專利名稱：一種檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及一種試劑盒，尤其涉及一種量子點免疫標記技術(shù)快速檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒。
背景技術(shù)：
金黃色葡萄球菌是血培養(yǎng)中常見的病原菌，其感染癥狀嚴重，特別是凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌常導(dǎo)致急性中毒癥狀，極易導(dǎo)致死亡。目前標準的細菌鑒定方法還是傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)鑒定方法，但此法好時長，整個鑒定過程需M 48h。新的快速檢測血培養(yǎng)中病原菌的方法也不斷出現(xiàn)，主要是基于分子診斷的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法和熒光原位雜交(FISH)。但PCR方法易污染，假陽性率高。FISH方法由于熒光染料易淬滅，需暗室避光操作。

實用新型內(nèi)容本實用新型為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供的一種結(jié)構(gòu)簡單，操作過程快速，利用量子點納米熒光物質(zhì)取代傳統(tǒng)的熒光染料，整過操作過程無需避光的量子點免疫標記技術(shù)快速檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒。本實用新型采用的技術(shù)方案它包括盒體，盒體上設(shè)有抗體稀釋液倉、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體倉、生物素化的鼠源性二抗倉、量子點稀釋液倉、封閉液倉、量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物倉、 洗液倉、定位載玻片倉和蓋玻片倉，上述倉體內(nèi)分別對應(yīng)裝有抗體稀釋液、金黃色葡萄球菌 SPA單克隆抗體、生物素化的鼠源性二抗、量子點稀釋液、封閉液、量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物、洗液、定位載玻片和蓋玻片，其特征在于所述定位載玻片上有對照區(qū)和檢測區(qū)，在對照區(qū)和檢測區(qū)分別固定有金黃色葡萄球菌對照品和表皮葡萄球菌對照品，定位載玻片外設(shè)有鋁塑袋。本實用新型取得的技術(shù)效果1、本實用新型該結(jié)構(gòu)簡單，利用本實用新型可以在池內(nèi)從血液標本中直接檢測出金黃色葡萄球菌感染，且操作簡單，整個過程無需避光。

圖1是本檢測試劑盒構(gòu)造俯視圖；圖2是本檢測試劑盒定位載玻片俯視圖。其中，1-抗體稀釋液倉、2-金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體倉、3-生物素化的鼠源性二抗倉、4-量子點稀釋液倉、5-封閉液倉、6-量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物倉、7-TBST 洗液倉、8-定位載玻片倉、9-蓋玻片倉、10-盒體、11-對照區(qū)、12-檢測區(qū)。
具體實施方式
[0011]
以下結(jié)合附圖對本實用新型的實施方式做進一步的說明。參見圖1-2，一種檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒，它包括盒體10，盒體上設(shè)有抗體稀釋液倉1、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體倉2、生物素化的鼠源性二抗倉3、 量子點稀釋液倉4、封閉液倉5、量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物倉6、洗液倉7、定位載玻片倉8和蓋玻片倉9，上述倉體內(nèi)分別對應(yīng)裝有抗體稀釋液、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體、生物素化的鼠源性二抗、量子點稀釋液、封閉液、量子點標記的鏈酶親、素復(fù)合物、洗液、 定位載玻片和蓋玻片，所述定位載玻片上有對照區(qū)11和檢測區(qū)12，在對照區(qū)和檢測區(qū)分別設(shè)有金黃色葡萄球菌對照品和表皮葡萄球菌對照品，定位載玻片外設(shè)有鋁塑袋。