肽mdp-1及其在制備抗感染、抗內(nèi)毒素血癥及抗膿毒癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及肽MDP-1及其在制備抗感染、抗內(nèi)毒素血 癥及抗膿毒癥藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 內(nèi)毒素是革蘭陰性菌的細(xì)胞外壁溶解后釋放出的脂多糖(Lipopolysaccharide， LPS)，而內(nèi)毒素血癥是由于血中細(xì)菌或病灶內(nèi)細(xì)菌釋放出大量內(nèi)毒素至血液，或輸入內(nèi)毒 素污染的液體而引起。內(nèi)毒素的主要毒性反應(yīng)包括:發(fā)熱、白細(xì)胞顯著增加，肝臟損害，嚴(yán)重 者可導(dǎo)致內(nèi)毒素休克。目前，因內(nèi)毒素血癥未得到及時診斷和治療導(dǎo)致死亡的患者有逐年 增多的趨勢。
[0003] 膿毒癥（sepsis)是由感染因素引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS)，是嚴(yán)重創(chuàng)傷、 燒傷、休克、外科大手術(shù)后常見的并發(fā)癥，進(jìn)一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒性休克、多器官功能障礙 綜合征甚至死亡。膿毒癥在全球的發(fā)病率正逐年遞增，膿毒癥及其后續(xù)癥已成為病人死亡 的首要原因。在美國，每年至少有750000人罹患膿毒癥，膿毒癥患者的死亡率為34%。在中 國，膿毒癥在外科加強監(jiān)護(hù)病房的發(fā)生率為8.68%，死亡率為48.7%，人均治療費用約為 100000元。因此，膿毒癥不僅嚴(yán)重威脅人類的健康，而且給個人和社會造成了沉重的負(fù)擔(dān)。
[0004]膿毒癥的發(fā)病機制十分復(fù)雜，其中感染和炎癥反應(yīng)在膿毒癥的發(fā)生發(fā)展中起著至 關(guān)重要的作用。病原微生物入侵后，機體產(chǎn)生大量促炎性因子以清除入侵的病原微生物，若 炎癥反應(yīng)得到及時控制，膿毒癥將痊愈。但是，感染源若持續(xù)存在，炎癥反應(yīng)將被"瀑布樣" 級聯(lián)放大，機體組織器官受損，甚至引起死亡；同時免疫細(xì)胞大量凋亡、失活，其數(shù)量和功能 下降，機體很快進(jìn)入免疫抑制狀態(tài)，不僅對原發(fā)病原微生物的清除能力明顯下降，而且容易 發(fā)生機會致病菌引起的二重感染，最終影響膿毒癥預(yù)后。盡管新的療法不斷出現(xiàn)，但是膿毒 癥患者的死亡率仍居高不下。美國食品藥品管理局批準(zhǔn)的唯一用于嚴(yán)重膿毒癥治療的藥物 重組活化蛋白C由于在臨床應(yīng)用不能取得滿意的結(jié)果而撤出市場;eritoran(抗TLR-4的化 合物)雖然在I期臨床試驗有效，但是卻在臨床II期試驗中未發(fā)現(xiàn)明確效果而終止。目前臨 床上對內(nèi)毒素所致的內(nèi)毒素血癥及多種微生物感染性膿毒癥的治療策略主要仍依賴于各 種輔助治療方法，缺乏特異、有效的治療手段。
[0005] 目前，沒有任何肽MDP-1應(yīng)用于抗感染、抗內(nèi)毒素血癥及抗膿毒癥治療的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種肽MDP-1及其在制備抗感染、抗內(nèi)毒素血癥及抗膿毒 癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)一種新肽MDP-1對內(nèi)毒素血癥及膿毒癥動物模型具有保 護(hù)作用，能夠用于制備抗感染，抗內(nèi)毒素血癥及抗膿毒癥藥物。
[0007]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0008] 一種肽MDP-1，其氨基酸序列如SEQ.ID.N0.1所示。
[0009] 編碼所述肽MDP-1的核苷酸序列如SEQ.ID.N0.2所示。
[0010]肽MDP-1在制備抗感染藥物中的應(yīng)用。
[0011] 肽MDP-1在制備抗內(nèi)毒素血癥藥物和抗膿毒癥藥物中的應(yīng)用。
[0012] 所述的抗內(nèi)毒素血癥藥物為能夠降低內(nèi)毒素血癥的病死率的藥物。
[0013] 所述的抗膿毒癥藥物為能夠降低膿毒癥的病死率的藥物。
[0014] 所述的抗內(nèi)毒素血癥藥物為能夠抑制內(nèi)毒素血癥動物體內(nèi)促炎性細(xì)胞因子分泌 的藥物。
[0015]所述的抗膿毒癥藥物為能夠抑制膿毒癥動物體內(nèi)促炎性細(xì)胞因子分泌的藥物。
[0016] 所述的促炎性細(xì)胞因子為TNF-α和IL-6。
[0017] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：
