本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體地，涉及一類新穎的褐藻多糖及其制備方法和在治療神經(jīng)退行性疾病的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

早老性癡呆即阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)，是一類神經(jīng)退行性疾病，其癥狀表現(xiàn)主要是病人記憶和認知能力不同程度地喪失，行為活動發(fā)生障礙。ad的發(fā)病機制還不十分清楚，可能與細胞的衰老、遺傳基因、神經(jīng)遞質(zhì)損傷和炎癥等多種因素有關(guān)。

目前臨床應(yīng)用或處于臨床研究中的抗ad藥物主要是從提高腦神經(jīng)中的ach水平出發(fā)，恢復(fù)ach神經(jīng)傳導(dǎo)，改善病人的記憶、認知和行為能力，延緩病情的發(fā)展。其中一類藥物是擬膽堿藥物，另一類藥物是促進腦神經(jīng)中ach釋放的藥物。

常用的防治藥物包括中樞興奮劑、改善膽堿能的物質(zhì)和腦血液循環(huán)改善劑等，然而這些藥物存在療效不確切、特異性不強或毒副作用大，口服吸收差，治標不治本等缺點，因而限制了它們的應(yīng)用。

綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的能夠有效用于改善記憶和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種預(yù)防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物。

本發(fā)明第一方面，提供了一種植物多糖，所述的植物多糖是由單糖單元組成的雜多糖，并且所述的單糖單元包括(i)巖藻糖，(ii)甘露糖，以及(iii)任選的葡萄糖和/或半乳糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中單糖單元包括巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中單糖單元包括巖藻糖、甘露糖和葡萄糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中單糖單元包括巖藻糖、甘露糖和半乳糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖還含有選自下組的單糖單元：木糖、鼠李糖、或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中單糖單元包括2、3、4、5、6種單糖單元。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中單糖單元包括木糖、鼠李糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖、和半乳糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖為褐藻多糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的褐藻包括褐藻門馬尾藻科植物。

在另一優(yōu)選例中，所述的褐藻包括馬尾藻羊棲菜。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中甘露糖單元的摩爾含量≥50％,較佳地≥70％，更佳地≥80％，最佳地≥85％，按植物多糖中所有單糖單元的總量計。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖中甘露糖單元的摩爾含量為60-93％,較佳地70-92％，更佳地75-91％，最佳地80-90％，按植物多糖中所有單糖單元的總量計。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖選自下組：

(a)一種植物多糖，其中所含的單糖的摩爾比為，巖藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝1～2∶20～30∶0.5～2∶1；

(b)一種植物多糖，其中所含的單糖的摩爾比為，巖藻糖∶甘露糖∶半乳糖＝1～2∶20～40∶1；

(c)一種植物多糖，其中所含的單糖的摩爾比為，巖藻糖∶甘露糖∶葡萄糖＝1～2∶25～30∶0.5～2；

(d)一種植物多糖，其中所含的單糖的摩爾比為，巖藻糖∶甘露糖＝1～2∶20～30。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖的分子量為100～350kda。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖的分子量小于250kda的組分占全部多糖分子的百分比≥70％(如70-90％)。

在另一優(yōu)選例中，所述的植物多糖的分子量分布指數(shù)為1.2～2.0。

在另一優(yōu)選例中，所述植物多糖具有選自下組的一個或多個特征：

(1)糖殘基摩爾比為巖藻糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＝1.96∶21.00∶1.88∶1.00；

(2)分子量為140～300kda；

(3)分子量分布指數(shù)為1.2～2.0；

(4)甘露糖的含量為25～40wt％，按植物多糖總重量計；

(5)糖醛酸8～20wt％，按植物多糖總重量計；

(6)蛋白質(zhì)含量0.1～1wt％，按植物多糖總重量計；

(7)硫酸基含量10～15wt％，按植物多糖總重量計；

(8)連接方式包括選自下組的單糖連接方式：末端、1,2-、1,2,3-、1,2,3,4-和1,2,4,6-連接的甘露糖；末端、1,2,4-、1,4-、1,6-連接的半乳糖和葡萄糖；末端、1,2,4-、1,3-和1,4-連接的巖藻糖；

(9)硫酸基位置選自下組：甘露糖的4位及6位，巖藻糖的2、3、4位(部分巖藻糖可同時存在2個硫酸基)。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種褐藻多糖，所述褐藻多糖的分子量為100kda-350kda(較佳地，140kda-300kda，更佳地，140kda-250kda)；

并且所述褐藻多糖中含有以下單糖單元：甘露糖和巖藻糖，

其中，按褐藻多糖中所有單糖單元的總量計，所述甘露糖的摩爾含量為50％-93％(較佳地，60％-90％；更佳地，80％-90％)；以及

所述巖藻糖的摩爾含量為3％-10％(較佳地，4％-8％，更佳地，5％-6％)。

在另一優(yōu)選例中，所述褐藻多糖分子量分布指數(shù)為1-4，較佳地，1.5-3或1-2，更佳地1.2-2.0。

在另一優(yōu)選例中，所述褐藻多糖還包括葡萄糖和半乳糖。

在另一優(yōu)選例中，所述褐藻多糖還包括木糖和鼠李糖。

在另一優(yōu)選例中，所述巖藻糖和甘露糖的摩爾比為1-10：20-30，較佳地，1-5：20-30，更佳地，1-3：20-30，最佳地，1-2：20-30。

在另一優(yōu)選例中，所述葡萄糖和半乳糖的摩爾比為0.2-10：1，較佳地，0.5-10：1，更佳地，0.5-5：1，最佳地，0.5-2：1。

在另一優(yōu)選例中，所述巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩爾比為1-10：20-40：0.2-10：1，較佳地，1-5：20-35：0.5-6：1，更佳地，1-3：20-30：0.5-5：1，最佳地，1-2：20-30：0.5-1：1。

