專利名稱：絲氨酸蛋白酶、特別是丙型肝炎病毒ns3蛋白酶的抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的用作蛋白酶抑制劑特別是用作絲氨酸蛋白酶抑制劑和用作肝炎C NS3蛋白酶抑制劑的化合物。它們通過(guò)干擾丙型肝炎病毒的生活周期來(lái)發(fā)揮作用并且也用作抗病毒劑。
本發(fā)明也涉及包含這些化合物的藥物組合物。本發(fā)明化合物和藥物組合物特別適用于抑制HCV NS3蛋白酶活性并因此可有效地用作丙型肝炎病毒和其它依賴絲氨酸蛋白酶增殖病毒的治療劑。本發(fā)明也涉及利用本發(fā)明化合物及其相關(guān)化合物來(lái)抑制蛋白酶包括丙型肝炎病毒NS3蛋白酶和其它絲氨酸蛋白酶活性的方法。
由丙型肝炎病毒(“HCV”)引起的感染是需引起人類關(guān)注的醫(yī)學(xué)問(wèn)題。人們認(rèn)為HCV是大多數(shù)非甲、非乙型肝炎的起因劑，估計(jì)人血清攜帶率(seroprevalence)為總數(shù)的1％[Purcell,R.H.，“丙型肝炎病毒傳統(tǒng)觀點(diǎn)及現(xiàn)行概念”FEMS微生物綜述14,181-192頁(yè)(1994)；Van der Poel,C.L.，“丙型肝炎.流行病，丙型肝炎的傳染及預(yù)防。血液及輸血的目前研究，H.W.Reesink,Ed.,(Basel:Karger),137-163頁(yè)(1994)]。僅在美國(guó)可能就有四百萬(wàn)人受到感染[Alter,M.J.和Mast,E.E.，“病毒性肝炎在美國(guó)的流行病學(xué)，Gastroenterol.Clin.North Am.23,pp.437-455(1994)]。
當(dāng)?shù)谝淮谓佑|HCV時(shí)，僅有大約20％的受感染者發(fā)展為急性肝炎，而其它人則自動(dòng)消除感染。然而，在大多數(shù)情況下，病毒引起可持續(xù)十年的慢性感染[Iwarson,S.“慢性肝炎的自然過(guò)程”FEMS微生物學(xué)綜述14,201-204頁(yè)(1994)]。這通常引起周期性發(fā)生的和逐漸惡化的肝炎，并因此通常引起更嚴(yán)重的疾病如肝硬化和肝細(xì)胞癌[Kew,M.C.，“丙型肝炎和肝細(xì)胞腫瘤”，F(xiàn)EMS微生物綜述14,211-220頁(yè)(1994)；Saito,I.，等人“丙型肝炎病毒感染與肝細(xì)胞腫瘤發(fā)展的關(guān)系”美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)87,6547-6549頁(yè)(1990)]。不幸的是，沒(méi)有廣泛有效的治療方法來(lái)減弱慢性HCV的進(jìn)程。
HCV基因組編碼了具有3010-3033個(gè)氨基酸的多蛋白[Choo,Q.-L.,等人“丙型肝炎病毒的基因組織和多樣性”，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)88,2451-2455頁(yè)(1991)；Kato,N.等人“來(lái)自日本甲型、乙型肝炎患者的人丙型肝炎病毒基因組的分子克隆”，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)87,9524-9528頁(yè)(1990)；Takamizawa,A.等人“由人類攜帶者分離出的丙型肝炎基因組的結(jié)構(gòu)和組織”，病毒雜志，65,1105-1113頁(yè)(1991)]。推測(cè)，HCV非結(jié)構(gòu)(NS)蛋白提供病毒復(fù)制必需的催化機(jī)構(gòu)。NS蛋白是由蛋白水解使多蛋白斷裂產(chǎn)生的[Bartenschlager,R.等人“丙型肝炎病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白3編碼用于斷裂NS3/4和NS4/5連接的絲氨酸型蛋白酶”，病毒雜志，67,3835-3844頁(yè)(1993)；Grakoui,A.等人“丙型肝炎病毒編碼的絲氨酸蛋白酶的特征蛋白酶-依賴多蛋白斷裂位點(diǎn)的測(cè)定”，病毒雜志，67,2832-2843頁(yè)(1993)；Grakoui,A.等人，丙型肝炎病毒多蛋白斷裂產(chǎn)物的表達(dá)和鑒定”，病毒雜志，67,1385-1395頁(yè)(1993)；Tomei,L.等人，“Ns3是用于加工丙型肝炎病毒多蛋白的絲氨酸蛋白酶”，病毒雜志，67,4017-4026頁(yè)(1993)]。
HCV NS蛋白3(NS3)包含絲氨酸蛋白酶活性，它有助于對(duì)大部分病毒酶進(jìn)行處置，并因此認(rèn)為是病毒復(fù)制和感染必需的。已知，黃熱病病毒NS3蛋白酶的突變降低了病毒的感染性[Chambers,T.J.等人，“來(lái)自黃熱病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白Ns3的N-末端區(qū)是負(fù)責(zé)病毒多蛋白的位點(diǎn)專一斷裂的絲氨酸蛋白酶的證據(jù)”，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)87,8898-8902頁(yè)(1990)]。NS3的最初181個(gè)氨基酸(蛋白多蛋白的1027-1207殘基)已顯示含NS3的絲氨酸蛋白酶區(qū)，它對(duì)HCV蛋白酶所有四個(gè)下游部位進(jìn)行處置[C.Lin等人，“丙型肝炎Ns3絲氨酸蛋白酶反式-斷裂需求及加工動(dòng)力學(xué)”，病毒雜志，68,8147-8157等人(1994)]。
HCV NS3絲氨酸及其相關(guān)輔助因子NS4A有助于對(duì)所有蛋白酶進(jìn)行處置，并因此認(rèn)為是病毒輔助必需的。該處置過(guò)程是與人免疫缺陷病毒門冬氨酰蛋白酶進(jìn)行的處置過(guò)程類似的，該過(guò)程也涉及病毒酶處置HIV蛋白酶抑制劑，該蛋白酶抑制劑抑制病毒蛋白處置過(guò)程，是人類有效的抗病毒劑，這表明，干擾病毒生活周期的該階段產(chǎn)生有效的治療劑。所以，它是藥物發(fā)現(xiàn)有吸引力的目標(biāo)。不幸的是，目前還沒(méi)有作為抗HCV劑有效的絲氨酸蛋白酶抑制劑。
而且，目前已知的HCV還沒(méi)有產(chǎn)生令人滿意的抗HCV劑或治療劑。唯一建立的治療HCV病的方法是干擾素治療。然而，干擾素具有明顯的副作用(Janssen等人，1994；Renault and Hoofnagle,1989)[Janssen,H.L.A.，等人“與α-干擾素治療慢性病毒性肝炎有關(guān)的自殺”J.Hepatol.,21,241-243頁(yè)(1994)]；Renault,P.F.和Hoofnagle,J.H.,“α-干擾素副作用。肝病研討會(huì)，9,273-277.(1989)]及僅在25％病例中產(chǎn)生長(zhǎng)期減輕[Weiland,O.“在慢性丙型肝炎傳染中的干擾素治療”，F(xiàn)EMS Microbiol.Rev.,14,279-288頁(yè)(1994)]。而且，有效的抗HCV疫苗的前景仍然是不確定的。
因此，需要更有效的抗HCV治療劑。該抑制劑具有作為蛋白酶抑制劑，特別是作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，更特別是作為HCV NS3蛋白酶抑制劑的治療潛力。尤其，該化合物可用作抗病毒劑，特別是作為抗HCV劑。
本發(fā)明提供用作蛋白酶抑制劑，特別是作為絲氨酸蛋白酶抑制劑，和更特別是作為HCV NS3蛋白酶抑制劑的化合物，及其藥用衍生物。這些化合物可單獨(dú)或與免疫調(diào)節(jié)劑如α-,-β-或γ-干擾素；其它抗病毒劑如利巴韋林和金剛烷胺；其它丙型肝炎蛋白酶抑制劑；HCV生活周期中的其它目標(biāo)抑制劑包括解螺旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入；或其混合物合用。
本發(fā)明也提供抑制蛋白酶，特別是絲氨酸蛋白酶，和HCV NS3蛋白酶的方法。
本發(fā)明也提供包含本發(fā)明化合物的藥物組合物，以及包含其它免疫調(diào)節(jié)劑如α-,-β-或γ-干擾素；其它抗病毒劑如利巴韋林和金剛烷胺；其它丙型肝炎蛋白酶抑制劑；HCV生活周期中的其它目標(biāo)抑制劑包括解螺旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進(jìn)入；或其混合物的多組分組合物。本發(fā)明也提供利用本發(fā)明化合物以及其它相關(guān)化合物來(lái)抑制HCV的方法。
為了更充分理解本文所描述的本發(fā)明，下面詳細(xì)闡述說(shuō)明書(shū)。在該說(shuō)明書(shū)中，使用下列縮寫指定縮寫符號(hào)試劑或片斷Abu 氨基丁酸Ac 乙?；鵄cOH乙酸Bn 芐基Boc 叔丁氧基羰基Bz 苯甲酰基Cbz 羰基芐氧基(carbobenzyloxy)CDI 羰基二咪唑DCE 1,2-二氯乙烷DCM 二氯甲烷DIEA異丙基乙胺DMA 二甲基乙酰胺DMAP甲基氨基吡啶DMF 二甲基甲酰胺DPPA二苯基磷?；B氮化合物DMSO二甲亞砜Et 乙基EtOAc 乙酸乙酯FMOC9-芴基甲氧基羰基HbtU鄰-苯并三唑基-N,N,N’,N’-四甲基脲(tetramethyluronium)HOBtN-羥基苯并三唑HPLC高效液相色譜Me 甲基MS 質(zhì)譜NMP N-甲基吡咯烷酮ND 未測(cè)定Pip 哌啶Prz 哌嗪PyBrop 溴-三-吡咯烷子基磷鎓六氟磷酸鹽Pyr 吡啶THF 四氫呋喃TFA 三氟乙酸TFE 三氟乙醇Tol 甲苯本文使用下列術(shù)語(yǔ)除非進(jìn)行相反的表述，本文所使用的術(shù)語(yǔ)“-SO2-”和“-S(O)2-”是指砜或砜衍生物(即兩個(gè)附加的基團(tuán)連接到S上)，而并非指亞硫酸酯。
術(shù)語(yǔ)“取代的”是指用選自特定基團(tuán)的取代基取代已知結(jié)構(gòu)中的一個(gè)或多個(gè)氫。當(dāng)用選自相同特定基團(tuán)的取代基取代一個(gè)以上氫時(shí)，在每個(gè)位置的取代基都可以是相同的或不同的。
本文所使用的術(shù)語(yǔ)“氨基”是指三價(jià)氮，它可以是連上一個(gè)C原子的或者可以是由1-2個(gè)烷基取代的。
術(shù)語(yǔ)“烷基”或“烷烴”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指直鏈或支鏈飽和的脂肪族烴基團(tuán)，其中包含有特定數(shù)目的碳原子或者未指定數(shù)目時(shí)，優(yōu)選包含1-10且更優(yōu)選包含1-5個(gè)碳原子。烷基的例子包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基等。
術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”或“烯烴”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指直鏈或支鏈的單或多不飽和的脂肪族烴基團(tuán)，其中包含有特定數(shù)目的碳原子或者未指定數(shù)目時(shí)，優(yōu)選包含2-10且更優(yōu)選包含2-5個(gè)碳原子。鏈烯基的例子包括但不限于乙烯基、E-和Z-丙烯基、E-和Z-異丁烯基、E-和Z-戊烯基、E-和Z-己烯基、E,E-,E,Z-,Z,E-和Z,Z-己二烯基等。
術(shù)語(yǔ)“炔基”或“炔烴”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指直鏈或支鏈的單或多不飽和的脂肪族烴基團(tuán)，其中包含有特定數(shù)目的碳原子或者未指定數(shù)目時(shí)，優(yōu)選包含2-10且更優(yōu)選包含2-5個(gè)碳原子，其中至少一個(gè)不飽和脂肪族烴基團(tuán)含有三鍵。炔基的例子包括但不限于乙炔基、丙炔基、異丁炔基、戊炔基、己炔基、己烯炔基(hexenynyl)等。
術(shù)語(yǔ)“芳基”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指含有特定碳原子數(shù)目的碳環(huán)芳香族基團(tuán)，并且可以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。優(yōu)選的芳基具有6-14個(gè)碳原子，更優(yōu)選6-10個(gè)碳原子。芳基的例子包括但不限于苯基、萘基、蒽基等。