如圖2，定位載玻片分為對照區(qū)11和檢測區(qū)12。檢測區(qū)包括一個金黃色葡萄球菌陽性對照位和表皮葡萄球菌陰性對照位和六個樣本檢測位。可同時檢測6份血液樣本。每片定位載玻片均為密封袋獨立包裝，于一 20°C下凍存。本實用新型試劑盒檢測過程如下1.報警的陽性血培養(yǎng)瓶，每份標本取樣IOuL平鋪在樣品檢測區(qū)的檢測位，可同時檢測六份樣品，分別平鋪在樣品檢測位的1、2、3、4、5、6號位，室溫晾干后，火焰固定；2.固定后再滴加封閉緩沖液，載玻片上每個位加兩滴約30uL，于37°C濕盒孵育 30min ；3.載玻片上檢測區(qū)每個位點均滴加抗PSA單克隆抗體兩滴約30uL，對照區(qū)以抗體緩沖液替代一抗，每個位兩滴，于37°C孵育Ih ；4.孵育后TBST洗液漂洗3min/次3次，滴加封閉緩沖液，每個檢測位兩滴，于 37°C濕盒孵育IOmin ；5.封閉液封閉后滴加生物素化羊抗鼠IgG，于37°C濕盒孵育30min ；6. TBST洗液漂洗3min/次3次，滴加封閉緩沖液，檢測區(qū)和對照區(qū)每個位均兩滴， 于37°C濕盒孵育IOmin ；7.最后滴加量子點緩沖液稀釋的QDs-SA ( 1 :300倍稀釋)37°C濕盒孵育10 min ；8. TBST洗液漂洗3 min/次3次，滴加50%甘油封片，上熒光顯微鏡用不同波長激發(fā)Qd605，以檢測區(qū)固定有金黃色葡萄球菌的位菌體呈現(xiàn)紅色的熒光信號，固定有表皮葡萄球菌的位無紅色的熒光信號，且抗體緩沖液代替一抗陰性對照位無紅色的熒光信號。 此時檢測位1、2、3、4、5、6上出現(xiàn)紅色的熒光信號則為陽性。無紅色的熒光信號為陰性。本實用新型的保護范圍并不限于上述的實施例，顯然，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以對本實用新型進行各種改動和變形而不脫離本實用新型的范圍和精神。倘若這些改動和變形屬于本實用新型權(quán)利要求及其等同技術(shù)的范圍內(nèi)，則本實用新型的意圖也包含這些改動和變形在內(nèi)。
權(quán)利要求1. 一種檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒，它包括盒體(10)，盒體上設(shè)有抗體稀釋液倉(1)、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體倉(2)、生物素化的鼠源性二抗倉(3)、量子點稀釋液倉(4)、封閉液倉(5)、量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物倉(6)、洗液倉(7)、定位載玻片倉(8)和蓋玻片倉(9)，上述倉體內(nèi)分別對應(yīng)裝有抗體稀釋液、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體、生物素化的鼠源性二抗、量子點稀釋液、封閉液、量子點標記的鏈酶親、素復(fù)合物、洗液、定位載玻片和蓋玻片，其特征在于所述定位載玻片上有對照區(qū)(11)和檢測區(qū) (12)，在對照區(qū)和檢測區(qū)分別設(shè)有金黃色葡萄球菌對照品和表皮葡萄球菌對照品，定位載玻片外設(shè)有鋁塑袋。
專利摘要本實用新型涉及一種檢測血液中金黃色葡萄球菌感染的試劑盒，它包括盒體，盒體上設(shè)有分別裝有抗體稀釋液、金黃色葡萄球菌SPA單克隆抗體、生物素化的鼠源性二抗、量子點稀釋液、封閉液、量子點標記的鏈酶親和素復(fù)合物、洗液、定位載玻片和蓋玻片，定位載玻片上有對照區(qū)和檢測區(qū)，在對照區(qū)和檢測區(qū)分別固定有金黃色葡萄球菌對照品和表皮葡萄球菌對照品，定位載玻片外設(shè)有鋁塑袋。本實用新型結(jié)構(gòu)簡單，利用本實用新型可以在3h內(nèi)從血液標本中直接檢測出金黃色葡萄球菌感染，且操作簡單，整個過程無需避光。
文檔編號G01N33/577GK202002935SQ201120074669
公開日2011年10月5日 申請日期2011年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月21日
發(fā)明者吳青, 李艷, 汪明 申請人:武漢大學(xué)