專利名稱：一種hplc法分析分離氯吡格雷中間體及其對映異構體的方法
技術領域：
本發(fā)明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離氯吡格雷中間體及 其對映異構體的高效液相色譜法。
背景技術：
氯吡格雷為一種抗凝血藥，在其制備過程中的一種中間體的結構式為
分子式為CI6H16CIN02S,化學名為(S)-a-(2-氯苯基)-6,7-二氫噻吩并[3,2-c]-吡啶 -5(4印-乙酸甲酯，該中間體的分子中含1個手性碳原子，在通過定向合成目標化 合物氯吡格雷的過程中需要控制其對映異構體的含量。
對于氯吡格雷中間體的對映異構體雜質,在藥物合成過程當中是需要進行質 量控制的。含手性碳原子的對映異構體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程中 質量控制的難點，實現(xiàn)氯吡格雷中間體及其對應異構體的分離在氯吡格雷藥物的 合成和制劑過程的質量控制方面具有現(xiàn)實意義。
本發(fā)明的目的在于提供一種分析分離氯吡格雷中間體及其對映異構體雜質 的高效液相色譜方法，從而實現(xiàn)氯吡格雷中間體與其對映異構體雜質的分離測 定。
申請人發(fā)現(xiàn)，以纖維素類手性柱，以乙腈與pH值為2-4的磷酸/磷酸鹽緩沖 液的混合溶液為流動相，可以將氯吡格雷中間體及其對映異構體進行有效分離， 從而可以準確控制氯吡格雷的質量。本發(fā)明的方法能簡單、快速、準確地分析分 離氯吡格雷中間體及其對映異構體雜質。
S^0CH3<
發(fā)明內容
進--歩地，選用OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)纖維素類手性柱，可以
獲得更好的分析分離效果。OD-RH纖維素類手性柱是以(纖維素三(3.5-二甲苯
基氨基甲酸酯))為填料。
進一歩地，本發(fā)明的磷酸/磷酸鹽緩沖液中的磷酸鹽選自磷酸二氫銨或磷酸
二氫鈉，最優(yōu)選磷酸二氫銨。
本發(fā)明的方法中的流動相選用體積比為25 : 75乙腈與磷酸/磷酸鹽緩沖液的
混合溶液。
本發(fā)明的方法中的流動相中磷酸/磷酸鹽緩沖液的pH值為2.5。 本發(fā)明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(xiàn)
(1) 取氯吡格雷中間體樣品適量，用甲醇或異丙醇溶解樣品，配制成每lmL 含氯吡格雷0.1mg 0.5mg的樣品溶液。
(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min，檢測波長為205 235 nm，最佳檢 測波長為225nm，色譜柱柱溫箱為20 40匸，色譜柱柱溫的最佳溫度為室 溫。
(3) 取(l)的樣品^液2-5(HiL注入液相色譜儀，完成氯吡格雷中間體及其對 映異構體的分析與分離。
其中
高效液相色譜儀島津LC-10ATip， SPD-M10Aip， SCL-10Ayp， DGU-12A
色譜柱OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)手性色譜柱
流動相乙腈-(0.01moI/L磷酸二氫鈉，稀磷酸調pH至2.5) =25:75
流速1.0mL/min
檢測波長225nrn
柱溫室溫
進樣體積lOpL
本發(fā)明采用纖維素類OD-RH (DACEL 150mmx4.6mm)手性色譜柱，能夠 有效的分析分離氯吡格雷中間體及其對映異構體(雜質)；選擇流動相溶解樣品， 確保了溶液的穩(wěn)定性；選擇進樣體積10nL，柱溫為室溫，提高了色譜峰的對稱 性。本發(fā)明解決了含氯吡格雷中間體及其對映異構體的原料及制劑的分析與分離 問題，從而確保了氯吡格雷及其制劑的質量可控。
圖1實施例1，乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH2.5) =25:75的 HPLC圖2實施例2，乙腈-(0.0mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH3.0) =25:75的 HPLC圖
圖3實施例3，乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH4.0) =25:75的 HPLC圖
圖4實施例4,乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH3.5) -'30:70的 HPLC圖
具體實施例方式
實施例l
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10AT、少，SPD-M10Ayp， SCL-10Av/ , DGU-12A;
色譜柱OD-RH (DACELlS0mmX4.6mm);
流動相乙腈-(0.01加ol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH2.5) =25:75
流速1.0mL/min;
柱溫s室溫；
進樣體積lOflL。
檢測波長225nm; 實驗步驟
分別稱取氯吡格雷中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取氯吡格雷中間 體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋置 刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l,圖中l(wèi)號峰為氯吡格雷，2號峰為異構體，可以看出 在該條件下氯吡格雷主峰可以和異構體完全分離開來，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
實施例2
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATv; , SPD-M10Av; ， SCL-10Av/ ， DGU-12A;
