抗her3抗體、其制法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及抗肥R3抗體、其制法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肥R3 巧rbB-3、ERBB3、c-erbB-3、c-erbB3、受體酪氨酸蛋白質(zhì)激酶erbB-3、沈Q IDNO. :41)是編碼表皮生長(zhǎng)因子受體巧GFR)酪氨酸激酶家族的一名成員，該家族還包括 肥Rl(又稱為EGFR)、肥R2、和肥R4等。肥R3結(jié)構(gòu)包括結(jié)合配體的胞外區(qū)，α螺旋的跨膜 區(qū)，具有酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域和富含酪氨酸的C端磯酸化位點(diǎn)胞內(nèi)區(qū)。其中胞外區(qū)又可分為 I(L1)、II(S1)、111化2)和IV(S2)，結(jié)構(gòu)域I和III是配體結(jié)合區(qū)，而II和IV結(jié)構(gòu)域是結(jié)合配 體后發(fā)生構(gòu)象改變暴露的二聚化結(jié)構(gòu)域?；痳egulin(HRG)是肥R3的特異性配體，肥R3的 表達(dá)和功能受到配體時(shí)空表達(dá)的影響，HRG通過促進(jìn)肥R3與肥R家族的其他成員形成異二 聚體來激發(fā)胞內(nèi)信號(hào)。因此，它能結(jié)合此配體，但是不能經(jīng)由蛋白質(zhì)磯酸化將信號(hào)傳送入細(xì) 胞中。然而，它與具有激酶活性的其它肥R家族成員形成異二聚體。異二聚化導(dǎo)致受體介 導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活及其胞內(nèi)域的轉(zhuǎn)磯酸化。肥R家族成員間的二聚體形成擴(kuò)大HER3 的信號(hào)傳導(dǎo)潛力，并且是一種不僅用于信號(hào)多樣化，而且用于信號(hào)放大的手段。例如，肥R2/ 肥R3異二聚體在肥R家族成員間經(jīng)由PI3K和AKT途徑誘導(dǎo)最重要的促有絲分裂信號(hào)之一， 已經(jīng)在許多癌癥，包括前列腺、膀脫、和乳腺腫瘤中報(bào)告了此基因的擴(kuò)增和/或其蛋白質(zhì)的 過表達(dá)。已經(jīng)表征了編碼不同同等型的可變轉(zhuǎn)錄剪接變體。一種同等型缺乏膜間區(qū)，并且 分泌到細(xì)胞外。此形式作用為調(diào)控膜結(jié)合形式的活性。還已經(jīng)報(bào)告了別的剪接變體，但是 它們尚未徹底表征。
[0003]W097/35885涉及肥R3抗體。W02003/013602涉及肥R活性抑制劑，包括肥R抗 體。W02007/077028和W02008/100624也涉及肥R3抗體。但是本領(lǐng)域中仍然缺乏一種針對(duì) 肥R3的靈敏性好特異性強(qiáng)的抗體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種新型的肥R3特異性抗體或其片段。
[0005] 本發(fā)明的另一目的是提供上述抗體或其片段的制備方法和用途。
[0006] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗體的重鏈可變區(qū)，所述的重鏈可變區(qū)包括W下 Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR;
[0007] (1)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1
[0008]所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR1 選自；SEQIDNO. :17、沈QIDNO. :23、沈QIDNO. :29 和 沈QIDNO. : 35 ;
[0009] 似互補(bǔ)決定區(qū)CDR2
[0010]所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR2 選自；SEQIDNO. :18、沈QIDNO. :24、沈QIDNO. :30 和 沈QIDNO. : 36 ;
[0011] 做互補(bǔ)決定區(qū)CDR3
[0012] 所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR3 選自；SEQIDNO. :19、沈QIDNO. :25、沈QIDNO. :31 和 沈QIDNO. :37。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的H個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDRl、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 17、SEQIDNO. : 18 和沈QIDNO. : 19 所示。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 23、SEQIDNO. : 24 和沈QIDNO. : 25 所示。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 29、SEQIDNO. : 30 和沈QIDNO. : 31 所示。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸 序列分別如沈QIDNO. : 35、SEQIDNO. : 36 和沈QIDNO. : 37 所示。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)具有沈QIDNO.:沈QIDNO. :2、6、10或12所 示的氨基酸序列。
