專利名稱：新的玫瑰樹堿化合物,它們的制備方法和含有它們的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的異橢圓玫瑰樹堿(olivacine)或玫瑰樹堿(ellipticine)化合物，它們的制備方法和含有它們的藥物組合物。
本發(fā)明化合物憑借它們的抗癌活性而用于治療當中。
許多異橢圓玫瑰樹堿或玫瑰樹堿類化合物因它們的抗癌性質而已眾所周知，見專利申請EP0591058A1。
治療的需要要求不斷地發(fā)展以得到既具有較高活性又具有更好耐受性的化合物為目的的新抗癌劑。
本發(fā)明涉及新的異橢圓玫瑰樹堿或玫瑰樹堿化合物，該類化合物與現(xiàn)有技術最接近的化合物比較，在結構上是新穎的(因為在四環(huán)9位上的取代不同于已知的化合物)和在毒理學上是新穎的(本發(fā)明化合物比現(xiàn)有技術中所述化合物具有更好的耐受性)，并且證明與對比產物比較具有更好的體內活性。
本發(fā)明特別涉及式I化合物以及它們可能的光學異構體和N-氧化物，及其與酸或堿的藥用加成鹽
其中R1代表具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；R2，R5和R6可以相同或不同，各自代表氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；R3代表A)氫原子；B)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈的(C1-C20)烷基、(C2-C20)鏈烯基或(C4-C20)鏈二烯基，所述4個基團中的各基團是未被取代或被1-3個選自下述的基團取代的a)(C1-C6)烷氧基，b)羧基，(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基，c)單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個選自原子氮、氧和硫的雜原子的雜芳基，各所述基團部分或全部被氫化；C)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和具有1-3個選自原子氮、氧和硫的雜原子的雜芳基，例如吡啶基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡咯基、咪唑基或喹啉基；上述定義的各芳基和雜芳基能夠任選被1-3個選自下列的取代基所取代a)(C1-C6)烷氧基羰基，b)芐氧基羰基，c)直鏈或支鏈、未被取代或被1或2個苯基取代的(C1-C6)烷基，d)直鏈或支鏈(C1-C6)烷氧基，和e)羧基；D)被1或2個選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)未被取代或被1或2個各自選自羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的取代基取代的(C1-C6)烷基，b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部是未被取代或被1或2個選自羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團取代的；或E)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)任選被1或2個各自選自(C1-C6)烷基、二苯甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、芐氧基羰基、羧基和哌啶子基的基團所取代；R4代表-氫原子，-直鏈或支鏈、任選被二(C1-C6)烷基氨基取代的(C1-C6)烷基，或-(C2-C6)鏈烯基；R7和R8可以是相同或不同的，各自代表氫原子，或直鏈或支鏈(C1-C6)烷基或(C2-C6)鏈烯基，或R7和R8可以與所鍵合的氮原子共同形成任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的雜環(huán)，例如，吡咯、吡咯啉、吡咯烷、咪唑、咪唑啉、咪唑烷、噁唑、噁唑啉、噁唑烷、吡啶、哌啶、嗎啉、硫嗎啉、哌嗪、吡唑、吡唑啉、噠嗪、嘧啶和吡嗪環(huán)，并且此外，R7可以被鍵合到R6上以共同形成-(CH2)m-橋，其中m是2或3；和A代表具有1-10個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴鏈。
本發(fā)明還涉及式I化合物制備方法，其特征在于◆將式II化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義，用相應于下式的化合物酯化
和
其中X代表不穩(wěn)定原子或基團，例如鹵素；和R’3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈的(C1-C20)烷基、(C2-C20)鏈烯基或(C4-C20)鏈二烯基，所述4個基團中的各基團是未被取代或被1-3個選自下述的基團取代的a)(C1-C6)烷氧基，b(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基，和c)單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基，例如吡啶基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡咯基、咪唑基或喹啉基；上述定義的各芳基和雜芳基能夠任選被1-3個選自下列的取代基所取代a)(C1-C6)烷氧基羰基，b)芐氧基羰基，c)直鏈或支鏈、未被取代或被1或2個苯基取代的(C1-C6)烷基，和d)直鏈或支鏈的(C1-C6)烷氧基；γ)被2個各自選自下列取代基雙取代的氨基a)未被取代或被1或2個各自選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的取代基取代的(C1-C6)烷基，和
b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部是未被取代的或被1或2個各選自羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團所取代；和δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)任選被1或2個選自(C1-C6)烷基、二苯甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、芐氧基羰基和哌啶子基的基團取代的；得到式Ia化合物
其中R1、R2、R’3、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義◆將其中作為取代基的R”3至少包括一個芐氧基的式Ia化合物，即將更準確地表示為式I’a化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和R″3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基或直鏈或支鏈(C1-C20)烷基，各所述基團被1-3個芐氧基羰基取代；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基，例如吡啶基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡咯基、咪唑基或喹啉基，上述定義的各芳基和雜芳基被1-3個芐氧基羰基取代；γ)被1-2個選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)各自被1或2個芐氧基羰基取代的(C1-C6)烷基，b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部被1或2個芐氧基羰基取代；δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)被1或2個芐氧基羰基取代；用氫或氫供體(如環(huán)己烷)處理，得到其中在式I’a起始化合物中的任何芐氧羰基取代基被羧基置換的相應化合物，即得到式Ib化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和R_3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基或直鏈或支鏈(C1-C20)烷基，各所述基團被1-3個羧基取代；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基，例如吡啶基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、吡喃基、苯并呋喃基、苯并吡喃基、苯并二氫吡喃基、吡咯基、咪唑基或喹啉基；上述定義的各芳基和雜芳基被1-3個羧基取代；