術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指穩(wěn)定的非芳香族3-8元碳環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)可以是飽和的、單不飽和的或多不飽和的，并且可以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。碳環(huán)可以附著在內(nèi)部碳原子上以形成任何穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”或“環(huán)烷烴”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指穩(wěn)定的非芳香族3-8元飽和的碳環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)可以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。碳環(huán)可以附著在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的內(nèi)部碳原子。優(yōu)選地，碳環(huán)具有5-6個(gè)碳原子。碳環(huán)基團(tuán)的例子包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、1,2-二氫化茚、四氫萘等。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”或“環(huán)烯烴”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指穩(wěn)定的含有至少一個(gè)端環(huán)碳碳雙鍵的環(huán)烴環(huán)狀基團(tuán)。碳環(huán)可以附著在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的環(huán)狀碳原子上。沒(méi)有指定碳原子數(shù)目時(shí)，環(huán)烯烴基團(tuán)優(yōu)選具有5-7個(gè)碳原子。環(huán)烯烴基團(tuán)的例子包括但不限于環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)戊二烯基、茚基等。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)亞烷基”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指穩(wěn)定的含有至少一個(gè)環(huán)外碳碳雙鍵的環(huán)烴環(huán)狀基團(tuán)，該環(huán)烴環(huán)可以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。碳環(huán)可以附著在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的環(huán)狀碳原子上。沒(méi)有指定碳原子數(shù)目時(shí)，環(huán)亞烷基團(tuán)優(yōu)選具有5-7個(gè)碳原子。環(huán)亞烷基基團(tuán)的例子包括但不限于環(huán)亞戊基、環(huán)亞己基、環(huán)亞戊烯基等。
技術(shù)操作人員會(huì)意識(shí)到某些基團(tuán)可以按環(huán)烷烴或按芳基分類。此基團(tuán)的例子包括1,2-二氫化茚基和四氫萘基。
術(shù)語(yǔ)“單環(huán)”或“單環(huán)的”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指5-7員環(huán)系，除非在本文中有定義。
術(shù)語(yǔ)“二環(huán)”或“二環(huán)的”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指6-11員環(huán)系，除非在本文中有定義。
術(shù)語(yǔ)“三環(huán)”或“三環(huán)的”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指11-15員環(huán)系，除非在本文中有定義。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指(除非在本文中有定義)穩(wěn)定的5-到15-員單、二或三環(huán)雜環(huán)，它是飽和的或者是部分不飽和的，但不是芳香族的，并且可以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。各個(gè)雜環(huán)由一個(gè)或多個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子組成。本文使用的術(shù)語(yǔ)“氮和硫雜原子”包括任何氧化形式的氮和硫，以及季銨化形式的任何堿性氮。雜環(huán)可以附著在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的內(nèi)部碳原子或雜原子上。
上文所定義的優(yōu)選的的雜環(huán)包括如咪唑烷基、引唑烷酮基(indazolinolyl)、全氫化噠嗪基、吡咯啉基、吡咯烷基、哌啶基、吡唑啉基、哌嗪基、嗎基、硫代嗎啉基、β-卡啉基、噻唑烷基、硫代嗎啉基砜、氧代哌啶烷基、氧代吡咯烷基、氧代氮雜基、氮雜基(azepinyl)、呋咱基、四氫吡喃基、四氫呋喃基、氧雜硫醇基(oxathiolyl)、二硫醇基(dithiolyl)、四氫苯硫基、二噁烷基、二氧戊環(huán)基、四氫呋喃并四氫呋喃基、四氫吡喃并四氫呋喃基、四氫吡喃并二氫呋喃基、二氫吡喃基、二氫呋喃基、二氫呋喃并四氫呋喃基、二氫吡喃并四氫呋喃基、四氫噻吩砜基(sulfolanyl)等。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”和“雜芳族的”不管是單獨(dú)使用還是與任何其它術(shù)語(yǔ)一起使用均指穩(wěn)定的芳族的3-到7-員單環(huán)雜環(huán)，并且以是不稠合的或是與1-3個(gè)環(huán)烷基、芳香族的，雜環(huán)的或雜芳香族環(huán)稠合的，例如與苯稠合的。各個(gè)雜芳環(huán)由一個(gè)或多個(gè)碳原子和1-4個(gè)選自氮、氧和硫的雜原子組成。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“氮和硫雜原子”包括任何氧化形式的氮和硫，以及季銨化形式的任何堿性氮。雜環(huán)可以附著在任何形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的內(nèi)部碳原子或雜原子上。
上文定義的優(yōu)選的雜芳環(huán)包括如苯并咪唑基、咪唑基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、吲唑基、噠嗪烷基(pyridazyl)、吡啶基、吡咯基、吡唑基、吡嗪基、喹噁啉基(quinoxolyl)、吡喃基、嘧啶基、噠嗪基、呋喃基、噻吩基、三唑基、噻唑基、四唑基、苯并呋喃基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、異噻唑基、噻二唑基、噻吩基等。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指基團(tuán)氟、氯、溴或碘。優(yōu)選的鹵素基團(tuán)為氟和氯。
在化學(xué)式中，本文使用括號(hào)表示1)存在有一個(gè)以上與相同原子或基團(tuán)結(jié)合的原子或基團(tuán)；或2)鏈中的一個(gè)支點(diǎn)(即，打開(kāi)括號(hào)之前的基團(tuán)或原子直接與打開(kāi)括號(hào)之后的基團(tuán)或原子結(jié)合)。第一種用法的例子是“N(R1)2”表示兩個(gè)R1與氮原子結(jié)合。第二種用法的例子是“-C(O)R1”表示氧原子和R1結(jié)合到碳原子上，如下列結(jié)構(gòu)式所示
本文所使用的“B”表示硼原子。
本發(fā)明提供可用作蛋白酶抑制劑，特別是絲氨酸蛋白酶抑制劑，尤其是作為HCV NS3蛋白酶抑制劑的化合物。照此，它們通過(guò)干擾HCV病毒和其它依賴于絲氨酸蛋白酶增殖的病毒的生活周期起作用。所以，這些化合物可用作抗病毒劑。
因此，在一個(gè)實(shí)施路線中，本發(fā)明提供式(Ⅰ)化合物
其中G1是巰基、羥基、硫甲基、鏈烯基、鏈炔基、三氟甲基、C1-2烷氧基、C1-2烷硫基或C1-3烷基，其中C1-3烷基可以是未取代的或由巰基、羥基、硫甲基、鏈烯基、鏈炔基、三氟甲基、C1-2烷氧基或C1-2烷硫基取代。
W1為
或
G2為烷基、芳基、芳烷基或一、二或三環(huán)雜環(huán)，它們可以是未取代的或由烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、芳烷氧基、雜環(huán)烷氧基、氧代、羥基、氨基、烷酰基氨基、烷氧基羰基氨基、脲基、羧基、雜環(huán)氧基烷基、芳氧基烷基、雜環(huán)基羰基、芳?；?、芳基磺?；㈦s環(huán)基磺?；?、雜環(huán)基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、芳烷基磺酰氨基、雜環(huán)基烷?；?、羧基烷基、羧酰氨基烷基、鏈烷磺?；?、磺酰氨基、鹵素、氰基或鹵代烷基取代的。
G4為烷基、鏈烯基、鏈炔基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烷基鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基鏈烯基、羥基烷基、烷氧基烷基、烷基硫代烷基、芳基硫代烷基或雜環(huán)基硫代烷基。
各Q1為羥基、烷氧基或芳氧基，或者各Q1為氧原子并且與它們所連接的硼一起形成5-7員環(huán)，其中環(huán)原子為碳、氮或氧。
U為氫、G9-C(O)-、G9-SO2-、G9-C(O)-C(O)-、(G9)2-N-C(O)-C(O)-、(G9)2-N-SO2-、(G9)2N-C(O)-或G9-O-C(O)-。
G9為氫、烷基、羧基烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基，或者為未取代的或由1-3個(gè)選自烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、雜環(huán)基、羧基烷基、羧酰氨基烷基、烷基磺酰基或磺酰氨基取代的雜環(huán)基鏈烯基；或者兩個(gè)G9基與它們所連接的氮原子一起形成4-10員含氮單環(huán)或二環(huán)飽和或部分不飽和環(huán)系統(tǒng)，其中形成環(huán)的1-2個(gè)原子為N、S或O并且其它形成環(huán)的原子為C；其中環(huán)系統(tǒng)為未取代的或由一個(gè)或兩個(gè)選自烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)基、酮基、羥基、氨基、烷?；被?、羧基、羧基烷基、羧酰氨基烷基、磺?；蚧酋０被〈?。
E4為鍵；
或
其中G13為環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、芳烷氧基烷基、雜環(huán)基烷氧基烷基、芳烷硫基烷基或雜環(huán)基烷硫基烷基，它們是未取代的或由1-2個(gè)烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)基、氧、羥基、氨基、烷?；被?、羧基、羧基烷基、羧酰氨基烷基、磺?；蚧酋０被〈?。
G14為氫、烷基、鏈烯基、羥基、烷氧基或-CH2-G8，其中，G8為芳基、芳烷基、碳環(huán)基或雜環(huán)基，其中芳基、芳烷基或雜環(huán)基的環(huán)部分可以是未取代的或由1-3個(gè)選自烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)烷基、芳烷氧基、雜環(huán)基烷氧基、氧代、羥基、氨基、烷?；被⑼檠豸驶被?、脲基、羧基、羧基烷基、羧基氨基烷基、烷基磺?；?、磺酰氨基、鹵素、氰基或鹵代烷基的基團(tuán)取代的；或E4為
G13和G14與它們所結(jié)合的原子(分別為碳和氮)一起形成含氮的具有4-7員的雜環(huán)，該雜環(huán)可以不合有或含有1-2個(gè)另外的雜原子，其中所產(chǎn)生的環(huán)系是不稠合的或與另外的碳環(huán)或雜環(huán)稠合形成含有7-11個(gè)原子的二環(huán)系統(tǒng)；并且其中單環(huán)或二環(huán)可以不被取代或被1-2個(gè)選自氧、羥基、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、烷基、鏈烯氧基芳氧基、芳烷氧基、鹵素或硝基取代。
各個(gè)Q3是鹵素、硝基、氰基、烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、羥基、氨基、烷基氨基、烷酰基氨基、羧基、羧基烷基、羧酰氨基烷基、烷基磺?；⒎蓟酋；?、芳烷基磺?；?、烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基或芳烷基磺酰氨基，其中任何烷基、鏈烯基、芳基或雜環(huán)基團(tuán)均可以不取代或被1-3個(gè)選自酮、羥基、硝基、氰基、鹵素、氨基、烷基、烷氧基或烷硫基取代；其中Q3不與特定原子結(jié)合時(shí)，可與任何可取代的原子結(jié)合。
Q4獨(dú)立地為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、烷?；⒎蓟驶?、芳烷基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺?；⒎纪榛酋；?、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、芳烷氨基羰基，其中任何所述烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基基團(tuán)可選擇性被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自酮基、羥基、硝基、氰基、鹵素、氨基、烷基、烷氧基或烷硫基的基團(tuán)取代。
Q5為芳基或芳族雜環(huán)，其中芳基或芳族雜環(huán)為具有5-14個(gè)原子的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，并且可以選擇性被1-3個(gè)選自羥基、硝基、氰基、鹵素、氨基、烷基、烷氧基、烷?；?、烷氨基或烷硫基取代。
E5為鍵或
其中G15為烷基、鏈烯基、環(huán)烷基烷基、芳烷基、雜環(huán)基烷基、羧基烷基或羧酰氨基烷基，其中，任何芳烷基或雜環(huán)基烷基的環(huán)都可以是未取代的或由1-2個(gè)烷基、鏈烯基、芳烷基、烷氧基、鏈烯氧基、芳氧基、雜環(huán)基、氧、羥基、氨基、烷?；被?、羧基、羧基烷基、羧酰氨基烷基、磺酰基或磺酰氨基取代。
E6為鍵或
其中，G16為氫、烷基、鏈烯基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；E7為鍵或
其中，G17為未取代的或由羧基取代的烷基；其中優(yōu)選地，烷基為C1-3烷基。