在另一優(yōu)選例中，在所述褐藻多糖中，當巖藻糖的摩爾比率為1時，所述甘露糖的摩爾比率為2-30，較佳地，15-30，更佳地，20-30；所述半乳糖的摩爾比率為0.02-5，較佳地，0.02-4，更佳地，0.1-3，最佳地，0.5-2；所述葡萄糖的摩爾比率為1，較佳地，0.5-2，更佳地，0.5-1。

在另一優(yōu)選例中，所述甘露糖在所述褐藻多糖的摩爾比為60％-93％，較佳地，70％-90％，更佳地，80％-90％。

在另一優(yōu)選例中，所述褐藻多糖來自馬尾藻科植物，如羊棲菜。

在另一優(yōu)選例中，所述褐藻多糖具有如下式所示的結(jié)構(gòu)單元：

r2＝[→4)-α-d-glcp-(1→或→4)-α-d-glcp-(1→]

hex＝[gal、man或glc]

其中，m＝大于10的正整數(shù)。

在另一優(yōu)選例中，m為50-300，更佳地為80-230。

在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖的用途，它們被用于制備一組合物，所述組合物用于(a)改善記憶能力；和/或(b)用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)退行性疾病。

在另一優(yōu)選例中，所述神經(jīng)退行性疾病選自下組：阿爾茨海默病、帕金森氏病、原發(fā)性側(cè)索硬化或其組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的組合物包括：藥物組合物、保健品組合物、或食品組合物、或膳食補充劑組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的食品組合物包括飲料組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物含有(a)本發(fā)明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖；和(b)藥學(xué)上可接受的載體。

在另一優(yōu)選例中，所述組分(a)占所述藥物組合物總重量的0.1-99.9wt％,較佳地10-99.9wt％，更佳地70％-99.9wt％。

在另一優(yōu)選例中，所述組分(a)占所述藥物組合物總重量的60.0％-99.5wt％，較佳地70.0-99.5wt％，更佳地80.0％-99.5wt％。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物為液態(tài)、固體、或半固體。

在另一優(yōu)選例中，所述藥物組合物的劑型包括片劑、顆粒劑、膠囊、口服液、或注射劑。

在另一優(yōu)選例中，所述組合物或藥物還用于改善哺乳動物的記憶能力。

在另一優(yōu)選例中，所述的記憶能力包括空間記憶能力。

在另一優(yōu)選例中，所述改善哺乳動物的空間記憶能力包括(i)延長哺乳動物在在站臺周圍范圍i的路程和時間；和/或(ii)縮短哺乳動物第一次穿越平臺的時間，增加穿越平臺的次數(shù)。

在另一優(yōu)選例中，所述哺乳動物包括人或非人哺乳動物。

在另一優(yōu)選例中，所述非人哺乳動物包括嚙齒動物，如小鼠、大鼠。

在本發(fā)明的第四方面，提供了一種藥物組合物，包括：

(a)本發(fā)明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖；和

(b)藥學(xué)上可接受的載體。

在本發(fā)明的第五方面，提供了一種治療神經(jīng)退行性疾病的方法，包括：給需要的哺乳動物施用本發(fā)明第一方面所述的植物多糖、或第二方面所述褐藻多糖、或第四方面所述的藥物組合物。

在另一優(yōu)選例中，所述的哺乳動物包括人或非人哺乳動物。

在另一優(yōu)選例中，所述非人哺乳動物包括嚙齒動物，如大鼠、小鼠。

在另一優(yōu)選例中，施用劑量為100-2000mg/kg/天，較佳地，250-10000mg/kg/天，更佳地，500-10000mg/kg/天。

在另一優(yōu)選例中，施用頻率為1-5次/天，較佳地1-2次/天。

在另一優(yōu)選例中，施用包括一個或多個周期，各周期為2-30天，較佳地3-7天。

在本發(fā)明的第五方面，提供了一種改善哺乳動物空間記憶的方法，包括：給需要的哺乳動物施用本發(fā)明第一方面所述的植物多糖或第二方面所述褐藻多糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的方法是治療性或非治療性的。

在另一優(yōu)選例中，所述的哺乳動物包括人或非人哺乳動物。

在另一優(yōu)選例中，所述非人哺乳動物包括嚙齒動物，如大鼠、小鼠。

在另一優(yōu)選例中，施用劑量為100-2000mg/kg/天，較佳地，250-10000mg/kg/天，更佳地，500-10000mg/kg/天。

在另一優(yōu)選例中，施用頻率為1-5次/天，較佳地1-2次/天。

在另一優(yōu)選例中，施用包括一個或多個周期，各周期為2-30天，較佳地3-7天。

應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附圖說明

圖1顯示了本發(fā)明中一個實例中的褐藻多糖的高效凝膠色譜圖。

具體實施方式

本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，通過大量篩選和試驗，意外地發(fā)現(xiàn)，可從褐藻中分離獲得一類新穎的、水溶性高且具有改善神經(jīng)系統(tǒng)功能的植物多糖。所述植物多糖是多種單糖單元(包括甘露糖、巖藻糖、以及葡萄糖和/或半乳糖等)按特定比例構(gòu)成的褐藻多糖。試驗證明，本發(fā)明的褐藻多糖能夠顯著改善哺乳動物的空間記憶能力，并可用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)退行性疾病。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。

