直接pcr擴(kuò)增試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種直接PCR擴(kuò)增試劑盒，要解決的技術(shù)問題是便于攜帶、使用方便且能夠避免試劑污染。本實(shí)用新型試劑盒包括盒體，所述試劑盒還包括離心管、分別分裝有直接PCR擴(kuò)增所需的若干個(gè)試劑的膠囊體以及研磨杵；所述離心管的蓋子的中心處設(shè)有用于刺破膠囊體上下兩端端面的刺針，膠囊體的橫截面為圓形，膠囊體的橫截面的直徑與離心管的內(nèi)徑相等，在膠囊體的外周壁上端設(shè)有一周環(huán)形的凸邊。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型直接PCR擴(kuò)增試劑盒可以避免試劑被污染；而且能夠根據(jù)需要攜帶相應(yīng)量的膠囊體，且在離心管上設(shè)置可刺破膠囊體的刺針，使用方便，而且成本低，能夠給免DNA提取PCR帶來巨大的改變，因此具有很好的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
【專利說明】
直接PCR擴(kuò)増?jiān)噭┖?br>技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本實(shí)用新型涉及一種生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種直接PCR擴(kuò)增試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，傳統(tǒng)的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，通常包含有分別裝有溶液A、溶液B以及PCR MagicMix3.0的各種試劑管，而每種試劑管內(nèi)一般裝有足夠檢測(cè)100次的試劑，而且其包含 的研磨杵以及實(shí)驗(yàn)需要使用的離心管均是分散設(shè)置，在使用時(shí)，將試劑通過吸管從容器中 吸出放入離心管內(nèi)混合，這種方式雖然簡單，但是多次使用或攜帶容易造成試劑污染而失 效的問題，而且各試劑和耗材均是分散設(shè)置，使用時(shí)還需要配合不同規(guī)格的移液槍和槍頭， 操作不太方便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本實(shí)用新型的目的是提供一種直接PCR擴(kuò)增試劑盒，要解決的技術(shù)問題是便于攜 帶、使用方便且能夠避免試劑污染。
[0004] 為解決上述問題，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種直接PCR擴(kuò)增試劑盒， 所述試劑盒包括盒體，所述試劑盒還包括離心管、分別分裝有直接PCR擴(kuò)增所需的若干個(gè)試 劑的膠囊體以及研磨杵;所述離心管的蓋子的中心處設(shè)有用于刺破膠囊體上下兩端端面的 刺針，膠囊體的橫截面為圓形，膠囊體的橫截面的直徑與離心管的內(nèi)徑相等，在膠囊體的外 周壁上端設(shè)有一周環(huán)形的凸邊。
[0005] 本實(shí)用新型所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒所需的若干個(gè)試劑包括溶液A、溶液B以及 PCRMagicMix3.0試劑。
[0006] 本實(shí)用新型的每個(gè)膠囊體放置在與其形狀適配且容易被擠出至離心管的小盒管 中。
[0007] 本實(shí)用新型所述的膠囊體的下端為弧面。
[0008] 本實(shí)用新型所述的膠囊體的上端設(shè)有薄膜面。
[0009] 本實(shí)用新型所述的盒體內(nèi)設(shè)有將盒體的內(nèi)腔劃分為至少五個(gè)分隔腔的隔板，所述 離心管、膠囊體以及研磨杵分別放置在分隔腔內(nèi)。
[0010] 本實(shí)用新型的放置研磨杵的分隔腔內(nèi)設(shè)有研磨杵盒，研磨杵放置在研磨杵盒內(nèi)， 研磨杵盒上設(shè)有蓋子。
