一種檢測食品中兔源性成分的試劑盒及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說涉及檢測食品中兔源性成分的試劑盒及 其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 動物源性食品在人們?nèi)粘Ｉ攀持械谋壤鸩皆龃?，各種冷鮮肉、精深加工的半成 品肉、熟肉制品等消費比例逐年上升。但不同物種的肉品質(zhì)和價格存在很大差異，給摻雜摻 假創(chuàng)造了極大的利潤空間為了謀取經(jīng)濟利益，有些不法企業(yè)和商販在肉制品中使用低成本 肉代替高價位肉的現(xiàn)象時有發(fā)生。這不僅嚴重侵害了消費者的健康和權(quán)益，還會涉及宗教 信仰，導(dǎo)致民族問題，同時直接影響到國家的形象，社會的和諧發(fā)展以及政府的公信力。
[0003] 隨著分子生物學(xué)方法在食品檢驗中的應(yīng)用不斷深入，食品中動物源性成分的鑒別 技術(shù)也在不斷發(fā)展，鑒別精度和檢測靈敏度的不斷提高，目前已初步形成了以基因檢測為 基礎(chǔ)的方法體系。以聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR)為基礎(chǔ)的技術(shù)已成為食品中動物源性成分鑒定 的核心方法。物種特異性PCR根據(jù)不同物種基因序列的差異位點設(shè)計特異性引物，利用PCR 反應(yīng)實現(xiàn)動物源性成分特征基因片段的指數(shù)級擴增，繼而通過電泳檢測鑒別可能的物種成 分。多重PCR能夠?qū)崿F(xiàn)混合物中多個物種同時檢測。近年來，實時熒光PCR技術(shù)是動物源 性成分檢測中研究最多的方法，與普通PCR相比，具有特異性強、靈敏度高、重現(xiàn)性好、有效 降低污染等優(yōu)點。
[0004] 哺乳動物線粒體DNA(mtDNA)在遺傳上相對獨立，具有基因組小、沒有重復(fù)序列、 生物個體內(nèi)無組織特異性、每個細胞中含有大量線粒體基因組等特點。因此，用mtDNA分子 標記鑒別動物源性成分與核DNA分子標記相比，具有靈敏度高、精確度好、DNA降解小等優(yōu) 勢?；趧游锞€粒體DNA的熒光PCR檢測技術(shù)在動物源性成分鑒別中具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0005] 目前，根據(jù)線粒體基因組DNA序列差異設(shè)計物種特異性引物，建立PCR與實時熒光 PCR方法已見大量報道，然而，針對兔源性成分檢測的熒光PCR方法尚未見報導(dǎo)。因此，建立 動物源性產(chǎn)品中兔源性成分實時熒光PCR檢測方法，對提高突發(fā)事件應(yīng)急處理能力，提升 食品安全風險監(jiān)測水平和監(jiān)管能力具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測食品中兔源性成分的試劑盒及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明首先提供用于檢測食品中兔源性成分的引物對以及熒光探針，其核苷酸序 列分別如SEQIDN0. 1-3所示。
[0008] 本發(fā)明提供了上述引物對和熒光探針在檢測食品中兔源性成分中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供了上述引物對和熒光探針在制備檢測食品中兔源性成分試劑盒中的 應(yīng)用。
[0010] 含有本發(fā)明引物對和熒光探針的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明的試劑 盒可以是由多個隔斷所形成，以容納固定一個或多個如管或小瓶的容器。這些容器之一或 者多個可以裝有本發(fā)明的引物以及熒光探針，根據(jù)需要該引物和熒光探針可以是凍干形式 或溶于緩沖液中的狀態(tài)。另外，本發(fā)明的試劑盒中還可以包括用于熒光定量PCR反應(yīng)的一 種或多種酶/試劑，以及實施本發(fā)明所需要的其它成分及用具，例如DNA裂解液、熒光定量 反應(yīng)液、陰性模板、陽性模板，所述陰性模板為雙蒸水，所述陽性模板為兔基因組DNA。
[0011] 進一步地，本發(fā)明的試劑盒其20iiL工作體系為：
【主權(quán)項】
1. 檢測食品中兔源性成分的引物對，其特征在于，所述引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1-2 所示。
2. 與權(quán)利要求1所述的引物對配合使用的熒光探針，其特征在于，熒光探針的核苷酸 序列如SEQ ID NO. 3所示。
3. 權(quán)利要求1所述的引物對和權(quán)利要求2所述的熒光探針在檢測食品中兔源性成分中 的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1所述的引物對和權(quán)利要求2所述的熒光探針在制備檢測食品中兔源性成 分試劑盒中的應(yīng)用。
5. -種檢測食品中兔源性成分試劑盒，其特征在于，含有權(quán)利要求1所述的引物對和 權(quán)利要求2所述的熒光探針。
6. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，還包括：DNA裂解液、熒光定量反應(yīng)液、陰 性模板、陽性模板，所述陰性模板為雙蒸水，所述陽性模板為兔基因組DNA。
7. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，其20 μ L PCR反應(yīng)體系為：
8. 如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，其工作程序為：95°C預(yù)變性IOmin ;95°C 變性15s，60°C退火lmin，40個循環(huán)。
9. 一種檢測食品中兔源性成分的方法，其特征在于，該方法以蛋白酶K消化法提取的 食品中DNA，以其為模板，利用權(quán)利要求1所述的引物對和權(quán)利要求2所述的熒光探針進行 熒光定量PCR擴增，根據(jù)Ct值判定結(jié)果。
10. 含有權(quán)利要求1所述的引物對和權(quán)利要求2所述的熒光探針的診斷試劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測食品中兔源性成分的試劑盒及其應(yīng)用，屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的試劑盒采用SEQ ID NO.1-2所示的引物和SEQ ID NO.3所示的熒光探針對待測食品進行熒光定量PCR檢測，根據(jù)Ct值判斷食品中是否含有兔源性成分。本發(fā)明試劑盒具有檢測準確，靈敏度高、特異性強，簡便快速的優(yōu)點，最低檢測限為100fg，具有良好的檢測食品中兔源性成分的能力，能有效抵御肉制品摻假，加大對消費者利益的保護力度。
【IPC分類】C12N15-11, C12Q1-68
【公開號】CN104531891
【申請?zhí)枴緾N201510024302
【發(fā)明人】王丹, 楊昕霆, 薛晨玉, 趙琳娜, 楊紅蓮, 李赫婧, 肖輝, 武艷茹, 陶慶會, 王猛
【申請人】北京市食品安全監(jiān)控和風險評估中心
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2015年1月16日