E8為鍵或
其中，G18為未取代的或由羧基取代的烷基；其中優(yōu)選地，烷基為C1-3烷基。
各Z1獨(dú)立地為O或H2，前提是，在所給化合物中，不超過(guò)2個(gè)Z1基為H2。
優(yōu)選的式(Ⅰ)化合物為那些其中至少一個(gè)取代基為如下定義的化合物G1為乙烯基、乙炔基、-CH3、-CF3、-CH2CH3、-CH2CF3、-SCH3、-SH、-CH2SH或-CH2OH；G13為C3-6支鏈烷基或者G13和G14與它們所連接的原子(分別為碳和氮)一起形成具有4-7個(gè)成員的含氮雜環(huán)系統(tǒng)，該環(huán)可以不合或含1-2個(gè)其它雜原子，其中單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)可以是未取代的或由1或2個(gè)選自氧、羥基、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、烷基、鏈烯氧基、芳氧基、芳烷氧基、鹵素或硝基的基團(tuán)取代的；并且Z1為O。
更優(yōu)選的式(Ⅰ)化合物為那些其中G1為-SH、-CH2SH、-CF3或-CF2CF3的化合物。
最優(yōu)選的式(Ⅰ)化合物為那些其中G1為-SH或-CF3的化合物。
按照另一實(shí)施例，本發(fā)明提供式(Ⅱ)化合物
在這些化合物中W為
或
m為0或1。
各R1為羥基、烷氧基或芳氧基，或者各R1為氧原子并且與它們所連接的硼一起形成5-7員環(huán)，其中環(huán)原子為碳、氮或氧。
各R2獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)烯基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基鏈烯基、雜芳基或雜芳烷基或者兩個(gè)連接到相同氮原子上的R2基與氮原子一起形成5-7員單環(huán)雜環(huán)系統(tǒng)；其中，任一R2碳原子都可以是未取代的或由J取代的。
J為烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、雜環(huán)烷基、酮基、羥基、氨基、烷氨基、烷酰基氨基、芳?；被?、芳烷酰氨基、羧基、羧烷基、羧酰氨基烷基、鹵素、氰基、硝基、甲酰基、?；?、磺酰基或磺酰氨基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J1基取代的。
J1為烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、酮基、羥基、氨基、烷?；被⒎减；被?、羧基、羧烷基、羧酰氨基烷基、鹵素、氰基、硝基、甲?；?、磺?；蚧酋０被?。
L為烷基、鏈烯基或鏈炔基，其中連接到碳原子上的任何氫都可以是未取代的或由鹵素取代的，并且其中連接到任何末端碳原子上的任何氫或鹵原子都可以是未取代的或由巰基或羥基取代的。
A1為鍵，
或
R4為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或、羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。
R5和R6獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。
X為鍵、-C(H)(R7)-、-O-、-S-或-N(R8)-。
R7為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。
R8為氫、烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、芳烷?；?、雜環(huán)烷酰基(heteroanoyl)、雜芳烷?；?、-C(O)R14、-SO2R14或羧酰氨基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；或者R8和Z與它們所連接的原子一起形成含氮未取代的或由1-3個(gè)J取代的單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)。
R14為烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基。
Y為鍵、-CH2-、-C(O)-、-C(O)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)(NR7)-，其中R7如上定義。
Z為烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、-OR2或-N(R2)2，其中，任何碳原子都可以是未取代的或由J取代的，其中R2如上定義。
A2為鍵或
R9為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。
M為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的，其中任何烷基的碳原子都可以由雜原子取代。
V為鍵、-CH2-、-C(H)(R11)-、-O-、-S-或-N(R11)-。
R11為氫或C1-3烷基。
K為鍵、-O-、-S-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)(NR11)-，其中R11如上所述。
T為-R12、-烷基-R12、-鏈烯基-R12、-鏈炔基-R12、-OR12、-N(R12)2、-C(O)R12、-C(=NO烷基)R12，或
各R12為氫、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)亞烷基或雜環(huán)亞烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的，或者第一個(gè)R12和第二個(gè)R12與它們所連接的氮原子一起形成未取代的或由1-3個(gè)J基取代的單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)。
R10為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。
R15為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J取代的；并且R16為氫、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
優(yōu)選地，W為
或
更優(yōu)選地，W為
或
最優(yōu)選地，W為
其中，R2為芳烷基；或
優(yōu)選地，J為烷基、烷氧基、芳氧基、芳基、芳烷基、芳烷氧基、鹵素、雜芳基、氰基、氨基、硝基、雜環(huán)基、?；?、羧基、羧烷基、烷氨基、羥基、雜環(huán)基烷基、芳烷?；被?、芳?；被?、烷?；被?、甲?；蛲?。
更優(yōu)選地，J為叔丁基、甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基、羧基、苯基、芐基、苯氧基、芐氧基、氟、氯、溴、異噁唑基、吡啶基、哌啶基、羧甲基、羧乙基；二烷基氨基，嗎啉基甲基、苯乙酰氨基或酰氨基。
優(yōu)選地，J1為烷氧基、烷基、鹵素或芳基。
更優(yōu)選地，J1為C1-3烷氧基、鹵素、C1-3烷基或苯基。
優(yōu)選地，L為烷基、鏈烯基、烯丙基或炔丙基。
更優(yōu)選地，L為三鹵甲基、巰基或由三鹵甲基、巰基或羥基取代的烷基。
優(yōu)選地，R4為烷基、芳烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烷基。更優(yōu)選地，R4為苯基烷基或環(huán)烷基。最優(yōu)選地，R4為異丁基、環(huán)己基烷基或苯乙基。
優(yōu)選地，R5和R6各為氫。
優(yōu)選地，X為-O-或-N(R8)-。
優(yōu)選地，R8為氫。
優(yōu)選地，Y為-CH2-、-C(O)-、-C(O)C(O)-或-S(O)2-。
優(yōu)選地，R2為H、氟、三氟甲基、烷基、芳基、芳烷基、雜芳烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基烷基。
優(yōu)選地，Z為烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、雜芳基、OR2或N(R2)2，其中優(yōu)選地，R2為芳烷基或鏈烯基。
更優(yōu)選地，Z為苯基、1,4-苯并二噁烷基、1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、苯并噻唑基、萘基、苯甲基、噁二唑基、異噁唑基、喹啉基、苯并噻吩基、噻唑基、環(huán)己基、丁基、萘基、二氧戊環(huán)基、苯甲基、吡啶基、嗎啉基、N-苯胺基、N-氨基苯并噻唑、N-氨基苯并間二氧雜環(huán)戊烯基、N-氨基萘、N-苯甲基胺、N-氨基吡啶、芐氧基、烯丙氧基或苯乙基，并且可以是不取代的或被J取代的。
最優(yōu)選的是，Z為萘基、3,4-二氯苯基、2-甲酯基苯基。
優(yōu)選地，R9為烷基。更優(yōu)選地，R9為丙基。最優(yōu)選地，R9為異丙基。
優(yōu)選地，M為烷基、雜芳基、芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基或烷芳基，其中一個(gè)烷基碳原子被O或S代替。
更優(yōu)選地，M為丙基、甲基、吡啶基甲基、苯甲基、萘基甲基、苯基、咪唑基甲基、噻吩基甲基、環(huán)己基甲基、苯乙基、苯甲基硫代甲基或芐氧基乙基。
優(yōu)選地，V為-N(R11)-。
優(yōu)選地，R11為氫。
優(yōu)選地，K為-C(O)-或-S(O)2-。
優(yōu)選地，T為-R12、-烷基-R12、-鏈烯基-R12、-OR12、-N(R12)2、-C(=NO烷基)R12，或
更優(yōu)選地，T為-R12和-烷基-R12。
優(yōu)選地，R12為芳基或雜芳基并且可以是不取代的或被1-3個(gè)J基團(tuán)取代的。更優(yōu)選地，R12為1-萘基、異喹啉基、吲哚基或2-烷氧基-1-萘基。
優(yōu)選地，R10為被羧基取代的烷基。更優(yōu)選地，R10為被羧基取代的C1-3烷基。
優(yōu)選地，R15為被羧基取代的烷基。更優(yōu)選地，R15為被羧基取代的C1-3烷基。
在式(Ⅱ)的一個(gè)優(yōu)選路線中，A1為
；并且
A2為鍵。
優(yōu)選地，在該優(yōu)選的路線中，X為O。
更優(yōu)選地，Y為-CH2-。
或者，Y為-C(O)-。
或者，Y為-C(O)-并且Z為-N(R2)2-。
或者，在該優(yōu)選的路線中，X為-N(R8)-。
更優(yōu)選地，Y為-C(O)-。
或者，Y為-S(O)2-。
或者，Y為-C(O)-并且Z為-N(R2)2-。
或者，在該優(yōu)選的的路線中，X為-N(R8)-，其中R8為-C(O)R14或-S(O)2R14。
更優(yōu)選地，R8為-C(O)R14時(shí)，Y為-C(O)-。
或者，Y為-S(O)2-。
或者，Y為-C(O)-并且Z為-N(R2)2-。
更優(yōu)選地，R8為-S(O)2R14時(shí)，Y為-C(O)-并且Z為-N(R2)2-。
在本發(fā)明式(Ⅱ)化合物的一個(gè)更優(yōu)選路線中，A1為
其中，X為-O-并且Y為-CH2-；A2為
V為-(NR11)，并且K為-C(O)-。
在本發(fā)明式(Ⅱ)化合物的另一個(gè)更優(yōu)選路線中，A1為
其中，X為O并且Y為CH2；A2為
’V為-(NR11)，并且K為-S(O)2-。
在本發(fā)明式(Ⅱ)化合物的另一個(gè)更優(yōu)選路線中，A1為
其中，X為O并且Y為-CH2-；A2為鍵V為-(NR11)，并且K為-C(O)-。
在本發(fā)明式(Ⅱ)化合物的另一個(gè)更優(yōu)選路線中，A1為
其中，X為O并且Y為-CH2-；A2為鍵V為-(NR11)，并且K為-S(O)2-。
優(yōu)選地，在這些優(yōu)選的路線中W為
或
更優(yōu)選地，W為
或
最優(yōu)選地，W為
其中R2為芳烷基；或
優(yōu)選地，在這些更優(yōu)選的實(shí)施路線中，L為烷基、鏈烯基、烯丙基或炔丙基。
更優(yōu)選地，L為三鹵代甲基、巰基或被三鹵代甲基、巰基或羥基取代的烷基。
在式(Ⅱ)的另一優(yōu)選的路線中，A1為
并且A2為鍵。在該優(yōu)選的實(shí)施路線中的優(yōu)選的基團(tuán)如上文所述。
在式(Ⅱ)的另一優(yōu)選的路線中，A1為鍵。在該優(yōu)選的實(shí)施路線中的優(yōu)選的基團(tuán)如上文所述。
在式(Ⅱ)的另一優(yōu)選的路線中，A1為
并且A2為
該優(yōu)選的實(shí)施路線中的優(yōu)選的、更優(yōu)選的和最優(yōu)選的的基團(tuán)如上文所述。
本發(fā)明預(yù)期許多涉及NS3蛋白酶抑制劑的活性部位可以是天然肽模擬的，因此可由天然底物來(lái)設(shè)計(jì)。所以，本發(fā)明肽模擬抑制劑的優(yōu)選的取代基包括那些與酶具有高親和性(低Km)的天然存在的底物或合成底物的骨架或側(cè)鏈相對(duì)應(yīng)的基團(tuán)。
在式(Ⅱ)的另一個(gè)優(yōu)選的的實(shí)施路線中，A1為鍵。該優(yōu)選的實(shí)施路線中的優(yōu)選的、更優(yōu)選的和最優(yōu)選的的基團(tuán)如上文所述。
本領(lǐng)域人員會(huì)意識(shí)到某些特定的基團(tuán)可以按雜環(huán)或雜芳族來(lái)分類，這取決于結(jié)合點(diǎn)。