[0011] 本實(shí)用新型的放置裝有PCRMagicMix3.0試劑的膠囊體的分隔腔的腔體內(nèi)設(shè)有 保溫隔熱板。
[0012] 本實(shí)用新型所述的放置離心管的分隔腔內(nèi)設(shè)有離心管支架，所述離心管支架上設(shè) 有至少一個(gè)用于將離心管插入后豎立放置的放置孔。
[0013] 本實(shí)用新型直接PCR擴(kuò)增試劑盒與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用各個(gè)分區(qū)將免DNA提取PCR 所需的耗材和試劑統(tǒng)一集中隔置，再用一個(gè)盒體將各個(gè)分區(qū)容納進(jìn)來，便于攜帶;采用將一 定量的免DNA提取PCR所需的若干個(gè)試劑分別封裝在膠囊體中，可以避免試劑被污染;而且 能夠根據(jù)需要攜帶相應(yīng)量的膠囊體，且在離心管上設(shè)置可刺破膠囊體的刺針，使用方便，而 且成本低，能夠給免DNA提取PCR帶來巨大的改變，因此有很好的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0014] 圖1是本實(shí)用新型試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015] 圖2是本實(shí)用新型離心管的剖視圖。
[0016] 圖3是本實(shí)用新型膠囊體的剖視圖。
[0017] 圖4是本實(shí)用新型使用時(shí)的離心管與膠囊體的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0019] 如圖1所示，本實(shí)用新型的試劑盒包括盒體1，在盒體1上設(shè)有能夠?qū)⒑畜w1的敞口 封閉的盒蓋12,盒蓋12與盒體1通過現(xiàn)有技術(shù)的卡扣結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)相互扣合。
[0020] 該試劑盒還包括離心管2、分別裝有直接PCR擴(kuò)增所需要的溶液A、溶液B和PCR MagicMix3.0的膠囊體3以及研磨杵4;其中的裝有溶液A、溶液B以及PCRMagicMix3.0的 膠囊體3的容量可根據(jù)實(shí)際測(cè)試所使用的劑量進(jìn)行灌裝;本實(shí)用新型的免DNA提取PCR試劑 盒中的溶液A、溶液B以及PCRMagicMix3.0試劑來源于寶曼公司生產(chǎn)的型號(hào)為130985-100 型免DNA提取PCR試劑盒中的試劑。
[0021] 如圖2所示，在離心管2的蓋子的中心處設(shè)有用于刺破膠囊體3上下兩端端面的刺 針5;在離心管2的蓋子上與離心管2的管腔開口相對(duì)的一側(cè)端面上還設(shè)有與離心管2的管腔 開口相適配連接的凸臺(tái)13。
[0022] 如圖3所示，膠囊體3的橫截面為圓形，其橫截面的直徑與離心管2的內(nèi)徑相等，膠 囊體3的下端為弧面，弧面可以引導(dǎo)膠囊體3中的液體從膠囊體3的刺破孔中流入離心管2的 管腔內(nèi)；而膠囊體3的上端設(shè)有厚度小于膠囊體3其余部分厚度的薄膜面15。在膠囊體3的外 周壁上端設(shè)有一周環(huán)形的凸邊6,當(dāng)膠囊體3放入離心管2內(nèi)時(shí)，凸邊6的下端邊緣與離心管2 的管體上端邊緣相互抵靠，從而使膠囊體3不會(huì)掉入離心管2的管腔內(nèi)。每個(gè)膠囊體3可以放 置在與其形狀適配且可容易擠出至離心管的小盒管中，以避免在存放或時(shí)間時(shí)受到污染， 使用時(shí)只需通過擠壓小盒管的底部將膠囊體3的一頭擠入離心管，利用小盒管將膠囊體3壓 入離心管中即可。
[0023] 如圖1所示，盒體1內(nèi)設(shè)有將盒體1的內(nèi)腔劃分為至少五個(gè)分隔腔的隔板7,優(yōu)選為5 個(gè)，分別為設(shè)于盒體1左邊上側(cè)的離心管分隔腔16、設(shè)于盒體1左邊下側(cè)的研磨杵分隔腔17、 設(shè)于盒體1右邊上側(cè)的用于放置裝有溶液A的膠囊體的第一膠囊體分隔腔18、設(shè)于盒體1右 邊中部的用于放置裝有溶液B的膠囊體的第二膠囊體分隔腔19以及設(shè)于盒體1的右邊下側(cè) 的用于放置裝有PCRMagicMix3.0的膠囊體的第三膠囊體分隔腔20,離心管2放置在離心 管分隔腔16,膠囊體3根據(jù)裝在的不同試劑分別放置在三個(gè)膠囊體分隔腔18、19、20中，研磨 杵4放置在研磨杵分隔腔17內(nèi)。
