一種用于治療乳腺癌的二萜類(lèi)化合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從黃琴的干燥根中分離得到的一種具有治療 乳腺癌作用的二祗類(lèi)化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃琴又名元琴、枯琴，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為唇形科植物 Scutellari油aicalensisGeorgi的干燥根。黃琴味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、 安胎等功效。主治溫?zé)岵?、上呼吸道感染、肺熱咳嗽、濕熱黃膽、肺炎、頻疾、咳血、目赤、胎動(dòng) 不安、高血壓、癡腫巧瘡等癥。黃琴是我國(guó)中醫(yī)臨床常用中藥品種之一，具有悠久的用藥歷 史，主產(chǎn)于河北、山西、內(nèi)蒙古、迂寧等省區(qū)，俄羅斯東西伯利亞，蒙古，朝鮮，日本均有分布。
[0003] 黃琴主要含黃酬類(lèi)化合物，目前從黃琴中分離的黃酬巧元及巧有40多種。此外黃 琴中還含有大量的二祗類(lèi)化合物和豐富的微量元素（其中鐵、銅、鋒、儘的含量均很高）。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明黃琴具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤、抗過(guò)敏、清除自由基及 抗氧化作用等作用。黃琴的抗菌和抗病毒作用，與中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)治療"天行熱疾"、"火咳肺瘦" 和"療瘡火瘍"相一致。黃琴抗菌范圍較廣，其中對(duì)金葡菌、綠脈桿菌的抑制作用最強(qiáng)，且 對(duì)鉤端螺旋體也有一定的抑制作用。黃琴巧可顯著抑制細(xì)胞內(nèi)白=締B4、白=締C4的 生物合成，還可顯著抑制人工=膚（fML巧激發(fā)的白細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高，并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)cAMP 水平提高，表明黃琴巧顯著影響白細(xì)胞的多種功能并掲示了其抗炎作用機(jī)理。研究顯示 5, 7, 2' -S徑基黃酬和5, 7, 2'，3'-四徑基黃酬能顯著抑制小鼠皮膚腫瘤的發(fā)生。黃琴中 黃琴莖葉總黃酬及野黃琴巧對(duì)LA795細(xì)胞的抑制實(shí)驗(yàn)顯示，它們?cè)谝欢舛认聦?duì)LA795細(xì) 胞有抑制作用；同時(shí)，不同劑量的黃琴總黃酬皆可抑制移植肉瘤S180瘤株的體內(nèi)增殖，且 呈量效關(guān)系，表現(xiàn)出高效低毒的抗腫瘤活性。黃琴的4種主要黃酬成分在機(jī)體的不同系統(tǒng) 中均具有消除自由基和抗氧化活性。黃琴素可預(yù)防諸如氨過(guò)氧化物酶、超氧化物陰離子等 氧自由基引起的成纖維細(xì)胞的損傷。在4種黃琴的黃酬類(lèi)成分中，黃琴素是最有效的抗氧 化劑。在缺血再灌注模型中，黃琴素可使細(xì)胞避免致死量氧化劑的損傷。 陽(yáng)0化]黃琴是一種較常用的中藥，臨床應(yīng)用廣泛，近年來(lái)對(duì)其抗氧化、抗腫瘤和抗HIV病 毒的研究日趨深入，開(kāi)發(fā)黃琴及其活性成分作為降血壓、治療冠屯、病W及防治腫瘤和艾滋 病藥物的前景十分廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種從黃琴的干燥根中分離得到的一種具有治療乳腺癌作 用的二祗類(lèi)化合物及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0008] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將黃琴的干燥根粉碎， 用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽 和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步驟（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中75% 乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、45:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體 積比為25:1、20:1和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫， 收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0011] 進(jìn)一步地，步驟（a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為AB-8型大孔吸附樹(shù)脂。
[0013] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0014] 所述的化合物（I)在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 所述的藥物組合物在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0017] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0018] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖I為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0020] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較；
[0021] 圖3為不同劑量化合物（I)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活力的影響；
[0022] 圖4為不同劑量化合物（I)對(duì)乳腺癌細(xì)胞調(diào)亡的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0024] 實(shí)施例1:化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證 陽(yáng)0巧]試劑來(lái)源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0026] 制備方法：（a)黃琴的干燥根（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?化X3次）， 合并提取液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋（化X3次）和水飽 和的正下醇0LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（398g)和正下醇 萃取物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè) 柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫 物浸膏（163g) ; (C)步驟化）中75 %乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體 積比為85:1 (10個(gè)柱體積）、45:U9個(gè)柱體積）、20:1(8個(gè)柱體積）、10:1(8個(gè)柱體積）和 1:1巧個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；(d)步驟（C)中組分3 (49g) 用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (10個(gè)柱體 積）和10:1巧個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2 (31g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠0DS-C18分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶 液等度洗脫，收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(244mg)。
[0027] 結(jié)構(gòu)確證：無(wú)色針晶（甲醇）；HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z471. 1606,結(jié)合核磁 特征可得分子式為C23H2訴9,不飽和度為10。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0-de，600MHz): H-l(9. 81，S)，H-3(2. 42,d，J= 11.8)，H-3(2. 17,d，J= 11.8)，H-6(4. 16,d，J= 7. 3)， H-7(5. 06,dd，J= 11.6,7. 3)，H-8(2. 48,m)，H-9(2. 57,m)，35,m)，14， dd，J= 16. 4, 5.6)，H-14 (3. 39,d，J=8. 0)，H-15 化.05,d，J=I. 7)，H-16 (7. 13,d，J= I. 7)，