本發(fā)明化合物可以合有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子并且因此可產(chǎn)生消旋體和消旋體混合物、單一對(duì)映體、非對(duì)映異構(gòu)體混合物和各個(gè)非對(duì)映異構(gòu)體。這些化合物的所有這些異構(gòu)體形式都清楚地包括在本發(fā)明之中。各個(gè)立體異構(gòu)體的碳都可以是R或S構(gòu)型。本發(fā)明預(yù)想的取代基和變體僅僅是那些能夠產(chǎn)生穩(wěn)定化合物形式的。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定”指具有足以允許進(jìn)行制備的穩(wěn)定性的并且在足夠長(zhǎng)的時(shí)間里保持化合物完整性以用于本文詳細(xì)描述的目的(如，治療或預(yù)防性地對(duì)哺乳動(dòng)物給藥或在親和性色譜層析中使用)的化合物。通常，這些化合物在40℃或低于該溫度、不潮濕和沒(méi)有其它化學(xué)反應(yīng)劑的條件下至少穩(wěn)定1周。
本發(fā)明化合物可使用常規(guī)技術(shù)來(lái)合成。有利的是，這些化合物易于由容易得到的原料來(lái)合成。
本文中定義的本發(fā)明化合物(包括式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物)包括其可藥用衍生物或藥物前體?！捌淇伤幱醚苌锘蛩幬锴绑w”意指任何可藥用鹽、酯、酯的鹽或本發(fā)明化合物的其它衍生物，它們被給予受體時(shí)能夠提供(直接或間接)本發(fā)明化合物。
因此，本發(fā)明也提供本發(fā)明化合物的藥物前體，該前體被設(shè)計(jì)成能夠提高生物特性如，口服吸收性、清除率、代謝率或腔室分布特性的衍生物。這些衍生物在本領(lǐng)域中是公知的。
本領(lǐng)域人員會(huì)意識(shí)到，本發(fā)明化合物可通過(guò)附加合適的功能基來(lái)修飾以改進(jìn)生物選擇特性。這種修飾在本領(lǐng)域中是已知的，且包括增加進(jìn)入要給予的生物腔(如，血液、淋巴系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng))的生物滲透性、增加口服的生物利用度、增加允許注射給藥的溶解度、改變代謝和改變排泄速度。
術(shù)語(yǔ)“保護(hù)的”涉及指定的功能基與合適的化學(xué)基團(tuán)(保護(hù)基)結(jié)合。合適的氨基保護(hù)基和保護(hù)基團(tuán)的例子描述在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，有機(jī)合成中保護(hù)基團(tuán)，第二版，John Wiley和Sons(1991)；L.Fieser和M.Fieser，用于有機(jī)合成的Fieser和Fieser’s試劑，John Wiley和Sons(1994)；L.Paquette編輯Encyclopedia ofReagents for Organic Synthesis,John Wiley和Sons(1995)并且在本發(fā)明中所使用的某些特定化合物中進(jìn)行了例舉。
特別有利的衍生物和前體是那些在將這些化合物給予哺乳動(dòng)物(如，通過(guò)口服給予化合物更易于吸收進(jìn)入血液)時(shí)增加本發(fā)明化合物生物利用度的、具有更有利的清除率或代謝模式的，或者那些與母體化合物相比增強(qiáng)母體化合物釋放進(jìn)入生物腔室(如，腦或淋巴系統(tǒng))的衍生物。優(yōu)選的前體藥物包括增強(qiáng)水溶性或增強(qiáng)經(jīng)腸膜轉(zhuǎn)運(yùn)活性物質(zhì)的基團(tuán)被附加在式(Ⅰ)和(Ⅱ)結(jié)構(gòu)上的衍生物。
本發(fā)明化合物可藥用鹽包括由可藥用無(wú)機(jī)的或有機(jī)的酸和堿衍生的化合物。合適的酸的鹽的例子包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、大門冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡萄庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、羥乙酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酯酸鹽、過(guò)硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。其它酸如草酸，盡管其本身不是可藥用的，但可用于制備作為獲得本發(fā)明化合物中間體有用的鹽及其可藥用酸加成的鹽。
由合適的堿衍生的鹽包括堿金屬(如，鈉和鉀)、堿土金屬(如鎂)、銨和N-(C1-4烷基)4-鹽。本發(fā)明也包括任何本文所公開(kāi)的堿性含氮化合物的季銨化物。水或油可溶解的或可分散的產(chǎn)物可通過(guò)這種季銨化來(lái)獲得。
通常，通過(guò)實(shí)施例1-8所述的方法來(lái)獲得式(Ⅰ)和(Ⅱ)化合物。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，本文所述的合成路線不是用來(lái)包括由此可合成本申請(qǐng)所描和要求保護(hù)化合物的廣泛列舉的全部方法。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其它的方法是顯而易見(jiàn)的。另外，上文所述的各種合成步驟可以對(duì)其順序進(jìn)行改變以獲得所需的化合物。
不受理論的限制，我們認(rèn)為，本發(fā)明化合物或者通過(guò)共價(jià)鍵或者通過(guò)非共價(jià)鍵與HCV NS3蛋白酶和其它絲氨酸蛋白酶相互作用，抑制該酶裂開(kāi)天然的或合成的底物的能力。非共價(jià)鍵相互作用是有利的，它們提供相對(duì)大的抑制特異性而不抑制其它不需要的目標(biāo)，例如半胱氨酸蛋白酶。因此，當(dāng)將這些化合物給予哺乳動(dòng)物時(shí)，它們具有比通過(guò)共價(jià)鍵相互作用的蛋白酶較大的治療指數(shù)，它們可以與較寬范圍的蛋白酶相互作用并引起不需要的毒性作用。相反，通過(guò)共價(jià)鍵相互作用是有利的，它們提供較大的抑制作用，允許給予較低的劑量并因此改善任何不足的特異性問(wèn)題。
本發(fā)明新的化合物是優(yōu)良的蛋白酶、特別是絲氨酸蛋白酶和HCVNS3蛋白酶的抑制劑。因此，這些化合物能夠靶向并抑制蛋白酶，特別絲氨酸蛋白酶，尤其是HCV NS3蛋白酶。因此，這些化合物干擾病毒包括HCV的生活周期并因此用作抗病毒劑?？赏ㄟ^(guò)各種方法如實(shí)施例11的方法來(lái)測(cè)定抑制作用。
術(shù)語(yǔ)“抗病毒劑”是指具有病毒抑制活性的化合物或藥物。該抑制劑包括逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(包括核苷和非核甘類似物)和蛋白酶抑制劑。優(yōu)選地，蛋白酶抑制劑為HCV蛋白酶抑制劑。
本文所使用的術(shù)語(yǔ)“治療”是指減輕患者特定疾病的癥狀或者改善與某特定疾病有關(guān)的可查明的測(cè)量方法。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“患者”是指哺乳動(dòng)物包括人。
因此，按照另一實(shí)施例，本發(fā)明提供藥物組合物，其包含式(Ⅰ)或(Ⅱ)或其可藥用鹽；其它抗病毒劑，其選自但不限制于免疫調(diào)節(jié)劑如α-、β-或γ-干擾素；其它抗病毒劑如利巴韋林和金剛烷胺；其它HCV蛋白酶抑制劑；其它靶向HCV生活周期的抑制劑包括解螺旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶；或它們的混合物和任何藥用載體、輔料或賦形劑。另一實(shí)施例提供包含式(Ⅰ)或(Ⅱ)或其可藥用鹽和可藥用載體、輔料或賦形劑的組合物。該組合物可不包含或包含其它選自免疫調(diào)節(jié)劑如α-,-β-或γ-干擾素；其它抗病毒劑如利巴韋林；其它HCV蛋白酶抑制劑；HCV解螺旋酶抑制劑或它們的混合物。
術(shù)語(yǔ)“可藥用載體或輔料”是指可以與本發(fā)明化合物一起給予患者的載體或輔料，并且它們不破壞本發(fā)明化合物的藥理活性，且當(dāng)以足以釋放治療量化合物的劑量給予時(shí)是無(wú)毒的。
在本發(fā)明藥物組合物中可使用的藥用載體、輔料和賦形劑包括但不限于，離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、自動(dòng)乳化藥物釋放系統(tǒng)(SEDDS)如dα-生育酚、聚乙二醇1000琥珀酸酯、以藥物劑量形式使用的表面活性劑如吐溫或其它類似的聚合物釋放基質(zhì)，血清蛋白如人血清白蛋白、緩沖劑如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸部分甘油酯的混合物、水、鹽或電解質(zhì)如硫酸鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠體二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素樣物質(zhì)、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。優(yōu)選地，也可以使用環(huán)糊精如“α-、β-和γ-環(huán)糊精或化學(xué)方法修飾的衍生物如羥烷基環(huán)糊精，包括2-和3-羥丙基-β-環(huán)糊精或其它增溶衍生物來(lái)促進(jìn)式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物的釋放。
本發(fā)明藥物組合物可以通過(guò)口服、非腸道、吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰、陰道或植入儲(chǔ)器給藥。優(yōu)選口服給藥或通過(guò)注射給藥。本發(fā)明藥物組合物可包含任何常規(guī)無(wú)毒可藥用載體、輔料或賦形劑。在一些情況下，可以用可藥用酸、堿或緩沖劑來(lái)調(diào)節(jié)制劑的PH以促進(jìn)所配制化合物或其釋放形式的穩(wěn)定性。本文所使用的術(shù)語(yǔ)非腸道包括皮下、皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、鞘內(nèi)、病灶內(nèi)和顱內(nèi)注射或輸液技術(shù)。
藥物組合物可以是滅菌注射劑形式，例如滅菌注射水性或油性懸浮液?？砂凑毡绢I(lǐng)域已知的技術(shù)，利用適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑(如吐溫80)和懸浮劑來(lái)配制該懸浮液。滅菌注射劑也可以是在無(wú)毒非腸道用的稀釋劑或溶劑中的滅菌注射溶液或懸浮液，如在1,3-丁二醇中的溶液?？墒褂玫倪m宜的載體或溶劑為甘露糖醇、水、林格溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，通常使用無(wú)菌固定油作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可以使用任何溫和的固定油包括合成的單和二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物，以及天然可藥用油如橄欖油或蓖麻油，特別是它們的聚氧乙基化形式可用于注射劑中。這些油性溶液或懸浮液也可以包含長(zhǎng)鏈醇稀釋劑或分散劑如Pharmacopeia Helvetica(Ph.Helv.)中所描述的那些或類似的醇，或羧甲基纖維素或類似的、通常在可藥用劑量形式的制劑中使用的分散劑如乳化劑和/或懸浮劑。為了配制，也可以使用其它通常使用的表面活性劑如吐溫或司盤和/或其它類似的、通常在生產(chǎn)可藥用固體、液體或其它劑量形式中使用的乳化劑或生物利用率促進(jìn)劑。
本發(fā)明藥物組合物可以以任何適宜的口服劑量形式通過(guò)口服給予，所述適宜的口服劑量形式包括但不限于，膠囊、片劑和水性懸浮劑和溶液。在口服使用的片劑中，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。典型地，也可以加入潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂。對(duì)以膠囊形式口服給藥來(lái)說(shuō)，所使用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)通過(guò)口服給予水性懸浮液時(shí)，將化學(xué)組分與潤(rùn)滑劑和懸浮劑混合。如果需要，可加入一些甜味劑和/或矯味劑和/或著色劑。
本發(fā)明藥物組合物也可以以用于直腸給藥的栓劑形式給予?？赏ㄟ^(guò)將本發(fā)明化合物與適宜的、在室溫下為固體但在直腸中為液體以便釋放活性組分的、無(wú)刺激性賦形劑混合來(lái)制備這些組合物。該物質(zhì)包括但不限于可可油、蜂蠟和聚乙二醇。
當(dāng)所需要的治療涉及通過(guò)局部應(yīng)用容易進(jìn)入的區(qū)域或器官時(shí)，局部應(yīng)用本發(fā)明組合物是特別有用的。對(duì)于局部用藥于皮膚來(lái)說(shuō)，應(yīng)該將藥物組合物配制成適宜的、包含懸浮或溶解在載體中活性組分的軟膏劑。在局部應(yīng)用本發(fā)明化合物的制劑所使用的載體包括但不限于礦物油、液體石蠟(liquid petroleum)、白凡士林(white petroleum)、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蠟和水。或者，可將藥物組合物配制成適宜的含有懸浮或溶解在載體中活性化合物的洗液或霜?jiǎng)＿m宜的載體包括但不限于礦物油、單硬脂酸山梨糖醇酯、多乙氧基醚60、鯨蠟醇酯蠟、鯨蠟醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。本發(fā)明藥物組合物也可以以直腸栓劑形式或以適宜的灌腸劑形式局部應(yīng)用于下端腸道。局部透皮貼劑也包含在本發(fā)明內(nèi)。
本發(fā)明的藥物組合物可以通過(guò)鼻腔氣霧劑或吸入劑來(lái)給藥。按照藥物配制領(lǐng)域中公知的技術(shù)制備這類組合物，并且可以制成鹽水溶液，可使用苯甲醇或其它合適的防腐劑、增強(qiáng)生物利用度的吸收促進(jìn)劑、氟化碳和/或其它本領(lǐng)域已知的溶解劑或分散劑。
