密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測裝置、檢測容器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于核酸檢測領(lǐng)域，具體涉及一種可用于普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和恒溫擴增產(chǎn)物檢測的反應(yīng)裝置。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，核酸檢測已經(jīng)越來越多地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、食品安全檢測等領(lǐng)域。目前常用的核酸擴增方法有基于經(jīng)典普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的擴增技術(shù)和新興的恒溫擴增技術(shù)，如交叉引物恒溫擴增技術(shù)(CPA)、環(huán)介導(dǎo)恒溫擴增技術(shù)(LAMP)、鏈置換擴增(SDA)、依賴解旋酶的擴增(HDA)等。由于核酸擴增技術(shù)的高靈敏度，擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量很高，因此面臨氣溶膠污染問題。
[0003]此外，基于擴增產(chǎn)物的檢測方法，傳統(tǒng)的實時熒光定量檢測方法需要集成龐大、昂貴、精密的光學(xué)設(shè)備，不利于裝置的小型化開發(fā)和應(yīng)用于現(xiàn)場檢測。目前新興的非光學(xué)檢測方法如電化學(xué)方法、HNB比色法、濁度法，對裝置的要求大為簡化，但這些方法有的需要開蓋操作，極容易造成氣溶膠污染，有的檢測靈敏度不高，結(jié)果不易判斷。申請?zhí)枮?01410431991.9的中國實用新型專利申請能夠使得陽性樣本反應(yīng)后反應(yīng)液從無色變?yōu)橛猩购怂釘U增檢測變得肉眼可見，和傳統(tǒng)的比色方法相比，其顯色更加靈敏，但是這一技術(shù)仍未涉及到檢測特異性。因此，開發(fā)密閉、小型化、便攜式的核酸檢測裝置，將其與現(xiàn)有的檢測方法相結(jié)合顯得越來越重要。
[0004]試紙條法因其檢測特異性、高靈敏度和簡單便攜的特性而受到廣泛關(guān)注。但目前商業(yè)化的試紙條檢測裝置設(shè)計復(fù)雜，不利于降低成本。因此開發(fā)簡便易行，成本低廉的試紙條檢測裝置，十分必要。
【實用新型內(nèi)容】
[0005]本實用新型的目的之一是提供一種密閉性便攜式試紙條比色法檢測核酸擴增的裝置，可使核酸反應(yīng)體系在不打開反應(yīng)容器的情況下，進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫擴增反應(yīng)及用試紙條進(jìn)行特異性檢測。為此，本實用新型采用以下技術(shù)方案:
[0006]一種密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測裝置，其特征在于它包括反應(yīng)管、檢測容器；檢測容器包括供膠體金試紙條放置的空腔，所述檢測容器的一端為能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)，且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的，在該端具有與所述空腔相通的連通口 ；所述檢測容器的另一端也具有與所述空腔相通的口，且該端與檢測容器的蓋相連；檢測容器中供膠體金試紙條放置的空腔經(jīng)過所述連通口與反應(yīng)管相通。
[0007]所述檢測容器的另一端的口為與空腔直通的試紙條裝填口。
