一種用無籽刺梨制備發(fā)酵型煙用香料的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于煙用添加劑制備技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種W無巧刺梨為原料，利用微 生物并結(jié)合酶技術(shù)生產(chǎn)特色煙用香料的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 加香加料是卷煙工藝中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是有效提升卷煙抽吸品質(zhì)，形成卷煙特有風(fēng) 格的有效手段之一。目前我國煙草中添加的煙用香料大多是采用傳統(tǒng)方法萃取再加 W調(diào)配 所得，雖然生產(chǎn)操作簡單，但也存在香氣單調(diào)、改善卷煙抽吸效果不明顯等缺點。利用微生 物發(fā)酵及酶制劑處理可W增加傳統(tǒng)提取香料中多種香氣物質(zhì)的含量，提升香氣豐富性，進 而生產(chǎn)出香氣豐富、高品質(zhì)的卷煙，滿足消費者對卷煙品質(zhì)的要求。
[0003] 無巧刺梨(Rosa SteriliS)屬菩薇科，多年生落葉攀援性灌木，高4-6m，生長強旺。 幼果長滿青刺形似海參奇特美觀，果實成熟金黃亮麗，老果呈澄黃色，完全成熟的果實表皮 毛刺基本脫落，果肉比普通刺梨肉厚，呈艷麗的澄黃色，非常脆嫩，香甜爽口，酸味適中，其 雄蕊敗育，幾無花粉，故名無巧刺梨。無巧刺梨營養(yǎng)成分豐富，經(jīng)分析測定，果實含糖量較 高，是普通刺梨的6倍W上，含酸較低，幾無單寧，富含維生素 C，S0D等抗氧化酶，胡蘿h素含 量較高，還含多種礦物質(zhì)營養(yǎng)元素。果實酸甜適宜、極少澀味，口感明顯優(yōu)于普通刺梨。現(xiàn)有 技術(shù)中，未見有W無巧刺梨為底物發(fā)酵制備煙用香料的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種W無巧刺梨為原料，利用微生 物并結(jié)合酶技術(shù)，制備發(fā)酵型煙用香料的方法。
[0005] 本發(fā)明的目的通過W下技術(shù)方案予W實現(xiàn)。
[0006] 除非另有說明，本發(fā)明所采用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。
[0007] -種用無巧刺梨制備發(fā)酵型煙用香料的方法，包括W下步驟：
[000引 （1)發(fā)酵菌株粗酶液制備:將黃綠木霉HLMM-04CGMCC No. 10839菌株活化兩次后， 接種于裝有200mL PDA液體培養(yǎng)基的S角瓶中，在28°C，180巧m下發(fā)酵培養(yǎng)5d;所述的PDA液 體培養(yǎng)基：馬鈴馨200g，葡萄糖20g，補蒸饋水至IL，pH7.0，115°C高壓滅菌15min;發(fā)酵液過 濾去除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置過夜，離屯、收集沉淀物并 溶于2mL緩沖液中，再用緩沖液進行透析，得到粗酶液備用；所述的緩沖液為：0.02mol/L Na2HP04-Na也P04，pH 7.3;
[0009] (2)將無巧刺梨洗凈后壓棒、過濾、分離汁液與殘渣；
[0010] (3)將果膠酶和糖化酶按1:1的質(zhì)量比混合，然后在40°C水中溶解活化，再按0.1~ 0.2 %質(zhì)量比加入無巧刺梨汁液中，40°C酶解2~4h;
[0011] (4)在無巧刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入備用的黃綠木霉 酶液進行發(fā)酵;粗酶液添加量為無巧刺梨殘渣重量的5%~10%，發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時 間2~地；
[0012] (5)取酶解后的無巧刺梨汁液和發(fā)酵后的無巧刺梨殘渣混合，回流提取化，過濾除 渣，將上清液減壓濃縮，即得所需的發(fā)酵型煙用香料。
[0013] 本發(fā)明具有W下優(yōu)點:通過酶解和微生物發(fā)酵，可W增加無巧刺梨提取物的得率， 豐富香氣物質(zhì)含量。在卷煙加香中進行應(yīng)用，與煙氣協(xié)調(diào)性更好，具有增加煙氣豐富性，改 善口感的作用。
[0014] 保藏生物材料的說明
[0015] 本發(fā)明的菌株，已于2015年5月22日，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中屯、(CGMCG);該中屯、地址：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生 物研究所。該菌株分類命名為黃綠木霉（Trichoderma aureoViride)HLMM-04，保藏號為 CGMCC No.10839。
【具體實施方式】
[0016] 下面通過實施例對本發(fā)明做進一步的詳細(xì)說明，但實施例并不是對本發(fā)明技術(shù)方 案的限定。
[0017]實施例1