在預(yù)防和治療抗病毒，特別是抗-HCV介導(dǎo)的疾病中進(jìn)行單獨(dú)治療時(shí)可使用在約0.01到約100mg/kg體重/天之間的，優(yōu)選在約0.5到約75mg/kg體重/天之間的本文所述蛋白酶抑制劑化合物的劑量水平。通常，本發(fā)明藥物組合物將每天給予約1-5次或者進(jìn)行連續(xù)輸注。這種給藥方法可用于慢性或急性治療。與載體材料混合以產(chǎn)生單位劑量形式的活性組分的量取決于被治療的宿主和特定的給藥方式。一般的制劑含有約5％到約95％的活性化合物(w/w)。優(yōu)選地，這類制劑含有約20％到約80％的活性化合物。
本發(fā)明的組合物含有式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物和一種或多種別的治療或預(yù)防劑的混合物時(shí)，化合物和其它藥物應(yīng)當(dāng)以單次治療路線中約10-100％之間，更優(yōu)選在約10-80％之間的正常給藥劑量存在，。
一個(gè)實(shí)施路線中，本發(fā)明組合物含有其它免疫調(diào)節(jié)劑。其它免疫調(diào)節(jié)劑的例子包括但不限于α-、β-和δ-干擾素。
在另一個(gè)實(shí)施路線中，本發(fā)明的藥物組合物可以另外含有抗病毒劑?？共《緞┑睦影ɡ晚f林和金剛烷胺。
另一個(gè)實(shí)施路線中，本發(fā)明的藥物組合物可另外含有其它HCV蛋白酶抑制劑。
再一實(shí)施路線中，本發(fā)明藥物組合物可另外含有其它靶向于HCV生命周期的抑制劑，如螺旋酶、聚合酶或金屬蛋白酶。
為了改善病人的癥狀，如果需要，可給予維持劑量的本發(fā)明化合物、組合物或混合物。隨后，以癥狀為函數(shù)將給藥劑量和/或頻率減小到保持改善癥狀的水平，癥狀已經(jīng)減輕到所需水平時(shí)，應(yīng)當(dāng)停止治療。然而，可基于疾病癥狀的任何復(fù)發(fā)對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期間歇治療。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到，可以要求比上文所述更低或更高的劑量。任何特定病人的具體劑量和治療路線將取決于各種因素，包括所使用的具體化合物的活性、年齡、體重、總的健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄速度、藥物的聯(lián)合使用、感染的嚴(yán)重性和階段、對(duì)病人感染的處置和治療醫(yī)生的判斷。
這些化合物或其可藥用鹽與可藥用載體配制時(shí)，所得組合物可以體內(nèi)給予哺乳動(dòng)物，如人，來(lái)抑制絲氨酸蛋白酶，特別是HCV NS3蛋白酶或治療或預(yù)防病毒感染，特別是HCV病毒感染。這種治療也可以使用本發(fā)明化合物和其它活性劑組合來(lái)完成，這些活性劑包括但不限于免疫調(diào)節(jié)劑，如α-、β-和δ-干擾素；其它抗病毒劑如利巴韋林和金剛烷胺；其它HCV NS3蛋白酶抑制劑；其它靶向于HCV生命周期的抑制劑，如螺旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或核糖體內(nèi)成分或它們的混合物。這些別的活性劑可以與本發(fā)明化合物混合以產(chǎn)生單位劑量形式。另外，這些別的活性劑也可以作為多次劑量形式的一部分單獨(dú)給予哺乳動(dòng)物。
因此，本發(fā)明的另一實(shí)施路線是通過(guò)給予式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物來(lái)抑制哺乳動(dòng)物絲氨酸蛋白酶活性的方法，其中取代基定義同上。優(yōu)選地，絲氨酸蛋白酶是HCV NS3。
在另一實(shí)施路線中，本發(fā)明提供抑制哺乳動(dòng)物HCV或HCV NS3活性的方法，包括給予所述哺乳動(dòng)物式(Ⅰ)或(Ⅱ)化合物的步驟，其中取代基定義同上。
在另一實(shí)施路線中，本發(fā)明提供減少哺乳動(dòng)物絲氨酸蛋白酶活性的方法，包括給予所述哺乳動(dòng)物任何藥物組合物和聯(lián)合用藥的混合物的步驟，其中取代基定義同上。如果藥物組合物僅僅含有本發(fā)明化合物作為活性成分，該方法可另外包含給予所述哺乳動(dòng)物選自免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV蛋白酶抑制劑或其它靶向于HCV生命周期的抑制劑的活性劑的步驟。該別的活性劑可以在給予HCV抑制劑組合物前、同時(shí)或之后給予哺乳動(dòng)物。
在另一優(yōu)選實(shí)施路線中，這些方法可用于抑制哺乳動(dòng)物的病毒復(fù)制。該方法用于治療或預(yù)防例如病毒疾病，如HCV。如果藥物組合物僅僅含有本發(fā)明化合物作為活性成分，該方法可另外包含給予所述哺乳動(dòng)物選自免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、HCV蛋白酶抑制劑或其它靶向于HCV生命周期的抑制劑的活性劑的步驟。該別的活劑可以在給予HCV抑制劑組合物前、同時(shí)或之后給予哺乳動(dòng)物。
本文所述的化合物也可用作實(shí)驗(yàn)室試劑。本發(fā)明化合物也可以用于處理或預(yù)防病毒污染材料并因此減少實(shí)驗(yàn)室或接觸該材料的醫(yī)療人員或病人病毒感染的危險(xiǎn)。這些材料包括但不限于生物材料，如血液組織等；外科儀器和衣服；實(shí)驗(yàn)儀器和衣服；以及血液收集設(shè)備和材料。
為了更充分理解本發(fā)明，描述下列實(shí)施例。這些實(shí)施例不以任何方式對(duì)本發(fā)明范圍構(gòu)成限定。一般材料和方法實(shí)施例1中提供了制備本發(fā)明化合物的一般合成方法。實(shí)施例2-9中提供了制備本發(fā)明化合物(包括化合物1-198)更具體的方法。
在表1-7中報(bào)告的HPLC數(shù)據(jù)以溶劑梯度、滯留時(shí)間和純度來(lái)表示。在各方法中使用去離子水。
通過(guò)輔助材料激光解吸質(zhì)譜儀(Kratos MALDIⅠ)或電子噴霧質(zhì)譜儀(MICROMASS QuatroⅡ)獲得所有化合物校正的(M+H)+和/或(M+Na)+分子離子。
實(shí)施例1本發(fā)明肽或模擬肽化合物的合成中使用的各種氨基酸可商購(gòu)，例如，從Sigma chemical Company或Bachem Feinchemikalien AQ(瑞士)購(gòu)得。不能購(gòu)得的氨基酸可通過(guò)已知的合成途徑來(lái)制得(“非天然和稀有存在氨基酸的動(dòng)力學(xué)拆分通過(guò)?；涪翊呋腘-?；被岬膶?duì)映選擇性水解”，Chenault,H.K.等，美國(guó)化學(xué)會(huì)志111,6354-6364(1989)及其中引證；“通過(guò)strecker反應(yīng)對(duì)β-γ-不飽和氨基酸的合成”，Greenlee,W.J.，有機(jī)化學(xué)雜志49,2632-2634(1984)；“β-氨基酸的最近立體有擇合成方法”，Cole,D.Tetrahedron 50:9517(1994)；“環(huán)狀α-亞氨基酸化學(xué)”，Mauger,A.B；Volume 4 of”氨基酸，肽和蛋白質(zhì)化學(xué)和生化”，Weinstein,B.editor,Marcel Dekker(1977)；“取代的哌啶合成和反應(yīng)中的最新進(jìn)展”，Org.Prep.Procedure Int.24,585-621(1992)，所有這些文獻(xiàn)均引入本文供參考)。
式(Ⅰ)或(Ⅱ)的一些化合物可由氨基酸通過(guò)肽領(lǐng)域和有機(jī)化學(xué)合成領(lǐng)域的公知方法來(lái)合成。此合成的實(shí)例在Bodanszky和Bodanszky，“肽合成實(shí)踐”，Springer-Verlag,Berlin,Germany(1984)，”肽”，Gross和Meinhofer編輯；AcademicPress,1979,Ⅰ-Ⅲ卷和Stewart,J.M.和Young,J.D.，”固相肽合成，第二版”，Pierce Chemical Company,Rockford,IL(1984)；和”分子多樣性產(chǎn)生的最新發(fā)展”，Moos,W.H.,Green,G.D.和Pavia,M.R.”藥物化學(xué)年報(bào)，28卷”315-324頁(yè)；Bristol,J.A..編輯；AcademicPress,San Diego,CA(1993)進(jìn)行了一般性描述，所有這些文獻(xiàn)都引入本文供參考。
典型地，對(duì)于肽的液相合成來(lái)說(shuō)，被偶合的氨基酸的α-胺通過(guò)尿烷如Boc、Cbz、Fmoc或Alloc來(lái)保護(hù)，同時(shí)通過(guò)在催化劑如HOBT、HOAT、HOSu或DMAP存在下與碳化二亞胺如DCC、EDC和DIC反應(yīng)來(lái)活化游離的羧基。其它方法也是合適的，如通過(guò)馬上活化酯、酰鹵、酶激活的氨基酸和包括磷鎓試劑的酐如BOP、Py-BOP、N-羧基-酐、對(duì)稱酐、混合的碳酐、碳-膦和碳-磷酐介導(dǎo)來(lái)進(jìn)行。形成肽之后，通過(guò)上文所列的參考文獻(xiàn)中所述的方法來(lái)除去保護(hù)基，如通過(guò)在鈀、鉑或銠催化劑存在下氫化、用在液氨鈉、鹽酸、氫氟酸、氫溴酸、甲酸、三氟甲磺酸或三氟乙酸、仲胺、氟離子、三甲基甲硅烷鹵化物包括溴化物和碘化物或堿處理。使用如上文所述的技術(shù)，通過(guò)商購(gòu)儀器包括但不限于Advanced Chemtech 357 FBS和496MOS；Tecan CombiTec和Applied Biosystem 433A來(lái)完成自動(dòng)合成過(guò)程。這些方法的具體應(yīng)用及其等價(jià)方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，這取決于目的化合物?；瘜W(xué)方法的改進(jìn)和儀器的選擇都在本領(lǐng)域普通實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例2化合物1-26(表1)按合成路線1中描述的方法來(lái)制備。路線1
301-306的合成步驟A、301的合成將4-甲基二苯甲胺樹(shù)脂(1.05mmol/g,20.0g)放在燒結(jié)玻璃漏斗中并用二甲基甲酰胺(3×75ml),10％(v/v)二異丙基乙胺(DIEA)的二甲基甲酰胺(2×75ml)溶液洗滌并最后用二甲基甲酰胺(4×75ml)洗滌。將足夠量的二甲基甲酰胺加到該樹(shù)脂中以便得到淤漿，然后加入300(8.0g,20.8mmol，按照A.M.Murphy et.al.美國(guó)化學(xué)會(huì)志，114,3156-3157(1992)，從(2S)2-(叔丁氧基羰基氨基)-丁醛制備)，1-羥基苯并三唑水合物(HOBT·H2O；3.22g,21.0mmol)，鄰-苯并三唑-N,N,N,N’-四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU；8.0g,21.0mmol)，和DIEA(11.0ml,63mmol)。將該混合物在室溫下用腕臂式振蕩器(wrist arm shaker)振蕩過(guò)夜。將樹(shù)脂在燒結(jié)玻璃漏斗上通過(guò)吸濾分離并用二甲基甲酰胺(3×75ml)洗滌。然后，通過(guò)將樹(shù)脂與20％(v/v)乙酸酐/二甲基甲酰胺(2×50ml)直接在漏斗中反應(yīng)(10分鐘/洗滌)，將未反應(yīng)的胺基保護(hù)(capped)起來(lái)。在真空干燥過(guò)夜之前，將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×75ml)和二氯甲烷(3×75ml)洗滌得到300a(26.3g,81％產(chǎn)率)。
通過(guò)下列方法，用Advanced ChemTech 396多肽合成器將t-Boc保護(hù)基從300a上除掉。通過(guò)用二氯甲烷(3×1ml)洗滌將樹(shù)脂300a膨脹，接著通過(guò)用50％(v/v)TFA/二氯甲烷(1.0ml)洗滌10分鐘(在振蕩下)，再用新鮮試劑(1ml)洗滌30分鐘將t-Boc保護(hù)基斷開(kāi)。然后將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1ml)，接著用DMF(3×1ml)，然后用10％DIEA/二甲基甲酰胺(v/v)(2×1ml)，最后用N-甲基吡咯烷酮(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂301。
步驟B、303的合成利用Advanced ChemTech 396多肽合成器，從樹(shù)脂301(0.05mmol)來(lái)制備該化合物。將樹(shù)脂301用0.4M302和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液?；⒎磻?yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)洗滌，接著用二氯甲烷(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂303。
