專利名稱:胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法及其在皮膚護(hù)理品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種依據(jù)生物工程技術(shù)，結(jié)合超臨界技術(shù)開發(fā)出的系列活性蛋白滋養(yǎng)護(hù)膚品，特別是一種胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法及其在皮膚護(hù)理品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有美容化妝品的生產(chǎn)工藝大多為膏霜?jiǎng)┊a(chǎn)品，其主要的成分基本是1、油脂和蠟；2、保濕成分，一般為多元醇；3、乳化劑；4、膏霜增稠劑；5、添加劑，如一般潤膚霜和乳液的基本組成都是DC-200、白油、凡士林、蜂蠟、硬脂酸、十六十八醇、羊毛脂、單甘脂、IPP、BHA、硼砂、K12、三乙醇胺、CPK、丙二醇、甘油、山梨醇、防腐劑、水。所述添加劑主要是一些植物提取物或是動(dòng)物提取物成分；這種產(chǎn)品主要是對皮膚具有護(hù)理作用，而不能起到調(diào)節(jié)的作用。
人們對沒有污染，綠色環(huán)保的產(chǎn)品近兩年的需求呈大幅度上升趨勢，表明了人們對皮膚的護(hù)理不再局限于外在的護(hù)理，而更加注重皮膚本質(zhì)上的改變。現(xiàn)有的化妝品原料基本是化學(xué)品，在一般的保護(hù)皮膚的同時(shí)也在無情的傷害著皮膚，所以近年來許多化妝品生產(chǎn)企業(yè)開始在化妝品的配方和工藝上進(jìn)行著大幅度的改革，但這種改革只是在調(diào)配好的化學(xué)基質(zhì)上添加一種或兩種對身體及環(huán)境沒有損害的物質(zhì)，基質(zhì)并沒有改變，仍然是化學(xué)制劑在起主導(dǎo)作用，添加的原料在常溫及化學(xué)品的環(huán)境中已經(jīng)不具備生物活性。
中國專利CN1259341A公開了一種純羊胚胎素護(hù)膚液，它是用下述制備方法得到的提取羊胚胎，經(jīng)熱壓，滅菌過濾后酸沉，堿沉，取離心分離后的上清液，用蒸餾水調(diào)配后，裝瓶。本發(fā)明根據(jù)人體皮膚細(xì)胞的特征和本質(zhì)，從動(dòng)物臟器羊胚胎細(xì)胞中提取脫氧核糖核酸，積極主動(dòng)地使皮膚在三至五分鐘左右增白變嫩達(dá)到，美容護(hù)膚的目的，它不加任何防腐劑添加劑，香精，區(qū)別于其它復(fù)合型美容護(hù)膚品。這種不是通過對胚胎細(xì)胞的培養(yǎng)而直接從動(dòng)物胚胎提取脫氧核糖核酸，很難形成工業(yè)化生產(chǎn)，而且往往不能獲得高純度提取物，及在提取過程中還容易混入對皮膚有害的化學(xué)物質(zhì)。
目前市場上并沒有同類的產(chǎn)品，只有一些細(xì)胞或基因工程的某一單純提取物添加到油水混合的基液里作為皮膚護(hù)理和保養(yǎng)的產(chǎn)品在市場上銷售，主要的銷售場所為美容中心或提供皮膚護(hù)理、修復(fù)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，在使用上也需要由醫(yī)師或美容師的指導(dǎo)，方能達(dá)到一定的美容效果。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)的不足而提供一種利用蛋白之間的生物功能鍵相結(jié)合的機(jī)理，通過活性蛋白對其生理功能進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)，促進(jìn)皮膚的更新速度，煥發(fā)肌膚，且具有高功效和高安全性特性、并適宜于工業(yè)化生產(chǎn)的胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法及其在皮膚護(hù)理品中的應(yīng)用。