，如在此所使用的，是指治療、改善或防止確定的疾病或狀況或 表現(xiàn)出可檢測的治療或抑制效果的藥物的用量。該效果可以通過在本領域中已知的任何方 法檢測。對主體來說精確的有效量將取決于主體的體重、尺寸和健康；病況的性質和程度； 以及所選擇的用于給藥的治療或聯(lián)合治療。特定情況下的治療有效量可以通過在臨床醫(yī)生 的技能和判斷決定內的常規(guī)實驗確定。在一個優(yōu)選的方面，待治療的疾病或病況是代謝障 礙。
[0198] 在本發(fā)明的方法的實踐中，有效量的任何一種本發(fā)明化合物或本發(fā)明的化合物的 任何組合或其藥學上可接受的鹽或酯是通過本領域公知的任何常見并可接受的方法單獨 地或組合地施用。因此，所述化合物或組合物可以是口服給藥（例如，口腔，舌下含服）、胃 腸外給藥（例如，肌肉注射、靜脈注射或皮下注射）、直腸給藥（例如，通過栓或洗滌）、經皮 (例如，皮膚電穿孔）或吸入（例如，通過氣溶膠），在形式上或是固態(tài)的、液體或氣態(tài)的劑 量，包括片劑和懸浮液?？梢砸詥我坏膯挝粍┝啃问竭B續(xù)治療或單劑量療法隨意進行施用。 治療組合物也可以是油乳液或分散液與親脂性鹽如雙羥萘酸結合的形式，或是同于皮下或 肌肉施用的可降解的緩釋組合物的形式。
[0199]對于制備本發(fā)明的組合物有用的藥物載體可以是固體、液體或氣體；因此，該組合 物可采用片、丸、膠囊、栓劑、粉、腸道涂層或其他保護的制劑（如結合在離子交換樹脂上或 包裹在脂質蛋白囊泡中）、緩釋制劑、溶液、懸浮液、酏劑、氣溶膠等形式。載體可以選自各 種油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，例如，花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。水、 鹽水、葡萄糖和乙二醇水溶液是優(yōu)選的液體載體，特別是（與血液等滲時）對于可注入的溶 液。例如，用于靜脈給藥的制劑包括活性成分的無菌水溶液，其是通過在水中溶解固體活 性成分產生水溶液然后將該溶液進行無菌處理而制備的。適宜的藥用輔料包括淀粉、纖維 素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、明膠、滑石粉、麥芽、大米、面粉、二氧化硅、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、 粉筆、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。該組合物可添加常規(guī) 藥物添加劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、用于調節(jié)滲透壓的鹽、緩沖劑等。合適的 藥物載體及其制劑在E.W.Martin的Remington'sPharmaceuticalSciences中描述。在 任何情況下，這樣的組合物包含有效量的活性化合物和合適的載體，以制備用于向接受者 適當施用的適當劑型。
[0200] 藥物制劑還可包含保鮮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味 劑、用于改變滲透壓的鹽、緩沖劑、涂層劑或抗氧劑。它們還可以包含其他在治療上有價值 的物質，包括除通式I的那些物質以外的額外的活性成分。
[0201] 本發(fā)明的化合物作為藥物對于治療具有至少一種TRP突變的主體中的抗甲狀腺 激素（RTH)是有用的。所述主體可具有疾病，例如肥胖、高血脂、血膽脂醇過多、糖尿病、非 酒精性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨病、甲狀腺軸變化、動脈粥樣硬化、心血管障礙、心跳過速、多 動行為、甲狀腺機能障礙、甲狀腺腫大、注意缺陷多動障礙、學習障礙、智力遲鈍、聽力缺 損、骨齡延遲、神經或精神疾病或甲狀腺癌。
[0202] 根據(jù)本發(fā)明的化合物的治療有效量或劑量可在很寬的范圍變化，并且可通過本領 域中已知的方法確定。例如，該藥物可根據(jù)體重施用。這些劑量將被調整到在每個特定的情 況下的個體需求，所述每個特定的情況包括被施用的特定的化合物、給藥途徑、正在接受治 療的疾病以及正在接受治療的病人。在另一實施方式中，該藥物可以固定劑量給藥，例如， 不根據(jù)體重調整劑量。一般來說，向成人口服或胃腸外給藥的話，每日劑量從約0. 5毫克到 約1000毫克應當時適當?shù)?，雖然必要時可能會超過上限。用量優(yōu)選為從約5毫克至約400 毫克/天。優(yōu)選的劑量可以是從約20毫克到約100毫克/天。每日劑量可作為單劑量或 分次給藥，或胃腸外給藥，其可以以連續(xù)輸注的形式施用。
[0203] 藥劑的有效量是指提供了被臨床醫(yī)生或其他有資格的觀察者注意到的客觀的可 辨認的改善。例如，在患者體內的腫瘤消退可以參考腫瘤直徑來測量。一個腫瘤的直徑減 小表示消退。消退也表明了治療停止后腫瘤復發(fā)的失敗。本文所使用的術語"劑量有效方 式"是指活性化合物在患者或細胞中產生所需的生物效應的量。
[0204] 所述藥物組合物可以同給藥說明書一起包含在容器、包裝或分配器中。.