步驟C、305的合成利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)樹(shù)脂結(jié)合化合物的合成。將樹(shù)脂303用二氯甲烷(3×1ml)洗滌，接著通過(guò)用50％(v/v)TFA/二氯甲烷(1.0mi)洗滌10分鐘(在振蕩下)，再用新鮮試劑(1ml)洗滌30分鐘將t-Boc保護(hù)基斷開(kāi)。然后將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1ml)，接著用DMF(3×1ml)，然后用10％DIEA/二甲基甲酰胺(v/v)(2×1ml)，最后用N-甲基吡咯烷酮(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂304。然后將該樹(shù)脂用0.4M Fmoc-纈氨酸和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液酰化并將反應(yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。該自動(dòng)化周期包括(1)、將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1ml)洗滌；(2)用25％(v/v)哌啶在二甲基甲酰胺(3×1ml)中的溶液脫保護(hù)3分鐘，接著用新鮮試劑脫保護(hù)10分鐘；(3)在如上進(jìn)行偶聯(lián)之前，將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)和N-甲基吡咯烷酮(3×1ml)洗滌。在該方法中，F(xiàn)moc-纈氨酸和吡嗪-2-羧酸被偶聯(lián)上。
步驟D、306的合成在斷開(kāi)之前，將樹(shù)脂用1∶1二氯甲烷/甲醇(3×1ml)洗滌，然后真空干燥。通過(guò)在室溫下用95％TFA/5％H2O(v/v,1.5ml)處理30分鐘或通過(guò)在室溫下用四氫呋喃/30％福爾馬林/1N HCl9∶1∶1(v∶v∶v)處理1小時(shí)，將醛從樹(shù)脂上斷開(kāi)。將樹(shù)脂用裂解試劑(1ml)洗滌后，將合并的濾液用水稀釋并冷凍干燥得到粗品306的白色粉末。將化合物通過(guò)半制備RP-HPLC，用Waters DeltaPak 300 A C18柱(15μ,30×300mm)純化，用含0.1％TFA(v/v)的線性乙腈梯度，以20/分鐘的速度洗脫45分鐘。收集含所需產(chǎn)品的餾分并冷凍干燥得到306。
實(shí)施例3如合成路線2所述制備化合物27-29(表1)。路線2
步驟A、合成301見(jiàn)合成路線1步驟A的方法。
步驟B、合成308通過(guò)用二氯甲烷(3×50ml)洗滌，將樹(shù)脂301(6.0g,0.65mmol/g,3.9mmol)在燒結(jié)玻璃漏斗中膨脹。然后通過(guò)用50％(v/v)TFA/二氯甲烷(50ml)洗滌10分鐘(間斷地?cái)嚢?，再用新鮮試劑(50ml)洗滌30分鐘，將Boc保護(hù)基斷開(kāi)。然后將樹(shù)脂303用二氯甲烷(3×50ml)，二甲基甲酰胺(2×50ml)，10％DIEA/二甲基甲酰胺(v/v)(2×50ml)，最后用N-甲基吡咯烷酮(3×50ml)洗滌。將樹(shù)脂轉(zhuǎn)移到100ml燒瓶中后，加入N-甲基吡咯烷酮得到淤漿，接著加入307(2.83g,8.0mmol)、HOBT·H2O(1.22g,8.0mmol)、HBTU(3.03g,8.0mmol)和DIEA(4.2ml,24mmol)。將該混合物在室溫下用腕臂式振蕩器(wrist arm shaker)振蕩過(guò)夜。如301中所述，將樹(shù)脂進(jìn)行處理并用20％(v/v)乙酸酐的二甲基甲酰胺溶液保護(hù)(capping)起來(lái)，得到308(6.86g，定量的產(chǎn)率)。
步驟C、合成309利用Tecan CombiTec合成器從樹(shù)脂308(0.15mmol)來(lái)制備該化合物。將樹(shù)脂308(0.076mmol)用二甲基甲酰胺(3×2ml)洗滌，用25％(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺(2.5ml)溶液脫保護(hù)5分鐘，接著用新鮮試劑(2ml)脫保護(hù)20分鐘。在用0.4M Fmoc-纈氨酸和0.4MHOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.8ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.8ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.6ml)中的溶液酰化之前，將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×2.5ml)和N-甲基吡咯烷酮(3×2.5ml)洗滌并將反應(yīng)物在室溫下振蕩8小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。重復(fù)脫保護(hù)和偶聯(lián)過(guò)程以便加入第二個(gè)纈氨酸基和最后加入吡嗪-2-羧酸基。然后將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×2.5ml)洗滌得到樹(shù)脂309。
步驟D、合成310向樹(shù)脂309中加入1∶1吡啶/二氯甲烷(v/v)(1ml)、0.8M二甲基氨基吡啶在二氯甲烷(0.2ml)中的溶液和0.2M C-COCl在二氯甲烷(1.5ml)中的溶液并將反應(yīng)物在室溫下振蕩8小時(shí)。重復(fù)?；磻?yīng)。將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×2.5ml)、二甲基甲酰胺(3×2.5ml)、二氯甲烷(3×2.5ml)洗滌，并最后用1∶1二氯甲烷/甲醇(3×2.5ml)洗滌，得到樹(shù)脂310。
步驟E、合成311在斷開(kāi)前，將樹(shù)脂用1∶1二氯甲烷/甲醇(3×1ml)洗滌，然后真空干燥。通過(guò)在室溫下用四氫呋喃/福爾馬林/乙酸/1N HCl 5∶1∶1∶0.1(v∶v∶v∶v)處理1小時(shí)，將醛從樹(shù)脂上斷開(kāi)。將樹(shù)脂用裂解試劑(1ml)洗滌后，將合并的濾液用水稀釋并冷凍干燥得到粗品311的白色粉末。將化合物通過(guò)半制備RP-HPLC，用Waters DeltaPak300 A C18柱(15μ,30×300mm)純化，用含0.1％TFA(v/v)的線性乙腈梯度，以20/分鐘的速度洗脫45分鐘。收集含所需產(chǎn)品的餾分并冷凍干燥得到311。
實(shí)施例4如合成路線3所述制備化合物30-56(表1)。路線3
步驟A、合成301見(jiàn)合成路線1步驟A的方法。
步驟B、合成308見(jiàn)合成路線2步驟B的方法。
步驟C、合成312利用Tecan CombiTec合成器從樹(shù)脂308(0.15mmol)來(lái)制備該化合物。將樹(shù)脂308用甲苯(3×2.5ml)洗滌并懸浮在甲苯(1.0ml)中。向該懸浮液中加入0.8M R3δ-異氰酸酯的甲苯(1.0ml)溶液，接著加入0.8M DIEA的甲苯(1.0ml)溶液，或者向該懸浮液中加入0.8M R3δ-羧酸和0.8MEIDA的甲苯(1.0ml)溶液，接著加入0.8M二苯基磷?；B氮化物的甲苯(1ml)溶液。將反應(yīng)物在55℃下振蕩8小時(shí)。然后將樹(shù)脂用甲苯(3×2.5ml)和二甲基甲酰胺(4×2.5ml)洗滌得到樹(shù)脂312。
步驟D、合成313見(jiàn)合成路線2步驟D的方法。
步驟E、合成314見(jiàn)合成路線2步驟E的方法。
實(shí)施例5如合成路線4所述制備化合物57-70(表1)。路線4
步驟A、合成301見(jiàn)合成路線1步驟A的方法。
步驟B、合成316利用Advanced ChemTech 396多肽合成器，從樹(shù)脂301(0.05mmol)來(lái)制備該化合物。將樹(shù)脂301用0.4M 315和0.4MHOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液?；⒎磻?yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)洗滌，接著用二氯甲烷(3×1ml)洗滌。通過(guò)在渦流下，用50％(v/v)TFA/二氯甲烷(1.0ml)處理10分鐘，然后用新鮮試劑(1.0ml)處理30分鐘將Boc保護(hù)基斷開(kāi)。然后將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1.0ml)、二甲基甲酰胺(2×1.0ml)、10％DIEA/二甲基甲酰胺(v/v)(2×1,0ml)、二甲基甲酰胺(3×1.0ml)洗滌并最后用二氯甲烷(3×1.0ml)洗滌得到316。
步驟C、合成317a將樹(shù)脂316用0.4M Z-CO2H和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液?；⒎磻?yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂317a。
步驟C、合成317b在室溫下，將樹(shù)脂316用0.5M Z-COCl在二甲基甲酰胺(1ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液酰化2小時(shí)。重復(fù)該酰化步驟。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×2.5ml)洗滌得到樹(shù)脂317b。
步驟C、合成317c在室溫下，將樹(shù)脂316與1.0M Z-磺酰氯的二氯甲烷(0.5ml)溶液和1M吡啶的二氯甲烷(0.60ml)溶液一起反應(yīng)4小時(shí)。重復(fù)該反應(yīng)。將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1.0ml)洗滌，然后用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)洗滌得到樹(shù)脂317c。
步驟C、合成317d在室溫下將樹(shù)脂316與0.5M Z-異氰酸酯的二甲基甲酰胺(1.2ml)溶液一起反應(yīng)8小時(shí)。重復(fù)該反應(yīng)。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)洗滌得到樹(shù)脂317d。
步驟C、合成317e在室溫下，在乙酸(0.1ml)和氰基硼氫化鈉(200mg)存在下，將樹(shù)脂316與0.5M Z-CHO反應(yīng)。重復(fù)該反應(yīng)。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)洗滌得到317e。
步驟D、合成318利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)樹(shù)脂結(jié)合化合物的合成。利用合成路線1步驟C中所述自動(dòng)化周期來(lái)加入Fmoc-纈氨酸，接著加入另一Fmoc-纈氨酸并最后加入吡嗪-2-羧酸。
步驟E、合成319見(jiàn)合成路線2步驟E的方法。
實(shí)施例6如合成路線5所述制備化合物81-100(表3和4)。路線5
步驟A、合成301見(jiàn)合成路線1步驟A的方法。
步驟B、合成320利用Advanced ChemTech 396多肽合成器，從樹(shù)脂165(0.05mmol)開(kāi)始來(lái)合成樹(shù)脂結(jié)合化合物。利用合成路線1步驟C中所述自動(dòng)化周期來(lái)加入Fmoc-A1，接著加入Fmoc-纈氨酸并最后加入末端Fmoc-氨基酸。如上所述，用25％哌啶/二甲基甲酰胺(v∶v)除掉Fmoc基得到樹(shù)脂166。
步驟C、合成321a將樹(shù)脂320用0.4M T-CO2H和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液?；⒎磻?yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。然后將樹(shù)脂二甲基甲酰胺(3×1ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂321a。
步驟C、合成321b在室溫下，將樹(shù)脂320用0.5MT-COCl在二甲基甲酰胺(1ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液酰化2小時(shí)。重復(fù)該酰化步驟。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂321b。
步驟C、合成321c在室溫下，將樹(shù)脂320與1.0M T-磺酰氯的二氯甲烷(0.5ml)溶液和1M吡啶的二氯甲烷(0.60ml)溶液一起反應(yīng)4小時(shí)。重復(fù)該反應(yīng)。將樹(shù)脂用二氯甲烷(3×1.0ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌，得到樹(shù)脂303c。
步驟C、合成321d在室溫下，將樹(shù)脂320與0.5M T-異氰酸酯的二甲基甲酰胺(1.2ml)溶液一起反應(yīng)8小時(shí)。重復(fù)該反應(yīng)。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌得到樹(shù)脂321d。
步驟D、合成322通過(guò)在室溫下用95％TFA/5％H2O(v/v,1.5ml)處理45分鐘，將醛從樹(shù)脂上斷開(kāi)并全部脫保護(hù)。將樹(shù)脂用新鮮裂解試劑(1ml)洗滌后，將合并的濾液加到冷卻的1∶1乙醚∶戊烷(12ml)中并將所得到的沉淀通過(guò)離心過(guò)濾和傾析分離。將所得到的沉淀溶解在10％乙腈/90％H2O/0.1％TFA(15ml)中并冷凍干燥得到粗品322的白色粉末。將化合物通過(guò)半制備RP-HPLC，用Waters DeltaPak 300 A C18柱(15μ,30×300mm)純化，用含0.1％TFA(v/v)的線性乙腈梯度，以20/分鐘的速度洗脫45分鐘。收集含所需產(chǎn)品的餾分并冷凍干燥得到322。
