專利名稱：快速檢測苯環(huán)已哌啶的膠體金試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測苯環(huán)己哌啶(PCP)的試紙。
背景技術(shù)：
苯環(huán)己哌啶也稱作普斯普劑，是化學(xué)合成的，粉末狀固體，是一種有麻醉作用的致幻類藥物。1956年由美國底特律一個(gè)化學(xué)實(shí)驗(yàn)室首次合成。
苯環(huán)己哌啶通過影響人的大腦及中樞神經(jīng)活動(dòng)對人體產(chǎn)生多種作用。小劑量服用會(huì)出現(xiàn)與大多數(shù)抑制劑相似的鎮(zhèn)靜效果；中等劑量服用則產(chǎn)生感覺障礙，表現(xiàn)為痛覺缺失或感覺缺失現(xiàn)象；如果大劑量服用苯環(huán)己哌啶將產(chǎn)生幻覺和驚厥、昏迷甚至死亡等急性中毒癥狀。大劑量用藥后1-2小時(shí)，吸毒者開始出現(xiàn)情緒不穩(wěn)、興奮躁動(dòng)、失去痛感、神經(jīng)麻木、并自感失重，繼而注意力不能集中，產(chǎn)生思維障礙，逐漸出現(xiàn)幻覺，有的還因此導(dǎo)致進(jìn)攻行為或自殘行為。資料表明，由服用苯環(huán)己哌啶而引起的自殺、殺人等行為較之其它致幻劑要多得多。服用苯環(huán)己哌啶后因思維混亂、感覺遲鈍、判斷力和自控力下降引起的死亡人數(shù)要遠(yuǎn)比這種毒品本身的化學(xué)毒性所造成的死亡人數(shù)多，而且很多死亡原因在常人看來是完全可以避免的。如服用者因思維混亂、自控力太差而溺死在淺水灘中；因感覺遲鈍、痛感消失又無力辨別方向而在完全可以逃生的火災(zāi)事件中被活活燒死等等。在生理上，吸食、注射苯環(huán)己哌啶者有惡心嘔吐、大量出汗、眼球震顫、復(fù)視等癥狀。象其它致幻劑一樣，苯環(huán)己哌啶有一定的心理依賴性，但未發(fā)現(xiàn)有生理依賴性。屬國家毒品行列。
目前，對苯環(huán)己哌啶(PCP)快速檢測的方法和儀器較多，主要是依靠氣相色譜(GS)、高效液相色譜(HPLC)、質(zhì)譜(MS)和毛細(xì)管電泳等方法進(jìn)行檢測，但存在儀器昂貴、檢測時(shí)間太長，并且需要專業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行操作，因此急需一種能快速、準(zhǔn)確、方便的檢測方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上準(zhǔn)確的顯示測試的結(jié)果，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測苯環(huán)己哌啶(PCP)的試紙及其檢測方法。
為了達(dá)到所述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的在苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原試驗(yàn)線和一條抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)墊相互交疊連接，在抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙的樣品層放入被檢測尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細(xì)管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動(dòng)，當(dāng)移動(dòng)至抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)墊時(shí)，樣品中的苯環(huán)己哌啶(PCP)與抗苯環(huán)己哌啶(PCP)金標(biāo)探針發(fā)生特開反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定有苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原試驗(yàn)線時(shí)，由于抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)墊中的抗體會(huì)與樣品中苯環(huán)己哌啶(PCP)結(jié)合而失去其與苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原結(jié)合位點(diǎn)，因此其膠體金不能滯留于試驗(yàn)線上；相反，如果樣品中沒有與抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)墊中的抗體結(jié)合的苯環(huán)己哌啶(PCP)，抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗金標(biāo)探針就會(huì)與試驗(yàn)線上的苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原發(fā)生特異結(jié)合，使膠體金滯留于試驗(yàn)線上，這就是免疫競爭法原理。所以試驗(yàn)線的顏色深淺與樣品中苯環(huán)己哌啶(PCP)含量高低成反比。設(shè)定界限值為25ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線代表尿樣中PCP低于25ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線表示尿樣中PCP超過界限值25ng/ml，為陽性。
當(dāng)移動(dòng)至抗鼠多克隆抗體控制線時(shí)，無論樣品中苯環(huán)己哌啶(PCP)含量多少，金標(biāo)探針都會(huì)與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測時(shí)，樣品液面超過MAX線)或試紙已經(jīng)過期。
在用試紙檢測尿液后，將其試驗(yàn)線與檢測色標(biāo)進(jìn)行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進(jìn)而確定所測尿液中苯環(huán)己哌啶(PCP)含量是否超標(biāo)。用含苯環(huán)己哌啶(PCP)對照品得尿液檢測，設(shè)定界限值為25ng/ml。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的檢測苯環(huán)己哌啶(PCP)的試紙及其檢測方法具有這樣的有益效果，即特異性強(qiáng)，靈敏度高，易儲(chǔ)存，無須專門技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖一為苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖二為苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。
圖三為苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙應(yīng)用于測試時(shí)顯示為陽性結(jié)果圖。
圖四為苯環(huán)己哌啶(PCP)檢測試紙應(yīng)用于測試時(shí)顯示為陰性結(jié)果圖。
具體實(shí)施方式
1.應(yīng)用活化脂法，將半抗原苯環(huán)己哌啶(PCP)結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)制備苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原。
2.抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單克隆抗體的結(jié)合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+去離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單克隆抗體→抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗膠體金。
(3)抗苯環(huán)己哌啶(PCP)單抗膠體金+吸水紙→金標(biāo)記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細(xì)管原理使膠體金朝向底物處移動(dòng)。
5.特種制膜機(jī)制膜機(jī)器特制，利用電腦控制傳動(dòng)速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗(yàn)線選用苯環(huán)己哌啶(PCP)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時(shí)觀察結(jié)果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線為陽性；如在檢測區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線，則為陰性。控制區(qū)未出現(xiàn)紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(xiàng)(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當(dāng)，均可產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
(3)密封保存，在有效期12個(gè)月內(nèi)使用。
權(quán)利要求1.一種快速檢測苯環(huán)已哌啶的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、苯環(huán)已哌啶單抗金標(biāo)墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗(yàn)線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測苯環(huán)已哌啶的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測苯環(huán)已哌啶的膠體金試紙，其特征在于試驗(yàn)線是由苯環(huán)已哌啶分子合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測苯環(huán)已哌啶的膠體金試紙，其特征在于金標(biāo)墊是由苯環(huán)已哌啶分子單克隆抗體作為膠體金標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種快速檢測苯環(huán)已哌啶(PCP)的試紙，屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標(biāo)墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測苯環(huán)已哌啶(PCP)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有苯環(huán)已哌啶(PCP)合成免疫原試驗(yàn)線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標(biāo)墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標(biāo)墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結(jié)果。具有靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)，無須復(fù)雜的設(shè)備。
文檔編號G01N33/52GK2914088SQ20062000430
公開日2007年6月20日 申請日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者萬志靜, 萬志強(qiáng) 申請人:萬華普曼生物工程有限公司