[0024] 因PCRMagicMix3.0需要低溫保藏，在放置裝有PCRMagicMix3.0的膠囊體3的分 隔腔（即第三膠囊體分隔腔20)的腔體內(nèi)設(shè)有保溫隔熱板9,該保溫隔熱板9由PE棉外包塑料 材料制成，在第三膠囊體分隔腔20上還可以設(shè)有由保溫隔熱板制作而成的蓋板14,使第三 膠囊體分隔腔20形成一個(gè)可用于低溫保藏的腔體。當(dāng)需要外出攜帶時(shí)，將放置于-20°C的包 含有膠囊體3的小盒管取出放入本實(shí)用新型免DNA提取PCR試劑盒中，或者將提前放置于-20 °(：保存的已保存有膠囊體3的本實(shí)用新型直接PCR擴(kuò)增試劑盒中直接取出，因在裝有PCR MagicMix3.0的膠囊體3的分隔腔的腔體內(nèi)設(shè)有保溫隔熱板9,即便外出，還能夠使其維持 在低溫環(huán)境，避免失效。
[0025]在放置離心管2的分隔腔（即離心管分隔腔16)內(nèi)設(shè)有離心管支架10,離心管支架 10的兩端固定在離心管分隔腔相對(duì)兩側(cè)的腔壁上，在離心管支架10上設(shè)有至少一個(gè)用于將 離心管2插入后豎立放置的放置孔11。
[0026]在研磨杵分隔腔17內(nèi)還可以設(shè)有可取出的研磨杵盒8,研磨杵盒8上設(shè)有蓋子，可 以使得研磨杵3更干凈，免受污染。
[0027] 如圖4所示，根據(jù)試劑的添加順序，將膠囊體3放入離心管2內(nèi)，當(dāng)蓋合離心管2的蓋 子時(shí)，刺針5依次刺破膠囊體3的上端面以及下端面，使得膠囊體3內(nèi)的試劑從下端面上的刺 破孔流入離心管2內(nèi)，進(jìn)一步將離心管2的蓋子緊壓在離心管2的管體上時(shí)，由于凸臺(tái)13的表 面對(duì)膠囊體3的上端面的擠壓，使膠囊體3中的試劑被完全推送至離心管2的管腔內(nèi)，然后取 出膠囊體3，重復(fù)上述步驟，使三種試劑均被擠入離心管2的管腔內(nèi)。
[0028]具體使用方法如下：
[0029] 1.首次使用本產(chǎn)品時(shí)需要詳細(xì)檢查溶液A和溶液B的膠囊體3是否有結(jié)晶析出。如 果有需要37°C溶解后搖晃均勻待用。未開封的裝有溶液A和溶液B膠囊體3可以放常溫保存。
[0030] 2.根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到1.5mL塑料的離心管2中。
[0031] L〇〇32」注意：未列出樣品，用尸需要自己摸
索最佳用量。對(duì)冨含多醌多酚的植物材料（如 棉花），組織使用量最好不要超過0.5mg。
[0033] 3.加入100uL溶液A，將裝有溶液A的膠囊體3放在離心管2上，蓋上蓋子，使刺針5刺 破薄膜面15以及膠囊體3的下端面，讓溶液A流入離心管2中，按壓離心管2蓋子，確保膠囊體 3中的溶液A完全被擠出并確保溶液A完全將樣品淹埋，并取出用過的膠囊體3。
[0034] 4.研磨杵4小心將樣品在離心管內(nèi)搗碎。血液一般搗碎30秒即可;實(shí)體組織需要搗 碎到溶液的顏色變渾濁(植物葉片的話，溶液的顏色將變成綠色）。如需更多研磨杵4,可另 購。對(duì)棘手的樣品，還可以增加95°C保溫10 - 60分鐘一步，待溫度冷卻到室溫后再進(jìn)入下一 步。殘留的實(shí)體組織碎片不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
[0035] 5.加入100uL溶液B，將裝有溶液B的膠囊體3放在離心管2上，蓋上蓋子，使刺針5刺 破薄膜面15以及膠囊體3的下端面，讓溶液B流入離心管2中，按壓離心管2蓋子，確保膠囊體 3中的溶液B完全被擠出，取出用過的膠囊體3，離心管2震蕩10秒混勻。
[0036] 6 ?常溫12000rpm離心2分鐘。
