專(zhuān)利名稱(chēng)：快速檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺的膠體金試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來(lái)檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的試紙。
背景技術(shù)：
亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)學(xué)名為N，a-二甲基-3-4-甲烯二氧苯乙胺，分子式量為C11H15O2N＝193。純品為白色粉末，屬于苯丙胺類(lèi)興奮劑，化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似“冰”毒，俗稱(chēng)“K”、“L”、“搖頭丸”、“亞當(dāng)”、“的士高餅干”、“歡樂(lè)丸”、“忘我”等，有強(qiáng)烈的致幻作用。
苯丙胺類(lèi)興奮劑能抑制丁氨基氧化酶的活性，使腎上腺素和腎上腺素能神經(jīng)的化學(xué)傳導(dǎo)物質(zhì)，去甲腎上腺素的破壞減慢，使大腦皮質(zhì)及皮質(zhì)下各中樞神產(chǎn)生興奮，引起心跳加快，大劑量可引起心臟抑制甚至死亡。其癥狀主要表現(xiàn)為煩躁不安、頭痛、頭暈、耳鳴、心慌氣短、惡心、嘔吐、出汗、心率加快、悸、顏面有時(shí)潮紅、瞳孔散大、呼吸困難、紫紺、血壓先升后降，最后因呼吸衰竭或循環(huán)衰竭而死亡。因其具有成癮性、依賴(lài)性，所以國(guó)家有關(guān)部門(mén)將其列為毒品行列。
對(duì)亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的檢測(cè)方法如氣相色譜(GC)，氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)，高效液相色譜(HPLC)等已有報(bào)道。高效毛細(xì)管電泳是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的分析方法，它具有分離能力強(qiáng)、分離效率高、分析時(shí)間短，所需的樣品及溶劑量小等特點(diǎn)。國(guó)外已有利用膠束毛細(xì)管電動(dòng)色譜法等，但是所需的時(shí)間較長(zhǎng)，因此需要一種快速、方便的檢測(cè)方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上準(zhǔn)確的顯示測(cè)試的結(jié)果，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無(wú)須復(fù)雜的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來(lái)檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的試紙。
為了達(dá)到所述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的在亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原試驗(yàn)線(xiàn)和一條抗鼠多克隆抗體控制線(xiàn)，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙的樣品層放入被檢測(cè)尿液中(液面不得超過(guò)MAX線(xiàn))由于毛細(xì)管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)墊時(shí)，樣品中的亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)與抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)金標(biāo)探針發(fā)生特異反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原試驗(yàn)線(xiàn)時(shí)，由于抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)墊中的抗體會(huì)與樣品中亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)結(jié)合而失去其與亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原結(jié)合位點(diǎn)，因此其膠體金不能滯留于試驗(yàn)線(xiàn)上；相反，如果樣品中沒(méi)有與抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)墊中的抗體結(jié)合的亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)，抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗金標(biāo)探針就會(huì)與試驗(yàn)線(xiàn)上的亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原發(fā)生特異結(jié)合，使膠體金滯留于試驗(yàn)線(xiàn)上，這就是免疫競(jìng)爭(zhēng)法原理。所以試驗(yàn)線(xiàn)的顏色深淺與樣品中亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)含量高低成反比。設(shè)定界限值為500ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線(xiàn)代表尿樣中MDMA低于500ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線(xiàn)表示尿樣中MDMA超過(guò)界限值500ng/ml，為陽(yáng)性。
當(dāng)移動(dòng)至抗鼠多克隆抗體控制線(xiàn)時(shí)，無(wú)論樣品中亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)含量多少，金標(biāo)探針都會(huì)與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線(xiàn)顯示紅色。因此控制線(xiàn)無(wú)色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測(cè)時(shí)，樣品液面超過(guò)MAX線(xiàn))或試紙已經(jīng)過(guò)期。
在用試紙檢測(cè)尿液后，將其試驗(yàn)線(xiàn)與檢測(cè)色標(biāo)進(jìn)行比色，按顏色深淺判斷為陽(yáng)性，可疑或陰性，進(jìn)而確定所測(cè)尿液中亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)含量是否超標(biāo)。用含亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)對(duì)照品得尿液檢測(cè)，設(shè)定界限值500ng/ml。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的試紙及其檢測(cè)方法具有這樣的有益效果，即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，無(wú)須專(zhuān)門(mén)技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖一為亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖二為亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。
圖三為亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙應(yīng)用于測(cè)試時(shí)顯示為陽(yáng)性結(jié)果圖。
圖四為亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)檢測(cè)試紙應(yīng)用于測(cè)試時(shí)顯示為陰性結(jié)果圖。
具體實(shí)施方式
1.應(yīng)用活化脂法，將半抗原亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)制備亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原。
2.抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單克隆抗體的結(jié)合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+無(wú)離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單克隆抗體→抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗膠體金。
(3)抗亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)單抗膠體金+吸水紙→金標(biāo)記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細(xì)管原理使膠體金朝向底物處移動(dòng)。
5.特種制膜機(jī)制膜機(jī)器特制，利用電腦控制傳動(dòng)速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線(xiàn)選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗(yàn)線(xiàn)選用亞甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過(guò)紙條上的“Max”線(xiàn)。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時(shí)觀察結(jié)果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線(xiàn)為陽(yáng)性；如在檢測(cè)區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線(xiàn)，則為陰性?？刂茀^(qū)未出現(xiàn)紅色線(xiàn)，表面試紙無(wú)效。
8.注意事項(xiàng)(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當(dāng)，均可產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
(3)密封保存，在有效期12個(gè)月內(nèi)使用。
權(quán)利要求1.一種快速檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、亞甲基雙氧甲基苯丙胺單抗金標(biāo)墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線(xiàn)(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(xiàn)(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺的膠體金試紙，其特征在于控制線(xiàn)是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺的膠體金試紙，其特征在于試驗(yàn)線(xiàn)是由亞甲基雙氧甲基苯丙胺分子合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測(cè)亞甲基雙氧甲基苯丙胺的膠體金試紙，其特征在于金標(biāo)墊是由亞甲基雙氧甲基苯丙胺分子單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型涉及一種快速檢測(cè)甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的試紙，屬于膠體金免疫檢測(cè)領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標(biāo)墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測(cè)甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有甲基雙氧甲基苯丙胺(MDMA)合成免疫原試驗(yàn)線(xiàn)和一條多克隆抗體控制線(xiàn)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層，通過(guò)膠體金免疫競(jìng)爭(zhēng)方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結(jié)果。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無(wú)須復(fù)雜的設(shè)備。
文檔編號(hào)G01N33/558GK2914091SQ20062000430
公開(kāi)日2007年6月20日 申請(qǐng)日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者萬(wàn)志靜, 萬(wàn)志強(qiáng) 申請(qǐng)人:萬(wàn)華普曼生物工程有限公司