[0018] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種抗體重鏈，所述抗體重鏈具有如權(quán)利要求1所述 的抗體的重鏈可變區(qū)。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述抗體重鏈具有SEQIDNO. :42、43、44或45所示的氨基酸序 列。
[0020] 本發(fā)明的第Η方面，提供了一種抗體的輕鏈可變區(qū)，其特征在于，所述的輕鏈可變 區(qū)包括W下Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR;
[0021] (1)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1'
[0022] 所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR1' 選自；SEQIDNO. :20、沈QIDNO. :26、沈QIDNO. :32 和 沈QIDNO. : 38 ;
[0023] (2)互補(bǔ)決定區(qū)CDR2'
[0024]所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR2' 選自；SEQIDNO. :21、沈QIDNO. :27、沈QIDNO. :33 和 沈QIDNO. : 39 ;
[00巧](3)互補(bǔ)決定區(qū)CDR3'
[0026]所述互補(bǔ)決定區(qū)CDR3' 選自；SEQIDNO. :22、沈QIDNO. :28、沈QIDNO. :：34 和 沈QIDNO. : 40。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 20、SEQIDNO. : 21和沈QIDNO. : 22所示。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 26、SEQIDNO. : 27和沈QIDNO. : 28所示。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 32、SEQIDNO. : 33和沈QIDNO. : 34所示。
[0030]在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)的Η個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)CDR1'、CDR2'、CDR3'的氨基 酸序列分別如沈QIDNO. : 38、SEQIDNO. : 39和沈QIDNO. : 40所示。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述輕鏈可變區(qū)具有SEQIDNO. :4、8、12或16所示的氨基酸序 列。
[0032] 本發(fā)明的第四方面，提供了一種抗體的輕鏈，所述的輕鏈具有如權(quán)利要求3所述 的抗體的輕鏈可變區(qū)。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述抗體輕鏈具有SEQIDNO. :46、47、48或49所示的氨基酸序 列。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述重鏈的恒定區(qū)和/或所述輕鏈的恒定區(qū)是人源的。
[0035] 本發(fā)明的第五方面，提供了一種特異性結(jié)合肥R3的單克隆抗體，其特征在于，所 述單克隆抗體具有W下特性：
[0036] (1)與肥R3蛋白親和力常數(shù)Μ> 1X10";
[0037] 似結(jié)合肥R3胞外區(qū)的DI或Dili結(jié)構(gòu)域。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體抑制肥R3與其配體化regulin結(jié)合的ICs。值 《3nM。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體與肥R3的結(jié)合位點(diǎn)包括選自下組的一個(gè)或多 個(gè)位點(diǎn)：第125位的絲氨酸、第150位天冬氨酸、151位精氨酸和第467位組氨酸。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體具有：
[0041] (1)如權(quán)利要求1所述的重鏈可變區(qū)；和/或
[0042] 似如權(quán)利要求3所述的輕鏈可變區(qū)。
[0043] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體具有：