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的一種胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法是1)胚胎細(xì)胞的培養(yǎng)方式培養(yǎng)基采用5％至20％胎牛或小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，199培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基；無血清培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件37℃二氧化碳培養(yǎng)箱，5％的二氧化碳濃度；傳代根據(jù)細(xì)胞生長的情況，一般為細(xì)胞的已經(jīng)鋪滿瓶底，細(xì)胞的形狀也逐漸轉(zhuǎn)向圓形，對細(xì)胞進(jìn)行傳代培育，傳代時(shí)間一般間隔期在三至四天左右；2)當(dāng)細(xì)胞達(dá)到6×10的6次方的濃度后(如達(dá)不到上述的濃度可以對細(xì)胞液進(jìn)行2000r/m離心30min，棄上清液并進(jìn)行計(jì)數(shù))進(jìn)行接種擴(kuò)大培養(yǎng)，采用微載體灌流式生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模的連續(xù)培養(yǎng)；3)對連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞收集，同時(shí)注入與收集細(xì)胞等量的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；4)將收集的細(xì)胞，離心，棄去培養(yǎng)液后用生理鹽水清洗，清洗3至4次，應(yīng)用超聲波破碎或是低溫凍融的方式對細(xì)胞進(jìn)行破碎；5)對破壁后的細(xì)胞采用微孔膜過濾，將細(xì)胞溶液內(nèi)的細(xì)胞碎片、大細(xì)胞器等內(nèi)容過濾掉；6)采用凝膠色譜方法分離細(xì)胞活性蛋白液中的核酸成分；7)采用高效離子色譜將細(xì)胞活性蛋白液中的抗體成分分離，使得提取液更加的純化；8)超濾除菌，低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> 在制備過程中不使用有毒害的化學(xué)試劑，保持細(xì)胞活性蛋白液不受外界或是化學(xué)物質(zhì)的污染。
根據(jù)上述胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法所獲得的胚胎細(xì)胞活性蛋白提取物應(yīng)用于皮膚護(hù)理品中，所提供的化妝品基本組成可以是胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、植物萃取物、磷脂、香料。其配比是15至50份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
胚胎細(xì)胞活性蛋白液的性狀為不含有核酸的純粹細(xì)胞活性蛋白液，透明、有一定黏附力，需要在低溫下儲(chǔ)存，以保存其生物活性在制備、使用中不喪失。
胚胎細(xì)胞活性蛋白液有各種蛋白分子、無機(jī)鹽、糖類、脂類、酶與生物催化劑組成，通過活性蛋白分子與皮膚相結(jié)合，對已經(jīng)退化或是衰老的細(xì)胞進(jìn)行調(diào)節(jié)，使用中可激活細(xì)胞的生物活力，同時(shí)促進(jìn)真皮層的干細(xì)胞增加活性，增加皮膚的代謝速度，增強(qiáng)分泌透明質(zhì)酸和糖蛋白的能力，滋潤和營養(yǎng)皮膚，達(dá)到嫩膚、護(hù)膚、緩和紫外線損傷的作用，對色斑、黑頭、疤痕、粉刺等有一定的預(yù)防、護(hù)理作用。
2.植物萃取物可以是菊花、山茶、人參、綠茶、紅花、月見草、葡萄籽、黃瓜、絲瓜、檸檬等植物萃取物組合。采用超臨界技術(shù)萃取的新鮮植物，將有效成分，溶于水。
選用菊花萃取物時(shí)，選用性狀為外觀為乳黃或是淡黃色的粉狀制劑，水份在3％以內(nèi)，不溶物質(zhì)小于25％。
植物萃取物主要的作用為抑制細(xì)菌的入侵，能夠抵御、阻隔外部環(huán)境的污染和侵襲。
3.磷脂采用固態(tài)磷脂，產(chǎn)品純度97％以上，以重量計(jì)磷脂通常的含量為每100份產(chǎn)品中約為0.5至5份，優(yōu)選為1至3.5份，更優(yōu)選為1.5至2.5份。
磷脂作為懸浮劑，穩(wěn)定產(chǎn)品內(nèi)的各個(gè)結(jié)構(gòu)。
4.香料根據(jù)不同產(chǎn)品調(diào)配各種香型，以重量計(jì)香料通常的含量每100份中不超過0.5份。增加產(chǎn)品的氣味，覆蓋產(chǎn)品的不良味道。