[0205] 本發(fā)明的化合物能夠進一步形成鹽。這些形式均考慮在要求保護的發(fā)明的范圍 內。
[0206] 本文使用的"藥學上可接受的鹽"是指本發(fā)明化合物的衍生物，其中母體化合物 通過制造其酸或堿的鹽而被修飾。藥學上可接受的鹽的例子包括，但不限于堿性殘基（如 胺）的無機酸鹽或有機酸鹽、酸性殘基（如羧酸）的堿金屬鹽或有機鹽，等等。所述藥學 上可接受的鹽包括例如由無毒的無機酸或有機酸形成的常規(guī)的無毒性的鹽或母體化合物 形成的季銨鹽。例如，所述常規(guī)的無毒性的鹽包括，但不限于那些衍生自無機酸或有機酸 的鹽，所述無機酸或有機酸選自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯 磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、1，2-乙烷磺酸、富馬酸、葡庚 糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰對氨苯基砷酸（glycollyarsanilic)、己基間苯二 酸酸（hexylresorcinic)、海巴明（hydrabamic)、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸、羥基馬來酸、輕 基萘甲酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸 (napsylic)、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛酸、丙酸、水楊酸、硬 脂酸、堿式乙酸（subacetic)、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、單寧酸、酒石酸、甲苯磺酸， 以及常用的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。
[0207] 藥學上可接受的鹽的其他例子包括己酸、環(huán)戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羥 基苯甲酰基）苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟腦磺酸、4-甲基雙 環(huán)-[2. 2. 2]-辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本發(fā)明 還包括當母體化合物中存在的酸性質子被金屬離子（例如堿金屬離子、堿土金屬離子或鋁 離子）取代時形成的鹽；或當母體化合物與有機堿配合時形成的鹽，所述有機堿例如為乙 醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。在鹽的形式中，可以理解的是化合 物對該鹽的陽離子或陰離子的比例可為1:1，或1:1以外的任意的比例，例如，3:1、2:1、1:2 或 1:3。
[0208] 應當理解的是，所有引用的藥學上可接受的鹽包括相同的鹽的如本文所定義的溶 劑加成形式（溶劑化物）或晶體形式（多形體）
[0209] 本發(fā)明的化合物也可以以酯的形式來制備，例如藥學上可接受的酯。例如，化合物 的羧酸官能團可以被轉換成其相應的酯，例如甲酯、乙酯或其它酯。此外，化合物中的醇基 可以被轉換成其相應的酯，例如乙酯、丙酯或其它酯。
[0210] 本發(fā)明的化合物也可以以前藥的形式來制備，例如藥學上可接受的前體藥物。術 語"前體藥物"和"前藥"本文中可互換使用，是指在體內釋放活性母體藥物的任何化合物。 由于已知前藥可以提高藥品的許多可取的品質（例如，溶解度、生物利用度、制造等），所以 本發(fā)明的化合物可以前藥的形式來輸送。因此，本發(fā)明意在覆蓋本發(fā)明要求保護的化合物 的前藥、其輸送方法以及包含它們的組合物。"前藥"意在包括任何共價鍵合的載體，當所述 前藥給藥于主體時所述載體在體內釋放本發(fā)明中的活性母體藥物。本發(fā)明中的前藥通過對 化合物中存在的官能團進行修飾的方式來制備，所述修飾在常規(guī)操作中或在體內裂解為母 體化合物。前藥包括本發(fā)明的化合物，其中，羥基、氨基、巰基、羧基或羰基鍵連到可在體內 裂解分別形成游離羥基、游離氨基、游離巰基、游離羧基或游離羰基的任何基團。