[0008]進(jìn)一步地，能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)為被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)。所述被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)為反應(yīng)管的蓋。更進(jìn)一步地，所述空腔與反應(yīng)管的軸線垂直，在此結(jié)構(gòu)中，所述檢測容器可呈長方體形。
[0009]進(jìn)一步地，所述檢測容器也可呈筒狀，其一端能被反應(yīng)管插入并密封。在此結(jié)構(gòu)中，所述檢測容器的蓋可采用活塞式，其內(nèi)側(cè)端具有能連接試紙條的部位，在此結(jié)構(gòu)中，處在空腔中的試紙條可連接在活塞上。
[0010]本實用新型的目的之二是提供一種試紙條比色法檢測核酸擴增的檢測容器，能夠應(yīng)用于核酸檢測裝置中，可使核酸反應(yīng)體系在不打開反應(yīng)容器的情況下，進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫擴增反應(yīng)及用試紙條進(jìn)行特異性檢測。為此，本實用新型采用以下技術(shù)方案:
[0011]一種試紙條比色法檢測核酸擴增的檢測容器，其特征在于其包括供膠體金試紙條放置的空腔，所述檢測容器的一端為能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)，且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的，在該端具有與所述空腔相通的連通口 ；所述檢測容器的另一端也具有與所述空腔相通的口，且該端與檢測容器的蓋相連；檢測容器中供膠體金試紙條放置的空腔經(jīng)過所述連通口與反應(yīng)管相通。
[0012]所述檢測容器的另一端的口為與空腔直通的試紙條裝填口。
[0013]進(jìn)一步地，能與反應(yīng)管相連的結(jié)構(gòu)為被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)。所述被反應(yīng)管插入的結(jié)構(gòu)為反應(yīng)管的蓋。更進(jìn)一步地，所述空腔與反應(yīng)管的軸線垂直，所述檢測容器還可以是呈長方體形。
[0014]進(jìn)一步地，所述檢測容器也可呈筒狀，其一端能被反應(yīng)管插入并密封。在此結(jié)構(gòu)中，所述檢測容器的蓋可采用活塞式，在此結(jié)構(gòu)中，處在空腔中的試紙條可連接在活塞上。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實用新型具有如下有益效果:
[0016]1.本實用新型將反應(yīng)容器和檢測容器分開但又連通，通過連通孔相互連接，能將試紙條集成到核酸擴增反應(yīng)器中，無需打開反應(yīng)容器就可以實現(xiàn)顯色反應(yīng)，大大降低氣溶膠的污染；
[0017]2.本實用新型裝置簡單，能進(jìn)行PCR反應(yīng)或進(jìn)行不同種類的恒溫擴增反應(yīng)，并且不影響后續(xù)的膠體金試紙條檢測，就可簡便的實現(xiàn)核酸擴增產(chǎn)物的檢測。
[0018]3.本實用新型不但保證了試紙條檢測的快速高效性，而且成本低廉，可在不開蓋的情況下完成整個核酸擴增的特異性檢測。
【附圖說明】
[0019]圖1為本實用新型實施例1中一種實施方式的剖視圖。
[0020]圖2為圖1的分解圖。
[0021]圖3為本實用新型實施例1中另一種實施方式的剖視圖。
[0022]圖4為圖3的分解圖。
[0023]圖5為本實用新型實施例2的剖視圖。
[0024]圖6為圖5的分解圖。
【具體實施方式】
[0025]實施例1，參照圖1、2、3、4:
[0026]本實用新型所提供的密閉性便攜式試紙條比色法核酸檢測裝置，包括反應(yīng)管5、檢測容器2 ;檢測容器2包括供膠體金試紙條放置的長條型空腔4，所述檢測容器的一端為能與反應(yīng)管5插入相連的反應(yīng)管的蓋20，且該結(jié)構(gòu)和反應(yīng)管之間是密封的，在該端具有與所述空腔相通的
