專利名稱：一種對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明及一種對(duì)二維固相的同一捕獲區(qū)域上對(duì)不同分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，屬于二維固相上進(jìn)行分析物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有科學(xué)文獻(xiàn)中報(bào)道并已商業(yè)化的檢測(cè)方法都是將分析物分布在一個(gè)二維空間里。以一個(gè)早早孕測(cè)試為例，在這個(gè)測(cè)試中，在膜的表面首先標(biāo)記上抗人體絨(毛)膜促性腺激素(HCG)的捕獲抗體。而一種包含HCG的生物樣品(如尿液)會(huì)與一種可見(jiàn)試劑(諸如膠體金或有色乳膠或熒光素)反應(yīng)，然后會(huì)與抗HCG的抗體偶聯(lián)形成一個(gè)HCG偶聯(lián)物。此偶聯(lián)物然后流經(jīng)膜上標(biāo)記了捕獲抗體的區(qū)域后，HCG偶聯(lián)物就會(huì)被捕獲而形成抗體-抗原-抗體“夾心法”偶聯(lián)物，這樣一來(lái)就可通過(guò)肉眼或儀器被檢測(cè)出來(lái)。
以上是一個(gè)抗體夾心法形式的形成，同樣原理可以也可以應(yīng)用于標(biāo)記抗原而檢測(cè)抗體，在這種情況下，就會(huì)形成雙抗原夾心法形式。
另一種結(jié)構(gòu)是，膜上的不同區(qū)域標(biāo)記不同的捕獲抗體。與不同的分析物結(jié)合的抗體偶聯(lián)物被分別捕獲后在這些區(qū)域上形成的夾心法形式而可以以不同的點(diǎn)或線的形式被識(shí)別。例如一份尿樣中的幾種違禁藥物能以列陣形式被檢測(cè)出來(lái)。另一個(gè)例子就是微陣，即不同的分析物以微點(diǎn)的形式分布在玻片上，然后利用熒光結(jié)合的方式檢測(cè)。
以上檢測(cè)中，不管是單一抗體或者單一抗原的檢測(cè)，還是列陣或者微陣，在同一個(gè)捕獲區(qū)域內(nèi)均只能檢測(cè)一種抗體或者抗原，檢測(cè)不僅耗時(shí)，而且耗資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡(jiǎn)單、便捷、有效的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不同。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的首先采用傳統(tǒng)的免疫標(biāo)記法將一份針對(duì)各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標(biāo)記固定在一個(gè)二維固相的單一區(qū)域中，其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區(qū)域中的抗體或抗原混合物進(jìn)行特異性反應(yīng)得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物，然后用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進(jìn)行偶聯(lián)得抗體或抗原偶聯(lián)物，將所得的抗體或抗原偶聯(lián)物流經(jīng)二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物進(jìn)行抗體或抗原捕獲就會(huì)得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物又都同時(shí)處于一個(gè)捕獲區(qū)域中，這樣即可采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理，從而在二維固相的同一區(qū)域上同步檢測(cè)出多種分析物。
二維固相指的是膜、玻片或試紙等。
單一區(qū)域指的是二維固相上的點(diǎn)或線。
不同的有色試劑指的是不同的熒光素、有色或熒光乳膠微粒、有色溶劑或膠質(zhì)染料等。
在采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理時(shí)，使用CCD相機(jī)成像技術(shù)對(duì)夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行感光并獲取圖像，然后將該圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟件的儀器中進(jìn)行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物中的不同標(biāo)記物的熒光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值。
在采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理時(shí)，使用可以分辨發(fā)射或折射光波長(zhǎng)的光學(xué)掃描裝置來(lái)檢測(cè)或量化同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物。
由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明可以在二維固相，比如膜、玻片或者試紙上標(biāo)記上對(duì)各分析物有特異性的抗體或抗原混合物，然后將含有多種分析物的樣品與其對(duì)應(yīng)的特異性抗體反應(yīng)，而每種抗體或抗原可以與不同的有色試劑偶聯(lián)，這樣固定在固相上的抗體或抗原被捕獲后，每種分析物會(huì)與不同的有色試劑形成夾心法形式，但同時(shí)又都處于一個(gè)捕獲區(qū)域中，使用CCD相機(jī)技術(shù)和成像分析軟件來(lái)進(jìn)行感光，轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)的處理，輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟件的儀器中即可分辨及量化不同標(biāo)記物的熒光折射率或顏色反射率，使用可以分辨發(fā)射或折射光波長(zhǎng)光學(xué)掃描裝置來(lái)檢測(cè)或量化多標(biāo)記的點(diǎn)或線，這樣即可方便地一次性在同一個(gè)捕獲區(qū)域中將不同分析物檢測(cè)出來(lái)。因此，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明不僅具有簡(jiǎn)單、便捷、有效的優(yōu)點(diǎn)，而且還具有檢測(cè)精度較高的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
具體實(shí)施例方式被檢測(cè)的針對(duì)各自特異性分析物的不同的抗體或抗原混合物可以被固定于二維固相的同一區(qū)域中。一份包含著不同分析物的樣品會(huì)與對(duì)各分析物有特異性的抗體或抗原混合物反應(yīng)，每種抗體或抗原與不同的有色試劑偶聯(lián)，比如不同的熒光素或不同有色乳膠微粒。當(dāng)固定在固相上的抗體或抗原被捕獲后，每種分析物會(huì)與不同的有色試劑形成夾心法形式，但同時(shí)又都處于一個(gè)捕獲區(qū)域中。而每一種有色試劑都可以被檢測(cè)，可以通過(guò)類似于印刷工業(yè)中采用的“色分離”技術(shù)的成像分析系統(tǒng)的CCD相機(jī)或其他成像系統(tǒng)來(lái)感光，并將色彩信息轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)，輸入電腦或具有分色圖象分析軟件的儀器中，即可輕松來(lái)分辨和量化。對(duì)于熒光染料的檢測(cè)，可以使用特定激發(fā)波長(zhǎng)或?qū)挷ǘ渭ぐl(fā)光源，而使用特定的濾光片在攝像系統(tǒng)中的可以用來(lái)分析熒光發(fā)射率。當(dāng)不同顏色的乳膠微粒被作為有色試劑使用時(shí)，可以使用白光測(cè)試其反射系數(shù)。而一個(gè)配備分色圖象分析軟件的CCD相機(jī)可以用來(lái)檢測(cè)并分色與量化。