[0018]本發(fā)明采用化學(xué)合成的方法獲得了一種由16個氨基酸組成的新型肽MDP-1，其氨 基酸序列如SEQ.ID.NO. 1所示，并提供了該肽MDP-1在制備抗感染、抗內(nèi)毒素血癥及膿毒癥 藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過合成肽MDP-1，并首次發(fā)現(xiàn)MDP-1對內(nèi)毒素血癥及膿毒癥動物模 型具有保護(hù)作用，能夠應(yīng)用于制備抗感染、抗內(nèi)毒素血癥及抗膿毒癥藥物。
[0019] 進(jìn)一步的，通過實驗證明，本發(fā)明提供的新型肽MDP-1在治療LPS誘發(fā)的致死性內(nèi) 毒素血癥及盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)構(gòu)建的膿毒癥小鼠動物模型過程中，能夠有效提高動物 的生存率，并且顯著降低了小鼠血清及腹腔中促炎性細(xì)胞因子TNF-a和IL-6的水平，說明肽 MDP-1具有良好的治療內(nèi)毒素血癥及膿毒癥的效果。
【附圖說明】
[0020] 圖1為肽MDP-1降低LPS誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)毒素血癥的死亡率的統(tǒng)計結(jié)果圖，*代表p〈 0.05〇
[0021] 圖2為肽MDP-1抑制采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)構(gòu)建的小鼠膿毒癥的死亡率的統(tǒng)計結(jié)果 圖，*代表P〈〇.〇5。
[0022] 圖3為肽MDP-1抑制LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥小鼠血漿中促炎性細(xì)胞因子的分泌的統(tǒng) 計結(jié)果圖，其中（a)為促炎性細(xì)胞因子TNF-a，（b)為促炎性細(xì)胞因子IL-6，*代表p〈0.05，** 代表p〈〇 . 01。
[0023] 圖4為肽MDP-1抑制盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)構(gòu)建的膿毒癥小鼠血漿中促炎性細(xì)胞因子的 分泌的統(tǒng)計結(jié)果圖，其中(a)為促炎性細(xì)胞因子TNF-a，（b)為促炎性細(xì)胞因子IL-6，**代表p 〈0.01。
[0024] 圖5為肽MDP-1抑制盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)構(gòu)建的膿毒癥小鼠腹腔中促炎性細(xì)胞因子分 泌的統(tǒng)計結(jié)果圖，其中（a)為促炎性細(xì)胞因子TNF-α，（b)為促炎性細(xì)胞因子IL-6，*代表p〈 0.05，**代表?〈0.01。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合附圖和具體實驗結(jié)果對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0026]本發(fā)明采用化學(xué)合成的方法獲得了一種由16個氨基酸組成的新型肽MDP-1，其氨 基酸序列如SEQ.ID.NO. 1所示，發(fā)明人檢測了肽MDP-1對LPS刺激的小鼠巨噬細(xì)胞的炎性因 子的分泌的影響，發(fā)現(xiàn)肽MDP-1具有抑制炎性細(xì)胞因子分泌的功能。因此，將肽MDP-1進(jìn)一步 用于內(nèi)毒素血癥和膿毒癥的治療研究，發(fā)現(xiàn)肽MDP-1對內(nèi)毒素血癥和膿毒癥動物模型具有 保護(hù)作用，能夠顯著降低小鼠的病死率，改善小鼠的生存，同時能夠明顯抑制小鼠體內(nèi)促炎 性細(xì)胞因子的水平。
[0027]本發(fā)明合成的肽MDP-1的氨基酸序列如下：
[0028]MRWQEMGYIFYPRKLR(同SEQ·ID·N0· 1)
[0029]編碼所述肽MDP-1的核苷酸序列如下：
[0030]ATGAGGTGGCAAGAAATGGGCTACATTTTCTACCCCAGAAAACTACGA (SEQ.ID.NO.2)
[0031]下面對本發(fā)明提供的肽MDP-1作用于內(nèi)毒素血癥和膿毒癥動物模型的具體實驗和 結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0032]1、肽MDP-1治療對LPS誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥小鼠的生存率影響實驗：
[0033]將清潔級C57雄性小鼠40只，隨機分為四組：（1)正常對照組；（2)腹腔注射10mg/kg的LPS組；（3)腹腔注射10mg/kg的L