按本發(fā)明所提供的胚胎細(xì)胞的活性蛋白提取方法所得到的皮膚護(hù)理品，由于直接提取胚胎細(xì)胞中的活性蛋白成分使其與肌膚細(xì)胞相互融合，其各種蛋白質(zhì)與人體細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)屬于同源，結(jié)合細(xì)胞的各種受體促進(jìn)肌膚組織細(xì)胞的再生能力；同時(shí)含有很多種營養(yǎng)成分和微量元素，并表現(xiàn)出極高的極性，與皮膚有很好的親和力，具有較強(qiáng)的皮膚組織滲透性，極易與皮膚細(xì)胞的受體結(jié)合，真正被皮膚吸收，參與或調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝和生理周期；對某些頑固性的皮膚疾病，如色斑、黑頭、疤痕、粉刺等，能起到預(yù)防、護(hù)理的作用。在使用中可激活細(xì)胞的生物活力，增強(qiáng)分泌透明質(zhì)酸和糖蛋白的能力，滋潤和營養(yǎng)皮膚，達(dá)到嫩膚、護(hù)膚、緩和紫外線損傷的作用。添加天然植物成分兼有防護(hù)作用，能夠抵御、阻隔外部環(huán)境的污染和侵襲，所含的生物活性蛋白成分可以更好的解決面部皮膚問題。
本發(fā)明提供的皮膚護(hù)理品的主要功能是促進(jìn)皮膚生理機(jī)能，加強(qiáng)自我調(diào)節(jié)，在生物層面的基礎(chǔ)上達(dá)到美化皮膚的目的，并減少不必要的污染和損傷，具體作用體現(xiàn)在如下幾方面1、具備生物活性，調(diào)節(jié)肌膚細(xì)胞的生理功能、增強(qiáng)細(xì)胞自身活力，延緩皺紋的產(chǎn)生。
2、增強(qiáng)肌膚自我修復(fù)、保濕功能，深層滋養(yǎng)肌膚。
3、促進(jìn)新陳代謝系統(tǒng)。
4、全面營養(yǎng)。
本發(fā)明應(yīng)用生物技術(shù)和超臨界技術(shù)使我們的產(chǎn)品更加具備競爭力，增強(qiáng)了細(xì)胞在美容化妝領(lǐng)域中應(yīng)用效果，使消費(fèi)者的皮膚在保養(yǎng)時(shí)直接受益于生物活性成分的調(diào)節(jié)；我們在市場已經(jīng)形成需求的情況下應(yīng)用高科技生物技術(shù)生產(chǎn)出活力滋養(yǎng)蛋白原液產(chǎn)品，并保持其有效的生物活性成分及與人體同源、親和性等特點(diǎn)投放市場，可以直接的對皮膚進(jìn)行功能性的調(diào)節(jié)，使其達(dá)到正常的生理狀態(tài)，恢復(fù)肌膚的本真特性。
本發(fā)明的主要功效體現(xiàn)在胚胎活力蛋白敷到皮膚以后，利用蛋白之間的生物功能鍵相結(jié)合的機(jī)理在皮膚外部形成一層具有生物活性保護(hù)膜，在保護(hù)和滋養(yǎng)的同時(shí)可以將各種生物活性物質(zhì)緩緩的輸入到皮膚組織內(nèi)部，對皮膚細(xì)胞進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)和滋養(yǎng)，在此基礎(chǔ)上另外的活性成分可以使皮膚有效的防止細(xì)菌的感染、油膩的產(chǎn)生，起到清除死皮等作用。同時(shí)增強(qiáng)肌膚全面營養(yǎng)的吸收，通過活性蛋白對其生理功能進(jìn)行有效的調(diào)節(jié)，促進(jìn)皮膚的更新速度，煥發(fā)肌膚的水嫩白暫。
純生物制劑的美容化妝品只是近一到兩年的新興產(chǎn)品，市場份額占據(jù)較小，甚至可以忽略不記，但只有新興品種的市場機(jī)會(huì)才可能更大，但對化妝品行業(yè)的影響甚為關(guān)鍵，因其預(yù)示著化妝品將來發(fā)展的方向，并在逐步地改變?nèi)藗儗瘖y品的消費(fèi)觀念。因純生物化妝品的技術(shù)含量、工藝要求及前期的投入較大，風(fēng)險(xiǎn)也較大，所以，此類的企業(yè)在化妝品行業(yè)還是鳳毛麟角。
“愛美之心”人皆有之，人們總是希望皮膚能再細(xì)膩些、白嫩一些、光滑一些、皺紋再減少一些，為了讓夢想成真，化妝品成了人們?nèi)粘Ｗo(hù)理重要的手段，只要能使人們的皮膚看上去年輕又充滿光彩的產(chǎn)品，人們往往會(huì)不顧一切的去嘗試，而不計(jì)較價(jià)格的高低和產(chǎn)品的安全性，以及由此帶來的各種負(fù)面效應(yīng)。但隨著時(shí)代的進(jìn)步以及消費(fèi)心理的逐漸成熟，消費(fèi)者在購買產(chǎn)品時(shí)不僅注重功效，而且越來越強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品的安全性，一些含有毒害物質(zhì)的化妝品正在接受來自管理部門和消費(fèi)者的不斷暴光和排斥，有必要對現(xiàn)在的產(chǎn)品進(jìn)行大幅的改進(jìn)，增加人們生活的安全性；本發(fā)明正是以此作為契機(jī)，利用純生物類美容化妝品高功效和高安全性的特性，在滿足人們的愛美的前提下，提供更加安全、可靠的產(chǎn)品，增進(jìn)人們生活的質(zhì)量。
圖1是本發(fā)明皮膚護(hù)理品的生產(chǎn)工藝流程圖。
