一種生物堿化合物及其制備方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域和生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的生物堿化合 物及其制備方法和在制備抗菌農(nóng)藥中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 21世紀，隨著人們環(huán)境保護意識的增強以及對食品安全的關(guān)注，化學(xué)農(nóng)藥的負面 作用日益受到人們的重視，發(fā)展生物農(nóng)藥已成為保障人類健康和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要趨 勢。植物中含有豐富的次生代謝產(chǎn)物，一些次生代謝產(chǎn)物因其具有一定的防治病蟲害等作 用，成為近年來研究的熱點。植物次生代謝物的種類有生物堿類、酚類物質(zhì)、萜類、黃酮類、 精油類、光活化毒素類等。其中生物堿是含量最大的一類，生物堿不僅對昆蟲具有毒殺、忌 避、拒食、抑制生長發(fā)育等作用，同時對多種植物病菌有很強的抑菌和殺菌作用 [1]。
[0003] 已開發(fā)的生物堿類植物源農(nóng)藥大多以殺蟲農(nóng)藥為主，如煙堿、苦參堿等，近幾年 來，國內(nèi)外許多學(xué)者開始研究一些植物生物堿提取物的抗菌、殺菌活性。如張曦燕等學(xué)者， 采用PDA平板生長速率法，測定了牛心樸子生物堿提取液對稻瘟病、灰霉病的抑制作用和毒 力。結(jié)果表明：提取液對兩種病菌均有抑制作用，并隨著提取液濃度的升高，對病菌菌絲生 長的抑制作用也隨之增強;添加附著劑的牛心樸子提取液無明顯增強其抑制稻瘟病菌生長 的作用。湖南用山蒼籽油配制的乳劑，對茶樹主要病害茶紅銹病、茶黃萎病、茶云紋葉枯病 和棉花枯萎病、黃萎病等有較好的防治效果。薄荷等粉碎物以土重0.5%~0.1%的用量處理 嚴重感染棉花枯萎病的土壤，對枯萎病的防效可達43.9%~74.3% [2]。還未有報道某種具體 結(jié)構(gòu)的生物堿成分對水稻稻痕病菌（Magnaporthe orythae)和棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)有抑菌、殺菌作用。
[0004] 石蒜科(Amaryllidaceae)植物以其豐富多樣的生物堿類成分而著稱[3]，異喹諾酮 類生物堿（180031'1308七71'；[1)是其中一類特殊的化合物，主要分布在石蒜科植物中 [4]，經(jīng)檢 索得知，分離得到該類天然產(chǎn)物化合物數(shù)量只有12個，具有良好的抗腫瘤、抗病毒和抗真菌 的藥理作用。據(jù)文獻 [5]報道抗真菌作用:口3]1〇瓜1：丨8七31：；[11，7-(16(?7仙1'0；[0138；[116對小腸腦 炎微孢子蟲有抗性，IC 5Q分別是0.18μΜ和0.20 μΜ，這個濃度是化合物對宿主細胞的細胞毒 IC50的1/8。還未有報道石蒜科植物對水稻稻瘟病菌和棉花黃萎病菌有抑菌、殺菌作用。我們 從石蒜科植物中首次發(fā)現(xiàn)的新異喹諾酮類生物堿具有很好的抑制水稻稻瘟病菌和棉花黃 萎病菌活性。
[0005] 稻瘟病是世界性的水稻病害，是水稻三大病害之首，2014年安徽萬畝超級稻因稻 瘟病減產(chǎn)絕收事件引起社會廣泛關(guān)注。由于該病原菌易變，新的致病和抗藥性群體的產(chǎn)生 分別易導(dǎo)致新選育的抗病品種和藥劑失去利用價值，因此，新的稻瘟菌殺菌劑的研發(fā)和應(yīng) 用受到廣泛重視。棉花黃萎病是目前嚴重制約棉花生產(chǎn)的世界性病害，其危害極其嚴重，被 稱為棉花的"癌癥"，沒有特效藥。因此，菌、肥、藥綜合防治配套技術(shù)與抗病新品種的選育工 作缺一不可。綜上所述，新異喹諾酮類生物堿殺菌藥的研制對防治稻瘟病和棉花黃萎病具 有重要意義。
[0006] 與本發(fā)明有關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)有。
[0007] [1]薛廣厚，范海延，李航，高璐，李伊夫。生物堿在植物源農(nóng)藥中的應(yīng)用研究。北 方園藝，2009,6:131-134。
[0008] [2]呂梅香，曾和平，王曉娟，謝彥，王輝。農(nóng)藥用生物堿的研究進展。農(nóng)藥，2004， 43(6):249-253。
[0009] [3]李健，于淼，高世勇，袁洪亮，陳文強。石蒜科植物中生物堿的藥理作用研究。 哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2014,30(2) : 168-171。
[0010] [4]陳寧，董巖，凌娜，季宇彬。石蒜科兩種典型異喹諾酮類生物堿及其衍生物的 構(gòu)效關(guān)系。食品與藥品，2014,16(1): 52-54。
[0011] [ 5 ] Quarzane-Amara M, Franeti ch JF, Mazier D , et al . In Vitro Activities of Two Antimitotic Compounds , Pancratistatin and 7-Deoxynarciclasine, against Encephalitozoon intestinalis, a Microsporidium Causing Infections in Humans [J]. Antimicrob Agents Chemother,2001, 45(12)： 3409-3415。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明旨在提供一種新的生物堿化合物及其制備方法和在制備抗菌農(nóng)藥中的用 途。