實(shí)施例7如合成路線6所述制備化合物143-197(表6)。路線6
步驟A、合成301見(jiàn)合成路線1步驟A的方法。
步驟B、合成326利用Applied Biosystem Model 433A肽合成器，從樹(shù)脂301(0.50mmol)來(lái)制備該化合物。利用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)周期，用HBTU和HOBt作偶聯(lián)劑，在N-甲基吡咯烷酮中，將Nα-Fmoc-保護(hù)的氨基酸順序加到樹(shù)脂301上得到樹(shù)脂326。
步驟C、合成327a利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)該合成。將樹(shù)脂326(0.05mmol)用25％(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺(1ml)溶液脫保護(hù)3分鐘，接著用新鮮試劑(1ml)脫保護(hù)10分鐘。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)和N-二甲基吡咯烷酮(3×1ml)洗滌。將樹(shù)脂用0.4M T-CO2H和0.4M HOBT在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液，0.4M HBTU在N-甲基吡咯烷酮(0.5ml)中的溶液和1.6M DIEA在N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)中的溶液酰化并將反應(yīng)物在室溫下振蕩4小時(shí)。重復(fù)該偶聯(lián)反應(yīng)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌得到327a。
步驟C、合成327b利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)該合成。將樹(shù)脂326(0.05mmol)用25％(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺(1ml)溶液脫保護(hù)3分鐘，接著用新鮮試劑(1ml)脫保護(hù)10分鐘。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)和N-二甲基吡咯烷酮(3×1ml)洗滌。在室溫下，將樹(shù)脂用0.5M T-COCl的二甲基甲酰胺(1ml)溶液和1.6MDIEA的N-甲基吡咯烷酮(0.35ml)溶液?；?小時(shí)。重復(fù)該?；襟E。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1ml)洗滌得到327b。
步驟C、合成327c利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)該合成。將樹(shù)脂326(0.05mmol)用25％(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺(1ml)溶液脫保護(hù)3分鐘，接著用新鮮試劑(1ml)脫保護(hù)10分鐘。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)和二氯甲烷(3×1ml)洗滌。在室溫下，將樹(shù)脂與1.0M T-磺酰氯的二氯甲烷(0.5ml)溶液和1M吡啶的二氯甲烷(0.60ml)溶液反應(yīng)4小時(shí)。重復(fù)該反應(yīng)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1.0ml)洗滌得到327c。
步驟C、合成327d利用Advanced ChemTech 396多肽合成器來(lái)實(shí)現(xiàn)該合成。將樹(shù)脂326(0.05mmol)用25％(v/v)哌啶的二甲基甲酰胺(1ml)溶液脫保護(hù)3分鐘，接著用新鮮試劑(1ml)脫保護(hù)10分鐘。將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1ml)洗滌。在室溫下，將樹(shù)脂與0.5M T-異氰酸酯的二甲基甲酰胺(1.2ml)溶液反應(yīng)8小時(shí)。然后將樹(shù)脂用二甲基甲酰胺(3×1.0ml)、二氯甲烷(3×1.0ml)和1∶1二氯甲烷/甲醇(v/v)(3×1.0ml)洗滌得到327d。
步驟D、合成328見(jiàn)合成路線1步驟D的方法。
實(shí)施例8如合成路線7所述制備化合物79-123(表2、3和4)。路線7
步驟A、合成330在室溫和DIEA(0.47ml，2.7mmol)存在下，在二氯甲烷中，將2-氯-氯三苯甲基樹(shù)脂(2.2mmol/g,1.69g)與329(0.385g,1.1mmol，按照S.L.Harbeson et.al.J.Med.Chem.,37,2918(1994)制備)反應(yīng)1小時(shí)。通過(guò)加入甲醇將反應(yīng)驟冷并通過(guò)吸濾將樹(shù)脂在燒結(jié)玻璃漏斗上分離并用二氯甲烷(3×25ml)洗滌。將樹(shù)脂真空干燥過(guò)夜得到330(1.92g,0.49meq/g)。
步驟B、合成322利用Applied Biosystems Model 433A肽合成器和樹(shù)脂330(0.74mmol)來(lái)合成該樹(shù)脂結(jié)合化合物。利用合成路線1步驟C中所述自動(dòng)化周期加入Fmoc-A1，接著加入Fmoc-A2和Fmoc-A3。如上所述用25％哌啶/二甲基甲酰胺(v/v)除掉Fmoc基得到樹(shù)脂332。
步驟C、合成333在斷開(kāi)之前，將樹(shù)脂用1∶1二氯甲烷/甲醇(3×1ml)洗滌，然后真空干燥。通過(guò)在室溫下用乙酸∶三氟乙醇∶二氯甲烷(1∶1∶3)處理1小時(shí)將膚從樹(shù)脂上斷開(kāi)。將樹(shù)脂用二氯甲烷洗滌后，將合并的濾液真空濃縮得到粗品333的白色粉末(0.48g,76％)。
步驟D、合成335將化合物333(0.05g,0.058mmol)溶解在二甲基乙酰胺(1ml)中并向其中加入DIEA(0.17mmol)、適宜的胺(0.20mmol)和PyBrop(0.12mmol)。將該反應(yīng)物在70℃下攪拌2小時(shí)。然后將該反應(yīng)物稀釋到H2O(8ml)中，接著離心得到沉淀，將該沉淀真空干燥得到粗品334，將該粗品直接氧化得到化合物335。將粗品334溶解在N-甲基吡咯烷酮(3ml)中并在室溫下，與Dess-Martin periodinane(110mg,0.26mmol)反應(yīng)過(guò)夜。將飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)和10％(w∶v)硫代硫酸鈉水溶液(5ml)加到該反應(yīng)物中并在加入H2O(40ml)之前攪拌。通過(guò)離心將沉淀分離并將該固體真空干燥。當(dāng)需要時(shí)，通過(guò)在室溫下用1∶1三氟乙酸∶二氯甲烷處理30分鐘除掉酸不穩(wěn)定保護(hù)基。將溶劑真空除掉并將粗品化合物通過(guò)半制備RP-HPLC，用WatersDeltaPak 300 A C18柱(15μ,30×300mm)純化，用含0.1％TFA(v/v)的線性乙腈梯度，以20/分鐘的速度洗脫45分鐘。收集含所需產(chǎn)品的餾分并冷凍干燥得到335。
實(shí)施例9
從適當(dāng)保護(hù)的肽酸制備化合物71-78和124-126。如上合成路線7所述，用2-氯-氯三苯甲基樹(shù)脂制備保護(hù)的肽酸。利用標(biāo)準(zhǔn)溶液的肽偶聯(lián)方法，將這些肽酸偶聯(lián)到下列基團(tuán)之一上。也提供制備這些基團(tuán)的參考文獻(xiàn)。
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T.T.Curran et.al.，有機(jī)化學(xué)雜志，58,6360-6363(1993)
E.Edwards et.al.，藥物化學(xué)雜志，38,3972-3982(1995)。
當(dāng)需要時(shí)，如合成路線7中所述，利用Dess Martin Periodinane將所得到的產(chǎn)品氧化為酮。當(dāng)需要時(shí)，通過(guò)在室溫下用1∶1三氟乙酸∶二氯甲烷處理30分鐘除掉酸不穩(wěn)定保護(hù)基。將溶劑真空除掉并將粗品化合物通過(guò)半制備RP-HPLC，用Waters DeltaPak 300 A C18柱(15μ,30×300mm)純化，用含0.1％TFA(v/v)的線性乙腈梯度，以20/分鐘的速度洗脫45分鐘。收集含所需產(chǎn)品的餾分并冷凍干燥得到最終產(chǎn)品71-78和124-126。
實(shí)施例10通過(guò)修改將實(shí)施例1中所描述的一般方法制備化合物198。
表1化合物1-70的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)
表2化合物71-79的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。

表3化合物80-88的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。
表4化合物89-126的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。
表5化合物127-142的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。

表6化合物143-197的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。

表7化合物198的結(jié)構(gòu)和分析數(shù)據(jù)。
實(shí)施例11式(Ⅰ)或式(Ⅱ)化合物能夠抑制NS3絲氨酸蛋白酶，顯然，它們具有治療病毒疾病，包括HCV的臨床實(shí)用性。這些試驗(yàn)預(yù)測(cè)化合物在體內(nèi)抑制HCV的能力。肽及其測(cè)定從AnaSpec Inc.(San Jose,CA)購(gòu)得肽EDVV abuCSMSY(Abu稱作氨基丁酸)、DEMEECSQHLPYI、ECTTPCSGSWLRD和EDVV AbuC-對(duì)-硝基苯胺。
通過(guò)定氮分析來(lái)測(cè)定純化的、冷凍干燥肽的肽含量和其中的肽并在制備儲(chǔ)備肽溶液(Galbreath)中使用合適的值。由Robertson MicrolitLaboratories,Inc.(Madison,NJ)測(cè)定pKa。
在30℃下，使用在含有50mMHEPES-KOH(pH7.8)、100mM NaCl、20％甘油、5mM DTT的100μL體積中的25nM到3.0μM酶和合適量的底物(在DMSO中)進(jìn)行HPLC裂解測(cè)定，底物中有或沒(méi)有NS4A肽，使得最終DMSO濃度不超過(guò)4％。獨(dú)立的對(duì)照試驗(yàn)證明該百分含量的DMSO不影響酶的活性。通過(guò)加入等體積的10％TFA∶乙腈(1∶1)混合物來(lái)使裂解反應(yīng)中止并在反相HPLC(Rainin C18 Microsorb-MV,5mm,4.6×250mm；0-50％乙腈，0.1％TFA@3.33％分鐘)使用裝有自動(dòng)注射器和二極管排列Hewlett Packard 1050儀器在210nm和280nm(合適時(shí))測(cè)定活性。收集肽洗脫片斷并通過(guò)質(zhì)譜和N-末端分析來(lái)鑒定。通過(guò)可信合成的產(chǎn)品進(jìn)一步確證片斷的特性和濃度。在＜20％底物轉(zhuǎn)化時(shí)測(cè)定裂解的起始速度和使用MultiFit程序(Day Computing，Cambridge,MA)假設(shè)的Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)來(lái)測(cè)定催化參數(shù)。
在30℃下，在96孔微滴定板中使用具有動(dòng)力學(xué)能力的SpectraMax250讀數(shù)儀(Molecular Devices,Sunnyvale,CA)進(jìn)行分光光度測(cè)定。在30℃溫度下，用于HPLC測(cè)定中使用的相同緩沖液中有或無(wú)NS44時(shí)進(jìn)行EDVV AbuC-對(duì)-硝基酰苯胺(5A-pNA)底物裂解并在405nm處檢測(cè)pNA釋放。pH在5.5和以上時(shí)對(duì)-硝基酰苯胺的消光系數(shù)是與pH無(wú)關(guān)的(Tuppy,H.，等，Hoppe-Seyler’s Z.Physiol.Chem.,329,278-288頁(yè)(1962)；Raybuck和Luong，未公開(kāi)觀察結(jié)果)。在該測(cè)定中，DMSO的百分?jǐn)?shù)未超過(guò)4％。
使用一系列恒定離子強(qiáng)度的含有50mM MES、25Nm Tris、25mM乙醇胺和0.1M氯化鈉的緩沖液測(cè)定Vmax、Km和Vmax/Km隨pH的變化(Morriso,J.F.和Stone,R.F.生物化學(xué)，27,5499-5506(1988))。通過(guò)符合下列等式數(shù)據(jù)的非線性最小面積來(lái)計(jì)算logV數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。
log v=log[Vmax/(1+H/Ka)][Dixon,M.和Webb,E.C.酶；Academic Press:New York；Vol.,138-164頁(yè)(1979)]。通過(guò)符合下列等式數(shù)據(jù)的非線性最小面積來(lái)計(jì)算logV/K數(shù)據(jù)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。