褐藻

適用于本發(fā)明的植物主要為褐藻。

典型的褐藻包括褐藻門馬尾藻科的植物。一種典型的褐藻為羊棲菜。

羊棲菜(sargassumfusiforme(harv.)setchel)屬于褐藻門馬尾藻科，又名海大麥、鹿角尖、海菜等。羊棲菜主要生長在北太平洋西部的暖溫帶水域，在我國分布十分廣泛，北起遼東半島，沿山東和浙江，南至福建和廣東的淺海海域均有分布。羊棲菜肉厚多汁，營養(yǎng)價值高，在民間早已入藥，是我國傳統(tǒng)常用的藥食兩用藥材，以干燥藻體全藻入藥，性味苦、咸、寒而無毒，主要功效為軟堅散結(jié)、消痰、清涼解毒、破血祛瘀、利水消腫，用于癭瘤、睪丸腫痛、痰飲水腫。馬尾藻科植物羊棲菜作為藥用海藻被2015版中國藥典所收載。

褐藻多糖

如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明多糖”、“本發(fā)明植物多糖”、“本發(fā)明褐藻多糖”可互換使用，指本發(fā)明第一方面中所所述的植物多糖或褐藻多糖。本發(fā)明的植物多糖是主要由二種或多種單糖單元(如甘露糖、巖藻糖、葡萄糖、半乳糖)構(gòu)成的雜多糖。

在本發(fā)明中，所述褐藻多糖的來源沒有特別限制。在一優(yōu)選實施方式中，所述褐藻多糖可提取自海洋植物，如馬尾藻科植物的羊棲菜。

典型地，本發(fā)明的植物多糖是由單糖單元組成的雜多糖，并且所述的單糖單元包括(i)巖藻糖，(ii)甘露糖，以及(iii)任選的葡萄糖和/或半乳糖。此外，本發(fā)明的植物多糖還含有選自下組的其它單糖單元：木糖、鼠李糖、或其組合。

在本發(fā)明的褐藻多糖中，為甘露糖為主。典型地，甘露糖單元的摩爾含量≥50％,較佳地≥70％，更佳地≥80％，最佳地≥85％，按植物多糖中所有單糖單元的總量計。例如，所述甘露糖的摩爾含量為50％-95％，較佳地，60％-90％，更佳地，70-90％，最佳地，80％-90％。

在本發(fā)明的褐藻多糖中，巖藻糖、葡萄糖、半乳糖或其它微量單糖單元之間的比例沒有限制。

優(yōu)選地，所述巖藻糖和甘露糖的摩爾比為1-10：20-30，較佳地，1-5：20-30，更佳地，1-3：20-30，最佳地，1-2：20-30。

優(yōu)選地，所述葡萄糖和半乳糖的摩爾比為0.2-10：1，較佳地，0.5-10：1，更佳地，0.5-5：1，最佳地，0.5-2：1。

優(yōu)選地，所述巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖的摩爾比為1-10：20-40：0.2-10：1，較佳地，1-5：20-35：0.5-6：1，更佳地，1-3：20-30：0.5-5：1，最佳地，1-2：20-30：0.5-1：1。

在本發(fā)明所述的褐藻多糖中，當巖藻糖的摩爾比率為1時，

所述甘露糖的摩爾比率為2-30，較佳地，15-30，更佳地，20-30；

所述半乳糖的摩爾比率為0.02-5，較佳地，0.02-4，更佳地，0.1-3，最佳地，0.5-2；和/或

所述葡萄糖的摩爾比率為0.2-2，較佳地，0.5-2，更佳地，0.5-1。

在一優(yōu)選實施方式中，所述褐藻多糖還包括微量或少量的其它單糖單元，例如木糖和鼠李糖。

試驗表明，本發(fā)明的褐藻多糖可顯著改善哺乳動物(如小鼠)的空間記憶能力，因此，可用于治療神經(jīng)退行性疾病。

制備方法

本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明褐藻多糖的方法。用于制備褐藻多糖的試劑和設(shè)備為常規(guī)的，可市售獲得。

在一優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的制備方法包括：

步驟一提取-過濾：取褐藻(如羊棲菜)加水，加熱至沸騰后，提取一段時間(如1-24小時，較佳地2-12小時，更佳地3～4小時)，然后過濾。其中，該提取-過濾步驟可重復(fù)提取，如重復(fù)2次或多次(如2-6次)，并合并濾液。

步驟二濃縮-醇沉(高濃度醇沉)：取步驟一的濾液，進行濃縮(通常濃縮至濾液體積的約1/6-1/15，較佳地1/9～1/11)，得到濃縮液；在濃縮液中加入醇溶劑(如乙醇)，至溶液中醇的體積分數(shù)達到一定比例(如70％～80％(v/v)的高濃度)，并攪拌形成沉淀(如攪拌1-6小時，較佳地3～4小時)；離心并收集第一高濃度醇溶劑的醇沉沉淀物；沉淀加水溶解，溶解后再加入醇溶劑(如乙醇)至溶液中直至醇溶劑的體積分數(shù)70％～80％；本醇沉步驟一般可重復(fù)2次或多次(如2-6次，較佳地2-4次，更佳地2-3次)，并收集最后一次醇沉沉淀物。

步驟三醇沉(低濃度醇沉)-濃縮：步驟二收集沉淀物加水溶解，然后加入醇溶劑(如乙醇)，至溶液中醇溶劑的體積分數(shù)為30％～40％，攪拌一段時間(如1-12小時，較佳地3～4小時)形成沉淀后，離心并收集低濃度醇溶劑的醇沉沉淀物和上清液；低濃度醇溶劑的醇沉沉淀物加水溶解，再加入醇溶劑(如乙醇)至溶液中乙醇體積分數(shù)為30％～40％，本醇沉步驟一般可重復(fù)2次或多次(如2-6次，較佳地2-4次，更佳地2-3次)；收集各次上清液合并，然后進行濃縮(通常濃縮至上清液總體積的約1/6-1/15，較佳地1/9～1/11)，得到濃縮的上清液。