[0013] 本發(fā)明公開了一種生物堿化合物，其特征在于:化學(xué)名為二氫水仙克拉辛-4-0-α-!^阿拉伯糖苷（(1；[117(11'011&1'(3；[(31&8；[116-4-0-€[-1^-&抑13；[11(^5^&1108丨(16)，分子量為441，分子 式為C19H23NO11，結(jié)構(gòu)為式I所不。
[0014]
[0015] 上述的生物堿的制備方法，其特征在于：以石蒜科植物為原料，甲醇、乙醇或含水 醇類提取，過濾、濃縮至小體積，用水分散后經(jīng)大孔樹脂柱層析，收集30%醇洗脫部位，再經(jīng) 反復(fù)柱層析，柱層析填料為硅膠或反相硅膠，即得新生物堿。
[0016] 根據(jù)權(quán)利要求2生物堿的制備方法，其特征在于：所述石蒜科植物為蔥蓮 (Zephyranthes Candida)，石蒜（Lycoris radiata)，長筒石蒜（Lycoris longituba)和忽 地笑（Lycoris aurea)。
[0017] 這種生物堿可以從植物中提取分離制備而得，也可以用化學(xué)合成方式獲得。
[0018] -種天然植物殺菌劑，其特征在于以權(quán)利要求1的生物堿化合物作為殺菌組分。
[0019] 根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：所述農(nóng)作物病原真菌為水稻稻瘟病菌 (Magnaporthe orythae)和棉花黃萎病菌（Verticillium dahliae)。
[0020] 根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于:所述的生物堿化合物與其它殺菌劑復(fù)配，制 成復(fù)配殺菌農(nóng)藥。
[0021] 生物堿具有高效、低毒、無污染、對人畜安全、作用方式獨特、選擇性高、對天敵和 有益生物安全及害蟲病原菌不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點的天然產(chǎn)物，符合人們對理想農(nóng)藥的要 求，但目前僅少數(shù)植物生物堿在植物保護中得到廣泛應(yīng)用。水仙克拉辛具有很好的抗病毒、 抗腫瘤等作用，但是對水稻稻痕病菌（Magnaporthe orythae)和棉花黃萎病菌 (Verticillium dahliae)的效果一般，二氫水仙克拉辛_4-〇-a-L_阿拉伯糖苷在母核結(jié)構(gòu) 上連接阿拉伯糖后生物活性大大增加，具有很好的作為農(nóng)用殺菌劑使用的價值。
[0022] 為延緩抗藥性和兼治病蟲、雜草以提高農(nóng)藥防治效果，根據(jù)一藥多治的原則，按照 農(nóng)藥一定的混合比例采用復(fù)合配制方法配成的農(nóng)藥稱為復(fù)配農(nóng)藥。在病蟲害防治中單劑逐 漸淡出歷史的舞臺，為增加防效達到兼治的效果，農(nóng)藥的復(fù)配得到推廣和應(yīng)用。二氫水仙克 拉辛-4-0-a-L-阿拉伯糖苷作為一種新的天然生物農(nóng)藥，具有新的抗菌機理，與現(xiàn)有的農(nóng)藥 復(fù)配后能延緩病菌耐藥，減少意外損失。
【附圖說明】
[0023]以下圖可作為附件材料上報。
[0024]圖1、本發(fā)明實施例1所得的化合物結(jié)構(gòu)式。
[0025]圖2、本發(fā)明實施例1所得的化合物質(zhì)譜(ESI MS)譜圖。
[0026] 圖3、本發(fā)明實施例1所得的化合物核磁共振氫譜CH-NMR)譜圖。
[0027] 圖4、本發(fā)明實施例1所得的化合物核磁共振碳譜(13C_NMR)譜圖。
[0028]圖5、本發(fā)明實施例1所得的化合物二維核磁共振(HSQC)譜圖。
[0029] 圖6、本發(fā)明實施例1所得的化合物二維核磁共振(HMBC)譜圖。
[0030] 圖7、本發(fā)明實施例1所得的化合物二維核磁共振(H-H COSY)譜圖。
【具體實施方式】
[0031] 結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步詳細描述，但本發(fā)明的內(nèi)容并不僅僅限于所 列舉的實施方式。
[0032] 實施例1。
[0033] 新鮮蔥蓮鱗莖，切碎，曬干得到40 kg，用95%乙醇冷浸提取3次，每次10天，過濾得 到冷浸提取液，濾渣用95%乙醇熱回流提取4次，2h/次，合并冷浸和熱提的浸提液，減壓濃 縮得到浸膏，加水溶解。水液經(jīng)過大孔樹脂D101柱，用不同濃度的乙醇洗脫，其中30%乙醇部 位得到147 g提取物。將得到的147g提取物上硅膠柱，以氯仿-甲醇-水系統(tǒng)洗脫進行分段和 反復(fù)柱層析，得到化合物Yzec-3，純度經(jīng)HPLC-MS檢測大于98%。結(jié)構(gòu)通過質(zhì)譜和核磁共振解 析后，命名為二氫水仙克拉辛-4-〇-<1-1^-阿拉伯糖苷（(1；[117(11'01131'(3；[(3138；[116-4-0-€[-1^- arabinopyranoside)，經(jīng)SCIfinder檢索后發(fā)現(xiàn)，該化合物為新化合物。
[0034] 結(jié)構(gòu)解析