一種耐高壓乳酸菌及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種耐高壓乳酸菌及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸菌(Lactobacillus)是一種益生菌，具有增強(qiáng)免疫力、降低膽固醇、產(chǎn)生抑菌活性的代謝產(chǎn)物等重要生理與保健功能，近年來乳酸菌發(fā)酵食品日益受到市場歡迎，并被美國FDA等機(jī)構(gòu)列入到公認(rèn)安全(GRAS，Generally Recognized As Safe)范圍。
[0003]目前，我國對泡椒鳳爪等乳酸菌發(fā)酵食品的開發(fā)主要采用自然發(fā)酵、防腐劑結(jié)合傳統(tǒng)熱殺菌或輻照殺菌工藝生產(chǎn)，產(chǎn)品無乳酸菌活性，并且存在品質(zhì)劣變嚴(yán)重、煮熟味重、脆度差、營養(yǎng)損失等問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的一個目的是提供一種耐高壓乳酸菌的制備方法。
[0005]本發(fā)明提供的耐高壓乳酸菌的制備方法包括如下步驟:對乳酸菌Lactobacillusplantarum進(jìn)行多次超高壓處理，得到高壓處理菌，為耐高壓乳酸菌；
[0006]每次所述超高壓處理的對象為上一次超高壓處理得到的高壓處理菌，且每次超高壓處理的壓力呈依次遞增或者不變的狀態(tài)；
[0007]所述多次為大于等于2次。
[0008]上述方法中，每次所述超高壓處理的壓力為100_600MPa ;每次所述超高壓處理的時間為l-15min。
[0009]上述方法中，所述超高壓處理的次數(shù)為2次或3次。
[0010]上述方法包括如下步驟:
[0011]I)對乳酸菌Lactobacillus plantarum進(jìn)行第一次超高壓處理，得到一次高壓處理菌；
[0012]2)將所述一次高壓處理菌進(jìn)行第二次超高壓處理，得到二次高壓處理菌，即為耐高壓乳酸菌；
[0013]所述第一次超高壓處理和所述第二次超高壓處理的條件均為350MPa處理5min。
[0014]上述方法包括如下步驟:
[0015]I)對乳酸菌Lactobacillus plantarum進(jìn)行第一次超高壓處理，得到一次高壓處理菌；
[0016]2)將所述一次高壓處理菌進(jìn)行第二次超高壓處理，得到二次高壓處理菌；
[0017]3)將所述二次高壓處理菌進(jìn)行第三次超高壓處理，得到三次高壓處理菌，即為耐高壓乳酸菌；
[0018]所述第一次超高壓處理條件為200MPa處理1min ;
[0019]所述第二次超高壓處理條件為300MPa處理1min ;
[0020]所述第三次超高壓處理條件為400MPa處理1min。
[0021]上述方法中，所述耐高壓乳酸菌為在超高壓條件下的存活率大于所述乳酸菌Lactobacillus plantarum 的菌。
[0022]上述方法中，所述乳酸菌Lactobacillus plantarum為ATCC編號是14917的乳酸菌 Lactobacillus plantarum。
[0023]上述方法中，所述超高壓處理為將處理對象在超高壓的密閉容器中靜置。
[0024]上述方法中，所述乳酸菌以乳酸菌培養(yǎng)液的形式存在；所述乳酸菌在所述乳酸菌培養(yǎng)液中的濃度為17?10 9cfu/mL。
[0025]本發(fā)明的另一個目的是提供上述方法制備的耐高壓乳酸菌。
[0026]上述方法或上述耐高壓乳酸菌在生產(chǎn)乳酸菌發(fā)酵食品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0027]本發(fā)明采用處理溫度為常溫、處理時間短的超高壓殺菌技術(shù)將乳酸菌進(jìn)行超高壓處理，導(dǎo)致不耐壓的乳酸菌和一些有害菌的傷害或死亡，耐壓的乳酸菌存活，從而篩選出耐高壓的乳酸菌。通過試驗證明:本發(fā)明篩選出的耐高壓乳酸菌在超高壓條件下的存活率明顯高于未經(jīng)過超高壓處理的乳酸菌。篩選出的耐高壓乳酸菌將可用于乳酸菌發(fā)酵食品的加工，生產(chǎn)出營養(yǎng)、安全并含有活性乳酸菌的發(fā)酵食品。