具體實(shí)施時(shí)可按以下方法進(jìn)行實(shí)施首先采用傳統(tǒng)的免疫標(biāo)記法(即常用的免疫標(biāo)記技術(shù))根據(jù)所要檢測(cè)的多種分析物將一份針對(duì)各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標(biāo)記固定在一個(gè)二維固相的單一區(qū)域中，其二維固相可以是膜、玻片或試紙等，膜最好采用硝酸纖維素膜，其單一區(qū)域可以取二維固相上的點(diǎn)或線；其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區(qū)域中的抗體或抗原混合物按傳統(tǒng)的方式進(jìn)行特異性反應(yīng)得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物，然后用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進(jìn)行偶聯(lián)得抗體或抗原偶聯(lián)物，不同的有色試劑可以采用現(xiàn)有技術(shù)中不同的熒光素、有色或熒光乳膠微粒、有色溶劑或膠質(zhì)染料等；然后將所得的抗體或抗原偶聯(lián)物流經(jīng)二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物進(jìn)行抗體或抗原捕獲就會(huì)得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物都同時(shí)處于一個(gè)捕獲區(qū)域中，這樣即可采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理，從而在二維固相的同一區(qū)域上同步檢測(cè)出多種分析物。
在采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理時(shí)，使用CCD相機(jī)成像技術(shù)對(duì)夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行感光并獲取圖像，然后將該圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)輸入電腦或輸入到現(xiàn)有技術(shù)中常用的具有分色圖象分析軟件的儀器中進(jìn)行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物中的不同標(biāo)記物的熒光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值；也可使用現(xiàn)有技術(shù)中可以分辨發(fā)射或折射光波長(zhǎng)的光學(xué)掃描裝置來(lái)檢測(cè)或量化同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物。
權(quán)利要求
1.一種對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，它包括采用免疫標(biāo)記法，其特征在于首先采用免疫標(biāo)記法將一份針對(duì)各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標(biāo)記固定在一個(gè)二維固相的單一區(qū)域中，其次將一份包含著多種不同抗原或抗體分析物的樣品與固定在該二維固相的單一區(qū)域中的抗體或抗原混合物進(jìn)行特異性反應(yīng)得抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物，然后用不同的有色試劑與另一份含有不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物進(jìn)行偶聯(lián)得抗體或抗原偶聯(lián)物，將所得的抗體或抗原偶聯(lián)物流經(jīng)二維固相上的抗原-抗體或抗體-抗原偶聯(lián)物進(jìn)行抗體或抗原捕獲就會(huì)得到具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物，這些不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物又都同時(shí)處于一個(gè)捕獲區(qū)域中，這樣即可采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理，從而在二維固相的同一區(qū)域上同步檢測(cè)出多種分析物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，其特征在于二維固相指的是膜、玻片或試紙。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，其特征在于單一區(qū)域指的是二維固相上的點(diǎn)或線。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，其特征在于不同的有色試劑指的是不同的熒光素、有色或熒光乳膠微粒、有色溶劑或膠質(zhì)染料。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，其特征在于在采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理時(shí)，使用CCD相機(jī)成像技術(shù)對(duì)夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行感光并獲取圖像，然后將該圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)輸入電腦或輸入具有分色圖象分析軟件的儀器中進(jìn)行處理，從而得到不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物中的不同標(biāo)記物的熒光折光率或顏色反射率的分辨值或量化值。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，其特征在于在采用色分離處理儀器對(duì)同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理時(shí)，使用可以分辨發(fā)射或折射光波長(zhǎng)的光學(xué)掃描裝置來(lái)檢測(cè)或量化同一區(qū)域中的具有不同色彩的夾心法形式的偶聯(lián)物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種對(duì)二維固相的同一區(qū)域上多種分析物進(jìn)行同步檢測(cè)的方法，它首先采用免疫標(biāo)記法將一份針對(duì)各自特異性分析物的含有多種不同抗體或抗原的抗體或抗原混合物標(biāo)記固定在一個(gè)二維固相的單一區(qū)域中，其次將一份抗原或抗體分析物的樣品與固定在固相上的抗體或抗原混合得抗原－抗體或抗體－抗原偶聯(lián)物，然后用不同的有色試劑與另一份抗體或抗原混合物進(jìn)行偶聯(lián)得抗體或抗原偶聯(lián)物，將所得的抗體或抗原偶聯(lián)物流經(jīng)二維固相上的抗原－抗體或抗體－抗原偶聯(lián)物進(jìn)行抗體或抗原捕獲得到夾心法形式的偶聯(lián)物，用色分離處理儀器對(duì)該偶聯(lián)物進(jìn)行同步分色檢測(cè)和量化處理。本發(fā)明不僅具有簡(jiǎn)單、便捷、有效的優(yōu)點(diǎn)，而且還具有檢測(cè)精度較高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/25GK1971278SQ200610119219
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月6日
發(fā)明者陳國(guó)治 申請(qǐng)人:益思美詮生物科技(上海)有限公司