一種用于提取三七素的分子印跡聚合物的制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物技術領域的方法，具體是一種用于提取三七素的分子印跡聚合物的制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]名貴中藥“三七”具有活血化瘀、消腫止痛、舒筋活絡等功能，其中尤以止血功能著稱，為著名中藥制劑“云南白藥”原料之一?！侗静菥V目》稱“三七止血散血定痛”，三七具有“止血不留瘀，化瘀不傷正”的美名，實為理血的要藥。歷代醫(yī)家將三七作為止血上品，廣泛用于跌打損傷、內傷出血等內外出血癥。三七的水溶性成分三七素，是從三七根中分離的一種特殊的氨基酸，它能縮短小鼠的凝血時間，并使血小板數(shù)量顯著增加，但目前還沒有三七素制劑的生產和使用。
[0003]三七中三七素的提取工藝文獻報道與已有專利均采用醇提、殘渣水提取、過濾、濃縮、正丁醇萃取、水提液上樹脂層析，如中國專利CN1267665A、中國專利CNl 166679C、中國專利CN1865232A等。這些報道工藝基本一致，特別是在提取工藝中均采用S印hadex LH-20以及CM Sephadex C_25樹脂柱，而此兩種樹脂均價格昂貴，成本較高，且處理樣品耗時，操作技術要求高，若要得到高純度的三七素，需要更多的萃取、結晶，是工業(yè)化生產的難題。
[0004]分子印跡技術(Molecular imprinting technology, MIT)是為獲得在空間結構和結合點位上與某一分子(通常稱為模板分子)完全匹配的聚合物的實驗制備技術，屬于高分子化學、材料科學、生物化學、分析化學等之間的一個交叉學科領域。分子印跡聚合物(Molecular imprinting polymer, MIPs)是指以目標分子為模板分子，將具有結構互補的功能化聚合物單體通過共價或非共價的方式與模板分子結合，加入交聯(lián)劑進行聚合反應，反應完成后將模板分子提取出來后形成的一類有固定空穴大小和形狀及有確定排列功能團的交聯(lián)高聚物。因為制備的材料有著極高的選擇性及卓越的分子識別性能，很快在固相萃取、人工酶學、手性拆分、生物傳感器、不對稱催化等方面得到了廣泛的應用。在天然活性物質分離領域，所報道的分子印跡技術多用于黃酮類、多元酚類、生物堿類、留體類和香豆素類的分離純化。
[0005]目前尚未見利用分子印跡技術從三七中提取三七素的方法的報道。主要存在以下的原因:模板“三七素”價格昂貴，，考慮成本與收入，利用模板“三七素”來大規(guī)模制備分子印跡聚合物是不合理的，若是使用一般的物質代替三七素，將會出現(xiàn)分子印跡聚合物對三七素的選擇性較差，制得三七素的純度非常低，迄今還沒有一種價格便宜的物質來代替三七素，并且得到的分子印跡聚合物選擇性強，可用于定向富集三七素。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種用于從三七中提取三七素的分子印跡聚合物和方法，為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
[0007]本發(fā)明提供了一種用于提取三七素的印跡聚合物的制備方法，包括如下步驟:
[0008]I)將假模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑、制孔劑按質量比為I?3:2?6:15?30:0.05?0.10:20?70混合制成均相體系，超聲脫氣、在氮氣保護下，于40?60°C聚合18?24小時；得到帶模板分子的聚合物；
[0009]2)將步驟I)制備的聚合物磨成粉末，過150?200目篩，然后用醇與有機酸的混合溶液進行淋洗，對淋洗液進行高效液相檢測，直至無模板物質檢出為止，干燥，即得三七素分子印跡聚合物。
[0010]進一步地，所述假模板分子為苯丙酮酸、DL-酪氨酸或甘氨酸-DL-亮氨酸，優(yōu)選為甘氨酸-DL-亮氨酸。
[0011]進一步地，所述的功能單體為丙烯酰胺、甲基丙烯酸或4-乙烯基吡啶，優(yōu)選為4-乙烯基吡啶。
[0012]進一步地，所述的交聯(lián)劑為N，N-二甲基二丙烯酰胺、二甲基丙烯酸乙二醇酯或二乙烯基苯，優(yōu)選為二甲基丙烯酸乙二醇酯。