[0211] 前藥的例子包括，但不限于本發(fā)明化合物中的羥基官能團的酯（例如，乙酸酯、 二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物）和氨基甲酸酯類（例 如，N，N-二甲氨基羰基），羧基官能團的酯（如乙酯、嗎啉乙醇酯），N-?；苌铮ɡ?如，N-乙?；?，氨基官能團的N-曼尼希堿、席夫堿和烯胺酮，酮和醛官能團的肟類、縮醛、 縮酮和稀醇酯等等（參閱Bundegaard，H.，DesignofProdrugs，pl-92，Elesevie;r，New York-Oxford(1985))〇
[0212] 所述化合物或其藥學上可接受的鹽、酯或前藥經口服、鼻內、經皮、肺、吸入、頰、舌 下、腹膜內、皮下、肌肉、靜脈、直腸、胸腔內、鞘內和腸道外給藥。在一個實施方案中，所述化 合物經口服給藥。本領域技術人員將認識到某些給藥途徑的優(yōu)點。
[0213] 利用所述化合物的給藥方案根據(jù)多種因素選擇，包括患者的品種、物種、年齡、體 重、性別和病情；需治療的疾病的嚴重程度；給藥途徑；病人的腎肝功能，以及使用的具體 化合物或其鹽。本領域普通技術的醫(yī)生或獸醫(yī)可以很容易地確定和規(guī)定所需藥物的有效量 來防止、對抗或阻止病情的發(fā)展。
[0214] 本發(fā)明公開的化合物的制劑和給藥技術可以參閱Remington:theScienceand PracticeofPharmacy, 19thedition,MackPublishingCo.，Easton,PA(1995) 〇 在一個實 施方案中，本文所公開的化合物和其藥學上可接受的鹽與其藥學上可接受的載體或稀釋劑 結合用于制備藥物。合適的藥學上可接受的載體包括惰性固體填充劑或稀釋劑、無菌水溶 液或有機溶液。所述化合物將以足以提供本文描述范圍內的所需劑量存在于所述藥物組合 物中。本發(fā)明提供了一種用于治療或改善主體中抗甲狀腺激素癥狀的方法，通過向表達包 括配體結合域中的突變的突變TRP主體施用治療有效量的通式（IV)化合物，例如化合物 A，例如其I型。
[0215] 本發(fā)明還提供一種通過提供來自主體的樣品；以及檢測至少一種TRP突變（例如 基因突變或TRP多肽在配體結合域中的突變，TRP多肽例如SEQIDN0:1中限定的多肽） 來檢測抗甲狀腺激素（RTH)的主體對本文所公開的通式（IV)化合物的響應能力的方法通 過提供來自主體的樣品；所述突變的存在表明主體對通式（IV)化合物（例如化合物A，例 如其I型）做出響應。所述方法可進一步包括通過施用治療有效量的通式（IV)化合物（例 如化合物A，例如其I型）治療具有突變的主體。
[0216] 在一個【具體實施方式】中，顯示或將顯示對通式（IV)化合物（例如化合物A)響應 的主體具有肥胖、高血脂、血膽脂醇過多、糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎、脂肪肝、骨病、甲狀 腺軸變化、動脈粥樣硬化、心血管障礙、心跳過速、多動行為、甲狀腺機能障礙、甲狀腺腫 大、注意缺陷多動障礙、學習障礙、智力遲鈍、聽力缺損、骨齡延遲、神經或精神疾病或甲狀 腺癌。
[0217] 進一步地，本發(fā)明還提供了一種方法，其包括確定在來自主體的樣品中存在TRP基因突變；基于TRP基因突變存在，選擇療法，所述療法包括施用治療有效量的通式（IV) 化合物，例如化合物A，例如其I型。
[0218] 本發(fā)明還提供一種方法，其包括用引物使來自主體的樣品中的核酸擴增，所述引 物與在SEQIDN0:2中限定的核酸序列中包含TRP基因突變的突變TRP核酸序列互補； 確定擴增核酸的存在，以及基于存在擴增的核酸，選擇包括施用治療有效量的通式（IV)化 合物的療法，或者基于存在擴增的核酸，通過施用治療有效量的通式（IV)化合物來治療主 體。
[0219] 本文所描述的突變TRP是突變TRP多肽或編碼突變TRP多肽的核酸序列。