[0044] (1)如權(quán)利要求2所述的重鏈；和/或
[0045] 似如權(quán)利要求4所述的輕鏈。
[0046] 在另一優(yōu)選例中，所述單克隆抗體包括：?jiǎn)捂溈贵w、雙鏈抗體、嵌合抗體（如人鼠 嵌合抗體）、鼠源抗體、人源化抗體或其組合。
[0047] 在另一優(yōu)選例中，所述的單克隆抗體，為IgG(IgGl)型抗體。
[0048] 本發(fā)明的第六方面，提供了一種重組蛋白，所述的重組蛋白具有：
[0049](i)如權(quán)利要求1所述的抗體的重鏈可變區(qū)、如權(quán)利要求2所述的抗體重鏈、如權(quán) 利要求3所述的抗體的輕鏈可變區(qū)、如權(quán)利要求4所述的抗體輕鏈、或如權(quán)利要求5所述的 單克隆抗體；W及
[0050](ii)任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽序列。
[005。 在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)簽序列包括細(xì)is標(biāo)簽。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述的重組蛋白特異性抗肥R3。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述的重組蛋白選自下組：
[0054] (a)具有SEQIDNO. :42-49所示的氨基酸序列的多膚；
[00巧]化）將（a)中的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)（如1-20個(gè)）氨基酸殘基的取代、缺 失或添加而形成的、由（a)衍生的且特異性抗肥R3的多膚。
[0056] 本發(fā)明的第走方面，提供了一種免疫偶聯(lián)物，該免疫偶聯(lián)物含有：
[0057] (a)載體部分，所述載體部分含有如權(quán)利要求1所述的抗體的重鏈可變區(qū)、如權(quán)利 要求2所述的抗體重鏈、如權(quán)利要求3所述的抗體的輕鏈可變區(qū)、如權(quán)利要求4所述的抗體 輕鏈、或如權(quán)利要求5所述的單克隆抗體或權(quán)利要求7所述的重組蛋白；和
[0058] 化）選自下組的偶聯(lián)部分；可檢測(cè)標(biāo)記物、藥物、毒素、細(xì)胞因子、放射性核素、或 酶。
[0059] 在另一優(yōu)選例中，所述偶聯(lián)物選自；英光或發(fā)光標(biāo)記物、放射性標(biāo)記物、MRI(磁共 振成像）或CT(電子計(jì)算機(jī)X射線斷層掃描技術(shù)）造影劑、或能夠產(chǎn)生可檢測(cè)產(chǎn)物的酶、放 射性核素、生物毒素、細(xì)胞因子（如IL-2等）、抗體、抗體化片段、抗體scFv片段、金納米顆 粒/納米棒、病毒顆粒、脂質(zhì)體、納米磁粒、前藥激活酶（例如，DT-必肌黃酶值TD)或聯(lián)苯 基水解酶-樣蛋白質(zhì)度?l))、化療劑（例如，順笛）或任何形式的納米顆粒等。
[0060]本發(fā)明的第八方面，提供了一種多核巧酸，它編碼選自下組的蛋白質(zhì)：
[0061]如本發(fā)明第一方面所述的抗體的重鏈可變區(qū)、如本發(fā)明第二方面所述的抗體重 鏈、如本發(fā)明第Η方面所述的抗體的輕鏈可變區(qū)、如本發(fā)明第四方面所述的抗體輕鏈、或如 本發(fā)明第五方面所述的單克隆抗體或本發(fā)明第六方面所述的所述的重組蛋白。
[0062]在另一優(yōu)選例中，所述的多核巧酸具有沈QIDNO. :1、3、5、7、9、11、13、15或50-57 所示的DM序列。
[0063]本發(fā)明的第九方面，提供了一種載體，它含有本發(fā)明第八方面所述的多核巧酸。
[0064]在另一優(yōu)選例中，所述的載體包括；細(xì)菌質(zhì)粒、瞻菌體、酵母質(zhì)粒、植物細(xì)胞病毒、 哺乳動(dòng)物細(xì)胞病毒如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、或其他載體。
[0065]本發(fā)明的第十方面，提供了一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，它含有本發(fā)明第九方面 所述的載體或基因組中整合有本發(fā)明第八方面所述的多核巧酸。
[0066]本發(fā)明的第十一方面，提供了一種制備重組多膚的制備方法，該方法包含：
[0067] (a)在適合表達(dá)的條件下，培養(yǎng)本發(fā)明第十方面所述的宿主細(xì)胞；
[0068] 化）從培養(yǎng)物中分離出重組多膚，所述的重組多膚是本發(fā)明第五方面所述的所述 的單克隆抗體或本發(fā)明第六方面所述的所述的重組蛋白。
[0069]本發(fā)明的第十二方面，提供了一種藥物組合物，所述組合物中含有：
[0070](i)如權(quán)利要求1所述的抗體的重鏈可變區(qū)、如權(quán)利要求2所述的抗體重鏈、如權(quán) 利要求3所述的抗體的輕鏈可變區(qū)、如權(quán)利要求4所述的抗體輕鏈、或如權(quán)利要求5所述的 單克隆抗體或權(quán)利要求7所述的重組蛋白；W及
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