步驟四醇沉(高濃度醇沉)：向步驟三濃縮上清液中加入醇溶劑(如乙醇)，至溶液中醇溶劑的體積分數(shù)為70％～80％，攪拌3～4小時后，離心，得第二高濃度醇溶劑醇沉沉淀物，沉淀加水溶解，加入醇溶劑(如乙醇)至溶液中醇溶劑的體積分數(shù)為70％～80％；本醇沉步驟一般可重復(fù)2次或多次(如2-6次，較佳地2-4次，更佳地2-3次)；收集最后一次的第二高濃度醇溶劑醇沉的沉淀物，即得褐藻多糖。

組合物及其應(yīng)用

本發(fā)明還提供了一種組合物，其中包括有效量的褐藻多糖。本發(fā)明組合物包括藥物組合物、保健品組合物、或食品組合物、或膳食補充劑組合物；優(yōu)選藥物組合物。

在一優(yōu)選例中，所述的組合物為液態(tài)制劑、固態(tài)制劑、半固態(tài)制劑。在一優(yōu)選例中，所述的液態(tài)制劑選自下組：溶液制品或懸浮液制品。

在一優(yōu)選例中，所述的組合物的劑型選自下組：粉末劑、散劑、片劑、糖衣劑、膠囊劑、顆粒劑、懸浮劑、溶液劑、糖漿劑、滴劑、和舌下含片。

本發(fā)明藥物組合物可以以藥物片劑，針劑或膠囊的任一種形式給藥，所述藥物制劑包括賦形劑、藥物允許的媒介和載體，這些物質(zhì)可根據(jù)給藥途徑進行選擇。本發(fā)明中藥物制劑可進一步包含輔助的活性組份。

乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、硅酸鈣、細結(jié)晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂或礦物油等都可用作本發(fā)明中藥物組合物的載體、賦形劑或稀釋劑等。

此外，本發(fā)明的藥物組合物可進一步包括潤滑劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮液穩(wěn)定劑、防腐劑、甜味劑和香料等。本發(fā)明的藥物組合物可通過多種公知的方法以腸衣制劑生產(chǎn)，以便于藥物組合物的活性成分能順利通過胃而不被胃酸所破壞。

說明書中“藥物有效量”是指可對人和/或動物產(chǎn)生功能或活性的且可被人和/或動物所接受的量。比如，在本發(fā)明中，可制備含有1％-99％(特別的，可含有30％—90％；更特別地，可含有50％—80％)的褐藻多糖的制劑。

當用于制備藥物組合物時，所用的褐藻多糖的有效劑量可隨施用的模式和待治療的疾病的嚴重程度而變化。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體密切混合的約含有1％-99％(特別的，可含有30％—90％；更特別地，可含有0％—80％)的褐藻多糖?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。

所述的褐藻多糖可通過口服等途徑給予。固態(tài)載體包括：淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括：培養(yǎng)基、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合褐藻多糖的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素e、維生素c、bht和bha。

從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊?？诜o藥是優(yōu)選的。

將本發(fā)明組合物施用給所述個體，每天給藥1次或多次。給藥劑量單位表示其形式上能分開且適用于人類或其他所有哺乳動物個體的劑量。每一單位含有藥物允許的載體和有效治療量的本發(fā)明的褐藻多糖。給藥量隨病人病情、所包括的補充活性組份和所使用的褐藻多糖而變化。此外如可能，可分開給藥，并且如需要可連續(xù)給藥。因此，所述給藥量不會對本發(fā)明造成限制。此外，本發(fā)明中的“組合物”不僅意味著藥品而且表示可作為功能性食品和健康補充食品。在一個優(yōu)選例中，所述組合物包括：食品、保健品、藥品等。在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，還提供了一種食品組合物，它含有有效量的磷結(jié)合劑，以及余量的食品上可接受的載體，所述的食物組合物的劑型選自固體、乳品、溶液制品、粉末制品、或懸浮液制品。

在一優(yōu)選例中，所述組合物的配方如下：

0.01-95wt％(較佳地0.1-90wt％，更佳地1-50wt％)的褐藻多糖；以及食品上或藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。

在另一優(yōu)選例中，所述組合物的配方如下：

10-80wt％的褐藻多糖；以及食品上或藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。

本發(fā)明褐藻多糖或含有褐藻多糖的組合物能夠顯著改善哺乳動物的記憶能力(包括空間記憶能力)。

本發(fā)明褐藻多糖或含有褐藻多糖的組合物可以用來治療和/或預(yù)防哺乳動物的神經(jīng)退行性疾病。

在本發(fā)明中，哺乳動物包括嚙齒動物和靈長目，尤其人。

本發(fā)明的主要優(yōu)點包括：

(1)本發(fā)明首次提取了含有甘露糖、巖藻糖、葡萄糖和半乳糖的褐藻多糖，本發(fā)明的褐藻多糖可顯著改善哺乳動物的空間記憶能力，因此可以用來治療和/或預(yù)防哺乳動物的神經(jīng)退行性疾病。

(2)本發(fā)明的褐藻多糖來源于海洋植物(如馬尾藻科植物的羊棲菜)，因此具有副作用小、成本低、安全性好的特點。

(3)本發(fā)明的褐藻多糖制備工藝簡單，易于工業(yè)生產(chǎn)。

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。

本發(fā)明所用的試劑若未明確指明，則均購自于西格瑪-奧德里奇(sigma-aldrich公司)。

實施例1褐藻多糖(供試品1)

