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一種檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合、試劑盒及其應用的制作方法

文檔序號:12098136閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合,其特征在于,其包括引物對和與所述引物對相對應的探針,所述引物對包括堿基序列如SEQ ID NO.1所示的第一引物和如SEQ ID NO.2所示的第二引物,所述探針的堿基序列如SEQ ID NO.3所示,所述探針的5’端標記有熒光報告基團,所述熒光報告基團選自HEX、FAM或VIC中的任意一種,所述探針的3’端標記有淬滅基團,所述淬滅基團為BHQ或TAMRA。

2.權利要求1所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,其包括:

往PCR體系中加入所述引物對和所述探針,所述PCR體系包括PCR反應混合液和待測樣本;

將所述PCR體系進行微滴數(shù)字PCR。

4.根據(jù)權利要求3所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,所述第一引物和所述第二引物在所述PCR體系中的濃度分別為0.88-0.92μM。

5.根據(jù)權利要求3所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,所述探針在所述PCR體系中的濃度為0.23-0.27μM。

6.根據(jù)權利要求3所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,將所述PCR體系進行微滴數(shù)字PCR包括:

將PCR體系與微滴生成油混合生成微滴,然后進行封閉處理,所述封閉處理的程序為:溫度178-182℃,時間8-12s;

在預設條件下,進行微滴數(shù)字PCR反應。

7.根據(jù)權利要求6所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,所述微滴生成油與所述PCR體系的體積比為6.8-7.2:2。

8.根據(jù)權利要求7所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合在檢測日本乙型腦炎病毒中的應用,其特征在于,所述預設條件為:95℃預變性10min;94℃變性30s,50-60℃退火1min,40個循環(huán);98℃10min,4℃停止反應。

9.一種檢測日本乙型腦炎病毒的試劑盒,其特征在于,其包括權利要求1所述的檢測日本乙型腦炎病毒的核酸組合。

10.根據(jù)權利要求9所述的檢測日本乙型腦炎病毒的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括PCR反應緩沖液、dNTP、Taq DNA聚合酶中的一種或多種。

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