【具體實施方式】
[0028]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0029]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0030]下述實施例中的高壓設(shè)備為一種框架固定自動式大型工業(yè)化超高壓設(shè)備在專利號為ZL201020169879.X中公開過，公眾可從中國農(nóng)業(yè)大學(xué)國家果蔬加工工程技術(shù)研究中心獲得。
[0031]下述實施例中的乳酸菌Lactobacillus plantarum的ATCC編號為14917。
[0032]下述實施例中的MRS肉湯和MRS固體培養(yǎng)基均為北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司的產(chǎn)品。
[0033]實施例1、耐高壓乳酸菌的制備方法
[0034]—、耐200MPa高壓的乳酸菌的獲得
[0035]1、選種
[0036]選取純度高、產(chǎn)酸性能好的乳酸菌Lactobacillus plantarum(ATCC 14917)。
[0037]2、接種
[0038]在無菌操作條件下，將步驟I選取的乳酸菌(ATCC 14917)接種到MRS肉湯中，在30°C條件下培養(yǎng)2d，使菌液中菌體濃度達(dá)到109cfu/mL，得到待篩選的乳酸菌菌液。
[0039]3、耐壓乳酸菌的篩選
[0040]采用高壓設(shè)備對上述步驟2獲得的待篩選的乳酸菌菌液進(jìn)行超高壓處理。具體步驟如下:取20mL的步驟2獲得的待篩選的乳酸菌菌液于無菌密封包裝容器中進(jìn)行超高壓處理，超高壓處理條件為200MPa處理lOmin，得到超高壓(200MPa)處理后的乳酸菌。
[0041]將上述超高壓(200MPa)處理后的乳酸菌接種于MRS固體培養(yǎng)基上，30°C條件下培養(yǎng)2d，在平板上生長的菌即為耐200MPa高壓的乳酸菌。
[0042]4、耐壓乳酸菌的擴(kuò)大培養(yǎng)及保存
[0043]在無菌操作條件下，將步驟3中獲得的耐200MPa高壓的乳酸菌擴(kuò)大培養(yǎng)，將其接種到MRS肉湯中，在30°C條件下培養(yǎng)2d，使菌體濃度達(dá)到109cfu/mL ;在無菌操作條件下，將其接種到MRS培養(yǎng)基上，并置于4°C條件下保存。
[0044]二、耐300MPa高壓的乳酸菌的獲得
[0045]1、選種
[0046]選取上述步驟一獲得的耐200MPa高壓的乳酸菌。
[0047]2、接種
[0048]在無菌操作條件下，將耐200MPa高壓的乳酸菌接種到MRS肉湯中，在30°C條件下培養(yǎng)2d，使菌液中菌體濃度達(dá)到109cfu/mL，得到待篩選的耐200MPa高壓的乳酸菌菌液。
[0049]3、乳酸菌耐壓性能的篩選
[0050]采用高壓設(shè)備對上述步驟2獲得的待篩選的耐200MPa高壓的乳酸菌菌液繼續(xù)進(jìn)行超高壓處理。具體步驟如下:取20ml的上述步驟2獲得的待篩選的耐200MPa高壓的乳酸菌菌液于無菌密封包裝容器中進(jìn)行超高壓處理，超高壓處理條件為300MPa，lOmin，得到超高壓(300MPa)處理后的乳酸菌。
[0051]將上述超高壓(300MPa)處理后的乳酸菌接種于MRS固體培養(yǎng)基上，30°C條件下培養(yǎng)2d，在平板上生長的菌即為耐300MPa高壓的乳酸菌。
[0052]4、耐壓乳酸菌的擴(kuò)大培養(yǎng)及保存
[0053]在無菌操作條件下，將步驟3中獲得的耐300MPa高壓的乳酸菌擴(kuò)大培養(yǎng)，將其接種到MRS肉湯中，在30°C條件下培養(yǎng)2d，使菌體濃度達(dá)到109cfu/mL ;在無菌操作條件下，將其接種到MRS培養(yǎng)基上，并置于4°C條件下保存。
[0054]三、耐400MPa高壓的乳酸菌的獲得
[0055]1、選種
[0056]選取上述步驟二獲得的耐300MPa高壓的乳酸菌。
[0057]2、接種
[0058]在無菌操作條件下，將耐300MPa高壓的乳酸菌接種到MRS肉