[0027]所述空腔4與反應(yīng)管的軸線垂直，所述檢測容器可呈長方體形。
[0028]根據(jù)反應(yīng)管的蓋與檢測容器的連通方式的不同，該實施方案又可以分為兩種:
[0029]第一種:反應(yīng)管的蓋及與其連通的用于放置試紙條的檢測容器的連通口 21開口較小(如圖1、2所示)。該連通口 21的橫截面形狀任意，優(yōu)選為長方形(包括正方形)和圓形，更優(yōu)選地為圓形，開口直徑大小優(yōu)選地小于等于2mm，大于等于1mm，更優(yōu)選地為1.5mm。
[0030]第二種:反應(yīng)管的蓋及與其連通的用于放置試紙條的長方體檢測容器的連通口21較大(如圖3、4所示)。優(yōu)選地反應(yīng)管的蓋和放置試紙條的空腔的壁相重疊的部分都去掉，使兩者的連通部分橫截面積盡可能達(dá)到最大。
[0031]上述密閉式核酸檢測裝置，集成有反應(yīng)管的蓋的檢測容器為一體成型。
[0032]所述空腔與檢測容器所要連的反應(yīng)管的軸線垂直，也即所述檢測容器相對于反應(yīng)管是臥式的檢測容器或也可稱為檢測容器相對于反應(yīng)管是橫向的容器。所述反應(yīng)管的高度優(yōu)選地，小于等于20mm，大于等于1mm0
[0033]在上述第一種實施方案中，反應(yīng)工作液的體積優(yōu)選地在50~450 μ L之間，更優(yōu)選地在50~100 μ L之間。在上述第二種實施方案中，反應(yīng)工作液的體積優(yōu)選地在20~450 μ L之間，更優(yōu)選地在20~50 μ L之間。
[0034]裝配時，可取上述檢測容器，從口 22處放入針對待檢測物質(zhì)的已經(jīng)標(biāo)記好的膠體金試紙條，膠體金試紙條的標(biāo)記端靠近連通口 21，膠體金試紙條的未標(biāo)記端靠近檢測容器的口 22，再用蓋3將口 22密封。
[0035]本實用新型的核酸檢測裝置主要是針對做大批量核酸擴增檢測時，開蓋檢測形成的氣溶膠污染等問題。按照實際反應(yīng)的需要，向檢測容器中，加入針對不同檢測物的特異性標(biāo)記的膠體金試紙條，使用的時候，只需將反應(yīng)液加入反應(yīng)管中，與檢測容器連接后進(jìn)行反應(yīng)和檢測即可。
[0036]本實用新型裝置的反應(yīng)容器(反應(yīng)管5)用于盛放核酸擴增反應(yīng)液，反應(yīng)容器的材質(zhì)能夠耐高溫，不影響核酸擴增反應(yīng)進(jìn)行。反應(yīng)容器具有良好的密閉性，反應(yīng)過程中不發(fā)生水分蒸發(fā)散失，能夠獨立進(jìn)行PCR反應(yīng)或其他恒溫擴增反應(yīng)。在不開蓋的情況下，通過搖晃或是震動、顛倒等操作，反應(yīng)容器中的液體能夠通過連通孔進(jìn)入檢測容器進(jìn)行試紙條比色法檢測。
[0037]利用上述核酸檢測裝置的核酸檢測方法，具體包括如下步驟:
[0038](I)取加工成型的密閉核酸檢測裝置的反應(yīng)管，放入PCR擴增反應(yīng)液(或CPA、LAMP等恒溫擴增反應(yīng)液)。如檢測容器采用上述第二種實施方案中，反應(yīng)液上層用石蠟油密封。
[0039]需要注意的是，對于用膠體金試紙條來說，蠟油和擴增反應(yīng)液的比例。石蠟油與擴增反應(yīng)液的體積比例應(yīng)小于2.5:1。實驗證明，當(dāng)石蠟油與擴增反應(yīng)液的比例為2.5:1時，膠體金試紙條上沒有條帶出現(xiàn)；當(dāng)石蠟油與擴增反應(yīng)液的比例為2:1時，膠體金試紙條上偶爾有條帶出現(xiàn)，但出現(xiàn)條帶所需反應(yīng)時間較長。當(dāng)石蠟油與擴增反應(yīng)液的比例為1.5:1時，膠體金試紙條上有條帶出現(xiàn)，并且反應(yīng)速度快，條帶顏色明顯。
[0040]因此優(yōu)選的石蠟油與擴增反應(yīng)液的比例應(yīng)小于等于1.5:1，同時要保證石蠟油在擴增反應(yīng)液上層形成密封。
[0041](