[0220] 在一個【具體實施方式】中，突變TRP包括一個或多個在SEQIDNO: 1的氨基酸位點 234、243、316和317處的突變。更優(yōu)選地，突變選自在SEQIDN0:1的氨基酸位點234處 的野生型丙氨酸（A)殘基被替換為蘇氨酸（T) (A234T);在SEQIDNO: 1的氨基酸位點243 處的野生型精氨酸（R)殘基被替換為谷氨酰胺（Q)氨基酸；在SEQIDNO: 1的氨基酸位點 316處的野生型精氨酸（R)殘基被替換為組氨酸（R316H);以及在SEQIDNO: 1的氨基酸位 點317處的野生型丙氨酸（A)殘基被替換為蘇氨酸（T) (A3m〇。
[0221] 在一個【具體實施方式】中，所述突變TRP包括編碼突變TRP多肽的核酸序列，所 述突變TRf3多肽具有在SEQIDN0:1的氨基酸位點234、243、316和317處的一個或多 個突變。編碼突變TRP多肽或具有突變TRP多肽特征的多肽片段的核酸序列可以使用 任何合適的方法檢測。例如，編碼突變TRP多肽的核酸序列可以根據(jù)本領域公知的方法 采用使用適當選擇的DNA來源和聚合酶鏈反應（PCR)引物的全基因組測序或靶區(qū)域測 序（后者也被稱為靶向重測序）來檢測。參見，例如，Bentley(2006)CurrOpinGenet Dev. 16:545-52,andLietal. (2009)GenomeRes19:1124-32。所述方法經典地、通常地 需要以下步驟：基因組DNA純化、對感興趣區(qū)域擴增的PCR擴增、循環(huán)測序、測序反應清潔、 毛細管電泳以及數(shù)據(jù)分析。使用生物信息學（inSilico)引物設計工具設計覆蓋感興趣區(qū) 域的高質量PCR引物。循環(huán)測序是個簡單方法，其中在熱循環(huán)中變性、熱處理和延伸的連續(xù) 輪回導致延伸產物的線性擴增。通常，所述產物的末端為以識別作為G、A、T或C的末端核 苷酸堿基的熒光標記。未摻入的染料終止劑和可與毛細管電泳注射劑競爭的鹽通過洗滌除 去。毛細管電泳期間，循環(huán)測序反應的產物通過填充聚合物的毛細管迀移。當它們通過毛 細管向陽極移動時，帶負電的DNA片段按從小到大分離。電泳后，數(shù)據(jù)收集軟件創(chuàng)建原始數(shù) 據(jù)的樣品文件。使用下游應用軟件進行進一步數(shù)據(jù)分析以便將收集的彩色數(shù)據(jù)圖像轉譯為 相應的核苷酸堿基。備選地或另外地，所述方法可包括采用芯片目標區(qū)域基因組DNA捕獲 和/或測序。試劑盒、試劑和用于選擇適當PCR引物和進行重測序的方法可以商購獲得，例 如，從AppliedBiosystems，Agilent,andNimbleGen(RocheDiagnosticsGmbH)獲得。為 了用于本發(fā)明，PCR引物可被選擇以擴增，例如，編碼突變TRP多肽的核酸序列的至少相關 部分，所述突變TRP多肽具有在SEQIDN0:1的氨基酸位點234、243、316和317處的一個 或多個突變。
[0222] 備選地或另外地，根據(jù)本領域公知的方法，使用印跡法編碼突變TRP多肽的核酸 序列可被檢測。
[0223] 在某些【具體實施方式】中，本發(fā)明的方法包括步驟進行化驗以檢測來自主體的樣品 中的TRP的突變體的步驟。如在此所使用的，"來自主體的樣品"是指從主體獲得或衍生 的包含細胞或細胞成分的任何合適的樣品。在一個【具體實施方式】中，所述樣品是血液樣品。 在一個【具體實施方式】中，所述樣品是從例如甲狀腺體獲得的活組織切片樣本。
[0224] 本發(fā)明還提供了配體-突變TRP絡合物，其包括：突變TRP多肽和通式（IV)化 合物。例如，形成所述絡合物的突變TRP多肽包括SEQIDNO: 1中的一個或多個在氨基酸 位點234、243、316和317的突變。例如，形成所述絡合物的化合物是化合物A。
[0225] 另外，本發(fā)明提供引物-核酸絡合物包括：突變TRP核酸序列和與突變TRP核酸 序列互補的PCR引物，其特征是，突變核酸序列包括在SEQIDN0:2中限定的核酸序列中的 EZH2基因突變。
[0226] 在此提及的所有專利、專利申請和出版物均通過引用并入本申請中。然而，包含表 達定義的專利、專利申請和出版物被通過引用被包含時，那些表達定義應當理解為只適用 于它們被發(fā)現(xiàn)的所并入的專利、專利申請和出版物，而不適用于該申請的文本的其余部分， 特別是本申請的權利要求。
