一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng) 基。
【背景技術(shù)】
[0002] 表皮生長因子是由Cohen等人在上世紀(jì)60年代從小鼠頌下腺發(fā)現(xiàn)的一種生長 調(diào)節(jié)蛋白，由53個氨基酸組成，研究證實(shí)它具有廣泛的刺激細(xì)胞增殖的作用。1975年， Starkey、Cohen等人從人尿中提取了人表皮生長因子化umanEpidermalGrowthFactor, hEGF)，與鼠表皮生長因子具有高度一致的結(jié)構(gòu)，并具有一致的生物學(xué)活性。表皮生長因子 廣泛存在于人體各種組織中，可刺激多種細(xì)胞增殖，主要是上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，運(yùn) 是通過結(jié)合細(xì)胞膜上的表皮生長因子受體巧GFR)而起作用的。EGF通過與細(xì)胞受體的膜外 部分結(jié)合，激活其酪氨酸激酶活性，誘導(dǎo)蛋白憐酸化，啟動DNA合成，激活RNA、蛋白質(zhì)合成， 促進(jìn)細(xì)胞增生、移行。
[0003] 表皮生長因子廣泛存在于人體內(nèi)各種組織，含量極微，對于維持人體各種組織器 官（如角結(jié)膜、皮膚、各種黏膜、腺體等）的正常生理功能具有重要作用。隨著年齡的增長， 體內(nèi)表皮生長因子水平逐漸下降，表現(xiàn)為相關(guān)組織器官的衰老和退化，特別是上皮組織的 衰老，因此，及時向人體補(bǔ)充表皮生長因子，可維護(hù)人體正常功能并延緩衰老，運(yùn)是表皮生 長因子在美容保健行業(yè)的應(yīng)用基礎(chǔ)。另外，在肌體受損等的情況下，內(nèi)源性表皮生長因子不 能滿足組織修復(fù)的大量需要，及時向受損部位補(bǔ)充表皮生長因子，可促進(jìn)受損肌體組織的 修復(fù)，在臨床上應(yīng)用非常廣泛，如用于創(chuàng)傷、炎癥、手術(shù)、化學(xué)燒傷及干眼癥等各種原因引起 的角膜上皮缺損修復(fù)，燒傷、創(chuàng)傷、外科手術(shù)、炎癥、潰瘍等各種皮膚和黏膜缺損的修復(fù)。
[0004] 目前，對表皮生長因子和重組表皮生長因子已有研究，例如中國專利97115284. 5， 公開了表皮生長因子工程菌及使用該菌制備表皮生長因子的方法，研究人員通過表皮生長 因子可W得到重組人表皮生長因子（或者稱為重組人表皮生長因子原液）?？萍荚诓粩噙M(jìn) 步，對于表皮生長因子和重組表皮生長因子的研究也在不斷的進(jìn)行當(dāng)中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由W 下重量比例成分制成：
[0006] 肯油; 5.0-7.0%、
[0007] 藤母堿基（Y腑）3.0-3.日％、 微量金屬離子；1.8-2. 2%、 化物索 0.5-1.0%、 促進(jìn)劑 0.5-1.0%、 水 余量；
[0008] 所述微量金屬離子為=氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中 的一種；
[0009] 用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為5. 5-6. 5;
[0010] 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備：
[00川 1)原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎；
[0012] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時間維持在150-200S;
[0013] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0014] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度 30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0015] 進(jìn)一步優(yōu)選的，該培養(yǎng)基由W下重量比例成分制成：
[0016] 甘油； 6.0%、 酵母堿基（YNB) 3.44%、 微量金屬離子： 2.0%、 化物袁 ].0%、 促進(jìn)劑 0.8%、 水 余量；
[0017] 所述微量金屬離子為=氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中 的一種；
[001引用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為6. 0 ;
[0019] 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備：
[0020] 1)原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎；
[0021] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時間維持在150-200S;
[0022] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[002引 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度 30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0024] 本發(fā)明所述用水符合制藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。
[00巧]本發(fā)明所述培養(yǎng)基按照現(xiàn)有技術(shù)制備。
[0026] 本發(fā)明所述積雪草的使用量，優(yōu)選粉碎后的體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐體積的 1/4-1/3。
[0027]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[002引1、本發(fā)明使用的植物原料成分經(jīng)過了蒸汽爆破、蒸饋、高剪切均質(zhì)機(jī)處理，得到納 米乳狀的植物油性成分，和培養(yǎng)基中其他配方的相容性好。
[0029] 2、本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中添加植物原料成分作為促進(jìn)劑，和現(xiàn)有技術(shù)相比，表達(dá) 產(chǎn)量會提高24-33%。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面W實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于運(yùn)些實(shí)施例。
[003。 實(shí)施例1 :
[0032] -種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由W下重量比例成分制 成：
[0033] ；；油:； 5. 0%、 酵母堿基（YNB) 3.5%、 微量金屬聞子； 1.8%、 'M勿崇 0.5%、 促進(jìn)劑 1.0%、 水 余量；
[0034] 所述微量金屬離子為=氯化鐵；
[003引用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為5. 5;
