一種固定化脂肪酶的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種固定化脂肪酶的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪酶可溶于水溶液中，但其天然底物如油脂卻不溶于水。雖然采用適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑或乳化劑有助于酶與底物的結(jié)合，但脂肪酶在非均相反應(yīng)體系的實際利用中仍存在技術(shù)上的問題。例如反應(yīng)系統(tǒng)中殘存的酶可能對產(chǎn)物的質(zhì)量產(chǎn)生不利影響。另外游離酶的使用壽命相對較短，從而使成本增加。如果將脂肪酶固定化，使其在反應(yīng)體系中成為獨立相，便可通過機械手段固定于反應(yīng)器中，這樣就不會污染產(chǎn)物，使用壽命也大大延長。
[0003]生物柴油生產(chǎn)中固定脂肪酶的載體有大孔丙稀酞胺樹脂、蠶絲、凝膠、聚亞胺酯泡沫、生物質(zhì)顆粒等，但存在甘油易堵塞顆粒狀固定化酶的孔徑，產(chǎn)生固定化酶壽命縮短的問題。為制備高品質(zhì)、低成本的生物柴油，應(yīng)開發(fā)新型的脂肪酶固定化方法及載體，其中脂肪酶的膜固定化具有其他方法不可比擬的優(yōu)勢而備受關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種固定化脂肪酶的制備方法，采用價格低廉、活性高的游離脂肪酶Lipause OF作為催化劑，解決催化劑易受醇作用而失活以及催化劑長期使用等問題。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0006]將一定量的LipaSe OF和海藻酸鈉(濃度I % -3% )分別溶于磷酸緩沖液(pH值6.0-8.0)中，充分溶解，合并兩溶液，充分攪拌，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.02-0.15mol/L)中，室溫下固定20_60min ;過濾，在35°C，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。
[0007]本發(fā)明采用海藻酸鈉包埋法制得的固定化酶，具有較好的熱穩(wěn)定性，在60°C溫度下保持7h，其酶活力基本上不變。
【具體實施方式】
[0008]實施例1
[0009]將一定量的Lipase OF和海藻酸鈉(濃度2 % )分別溶于磷酸緩沖液(pH值7.0)中，充分溶解，合并兩溶液，充分攪拌，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.05mol/L)中，室溫下固定30min ;過濾，在35°C，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活達到1810U/g。
[0010]實施例2
[0011]將一定量的Lipase OF和海藻酸鈉(濃度2 % )分別溶于磷酸緩沖液(pH值7.5)中，充分溶解，合并兩溶液，充分攪拌，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.05mol/L)中，室溫下固定40min ;過濾，在35°C，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。酶活達到2300U/g。
[0012]以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其進行限制，盡管參照上述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，依然可以對上述實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換，而這些修改或替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明所要求的技術(shù)方案的精神和范圍。
【主權(quán)項】
1.一種固定化脂肪酶的制備方法，其特征在于:將一定量的LipaSe OF和海藻酸鈉(濃度1% -3% )分別溶于磷酸緩沖液(pH值6.0-8.0)中，充分溶解，合并兩溶液，充分攪拌，混合均勻；用微量注射器逐滴滴入到氯化鈣溶液(0.02-0.15mol/L)中，室溫下固定20-60min ;過濾，在35°C，真空度為0.09MPa的真空干燥箱中烘干。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種固定化脂肪酶的制備方法。其特征是利用海藻酸鈉包埋法對Lipase OF進行固定化。固定化脂肪酶具有較好的熱穩(wěn)定性，在60℃溫度下保持7h，其酶活力基本上不變，可以用于生物柴油的制備。
【IPC分類】C12N9-20, C12N11-10
【公開號】CN104651345
【申請?zhí)枴緾N201310581545
【發(fā)明人】金雪
【申請人】金雪
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2013年11月19日