步驟一，取羊棲菜藥材(2000g)，用20倍量的水浸泡并攪拌清洗，換水三次，濾干，加入20倍體積的水，加熱至沸騰后，提取4h，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液。

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入乙醇，攪拌，直至溶液中乙醇的體積分數(shù)達到80％，攪拌4h后，離心并第一次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第二次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第三次收集沉淀物。

步驟三，第三次收集沉淀物加水溶解，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為40％，攪拌4h后，離心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為40％，攪拌4h后，離心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為40％，攪拌4h后，離心并第六次收集上清液，合并第四次、第五次和第六次收集的上清液，濃縮至上清液總體積的1/10，得到濃縮的上清液。

步驟四，向濃縮的上清液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第七次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第八次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第九次收集沉淀物52g，即為褐藻多糖(供試品1)。

經(jīng)測定(見實施例5-7)，該制得的褐藻多糖中含有巖藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖(1～2∶20～30∶0.5～2∶1)為主的部位。分子量為140kda～300kda。

供試品1的褐藻多糖的高效凝膠色譜結(jié)果如圖1所示，表明褐藻多糖的純度很高。

基于分析，該褐藻多糖中具有下式所示的結(jié)構(gòu)單元：

r2＝[→4)-α-d-glcp-(1→or→4)-α-d-glcp-(1→]

hex＝[galormanorglc]

其中，m＝80-230。

實施例2褐藻多糖(供試品2)

步驟一，取羊棲菜藥材(1500g)，用20倍量的水浸泡并攪拌清洗，換水三次，濾干，加入20倍體積的水，加熱至沸騰后，提取4h，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液。

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入乙醇，攪拌，直至溶液中乙醇的體積分數(shù)達到80％，攪拌4h后，離心并第一次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第二次收集沉淀物。

步驟三，第二次收集沉淀物加水溶解，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為40％，攪拌4h后，離心并第三次收集沉淀物和上清液，然后第三次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為40％，攪拌4h后，離心并第四次收集沉淀物和上清液，合并第三次和第四次上清液并濃縮至上清液總體積的1/10，得到濃縮的上清液。

步驟四，向濃縮的上清液中加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第五次收集沉淀物，然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心，第六次收集沉淀物，烘干沉淀物，得到褐藻多糖60g(供試品2)。

經(jīng)測定，該制得的褐藻多糖中，含有巖藻糖、甘露糖、半乳糖(1～2∶25～30∶1)為主的單糖，以及少量葡萄糖的部位。其中，葡萄糖的比例為1％。

實施例3褐藻多糖(供試品3)的制備

步驟一，取羊棲菜藥材(1500g)，用20倍量的水浸泡并攪拌清洗，換水三次，濾干，加入20倍體積的水，加熱至沸騰后，提取4h，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液。

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入乙醇，攪拌，直至溶液中乙醇的體積分數(shù)達到30％，攪拌4h后，離心并第一次收集濾液和沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為30％，攪拌4h后，離心并第二次收集濾液及沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為30％，攪拌4h后，離心，第三次收集濾液和沉淀物，合并濾液。

步驟三，取步驟二的濾液濃縮至無醇，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第六次收集沉底物和上清液，合并第四次、第五次和第六次收集的上清液，濃縮至上清液總體積的1/10，得到濃縮的上清液，蒸干，得到褐藻多糖85g(供試品3)。

經(jīng)測定，該制得的褐藻多糖中，含有巖藻糖、甘露糖、半乳糖(1～2∶20～40∶1)為主的單糖，以及少量葡萄糖的部位。其中，葡萄糖的比例為2％。

實施例4褐藻多糖(供試品4和5)

步驟一，取羊棲菜藥材(1500g)，用20倍量的水浸泡并攪拌清洗，換水三次，濾干，加入20倍體積的水，加熱至沸騰后，提取4h，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液。

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入乙醇，攪拌，直至溶液中乙醇的體積分數(shù)達到30％，攪拌4h后，離心并第一次收集濾液和沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為30％，攪拌4h后，離心并第二次收集濾液及沉淀物，沉淀物然后加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為30％，攪拌4h后，離心，第三次收集濾液和沉淀物，合并濾液。

步驟三，取步驟二的濾液濃縮至無醇，然后加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第四次收集沉淀物和上清液，然后第四次收集沉淀加水溶解，加入乙醇，至溶液中的乙醇體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第五次收集沉淀物和上清液，然后第五次收集沉淀物再次加水溶解，加入乙醇，至溶液中乙醇的體積分數(shù)為80％，攪拌4h后，離心并第六次收集沉底物和上清液，第六次沉淀物烘干，然后用0.2mnacl水溶，經(jīng)sepharcryls300凝膠柱進行分離，洗脫液為0.2mnacl，分離得到兩個流份，分別透析，濃縮至干，得到褐藻多糖15g(供試品4)和褐藻多糖24g(供試品5)。

經(jīng)測定，該制得的褐藻多糖(供試品4)中，含有巖藻糖，甘露糖，半乳糖(1～2∶25～30∶1)為主、以及少量葡萄糖的部位。

經(jīng)測定，該制得的褐藻多糖(供試品5)中，含有巖藻糖，甘露糖，葡萄糖(1～2∶25～30∶1)為主、以及少量半乳糖的部位。

實施例5褐藻多糖的分子量表征

以供試品1為例，采用凝膠色譜法，以標準多糖(葡聚糖)為對照品，通過gpc軟件計算獲得。

檢測條件：agilent1100高效液相色譜儀，配備示差檢測器，ks-802和ks-804串聯(lián)柱(shodex公司)，流動相為0.2mol/l氯化鈉溶液，柱溫40℃，流速0.8ml/min。