色譜柱OD-RH (DACEL150mmx4.6mm);
流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH3.0) =25:75;
流速1.0mL/min;
檢測波長225nm;
柱溫室溫；
進樣體積10jiL。
實驗步驟
分別稱取氯吡格雷中間體及其對映異構體各5mg,置于25mL容量瓶中，加 流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取氯吡格雷中間 體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋置 刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖2，圖中l(wèi)號峰為氯吡格雷，2號峰為異構體，可以看出 在該條件下氯吡格雷主峰可以和異構體完全分離開來，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
實施例3
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp， SPD-M10Av/ ， SCL-10Avp， DGU-12A;
色譜柱OD-RH (DACEL150mmx4.6mm);
流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，碟酸調pH4.0) =25:75;
流速1 .OmL/min;
檢測波長225nm;
柱溫室溫；
進樣體積10nL。
實驗歩驟
分別稱取氯吡格雷中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取氯吡格雷中間 體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋置
刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記
錄色譜圖。結果見附圖3，圖中l(wèi)號峰為氯吡格雷，2號峰為異構體，可以看出 在該條件下氯吡格雷主峰可以和異構體完全分離開來，且氯吡格雷主峰在 33.9min左右。
實施例4
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-I0ATvj3， SPD-M10Av/ ， SCL-10Av/ ， DGU-12A;
色譜柱OD-RH (DACEL150mmX4.6mm);
流動相乙腈-(0.01mol/L磷酸二氫銨，磷酸調pH3.5) =30:70;
流速1.0mL/min;
檢測波長225nm;
柱溫室溫；
進樣體積10jiL。
實驗步驟
分別稱取氯吡格雷中間體及其對映異構體各5mg，置于25mL容量瓶中，加 流動相溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。并分別稱取氯吡格雷中間 體其對映異構體各5mg，分別置于2個25mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋置 刻度，搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖4，圖中l(wèi)號峰為氯吡格雷，2號峰為異構體，可以看出 在該條件下氯吡格雷主峰可以和異構體基線分離，且氯吡格雷主峰在29.2min左 右。
權利要求
1. 一種高效液相色譜法分析分離氯吡格雷中間體及其對映異構體的方法，其特征在于采用以纖維素類手性柱，以乙腈與磷酸/磷酸鹽緩沖液的混合溶液為流動相。
2. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述纖維素類手性柱為OD-RH(DACEL 150mmx4.6mm)。
3. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸鹽為磷酸二氫銨或磷酸 二氫鈉。
4. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述的磷酸鹽為磷酸二氫銨。
5. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述流動相中乙腈與磷酸/磷酸鹽緩 沖液的體積比為25 : 75。
6. 根據(jù)權利要求I所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸鹽緩沖液的pH值為 2-4。
7. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于所述磷酸/磷酸鹽緩沖液的pH值為 2.5。
8. 根據(jù)權利要求l'所述的方法，其特征在于包括以下步驟U)取氯吡格雷中間體樣品適量，用甲醇溶解樣品，lmL含氯吡格雷0.1mg 0.5mg的樣品溶液。(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min，檢測波長為205 235nm,檢測波長 為225nm，色譜柱柱溫箱為20 40X:。(3) 取步驟U)的樣品溶液2-50nL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種氯吡格雷中間體及其對映異構體的分析與分離測定方法，采用纖維素類手性柱，以乙腈與磷酸/磷酸鹽緩沖液(調至一定pH值)的混合溶液為流動相，用該方法可以快速的分離分析氯吡格雷以及含氯吡格雷制劑的對映異構體雜質。
文檔編號G01N30/00GK101393185SQ200710122128
公開日2009年3月25日 申請日期2007年9月21日 優(yōu)先權日2007年9月21日
發(fā)明者牟淑慧 申請人:北京德眾萬全藥物技術開發(fā)有限公司