具體實(shí)施方式下面通過實(shí)施例結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例本實(shí)施例提供的胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法是先對胚胎細(xì)胞培養(yǎng)采用5％胎?；蛐∨Ｑ宓?640培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件37℃二氧化碳培養(yǎng)箱，5％的二氧化碳濃度；根據(jù)細(xì)胞生長的情況，一般為細(xì)胞的已經(jīng)鋪滿瓶底，待細(xì)胞的生長形狀逐漸轉(zhuǎn)向圓形，對細(xì)胞進(jìn)行傳代培育，傳代時(shí)間一般間隔期在三至四天左右。
當(dāng)細(xì)胞達(dá)到6×10的6次方的濃度后(如達(dá)不到上述的濃度可以對細(xì)胞液進(jìn)行2000r/m離心30min，棄上清液并進(jìn)行計(jì)數(shù))進(jìn)行接種擴(kuò)大培養(yǎng)，采用微載體灌流式生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模的連續(xù)培養(yǎng)。
對連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞收集，同時(shí)注入與收集細(xì)胞等量的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；將收集的細(xì)胞，離心，棄去培養(yǎng)液后用生理鹽水清洗，清洗3至4次，應(yīng)用超聲波破碎或是低溫凍融的方式對細(xì)胞進(jìn)行破碎。
對破壁后的細(xì)胞采用微孔膜過濾，將細(xì)胞溶液內(nèi)的細(xì)胞碎片、大細(xì)胞器等內(nèi)容過濾掉，采用凝膠色譜方法分離細(xì)胞活性蛋白液中的核酸成分，再采用高效離子色譜將細(xì)胞活性蛋白液中的抗體成分分離，使得提取液更加的純化，然后超濾除菌，低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> 將上述方法制備的胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液作原料進(jìn)行皮膚護(hù)理品的配置，其生產(chǎn)方法可以按圖1所示的工藝流程生產(chǎn)，由于流程中的各分解步驟都是本行業(yè)專業(yè)技術(shù)人員都熟悉的，在此不再詳述。
根據(jù)上述胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法所獲得的胚胎細(xì)胞活性蛋白提取物應(yīng)用于皮膚護(hù)理品中，所提供的化妝品基本組成可以是胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、植物萃取物、磷脂、香料。其配比是15至50份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
植物萃取物可以是菊花、山茶、人參、綠茶、紅花、月見草、葡萄籽、黃瓜、絲瓜、檸檬等植物萃取物組合。采用超臨界技術(shù)萃取的新鮮植物，將有效成分，溶于水。
本實(shí)施例選用菊花萃取物的粉狀制劑，水份在3％以內(nèi)，不溶物質(zhì)小于25％。
磷脂采用固態(tài)磷脂，產(chǎn)品純度97％以上，以重量計(jì)磷脂通常的含量每100份中約為0.5至5份，優(yōu)選為1至3.5份，更優(yōu)選為1.5至2.5份。
香料根據(jù)不同產(chǎn)品調(diào)配各種香型，以重量計(jì)香料通常的含量每100份中不超過0.5份。增加產(chǎn)品的氣味，覆蓋產(chǎn)品的不良味道。
本實(shí)施例提供的具體配方組成可以是配方150份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、0.5份磷脂、0.5份香料、24.5份水。
配方250份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、5份磷脂、0.5份香料、20份水。
配方345份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、40份植物萃取物、4份磷脂、0.3份香料，30份水。
配方445份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、20份植物萃取物、4份磷脂、0.3份香料、30.7份水。
配方535份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、15份植物萃取物、2份磷脂、0.3份香料、41.7份水。