[0018] 將黃綠木霉HLMM-04菌株活化兩次后，接種于裝有200mL PDA液體培養(yǎng)基（馬鈴馨 200g，葡萄糖20g，補蒸饋水至IUpH 7.0，115°(：高壓滅菌15111111)的^角瓶中，在28°(：， 18化pm下發(fā)酵培養(yǎng)5d。過濾去除菌體。取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置 過夜，離屯、收集沉淀物并溶于少量緩沖液(0.〇2mol/L化抽P〇4和Na出P〇4的緩沖液，pH 7.3) 中，用同樣的緩沖液進行透析，得到粗酶液。
[0019] 將無巧刺梨洗凈后壓棒，過濾，將汁液與殘渣進行分離。
[0020] 將果膠酶和糖化酶在40°C水中溶解活化后，加入無巧刺梨汁液中進行酶解，果膠 酶和糖化酶添加量均為0.08%，酶解溫度為40°C，酶解時間為化。
[0021] 無巧刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入黃綠木霉化MM-04粗酶液進行發(fā) 酵。粗酶液添加量為殘渣重量的8%，發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時間化。
[0022] 將經(jīng)果膠酶、糖化酶酶解后的無巧刺梨汁液和黃綠木霉HLMM-04菌株粗酶液發(fā)酵 后的殘渣混合，回流提取化，過濾除渣，將上清液減壓濃縮，即得無巧刺梨發(fā)酵煙用香料。
[0023] 實施例2
[0024] 重復(fù)實施例1，有W下不同點：果膠酶和糖化酶添加量均為0.05%，酶解溫度為40 °C，酶解時間為化。粗酶液添加量為5%，發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時間化。
[0025] 實施例3
[00%]重復(fù)實施例1，有W下不同點：果膠酶和糖化酶添加量均為0.1%，酶解溫度為40 °C，酶解時間為地。粗酶液添加量為10%，發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時間地。
[0027]應(yīng)用實施例1
[002引將實施例1所得無巧刺梨發(fā)酵香料按煙絲重量的0.1%、0.2%、0.3%分別添加到 煙絲上，裝入干凈的密封袋內(nèi)，于室溫下放置化后，將煙絲于12(TC烘箱中烘干，使水分含量 達(dá)到將處理后的煙絲及對照放入恒溫恒濕箱中，在溫度22°C、濕度60%條件下 平衡2地，手工卷制成卷煙，由評吸專家組成的評吸小組進行感官評吸。W未發(fā)酵無巧刺梨 提取香料為對照。經(jīng)評吸小組反復(fù)評吸，認(rèn)為無巧刺梨發(fā)酵香料與對照區(qū)別明顯，無巧刺梨 發(fā)酵香料添加量為0.1%、0.2%時效果最佳，具有提升煙葉香氣豐富性、增加酸香、果香、掩 蓋雜氣、減少刺激的作用。評價結(jié)果見表1。
[0029]表1濱橄攬發(fā)酵香料評吸結(jié)果 [00301


【主權(quán)項】
1. 一種用無籽刺梨制備發(fā)酵型煙用香料的方法，包括以下步驟： (1) 發(fā)酵菌株粗酶液制備:將黃綠木霉HLMM-04 CGMCC No. 10839菌株活化兩次后，接種 于裝有200mL TOA液體培養(yǎng)基的三角瓶中，在28°C，180rpm下發(fā)酵培養(yǎng)5d;所述的PDA液體培 養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，補蒸餾水至1L，pH7.0，115 °C高壓滅菌15min;發(fā)酵液過濾去 除菌體，取上清液緩慢加入硫酸氨至80%飽和度，4°C下靜置過夜，離心收集沉淀物并溶于 2mL緩沖液中，再用緩沖液進行透析，得到粗酶液備用；所述的緩沖液為：0.02mol/L Na 2HP〇4-NaH2P〇4,pH 7.3； (2) 將無籽刺梨洗凈后壓榨、過濾、分離汁液與殘渣； (3) 將果膠酶和糖化酶按1:1的質(zhì)量比混合，然后在40°C水中溶解活化，再按0.1~ 0.2%質(zhì)量比加入無籽刺梨汁液中，40 °C酶解2~4h; (4) 在無籽刺梨殘渣中加入兩倍重量的水，混勻，加入備用的黃綠木霉HLMM-04粗酶液 進行發(fā)酵;粗酶液添加量為無籽刺梨殘渣重量的5%~10 %，發(fā)酵溫度為40°C，發(fā)酵時間2~ 4h； (5) 取酶解后的無籽刺梨汁液和發(fā)酵后的無籽刺梨殘渣混合，回流提取3h，過濾除渣， 將上清液減壓濃縮，即得所需的發(fā)酵型煙用香料。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用無籽刺梨制備發(fā)酵型煙用香料的方法。將無籽刺梨洗凈后壓榨，過濾，使汁液與殘渣分離。利用果膠酶和糖化酶對無籽刺梨汁液進行酶解，同時將黃綠木霉HLMM?04菌株制備粗酶液，發(fā)酵無籽刺梨殘渣。將酶解后的汁液與發(fā)酵后的殘渣混合，經(jīng)回流提取、過濾除渣、減壓濃縮，得無籽刺梨發(fā)酵型香料。所述黃綠木霉HLMM?04菌株保藏號為CGMCC No.10839，具有產(chǎn)纖維素酶的能力。所制得的發(fā)酵型煙用香料具有明顯的果香，與煙氣協(xié)調(diào)性較好，具有增加煙氣豐富性，改善口感的作用。CGMCC No. 1083920150522
【IPC分類】C12P1/00, C12R1/885, A24B3/12
【公開號】CN105713924
【申請?zhí)枴緾N201610240446
【發(fā)明人】段焰青, 楊璽, 付磊, 蔣舉興, 黨立志, 王文元, 李海濤
【申請人】云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司