具體方法如下：

1mg～2mg標準多糖(葡聚糖)和褐藻多糖樣品，用流動相配成2mg/ml溶液，12,000rpm離心10min，吸取上清液轉(zhuǎn)入液相樣品瓶。將標準多糖和褐藻多糖樣品溶液依次進樣，進樣體積20μl，測定保留時間，用gpc軟件計算褐藻多糖的分子量。

測得褐藻多糖的分子量分布范圍為140kda～300kda。

實施例6褐藻多糖的糖組成和連接方式分析

以供試品1為例，取0.1mg～1mg樣品，置10ml安瓿中，加1ml2mol/ltfa溶液，封口，120℃烘箱中水解反應(yīng)1.5h～2h，取出，放冷至室溫后，將水解液轉(zhuǎn)入25ml梨形燒瓶，60℃水浴減壓蒸干，加200μl水溶解，然后加1ml0.5mol/lnabh4的dmso溶液，混勻，于40℃水浴還原反應(yīng)90min。再逐滴加入100μl冰醋酸，混勻，然后加入200μl1-甲基咪唑和1ml乙酸酐，混勻，于40℃水浴乙?；磻?yīng)10min。反應(yīng)結(jié)束即加入2ml蒸餾水，混勻，再加入2ml氯仿，充分混勻萃取乙酰化產(chǎn)物，小心吸出并棄去大部分上層水液，下層溶液加2ml水洗滌一次，吸取下層溶液，用1g無水硫酸鈉干燥，置樣品瓶中備用。采用gc分析。

標準品不水解，其余操作同樣品。

采用如下氣相色譜條件對糖組成進行分析：hp-5(agilent)色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)；程序升溫條件為：起始溫度140℃，以10℃/min升溫至170℃，保持4min；再以0.5℃/min升溫至175℃；然后以10℃/min升溫至190℃；然后以0.5℃/min升溫至200℃；最后以10℃/min升溫至250℃。進樣口溫度為250℃；載氣為n2，流速為1ml/min。

經(jīng)分析，所制得的褐藻多糖含有巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等四種單糖，按摩爾比巖藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝1～2∶20～30∶0.5～2∶1。并且，所制得的褐藻多糖還含有微量的木糖和鼠李糖。

實施例7褐藻多糖的糖連接方式分析

在本實施例中，對供試品1-5分別進行分析。

甲基化分析：參照文獻方法(carbohydrres.1993,245,1～10)將褐藻多糖進行甲基化，甲基化后的產(chǎn)物用90％甲酸解聚，2mol/ltfa全水解，nabh4還原和醋酐乙?；瞥刹糠旨谆陌柕洗家宜狨パ苌?，然后進行g(shù)c-ms分析。

供試品1-5的糖連接方式基本相同。結(jié)合標準圖譜，確定組成褐藻多糖的單糖具有如下幾種連接方式：

甘露糖：位于糖鏈末端，或其上1,2位羥基成糖苷，3位及6位或被取代；其上1,4位羥基成糖苷，或2位，3位和6位被取代；

巖藻糖：位于糖鏈末端，或其上1,3位羥基成糖苷，4位或被取代；或其上1,4位羥基成糖苷，2，3位或被取代；

半乳糖：其上1,4位羥基成糖苷或6位被取代，或其上1,2位羥基成糖苷或4位被取代；

葡萄糖：其上1,4位羥基成糖苷或6位被取代，或其上1,2位羥基成糖苷或4位被取代。

基于上述分析，得出褐藻多糖的結(jié)構(gòu)式：

r2＝[→4)-α-d-glcp-(1→or→4)-α-d-glcp-(1→]

hex＝[galormanorglc]

其中，m＝80-230。

實施例8褐藻多糖對app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠空間記憶障礙的影響

本實施例中，使用的褐藻多糖為實施例1中制備供試品1。

app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠單只單籠飼養(yǎng)致20周齡時，各組小鼠以10ml/kg體重的藥液容積按應(yīng)給予藥液經(jīng)口灌胃(i.g)給藥，每天1次，連續(xù)60天。野生對照及模型組給予等體積溶媒，給藥組分別給予200mg/kg(低劑量)和300mg/kg(高劑量)供試品1，陽性藥組給予1.6mg/kg鹽酸多奈哌齊，每組10只。隨后進行morris水迷宮訓(xùn)練，連續(xù)5天。每次均為口服給藥1h后訓(xùn)練。

訓(xùn)練方式：先將小鼠放在位于第iv象限的平臺上使其熟悉30秒(sec)。然后再將小鼠于第iv象限面朝壁投入水中，使其尋找平臺，游泳時間為60sec。若在60sec內(nèi)找不到平臺，則將小鼠放到平臺上，停留10sec。休息2min后，再次將小鼠放入第i象限游泳以尋找平臺，其余過程同上。依次再將小鼠分別投入ii、iii象限。每日按上述方法進行訓(xùn)練，連續(xù)4天。

第5天進行撤臺實驗。將位于第iv象限的平臺撤除。給藥后1h將小鼠從水池的任意一點貼壁放入水中，游泳尋找平臺1min。morris水迷宮統(tǒng)計軟件將記錄每只小鼠穿越平臺的次數(shù)，分別在4個象限的活動時間和路程，以及在平臺中心區(qū)域及外圍區(qū)域的活動時間及路程等，并進行統(tǒng)計處理。