配方625份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、5份植物萃取物、8份磷脂和0.3份香料，51.7份水。
配方715份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、1份植物萃取物、8份磷脂、0.1份香料、63.7份水。
配方815份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、1份植物萃取物、35份磷脂、0.1份香料、70份水。
權(quán)利要求
1.一種胚胎細(xì)胞的活性蛋白制備方法，其特征是1)胚胎細(xì)胞的培養(yǎng)方式培養(yǎng)基采用5％至20％胎?；蛐∨Ｑ宓腄MEM培養(yǎng)基，199培養(yǎng)基、MEM培養(yǎng)基、RPMI-1640培養(yǎng)基；無血清培養(yǎng)基；培養(yǎng)條件37℃二氧化碳培養(yǎng)箱，5％的二氧化碳濃度；傳代根據(jù)細(xì)胞生長的情況，一般為細(xì)胞的已經(jīng)鋪滿瓶底，細(xì)胞的形狀也逐漸轉(zhuǎn)向圓形，對細(xì)胞進(jìn)行傳代培育，傳代時(shí)間一般間隔期在三至四天左右；2)當(dāng)細(xì)胞達(dá)到6×10的6次方的濃度后進(jìn)行接種擴(kuò)大培養(yǎng)，采用微載體灌流式生物反應(yīng)器進(jìn)行大規(guī)模的連續(xù)培養(yǎng)；3)對連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞收集，同時(shí)注入與收集細(xì)胞等量的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；4)將收集的細(xì)胞，離心，棄去培養(yǎng)液后用生理鹽水清洗，清洗3至4次，應(yīng)用超聲波破碎或是低溫凍融的方式對細(xì)胞進(jìn)行破碎；5)對破壁后的細(xì)胞采用微孔膜過濾，將細(xì)胞溶液內(nèi)的細(xì)胞碎片、大細(xì)胞器等內(nèi)容過濾掉；6)采用凝膠色譜方法分離細(xì)胞活性蛋白液中的核酸成分；7)采用高效離子色譜將細(xì)胞活性蛋白液中的抗體成分分離，使得提取液更加的純化；8)超濾除菌，低溫儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>2.一種根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法得到的胚胎細(xì)胞的活性蛋白提取液應(yīng)用于皮膚護(hù)理品。
3.根據(jù)權(quán)利要求
2所述的一種胚胎細(xì)胞的活性蛋白提取液應(yīng)用于皮膚護(hù)理品，其特征是皮膚護(hù)理品的配方組成為其配比是15至50份胚胎細(xì)胞活性蛋白提取液、1至40份植物萃取物、0.5至8份磷脂和0.1至0.5份香料、20至70份水。
4.根據(jù)權(quán)利要求
3所述的一種胚胎細(xì)胞的活性蛋白提取液應(yīng)用于皮膚護(hù)理品，其特征是所述皮膚護(hù)理品中的植物萃取物是菊花、山茶、人參、綠茶、紅花、月見草、葡萄籽、黃瓜、絲瓜、檸檬等植物萃取物組合。
專利摘要
本發(fā)明所提供的胚胎細(xì)胞的活性蛋白提取方法所得到的皮膚護(hù)理品，直接提取胚胎細(xì)胞中的活性蛋白成分使其與肌膚細(xì)胞相互融合，其各種蛋白質(zhì)與人體細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)屬于同源，結(jié)合細(xì)胞的各種受體促進(jìn)肌膚組織細(xì)胞的再生能力；同時(shí)含有很多種營養(yǎng)成分和微量元素，并表現(xiàn)出極高的極性，與皮膚有很好的親和力，具有較強(qiáng)的皮膚組織滲透性，極易與皮膚細(xì)胞的受體結(jié)合，真正被皮膚吸收，參與或調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝和生理周期。在使用中可激活細(xì)胞的生物活力，增強(qiáng)分泌透明質(zhì)酸和糖蛋白的能力。添加天然植物成分兼有防護(hù)作用，能夠抵御、阻隔外部環(huán)境的污染和侵襲，所含的生物活性蛋白成分可以更好地解決面部皮膚問題。
文檔編號A61K8/64GK1995371SQ200610155308
公開日2007年7月11日 申請日期2006年12月19日
發(fā)明者王書剛 申請人:王書剛導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan