弧菌菌株及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種弧菌菌株、弧菌菌株的用途、弧 菌菌株分泌物的用途、組合物、組合物的用途，試劑盒、試劑盒的用途、獲得溶藻物質(zhì)的方法 以及溶藻物質(zhì)的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 赤潮是在全球范圍內(nèi)造成嚴(yán)重的海洋生態(tài)環(huán)境問題的災(zāi)害，已經(jīng)引起社會(huì)各界的 廣泛關(guān)注，由于近年來，沿海污染加劇，導(dǎo)致近海海域發(fā)生富營(yíng)養(yǎng)化，導(dǎo)致赤潮頻繁爆發(fā)當(dāng) 赤潮藻類大量繁殖時(shí)，藻的光合作用消耗了大量的C02，導(dǎo)致水體的酸堿度發(fā)生改變，影響 了海洋生物的正常生命活動(dòng)，同時(shí)，由于赤潮生物覆蓋在水上層，使陽光很難到達(dá)水體深 處，降低水體的透明度，導(dǎo)致底層的水草、珊瑚礁及以水草為主食的海洋動(dòng)物死亡，生物多 樣性銳減。因此，海域一旦發(fā)生富營(yíng)養(yǎng)化，海洋生態(tài)系統(tǒng)的生物種群會(huì)發(fā)生大變化，生態(tài)平 衡便被打亂。特別是某些有毒赤潮藻種的爆發(fā)，不僅僅會(huì)毒害海洋生物，還會(huì)對(duì)人類健康造 成危害，并造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，急需研究出一種區(qū)別于傳統(tǒng)的物理法和化學(xué)法的新 型而高效的控制赤潮的方法，才能解決當(dāng)前的赤潮問題。
[0003]與傳統(tǒng)的物理方法和化學(xué)方法相比較，利用生物特別是某些具有殺藻作用的微生 物控制赤潮的方法具有高效、安全等優(yōu)點(diǎn)，得到學(xué)術(shù)界越來越多的關(guān)注和研究。利用海洋 中具有殺藻作用的微生物可使海洋生態(tài)環(huán)境保持動(dòng)態(tài)平衡，并能實(shí)現(xiàn)對(duì)赤潮的預(yù)防和控制 的目的。其中溶藻細(xì)菌作為一類能夠通過直接或間接方式來實(shí)現(xiàn)對(duì)藻類的滅活或溶解被 越來越多的學(xué)者所關(guān)注，許多研究表明有害藻類的生長(zhǎng)和消亡與自然水體中存在的某些溶 藻細(xì)菌有關(guān)。溶藻細(xì)菌是海洋生態(tài)系統(tǒng)中的重要組成部分，能有效維持藻華的生物量平衡 【Imai I，Sunahara T，Nishikawa T，et al. Fluctuations of the red tide flagellates Chattonella spp. (Raphidophyceae)and the algicidal bacterium Cytophaga sp.in the Seto Inland Sea, Japan[J]. Marine Biology,2001(138):1043-1049.]〇
[0004] 溶藻細(xì)菌（Algae-lysing bacteria)是專指那些能通過直接或者間接的方式，使 藻類生長(zhǎng)受到抑制或者殺滅藻細(xì)胞、裂解藻細(xì)胞的細(xì)菌統(tǒng)稱。國(guó)內(nèi)外學(xué)者十幾年前就開展 了溶藻細(xì)菌的研究工作。溶藻細(xì)菌的相關(guān)報(bào)道主要集中在：粘細(xì)菌【Fukami K，Yuzawa T， Nishijima T，et al. Isolation and properties of a bacteriu inhibiting the growth of Gymnodinium nagasakiense[J]. Nibon Suisan Gakkai-shi，1992(58):1073-1077】、 胞菌屬（Cytophaga)【Shilo M，.Lysis of Blue-Green Algae by Myxobacter[J]· Journal of bacteriology,1970(9):453-461.Shilo M, . Lysis of Blue-Green Algae by Myxobacter[J]· Journal of bacteriology，1970(9):453-461.】、纖維弧菌屬 (Cellvibrio)、節(jié)桿菌（Arthrobacter)、輕弧菌（Bdellovibrio bacterious)、腐生螺旋體 屬（Saprospira)、桿菌（Bacillus)、弧菌（Vibrio)【0shikawa K，K Aachi，M Nishijima，et al. 13-Cyanoaianene production by marine bacteriaon cyanide-free medium and its specific inhibitory activity toward cyanobacteria[J]. Appl Environ Microbiol， 2000,66(2) :718-722.】、黃桿菌屬（Flavobacterium)、假單胞菌（Pseudomonas)【HayashidaA,Tanaka S，Teramoto Y，et al. Isolation of anti-algal Pseudomonas stutzeri strains and their lethal activity of Chattonella antiaua[J]. Agric Biol Chem， 1991.55(3):787-790.】、交替單胞菌（Alteromonas)、屈燒細(xì)菌屬（Flexibacter)、鞘氨醇 單胞菌屬（Sphingomonas)、交替假單胞菌（Pseudoalteromonas)等。這些細(xì)菌大部分屬于 革蘭氏陰性菌，它們的作用對(duì)象比較廣泛，對(duì)許多微型藻類都具有殺滅作用。