表1第5天撤臺后供試品1對小鼠在站臺周圍范圍i的活動路程和時間的影響

*p<0.05，**p<0.01與模型組相比

表2第5天撤臺后供試品1對小鼠第一次穿越平臺時間和平臺穿越次數(shù)的影響

*p<0.05，**p<0.01與模型組相比

在撤臺試驗中，模型組動物在站臺(平臺所在區(qū)域)周圍范圍i的活動路程和時間明顯短于陰性對照組的小鼠，第一次穿越平臺的時間和平臺的穿越次數(shù)也明顯少于陰性對照組的小鼠(p值均小于0.01)，說明app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠飼養(yǎng)至8個月時，其空間記憶能力明顯降低。

多奈哌齊連續(xù)口服給藥2個月，明顯延長了小鼠在站臺周圍范圍i的活動路程和時間，明顯縮短了小鼠第一次穿越平臺的時間，增加了穿越平臺的次數(shù)，說明多奈哌齊連續(xù)口服給藥2個月明顯改善了app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的空間記憶障礙。300mg/kg和200mg/kg的供試品1均明顯延長了動物在站臺周圍范圍i的活動路程和時間，明顯縮短了小鼠第一次穿越平臺的時間，增加了穿越平臺的次數(shù)，說明供試品1在200mg/kg劑量下連續(xù)口服給藥2個月就可明顯改善app/ps1雙轉(zhuǎn)基因小鼠的空間記憶障礙。

實施例9供試品1對乙醇誘導(dǎo)的小鼠記憶再現(xiàn)障礙影響

乙醇為中樞抑制劑，可抑制大腦皮層的神經(jīng)功能活動，抑制動物的條件反射過程，使腦內(nèi)蛋白質(zhì)和rna合成受阻，膽堿能和多巴胺等系統(tǒng)發(fā)生改變。在重測前給予，可明顯干擾記憶的再現(xiàn)。乙醇價廉易得，在適宜的濃度下，結(jié)果穩(wěn)定，易于重復(fù)，對中樞和一般運動功能無明顯影響。有改善學(xué)習記憶的藥物可減少乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠24h后由明室到暗室的潛伏期及錯誤次數(shù)。

雄性icr小鼠(上海西普爾-畢凱實驗動物有限公司，動物合格證號：scxk(滬)2008-0016)，經(jīng)口灌胃(i.g.)給藥，其中空白對照組和模型組均給予等體積0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)，給藥組分別給予150mg/kg供試品1，陽性藥組給予1.6mg/kg鹽酸多奈哌齊，每組10只，1次/天，10ml/kg體重，連續(xù)給藥3周。末次給藥后1h，以避暗法訓(xùn)練一次。將小鼠放入避暗箱內(nèi)，背朝洞口放入明室，同時啟動視屏分析裝置，動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，視屏分析將記錄每鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24h后進行測試，測試前30min經(jīng)口灌胃給予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白對照組給予等體積生理鹽水。視屏分析系統(tǒng)將攝制并自動記錄動物所有相關(guān)數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果參見表3。

表3供試品1對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

注：“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，均為與模型組相比。

由表3可見，記憶再現(xiàn)障礙模型組在記憶受損后動物由明室進入暗室的潛伏期明顯縮短，其受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)也顯著多于陰性對照組(p<0.01/0.05)，顯示了記憶再現(xiàn)障礙。

多奈哌齊延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.01)，受電擊的動物數(shù)和5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)也顯著少于模型組(p<0.01)，顯示了改善記憶障礙的作用。供試品1明顯延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.05)，并顯著降低了受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)(p<0.01/0.05)，顯示出良好的改善記憶再現(xiàn)障礙的作用。

實施例10供試品2對乙醇誘導(dǎo)的小鼠記憶再現(xiàn)障礙影響

乙醇為中樞抑制劑，可抑制大腦皮層的神經(jīng)功能活動，抑制動物的條件反射過程，使腦內(nèi)蛋白質(zhì)和rna合成受阻，膽堿能和多巴胺等系統(tǒng)發(fā)生改變。在重測前給予，可明顯干擾記憶的再現(xiàn)。乙醇價廉易得，在適宜的濃度下，結(jié)果穩(wěn)定，易于重復(fù)，對中樞和一般運動功能無明顯影響。有改善學(xué)習記憶的藥物可減少乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠24h后由明室到暗室的潛伏期及錯誤次數(shù)。

雄性icr小鼠(上海西普爾-畢凱實驗動物有限公司，動物合格證號：scxk(滬)2008-0016)，經(jīng)口灌胃(i.g.)給藥，其中空白對照組和模型組均給予等體積0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)，給藥組給予250mg/kg供試品3，陽性藥組給予1.6mg/kg鹽酸多奈哌齊，每組10只，1次/天，10ml/kg體重，連續(xù)給藥3周。末次給藥后1h，以避暗法訓(xùn)練一次。將小鼠放入避暗箱內(nèi)，背朝洞口放入明室，同時啟動視屏分析裝置，動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，視屏分析將記錄每鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24h后進行測試，測試前30min經(jīng)口灌胃給予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白對照組給予等體積生理鹽水。視屏分析系統(tǒng)將攝制并自動記錄動物所有相關(guān)數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果參見表4。

表4供試品2對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

注：“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，均為與模型組相比。

由表4可見，記憶再現(xiàn)障礙模型組在記憶受損后動物由明室進入暗室的潛伏期明顯縮短，其受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)也顯著多于陰性對照組(p<0.01)，顯示了記憶再現(xiàn)障礙。

