瓊脂糖在pcr擴增中的應(yīng)用、pcr擴增試劑盒及pcr擴增方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用、PCR擴增試劑盒及PCR擴增方法。
【背景技術(shù)】
[0002]PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)的簡稱，是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù)，其研究對生物學各個領(lǐng)域有著深刻的影響，與醫(yī)、農(nóng)業(yè)、生物工程等的關(guān)系十分密切，例如PCR技術(shù)涉及在農(nóng)業(yè)上育種的新途徑，涉及在醫(yī)學上檢測、治療遺傳疾病，涉及以基因工程為基礎(chǔ)的新興工業(yè)，涉及法醫(yī)物證鑒定、親子鑒定等。
[0003]然而，對于極其微量DNA樣本，由于PCR擴增反應(yīng)敏感度低，很難捕捉到有效的DNA信息。對于微量的DNA樣本，常規(guī)的PCR擴增方法的反應(yīng)敏感度低是導致后續(xù)PCR擴增效果差的主要原因。例如，在法醫(yī)偵檢工作中，犯罪現(xiàn)場的法醫(yī)學物證的鑒定和檢出，對于及時有效地指證犯罪分子，打擊犯罪起到至關(guān)重要的作用。犯罪現(xiàn)場中指紋、煙蒂、指甲等都含有微量的DNA信息，可為找出或指證犯罪嫌疑人提供科學依據(jù)。但由于犯罪現(xiàn)場的DNA殘留甚微，采集到的痕跡法醫(yī)物證DNA極其微量，常規(guī)PCR擴增方法的反應(yīng)敏感度低，難以捕捉到有效DNA信息從而擴增效果較差，直接導致后續(xù)的DNA檢出率低，STR分型失敗，不能指認犯罪個體。
[0004]因此，如何提高PCR擴增的反應(yīng)敏感度，從而提高微量DNA的PCR擴增效果，對最終獲得完整STR分型結(jié)果具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明有必要提供一種能提高PCR擴增的反應(yīng)敏感度，從而提高微量DNA的PCR擴增效果的瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用、PCR擴增試劑盒及PCR擴增方法。
[0006]—種瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用，在配置PCR擴增體系過程中加入瓊脂糖。
[0007]—種PCR擴增試劑盒，包括盒體及盒體中單獨存放的試劑，所述試劑包括瓊脂糖。
[0008]一種PCR擴增方法，所述方法包括在配置PCR擴增體系過程中加入瓊脂糖的步驟。
[0009]本發(fā)明提供的瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用、PCR擴增試劑盒及PCR擴增方法的有益效果是:在配置PCR擴增體系過程中加入瓊脂糖，由于瓊脂糖對DNA具有極強的吸附力，并提高反應(yīng)體系的沸點使體系緩沖液不易蒸發(fā)，同時瓊脂糖流體是由許多微小球體組成，可以包裹反應(yīng)體系，使整個PCR擴增反應(yīng)在一個微小空間完成，從而提高PCR擴增的反應(yīng)敏感度，使反應(yīng)更加充分，提高微量DNA的PCR擴增效果，最終獲得完整STR分型結(jié)果。
【附圖說明】
[0010]圖1是實驗組一的STR圖譜，即采用常規(guī)的STR熒光檢測試劑盒在10 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下對志愿者一使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果。
[0011]圖2是實驗組二的STR圖譜，即采用本發(fā)明實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒在10 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下對志愿者一使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果。
[0012]圖3是實驗組三的STR圖譜，即采用常規(guī)的STR熒光檢測試劑盒在10 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下對志愿者二使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果。
[0013]圖4是實驗組四的STR圖譜，即采用常規(guī)的STR熒光檢測試劑盒在5 μ IPCR擴增反應(yīng)體系下對志愿者二使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果。
[0014]圖5是實驗組五的STR圖譜，即采用本發(fā)明實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒在5 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下對志愿者二使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果。
[0015]圖6是采用本發(fā)明實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒在3 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果示例I。