[0036] 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備：
[0037] 1)原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎；
[0038] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3. 5Mpa，保壓時間維持在150s;
[0039] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[0040] 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度40m/ S，時間3min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[00川實(shí)施例2:
[0042] -種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由W下重量比例成分制 成：
[0043] 甘油： 7.0%、 藤母堿基（YNB) 3.0%、 微量金屬離子； 2.2%、
[0044] 化物崇 1.0%、 誰進(jìn)劑 0.日％、 水 余量；
[0045] 所述微量金屬離子為氯化巧；
[0046] 用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為6. 5;
[0047] 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備：
[004引1)原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎；
[0049] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/4,爆破壓力3.OMpa,保壓時間維持在200s;
[0050] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[005。 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30m/ S，時間5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[005引實(shí)施例3:
[0053] -種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由W下重量比例成分制 成：
[0054] 甘油： 6.0%、 酵母堿基（YNB) 3.44%、 微量金屬離子； 2.0%、 小.物崇 1.0%、 促進(jìn)劑 0.8%、 水 余量；
[00巧]所述微量金屬離子為鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中；
[0056] 用憐酸鹽緩沖液調(diào)抑為6.0 ;
[0057] 所述促進(jìn)劑采用W下方法制備：
[0058] 1)原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎；
[0059] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3.OMpa,保壓時間維持在180s;
[0060] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分 離器，收集精油；
[006。4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度35m/ S，時間4min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于，該培養(yǎng)基由以下重量比 例成分制成：所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一 種； 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為5. 5-6. 5 ; 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備： 1) 原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa，保壓 時間維持在150-200s; 3) 蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分離器， 收集精油； 4) 高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30-40m/ s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于， 該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一 種； 用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為6.0; 所述促進(jìn)劑采用以下方法制備： 1) 原料處理：將積雪草洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa，保壓 時間維持在150-200s; 3) 蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當(dāng)炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內(nèi)，再通過油水分離器， 收集精油； 4)高剪切均質(zhì)機(jī)處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質(zhì)機(jī)處理，線速度30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在 于：所述積雪草的使用量，粉碎后的體積相當(dāng)于蒸汽爆破罐體積的1/4-1/3。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于重組人表皮生長因子發(fā)酵的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下重量比例成分制成：甘油5.0-7.0％、酵母堿基(YNB)3.0-3.5％、微量金屬離子1.8-2.2％、生物素0.5-1.0％、促進(jìn)劑0.5-1.0％、水余量；所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一種；用磷酸鹽緩沖液調(diào)pH為5.5-6.5。本發(fā)明使用的植物原料成分經(jīng)過了蒸汽爆破、蒸餾、高剪切均質(zhì)機(jī)處理，得到納米乳狀的植物油性成分，和培養(yǎng)基中其他配方的相容性好。本發(fā)明通過在培養(yǎng)基中添加植物原料成分作為促進(jìn)劑，和現(xiàn)有技術(shù)相比，發(fā)酵液的產(chǎn)量會提高24-33％。
【IPC分類】C12P21/02
【公開號】CN105296577
【申請?zhí)枴緾N201510843337
【發(fā)明人】韋忠明, 黃啟斌, 莫冬海, 秦芳, 包能創(chuàng), 唐申秀
【申請人】桂林華諾威基因藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月26日