log v=log[Vmax/(1+H/Ka+Kb/H)][Dixon,M.和Webb,E.C.酶；Academic Press:New York；Vol.,138-164頁(yè)(1979)]。在兩種情況下都使用程序Kinetic(BioKinLtd)。
通過(guò)符合(Morrison,J.F.Biochim.Biophys.Acta.,185,269-286頁(yè)(1969))文中所述的等式1的非線性最小面積由速度與[4A],[EDVV Abuc-pNA]數(shù)據(jù)來(lái)測(cè)定快速平衡順序的雙底物反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)常數(shù)。由速度與[抑制劑]、[底物]數(shù)據(jù)和符合混合抑制作用的等式測(cè)定肽抑制劑的Kii和Kis值速度=Vmax[s]/{Km(1+[I]/Kis)+[S](1+[I]/Kii)}在兩個(gè)過(guò)程中都使用商業(yè)程序KinetAsyst(StateCollege,PA)。通過(guò)符合緊密結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)抑制作用的Morrison等式(Morrison,J.F.Biochim.Biophys.Acta.,185,269-286頁(yè)(1969))數(shù)據(jù)的非線性最小面積由速度與[抑制劑]點(diǎn)計(jì)算Ki值。在該過(guò)程中，使用程序Kinetic(BioKin Ltd)。
結(jié)果顯示在表9中。Ki值以μM表示。目錄“A”表示＜1μM抑制作用；目錄“B”表示1-1001μM抑制作用；符號(hào)“ND”表示未對(duì)化合物進(jìn)行試驗(yàn)。
表9化合物1-198的酶抑制作用化合物號(hào) Ki(μM) 化合物號(hào) Ki(μM) 化合物號(hào) Ki(μM)1B 42B 83 B2B 43B 84 B3B 44B 85 B4B 45B 86 B5B 46B 87 B6B 47B 88 B7B 48B 89 B8B 49B 90 B9B 50B 91 B10 B 51B 92 B11 B 52B 93 B12 B 53B 94 B13 B 54B 95 B14 B 55B 96 B15 B 56C 97 B16 B 57B 98 B17 B 58B 99 B18 B 59B 100B19 B 60C 101A20 B 61C 102A21 B 62B 103A22 B 63B 104A23 B 64B 105A24 B 65B 106A25 B 66B 107A26 B 67C 108A27 B 68C 109B28 B 69B 110B29 B 70B 111C30 B 71A 112B31 B 72B 113B32 B 73B 114C33 C 74B 115B34 B 75B 116B35 B 76C 117B36 C 77C 118B37 B 78B 119C38 B 79B 120B39 B 80A 121C40 B 81B 122C41 B 82B化合物號(hào) Ki(μM) 化合物號(hào) Ki(μM) 化合物號(hào) Ki(μM)123 B 149B174B124 B 150B175B125 B 151C176C126 C 152C177C127 C 153B178C128 B 154B179B129 B 155B180C130 C 156B181C131 B 157B182C132 B 158B183B133 B 159B184B134 C 160B185B135 B 161C186C136 B 162B187C137 B 163C188C138 B 164C189C139 C 165C190C140 B 166C191C141 B 167C192C142 B 168B193C143 C 169C194C144 C 170C195B145 B 171C196B146 B 172C197B147 C 173C198A148 C
盡管我們?cè)谏衔闹忻枋隽吮景l(fā)明的許多實(shí)施路線，顯然可以改變我的基本構(gòu)思來(lái)提供用于本發(fā)明方法的其它實(shí)施路線。所以，本發(fā)明的范圍應(yīng)當(dāng)通過(guò)這里所附的權(quán)利要求來(lái)確定而不是上文以實(shí)施例方式提供的具體的實(shí)施路線。
權(quán)利要求
1.一種式(Ⅱ)化合物
其中W為
或
m為0或1；各R1為羥基、烷氧基或芳氧基，或者各R1為氧原子并且與它們所連接的硼一起形成5-7員環(huán)，其中環(huán)原子為碳、氮或氧；各R2獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)烯基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜環(huán)基鏈烯基、雜芳基或雜芳烷基或者兩個(gè)連接到相同氮原子上的R2基與氮原子一起形成5-7員單環(huán)雜環(huán)系統(tǒng)；其中，任一R2碳原子都可以是未取代的或由J取代的；J為烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、雜環(huán)烷基、酮基、羥基、氨基、烷基氨基、烷?；被?、芳?；被?、芳烷酰氨基、羧基、羧烷基、羧酰氨基烷基、鹵素、氰基、硝基、甲?；?、?；⒒酋；蚧酋０被⑶铱梢允俏慈〈幕蛴?-3個(gè)J1基取代的。J1為烷基、芳基、芳烷基、烷氧基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、酮基、羥基、氨基、烷?；被⒎减；被Ⅳ然?、羧烷基、羧酰氨基烷基、鹵素、氰基、硝基、甲酰基、磺?；蚧酋０被?；L為烷基、鏈烯基或鏈炔基，其中任何氫都可以是未取代的或由鹵素取代的，并且其中連接到任何末端碳原子上的任何氫或鹵原子都可以是未取代的或由巰基或羥基取代的；A1為鍵，
或
R4為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或、羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的。R5和R6獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、芳烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；X為鍵、-C(H)(R7)-、-O-、-S-或-N(R8)-；R7為氫、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；R8為氫、烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、芳烷酰基、雜環(huán)烷?；?heteroanoyl)、雜芳烷?；?、-C(O)R14、-SO2R14或羧酰氨基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；或者R8和Z與它們所連接的原子一起形成含氮未取代的或由1-3個(gè)J取代的單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)；R14為烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基；Y為鍵、-CH2-、-C(O)-、-C(O)C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)(NR7)-，其中R7如上定義；Z為烷基、芳基、芳烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、-OR2或-N(R2)2，其中，任何碳原子都可以是未取代的或由J取代的，其中R2如上定義；A2為鍵或
R9為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；M為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的，其中任何烷基碳原子都可以由雜原子取代；V為鍵、-CH2-、-C(H)(R11)-、-O-、-S-或-N(R11)-；R11為氫或C1-3烷基；K為鍵、-O-、-S-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)(NR11)-，其中R11如上所述；T為-R12、-烷基-R12、-鏈烯基-R12、-鏈炔基-R12、-OR12、-N(R12)2、-C(O)R12、-C(=NO烷基)R12，或
各R12為氫、芳基、雜芳基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、環(huán)亞烷基或雜環(huán)亞烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的，或者第一個(gè)R12和第二個(gè)R12與它們所連接的氮原子一起形成未取代的或由1-3個(gè)J基取代的單環(huán)或二環(huán)系統(tǒng)；R10為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基或雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J基取代的；R15為烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、雜芳基、雜芳烷基、羧烷基或羧酰氨基烷基，并且可以是未取代的或由1-3個(gè)J取代的；并且R16為氫、烷基、芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)基。
2.權(quán)利要求1化合物，其中A1為
3.權(quán)利要求2化合物，其中R5和R5為氫。
4.權(quán)利要求3化合物，
并且R9為烷基。
5.權(quán)利要求4化合物，其中R9為異丙基。
6.權(quán)利要求5化合物，其中L為烷基。鏈烯基或鏈炔基，其中任何氫都可以是未取代的或由鹵素取代的，并且其中連接到任何末端碳原子上的任何氫或鹵原子都可以是未取代的或由巰基或羥基取代的。
7.權(quán)利要求6化合物，其中L為三鹵甲基、巰基或羥基。
8.權(quán)利要求7化合物，其中X為-O-或-N(H)-；并且Y為-CH2-、-C(O)-或-S(O)2-。
9.權(quán)利要求8化合物，其中V為-N(H)-并且K為-C(O)-或-S(O)2-。
10.權(quán)利要求1化合物，其中A1為
并且R5和R6為氫；A2為
并且R9為異丙基；L為乙基；X為-O-或-N(H)-；Y為-CH2-、-C(O)-或-S(O)2-；V為-N(H)-；并且K為-C(O)-。
11.權(quán)利要求10化合物，其中M為異丙基。
12.權(quán)利要求11化合物，其中Z為芳基或雜芳基。
13.權(quán)利要求12化合物，其中T為芳基或雜芳基。
14.權(quán)利要求13化合物，其中T為吡嗪。
15.權(quán)利要求10化合物，其中X為-O-并且Y為-CH2-。
16.權(quán)利要求15化合物，其中Z為芳基或雜芳基。
17.權(quán)利要求16化合物，其中Z為芳基。
18.權(quán)利要求10化合物，其中M為異丙基。
19.權(quán)利要求18化合物，其中T為-R12、-OR12、-N(R12)2或
20.權(quán)利要求19化合物，其中M為烷基、雜芳烷基、芳基、環(huán)烷基烷基、芳烷基或芳烷基，其中一個(gè)烷基碳原子由O或S取代。
21.權(quán)利要求20化合物，其中所述雜原子為S或O。
22.權(quán)利要求21化合物，其中T為芳基或雜芳基。
23.權(quán)利要求22化合物，其中T為吡嗪。
24.權(quán)利要求3化合物，其中A2為鍵；L為乙基；X為-O-；Y為-CH2-；V為-N(H)-；并且K為-C(O)-或-S(O)2-。
25.權(quán)利要求24化合物，其中M為異丙基。
26.權(quán)利要求25化合物，其中Z為芳基或雜芳基。
27.權(quán)利要求26化合物，其中Z為苯基。
28.權(quán)利要求27化合物，其中T為-R12、-烷基-R12、-鏈烯基-R12、-OR12、-N(R12)2、-C(=NO烷基)R12，或
29.權(quán)利要求1化合物，其中A1為
并且A2為
30.權(quán)利要求29化合物，其中M為異丙基并且K為-C(O)-。
31.權(quán)利要求30化合物，其中T為-R12、-烷基-R12、-鏈烯基-R12、-OR12、-N(R12)2、-C(=NO烷基)R12，或
32.權(quán)利要求1-31任一化合物，其中W為
或
33.可藥用組合物包含a)、有效抑制HCV蛋白酶量的權(quán)利要求1-32化合物；和b)、適宜的藥用載體。
34.抑制絲氨酸蛋白酶活性的方法，它包括給予所述患者權(quán)利要求1-32中任一化合物。
35.權(quán)利要求34方法，其中，所述絲氨酸蛋白酶為HCV NS3蛋白酶。
36.治療或預(yù)防丙型肝炎病毒感染患者的方法，它包括給予所述病人/哺乳動(dòng)物權(quán)利要求1-32中任一化合物。
37.權(quán)利要求36方法，其中將所述化合物給予患者并將所述化合物與適宜的藥用載體一起配制成可藥用組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于抑制蛋白酶特別是絲氨酸蛋白酶和HCVNS3蛋白酶的化合物、方法和藥物組合物。該化合物及其組合物和應(yīng)用方法可單獨(dú)或聯(lián)合用于抑制病毒，特別是HCV病毒。
文檔編號(hào)C07K7/02GK1238780SQ97180151
公開(kāi)日1999年12月15日 申請(qǐng)日期1997年10月17日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月18日
發(fā)明者R·D·唐格, S·L·哈比遜, D·D·迪尼格, M·A·穆可, G·R·比斯提, L·J·法默 申請(qǐng)人:沃泰克斯藥物股份有限公司