[0016]圖7是采用本發(fā)明實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒在3 μ I PCR擴增反應(yīng)體系下進行PCR擴增后的STR分型結(jié)果示例2。
【具體實施方式】
[0017]本發(fā)明提供了一種瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用。瓊脂糖在生物學領(lǐng)域主要用于PCR擴增后的產(chǎn)物檢測階段進行瓊脂糖凝膠電泳，并未用于PCR擴增階段。
[0018]本發(fā)明提供的瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用，為在配置PCR擴增體系過程中加入瓊脂糖。
[0019]所述瓊脂糖溶解于一溶劑后配置為瓊脂糖流體使用。所述溶劑為水或緩沖液。所述瓊脂糖流體中，瓊脂糖的質(zhì)量百分比為0.01%?0.5%。
[0020]所述瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用包括向PCR擴增反應(yīng)體系中加入瓊脂糖后進行變性、退火及延伸。
[0021]本發(fā)明還提供了一種PCR擴增試劑盒，該試劑盒包括盒體及盒體中單獨存放的試劑，所述試劑包括瓊脂糖。
[0022]所述瓊脂糖為質(zhì)量濃度為0.01 %?0.5%的流體。所述試劑還包括PCRmix、Taq酶、引物。
[0023]本發(fā)明還提供了一種PCR擴增方法，該方法包括在配置PCR擴增體系過程中加入瓊脂糖的步驟。
[0024]所述PCR擴增方法還包括瓊脂糖溶解于一溶劑后配置為瓊脂糖流體。所述溶劑為水或緩沖液。所述瓊脂糖流體中，瓊脂糖的質(zhì)量百分比為0.01%?0.5%。
[0025]所述PCR擴增方法包括向PCR擴增反應(yīng)體系中加入瓊脂糖后進行變性、退火及延伸。
[0026]下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的瓊脂糖在PCR擴增中的應(yīng)用、PCR擴增試劑盒及PCR擴增方法予以進一步說明。
[0027]實施例一
[0028]將瓊脂糖應(yīng)用于從志愿者一使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA的PCR擴士豳
>曰ο
[0029]稱取0.03g瓊脂糖加入10g水中加熱混合均勻使其溶解,得瓊脂糖流體待用。
[0030]一種PCR擴增試劑盒，包括盒體及盒體內(nèi)單獨存放的試劑，所述試劑包括:瓊脂糖，PCR mix, Hot Start Taq 酶,復合引物。
[0031]所述瓊脂糖為0.03g瓊脂糖溶解于10g水中得到的瓊脂糖流體。
[0032]將上述PCR擴增試劑盒用于從志愿者一使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA的PCR擴增。
[0033]向志愿者一提供一支牙刷，由志愿者洗漱一次后提供給研究人員，提取牙刷中口腔脫落細胞DNA以備后續(xù)PCR擴增。
[0034]設(shè)置實驗組一、實驗組二，對牙刷中提取的相同口腔脫落細胞DNA樣本進行PCR擴增，實驗組一采用常規(guī)STR熒光檢測試劑盒進行PCR擴增，實驗組二采用本實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒進行PCR擴增。
[0035]實驗組一的PCR擴增體系配制為:按常規(guī)STR熒光檢測試劑盒中10 μ I反應(yīng)體系的配比，量取 4μ1 PCR mix, 0.4 μ I Hot Start Taq 酶，2 μ I 復合引物，3.6 μ I SdH2O 混合均勻。
[0036]實驗組二的PCR擴增體系配制為:量取本實施方式提供的添加了瓊脂糖的PCR擴增試劑盒中4μ I PCR mix, 0.4μ I Hot Start Taq酶,2 μ I復合引物,3.6 μ I瓊脂糖流體混合均勻。所述PCR mix、Hot Start Taq酶、復合引物與常規(guī)STR熒光檢測試劑盒的PCRmix、Hot Start Taq酶、復合引物相同。
[0037]向?qū)嶒灲M一、實驗組二的PCR擴增體系中分別加入I μ I DNA模板進行PCR擴增反應(yīng)，所述實驗組一、實驗組二反應(yīng)條件相同。
[0038]所述反應(yīng)條件為:一步反應(yīng)，95°C2min ；94°C 45s，60°C lmin,72°C lmin，10 個循環(huán);二步反應(yīng)，90°C 45s, 58°C lmin,72°C lmin，20 個循環(huán)。
[0039]將實驗組一、實驗組二擴增所得PCR產(chǎn)物分別進行STR分型檢測，實驗組一所得STR圖譜見附圖1，實驗組二所得STR圖譜見附圖2。
[0040]實施例二
[0041]將瓊脂糖應(yīng)用于從志愿者二使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA的PCR擴士豳
>曰ο
[0042]稱取0.3g瓊脂糖加入10g水中混合均勻加熱使其溶解,得瓊脂糖流體待用。
[0043]一種PCR擴增試劑盒，包括盒體及盒體內(nèi)單獨存放的試劑，所述試劑包括:瓊脂糖，PCR mix, Hot Start Taq 酶,復合引物。
[0044]所述瓊脂糖為0.3g瓊脂糖溶解于10g水中得到的瓊脂糖流體。
[0045]將上述PCR擴增試劑盒用于從志愿者二使用過的牙刷上提取的口腔脫落細胞DNA的PCR擴增。
[0046]向志愿者二提供一支牙刷，由志愿者洗漱一次后提供給研究人員，提取牙刷中口腔脫落細胞DNA以備后續(xù)PCR擴增。
[0047]設(shè)置實驗組三、實驗組四、實驗組五，對牙刷中提取的相同口腔脫落細胞DNA樣本進行PCR擴增。實