多奈哌齊延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.01)，受電擊的動物數(shù)也顯著少于模型組(p<0.05)，顯示了改善記憶障礙的作用。供試品2明顯延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.05)，并顯著降低了受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)(p<0.01/0.05)，顯示出良好的改善記憶再現(xiàn)障礙的作用。

實施例11供試品3對東莨菪堿誘導(dǎo)的小鼠記憶獲得障礙影響

東莨菪堿為m膽堿受體阻斷劑，從而引發(fā)受試動物膽堿能神經(jīng)受損型的記憶障礙。有改善學(xué)習記憶的藥物可減少東莨菪堿造成記憶獲得障礙小鼠24h后受電擊的動物數(shù)，降低3min內(nèi)的錯誤次數(shù)，以及縮短第一次跳下平臺的潛伏期。訓(xùn)練前數(shù)小時至幾分鐘內(nèi)給藥可觀察對學(xué)習成績和記憶獲得的影響。

雄性icr小鼠(上海西普爾-畢凱實驗動物有限公司，動物合格證號：scxk(滬)2008-0016)，經(jīng)口灌胃(i.g.)給藥，其中空白對照組和模型組均給予等體積0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)，給藥組分別給予150mg/kg供試品3，陽性藥組給予1.6mg/kg鹽酸多奈哌齊，每組10只，1次/天，10ml/kg體重，連續(xù)給藥3周。末次給藥后1h，以避暗法訓(xùn)練一次。將小鼠放入避暗箱內(nèi)，背朝洞口放入明室，同時啟動視屏分析裝置，動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，視屏分析將記錄每鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24h后進行測試，測試前30min經(jīng)口灌胃給予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白對照組給予等體積生理鹽水。視屏分析系統(tǒng)將攝制并自動記錄動物所有相關(guān)數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果參見表5。

表5供試品3對東莨菪堿誘導(dǎo)的小鼠記憶獲得障礙的影響

注：“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，均為與模型組相比。

由表5可見，模型組記憶受損24小時后第一次跳下平臺的潛伏期明顯縮短，受電擊的動物總數(shù)和5min內(nèi)動物的錯誤總次數(shù)均比陰性對照組明顯增多(p<0.01/0.05)，顯示了記憶障礙。

多奈哌齊明顯延長了小鼠第一次跳下平臺的潛伏期，并減少了受電擊的動物總數(shù)和5min內(nèi)的錯誤總次數(shù)，與模型組相比，p值小于0.01/0.05，顯示了促進記憶障礙的改善。供試品3明顯延長了小鼠第一次跳下平臺的潛伏期，并顯著減少了5min內(nèi)的錯誤總次數(shù)，與模型組相比，p值小于0.05，提示供試品3具有記憶獲得障礙改善作用。

實施例12供試品4和供試品5對乙醇誘導(dǎo)的小鼠記憶再現(xiàn)障礙影響

乙醇為中樞抑制劑，可抑制大腦皮層的神經(jīng)功能活動，抑制動物的條件反射過程，使腦內(nèi)蛋白質(zhì)和rna合成受阻，膽堿能和多巴胺等系統(tǒng)發(fā)生改變。在重測前給予，可明顯干擾記憶的再現(xiàn)。乙醇價廉易得，在適宜的濃度下，結(jié)果穩(wěn)定，易于重復(fù)，對中樞和一般運動功能無明顯影響。有改善學(xué)習記憶的藥物可減少乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙小鼠24h后由明室到暗室的潛伏期及錯誤次數(shù)。

雄性icr小鼠(上海西普爾-畢凱實驗動物有限公司，動物合格證號：scxk(滬)2008-0016)，經(jīng)口灌胃(i.g.)給藥，其中空白對照組和模型組均給予等體積0.5％羧甲基纖維素鈉(cmc-na)，給藥組分別給予150mg/kg及300mg/kg供試品4，或300mg/kg供試品5，陽性藥組給予1.6mg/kg鹽酸多奈哌齊，每組10只，1次/天，10ml/kg體重，連續(xù)給藥3周。末次給藥后1h，以避暗法訓(xùn)練一次。將小鼠放入避暗箱內(nèi)，背朝洞口放入明室，同時啟動視屏分析裝置，動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，視屏分析將記錄每鼠從放入明室至進入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24h后進行測試，測試前30min經(jīng)口灌胃給予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白對照組給予等體積生理鹽水。視屏分析系統(tǒng)將攝制并自動記錄動物所有相關(guān)數(shù)據(jù)，實驗結(jié)果參見表6。

表6供試品4和供試品5對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

注：“*”表示p<0.05，“**”表示p<0.01，均為與模型組相比。

由表6可見，記憶再現(xiàn)障礙模型組在記憶受損后動物由明室進入暗室的潛伏期明顯縮短，其受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)也顯著多于陰性對照組(p<0.01/0.05)，顯示了記憶再現(xiàn)障礙。

多奈哌齊延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.01)，受電擊的動物數(shù)和5分鐘內(nèi)錯誤次數(shù)也顯著少于模型組(p<0.05)，顯示了改善記憶障礙的作用。供試品4明顯延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.05)，并顯著降低了受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)(p<0.01/0.05)，顯示出良好的改善記憶再現(xiàn)障礙的作用。供試品5明顯延長了小鼠由明室進入暗室的潛伏期(p<0.05)，并顯著降低了受電擊的動物數(shù)和5min內(nèi)出現(xiàn)的錯誤總次數(shù)(p<0.05)，顯示出良好的改善記憶再現(xiàn)障礙的作用。

上述試驗結(jié)果表明，本發(fā)明新穎的褐藻多糖可顯著顯著改善哺乳動物空間記憶能力并可用于預(yù)防和/或治療神經(jīng)退行性疾病。

在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。