[0037] 7.將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的1.5mL離心管中。如果不用，可以放一 80°C長期保 存。如果用于后續(xù)PCR，請(qǐng)直接進(jìn)入下步。
[0038] 8.直接用裂解液作為模板設(shè)置30uL體系的PCR反應(yīng)體系如下：
[0039]
[0040] 注意：裝有PCRMagicMix3.0的膠囊體3需要放入離心管2中，刺破，使試劑流入離 心管內(nèi)，裂解液體積最好不要超過PCR體積的1/10。如果需要增加模板的加入量，則PCR體系 應(yīng)該相應(yīng)的增加。如果加入5uL裂解液，則可以使用50uL的PCR體系。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種直接PCR擴(kuò)增試劑盒，所述試劑盒包括盒體（1)，其特征在于:所述試劑盒還包括 離心管(2)、分別分裝有直接PCR擴(kuò)增所需的若干個(gè)試劑的膠囊體(3)以及研磨杵(4);所述 離心管(2)的蓋子的中心處設(shè)有用于刺破膠囊體(3)上下兩端端面的刺針(5)，膠囊體(3)的 橫截面為圓形，膠囊體(3)的橫截面的直徑與離心管(2)的內(nèi)徑相等，在膠囊體(3)的外周壁 上端設(shè)有一周環(huán)形的凸邊(6)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:所述直接PCR擴(kuò)增試劑盒所 需的若干個(gè)試劑包括溶液A、溶液B以及PCR MagicMix 3.0試劑。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:每個(gè)膠囊體(3)放置在與其 形狀適配且容易被擠出至離心管(2)的小盒管中。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:所述膠囊體(3)的下端為弧 面。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:所述膠囊體(3)的上端設(shè)有 薄膜面(15)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:所述盒體（1)內(nèi)設(shè)有將盒體 (1)的內(nèi)腔劃分為至少五個(gè)分隔腔的隔板(7)，所述離心管(2)、膠囊體(3)以及研磨杵(4)分 別放置在分隔腔內(nèi)。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:放置研磨杵(4)的分隔腔內(nèi) 設(shè)有研磨件盒(8 )，研磨件(4)放置在研磨件盒(8)內(nèi)，研磨件盒(8)上設(shè)有蓋子。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于：放置裝有PCR MagicMix 3.0試劑的膠囊體(3)的分隔腔的腔體內(nèi)設(shè)有保溫隔熱板(9)。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的直接PCR擴(kuò)增試劑盒，其特征在于:所述放置離心管(2)的分隔 腔內(nèi)設(shè)有離心管支架（10)，所述離心管支架（10)上設(shè)有至少一個(gè)用于將離心管（2)插入后 豎立放置的放置孔(11)。
【文檔編號(hào)】C12M1/00GK205687905SQ201620605914
【公開日】2016年11月16日
【申請(qǐng)日】2016年6月20日 公開號(hào)201620605914.5, CN 201620605914, CN 205687905 U, CN 205687905U, CN-U-205687905, CN201620605914, CN201620605914.5, CN205687905 U, CN205687905U
【發(fā)明人】付偉, 魏霜, 汪天杰, 王晨光, 朱鵬宇, 林春貴, 蔡雪妍, 朱水芳
【申請(qǐng)人】中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院