[0005] 溶藻細(xì)菌的作用方式分兩種：一種是通過直接與宿主藻接觸或者進(jìn)入宿主藻細(xì)胞 體內(nèi)殺滅藻細(xì)胞，另一種是通過分泌某些胞外活性物質(zhì)或者活性酶等使藻細(xì)胞死亡的間接 溶藻方式【周瑞.高效溶藻細(xì)菌混合溶藻特性的初步研究[D].湖北省武漢市：華中師范 大學(xué)，2006:7-10.】。最早被報(bào)道具有溶藻細(xì)菌是粘細(xì)菌，李勤生和黎尚豪【李勤生，黎尚 豪.溶解固氮藍(lán)藻的細(xì)菌[J].水生生物學(xué)集刊，1981，7(3):377-384】報(bào)道了粘細(xì)菌與藍(lán) 藻細(xì)胞發(fā)生直接接觸而導(dǎo)致藍(lán)藻細(xì)胞死亡，并發(fā)現(xiàn)該溶藻現(xiàn)象只發(fā)生在藻的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，對(duì) 抱子和異形胞等菌不會(huì)產(chǎn)生影響。Takenaka【Takenaka S，Watanabe M F.Microcystin LR degradation by Pseudomonas aeruginosa alkaline protease[J]. Chemosphere, 1997, 34 (4):749-757】從銅綠微囊藻水華中分離出一株與蛭弧菌相似度很高的細(xì)菌，該細(xì)菌能進(jìn) 入宿主銅綠微囊藻細(xì)胞內(nèi)使藻細(xì)胞溶解。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 依據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供一種分離的弧菌菌株，其在中國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中心（ChinaCenterforTypeCultureCollection，CCTCC)的保藏編號(hào)為M2015093， 命名為Vibriosp.HI15,保藏日期為2015年3月8日，保藏地址為湖北省武漢市武漢大學(xué)。
[0007] H115是發(fā)明人從赤潮海水樣本中首次分離出來的一種新型溶藻細(xì)菌，鑒定屬于 弧菌屬，該菌的16SrRNA序列如SEQIDN0:1所示。該菌具有形態(tài)特征如下：菌落直徑 2_3mm，圓形，表面光滑，濕潤(rùn)，灰白色。
[0008] 依據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提供弧菌菌株H115在抑制藻類生長(zhǎng)、殺滅藻細(xì)胞 和/或裂解藻細(xì)胞中的用途。
[0009] 依據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提供弧菌菌株H115的分泌物在抑制藻類生長(zhǎng)、殺 滅藻細(xì)胞和/或裂解藻細(xì)胞中的用途。該溶藻細(xì)菌通過分泌胞外活性物質(zhì)對(duì)藻類進(jìn)行溶 解。篩選溶藻細(xì)菌所分泌的高效溶藻物質(zhì)為有效控制赤潮提供了的一個(gè)新的思路。該溶藻 細(xì)菌通過分泌特異性或非特異性的胞外物質(zhì)，包括但不限于分泌氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、羥 胺和/或抗生等物質(zhì)來溶解藻細(xì)胞。
[0010] 依據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提供弧菌菌株H115在制備溶藻物質(zhì)中的用途。
[0011] 依據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提供一種組合物，該組合物包括弧菌菌株H115。
[0012] 依據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明提供上述組合物在抑制藻類生長(zhǎng)、殺滅藻細(xì)胞和/ 或裂解藻細(xì)胞中的用途。
[0013] 依據(jù)本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包括弧菌H115的分泌物。
[0014] 依據(jù)本發(fā)明的第八方面，本發(fā)明提供上述組合物在抑制藻類生長(zhǎng)、殺滅藻細(xì)胞和/ 或裂解藻細(xì)胞中的用途。
[0015] 依據(jù)本發(fā)明的第九方面，本發(fā)明提供一種試劑盒，其包括弧菌菌株H115和/或該 弧菌菌株的分泌物。
[0016] 依據(jù)本發(fā)明的第十方面，本發(fā)明提供上述試劑盒在抑制