[0227] 需要了解的是，雖然已經結合優(yōu)選的【具體實施方式】對本發(fā)明進行了描述，但是前 述說明以及下面的實施例意圖說明，而非限制本發(fā)明的保護范圍。本領域技術人員將理解， 各種變化和等價物可被替代，而不脫離本發(fā)明的保護范圍，進一步地，對于本發(fā)明所屬的那 些本領域技術人員來說，其他方面、優(yōu)點和修改將是顯而易見的。
[0228] 除非另有說明，否則本文所使用的百分比和比率均以重量計。本發(fā)明的其它特征 和優(yōu)點在不同的實施例中變得顯而易見。所提供的實施例說明可用于實施本發(fā)明的不同的 組分和方法。這些實施例并不限制所要求保護的發(fā)明?；诒景l(fā)明的公開內容，本領域技 術人員可以識別和采用可用于實施本發(fā)明的其他組分和方法。 實施例
[0229] 除非另有說明，用于實施例描述的化合物的分析儀器和參數(shù)如下：
[0230] XRPD數(shù)據(jù)在X-射線粉末衍射儀（CubiX-ProXRD)上收集，以從3至45度的 2-theta(2 0 )進行CuKa輻射（45kV，40mA)，掃描速率為0. 12度/分，步長為0. 020度。 樣品置于Si零返回超微觀樣品架上。使用IOmm的輻射寬度進行分析，以下參數(shù)設置在硬 件/軟件中：
[0231] X-射線管：CuKV, 45kV, 40mA
[0232] 檢測器：X'Celerator
[0233] ASS初級狹縫：Fixed1°
[0234] 發(fā)散狹縫（Prog):自動-5mm福照長度
[0235] 索勒狹縫：0. 02弧度
[0236] 散射狹縫（PASS):自動-5mm觀察長度
[0237] 掃描范圍：3. 0-45. 0°
[0238] 掃描模式：連續(xù)
[0239] 步長：0.02°
[0240] 時間每步：10s
[0241] 工作長度：2. 54。
[0242] 根據(jù)分析，使用X'PertHighScorePlus軟件，從可調的到固定的狹縫，將數(shù)據(jù)進 行轉換，參數(shù)如下：
[0243] 固定的發(fā)散狹縫大小：1. 00°，I. 59mm
[0244] 交叉點：44. 3。Omega
[0245] 在以下實施例中，除非另有說明，化合物4是苯甲?；Ｗo的化合物。
[0246] 實施例I:N_ (3, 5-二氯-4-((6-氧代-1,6-二氫噠嗪-3-基）氧基）苯基）苯甲 酰胺（化合物4,其中R2是苯甲?；┑闹苽?br>[0247] 向裝有頂置攪拌、熱偶、回流冷凝管和N2入口 /出口的IL三口圓底燒瓶中加入 3, 6-二氯噠嗪（100g，0. 672mol，lwt)、4_氨基-2, 6-二氯苯酚（122g，0. 686mol，L02 當量） 和DMAC(500mL，5vol)。向所產生的溶液中加入碳酸銫（251g，0. 771mol，1. 15當量），將該懸 浮液加熱到110°C。在該溫度下3h后，將批料溫度降至70°C，并在該溫度下攪拌16h。1HNMR 分析（DMSO)表明幾乎所有的二氯噠嗪都被消耗了，該反應被認為反應完全了。將該批次冷 卻到室溫，并在EtOAc(2L，20體積）幫助下轉移到3L圓底燒瓶中。添加硅膠（100g，lwt)， 將該懸浮液攪拌30min，然后過濾。用EtOAc(500mL，5體積）將反應器和濾餅沖洗至洗脫的 濾液為無色。所得到的濾液用10%NaCl水溶液（2L，20體積）處理，該兩相混合物被攪拌 30min，棄掉下層的水層。在減壓條件下將上層的有機層濃縮干。將EtOAc(100mL，1體積） 添加到殘留物中，在減壓條件下濃縮至干，以提供作為油狀物的粗制化合物2(251g，128% 的產率）。HPLC分析顯示93. 4%的純度。1HNMR分析（DMSO)與指定的結構一致，并且表明 存在~25%DMAC和 2%EtOAc。
[0248] 在下面的表1-3討論了合成化合物2的其他條件。
[0249] 表1.化合物2的反應參數(shù)總結



[0258] 上述粗品2溶解在醋酸（I. 48L，7. 5體積）中，添加苯甲酸酐（168g，0. 741mol，I.I 當量）。將所得混合物加熱至l〇〇°C，在該溫度下35min后，2的量為0. 8%。添加醋酸鈉 (110g，2當量），并將