[0013]進一步地，所述的制孔劑為氯仿；所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈或偶氮二異戊腈，優(yōu)選為偶氮二異丁腈。
[0014]進一步地，所述醇與有機酸的混合溶液為體積分數(shù)為10 %?20 %的乙酸甲醇溶液，其中，乙酸和甲醇的摩爾比為。
[0015]進一步地，所述干燥處理的條件為真空下50?65°C烘干。
[0016]上述任一所述方法制備的用于提取三七素的印跡聚合物。
[0017]本發(fā)明還提供了上述用于提取三七素的印跡聚合物在提取三七素中的應用，其特征在于，包括如下步驟:以上述的用于提取三七素的分子印跡聚合物作柱層析填料裝柱，然后用三七根提取液上柱，再用體積比為10:1的正己烷/醇混合溶液淋洗，最后層析柱用醇洗脫，流出液為三七素。
[0018]進一步地，所述的醇為乙醇、異丙醇、正丙醇或正丁醇。
[0019]由上述方法制備得到的三七素分子印跡聚合物。
[0020]本發(fā)明的有益效果:
[0021]1.本發(fā)明首次將分子印跡技術應用于三七中三七素的提取，與傳統(tǒng)三七素提取方法相比，本發(fā)明通過分子印跡-固相萃取柱的定向富集效果，可以簡便制備高純度的三七素，為三七素的臨床藥理研宄提供原料來源。
[0022]2.本發(fā)明采用“假模板”分子印跡技術，用簡便易得的苯丙酮酸、DL-酪氨酸或甘氨酸-DL-亮氨酸替代價格昂貴的真實模板“三七素”，可以為大規(guī)模制備分子印跡聚合物提供可靠的原料來源，使成本大大降低。
[0023]3.本發(fā)明的分子印跡聚合物選擇性強，用于定向富集三七素時，只有三七素分子能夠進入印跡當中，而其它的雜質分子不能進入印跡，使得該分子印跡聚合物主要吸附三七素，其它的雜質吸附的很少，使得到的三七素的純度可達到98%以上。
[0024]4.本發(fā)明的用于提取三七素的分子印跡聚合物在應用之后還可再生，且其再生方法簡單、可行。
[0025]5.該方法制備得到的分子印跡聚合物，其材料上留有孔穴(或稱為印跡)，對三七素具有高度的選擇性。
【附圖說明】
[0026]圖1是實施例1制得的洗脫液高效液相色譜圖，即經(jīng)分子印跡-固相萃取柱提取后的三七素液相色譜圖；
[0027]圖2是本發(fā)明中使用的三七素及結構類似物的分子結構式。
[0028]圖3實施例1印跡聚合物電鏡圖
[0029]圖4實施例2的印跡聚合物電鏡圖
[0030]圖5實施例3的印跡聚合物電鏡圖
[0031]圖6本發(fā)明制備的工藝流程圖
【具體實施方式】
[0032]下面結合附圖與實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0033]實施例1
[0034]三七素假模板分子印跡聚合物的制備:
[0035](I)備料
[0036]各原料組分按如下用量配比配料:假模板分子苯丙酮酸，功能單體4-乙烯基吡啶1.66g，交聯(lián)劑二甲基丙烯酸乙二醇酯16.12g，引發(fā)劑偶氮二異丁腈0.13g，制孔劑氯仿45.34g ；
[0037](2)制備帶有模板分子的聚合物
[0038]將上述備好的苯丙酮酸、4-乙烯基吡啶、二甲基丙烯酸乙二醇酯、偶氮二異丁腈、氯仿加入到反應釜中混合均勻，超聲脫氣15min，然后充氮除氧15分鐘，密封后于60°C恒溫水浴聚合24小時，得到帶有模板分子的聚合物；
[0039](3)制備脫去模板分子的分子印跡聚合物
[0040]將上述制備的聚合物碾磨過200目篩，即得到帶有假模板分子的聚合物顆粒，用乙酸體積分數(shù)為10%的甲醇溶液洗脫，于60°C真空干燥后，得到分子印跡聚合物18.4g。
[0041]三七素假模板分子印跡聚合物在三七素提取中的應用:
[0042]取15克本實施例制得的分子印跡聚合物裝柱，稱取10g三七根粉碎，加入500mL丙酮加熱回流提取2h后，過濾，濾液上柱。待上柱溶液流盡后，用正己烷/乙醇(10:1，V/V)進行淋洗，得淋洗液。層析柱用乙醇洗脫，得洗脫液。洗脫液高效液相色譜圖如圖1所示，洗脫液中三七素純度為99.6%。結果說明分子印跡-固相萃取對三七素有較好的富集效果。
[0043]三七素假模板分子印跡聚合物的再生:將上述洗去三七素的分子印跡聚合物，用95%乙醇洗脫，即可再生用于下一次提取用。
[0044]實施例2
[0045]三七素假模板分子印跡聚合物的制備:<