γ)被1-2個選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)各自被1或2個羧基取代的(C1-C6)烷基，b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部被1或2個羧基取代；δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)被1或2個羧基取代；和◆如上定義的式II化合物與甲酸和乙酸酐混合物反應，得到其中R3代表氫原子的式I化合物，即得到式Ic化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義。
全部的式Ia、Ib和Ic化合物形成全部的式I化合物。
本發(fā)明還涉及制備下列化合物的方法-其中R3被限定為被羧基取代的(C1-C20)烷基的式I化合物，就是說-更準確地表示為式I’化合物(它本身包括在式Ib中)
其中·R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義，和·R’代表被羧基取代的(C1-C20)烷基，該方法的特征在于-將式I”化合物
其中·R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和·R”代表在鏈的末端被芐氧基取代的(C1-C20)烷基，-用氫或氫供體(如環(huán)己烷)處理。
通過使式II化合物與下式環(huán)酸酐反應能夠得到許多式I’化合物
其中T代表任選被1或2個(C1-C5)烷基取代的具有1-10個碳原子的飽和烴鏈。
該方法也構成部分本發(fā)明。
本發(fā)明還涉及制備下列化合物的方法-其中R3被限定為被下列基團單取代的氨基的式I化合物未被取代或被1或2個選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團取代的(C1-C6)烷基，或者任選被全部或部分氫化的、未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的單或雙環(huán)芳基或雜芳基，即更準確地表示為式I_化合物(它本身包括在式Ia中)
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義，和·R_3代表被下列基團單取代的氨基未被取代或被1或2個選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的(C1-C6)烷基，或任選被全部或部分氫化的、未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的單或雙環(huán)芳基或雜芳基，其特征在于-使上述定義的式II化合物與-式IV異氰酸酯反應R9-N＝C＝O(IV)其中·R9代表未被取代或被1或2個選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團取代的(C1-C6)烷基，或任選被全部或部分氫化的、未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的單或雙環(huán)芳基或雜芳基。
任選在反應過程中形成的含氫酸的受體存在下，在溶劑(如四氫呋喃、二噁烷、二氯甲烷、二氯代苯、二甲基甲酰胺或吡啶)中，在20-80℃溫度范圍內特別有利于式IIIa、IIIc和IV化合物與式II化合物的反應。作為受體，可以使用例如堿金屬碳酸鹽(如碳酸鉀)、叔胺(如三乙胺、二甲基氨基吡啶(DMAP))或1，8-二氮雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)。
式II化合物與式IIIb化合物的反應適合于任選在1-羥基苯并三唑、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺或1，1-羰基二咪唑存在下的偶合試劑(如二環(huán)己基碳化二亞胺)存在下，在質子惰性溶劑(如四氫呋喃或二甲基甲酰胺)中進行。
式I’a化合物與氫或氫供體(如環(huán)己烷)的反應適合于在溶劑(如水、乙醇或二甲基甲酰胺)中、氫化催化劑(如Pd/C或氫氧化鈀)存在下、在1×105帕-5×105帕的壓力下、在20-80℃溫度范圍內順利進行。
用作起始原料的式II化合物被描述于歐洲專利說明書EP0591058A1中，或者是從歐洲專利說明書EP0591058A1制備的類似物的所述已知產物中制得。
其它用作起始原料的化合物是市售產物，或者是用已知物質根據(jù)文獻所述有機合成的常規(guī)方法制備的產物。
由式I化合物得到具有生理學上耐酸或耐堿的鹽，其中所述的鹽也同樣包括在本發(fā)明中。
由式I化合物還得到N-氧化物化合物，其中所述的N-氧化物化合物也包括在本發(fā)明中。
許多式I化合物包括一個或多個不對稱碳原子，并因此產生對映體或非對映體，該部分也形成本發(fā)明的一部分。
本發(fā)明化合物具有極重要的藥理性質、特別優(yōu)異的體外細胞毒性和體內抗癌活性，這些均優(yōu)于現(xiàn)有技術的化合物，此外，它們還具有良好的耐藥性，使之能夠在醫(yī)療上用作抗癌劑。
本發(fā)明特別重要和特別有代表性的是式I化合物、它們可能的光學異構體和N-氧化物、及其與酸或堿的藥用加成鹽，其中-R1和R2各自代表甲基；-R3代表羧基烷基，其中，烷基的直鏈或支鏈部分含有1-8個碳原子；-R4和R5可以相同或不同，各自代表氫原子或甲基；-R6代表氫原子；-R7和R8各自代表甲基；和-A代表-(CH2)2-或(CH2)3；本發(fā)明還涉及藥物組合物，該藥物組合物包括作為活性成分的、與一種或多種藥用賦形劑或惰性非毒性載體混合或結合的至少一種本發(fā)明化合物。
藥物組合物通常是適用于口服、直腸或腸胃外給藥的單位劑量的形式，特別是片劑、糖衣丸、膠囊、栓劑和注射或口服液的形式。
劑量根據(jù)患者的年齡和體重、給藥形式、治療指征的性質和任何輔助治療而變化，劑量變化范圍為0.1-400mg/日(一劑或多劑給藥)。
下列實施例用于說明本發(fā)明，用Kofler plate(K)或毛細管(cap.)測定熔點。
用于純化的硅是Amicon硅(0.025-0.07mm)，所用的壓力是105帕。實施例11-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-十四酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
將2g的1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑溶解在60ml吡啶中，將混合物冷卻至5℃，然后，在3分鐘的時間內引入4.67g肉豆蔻酸酐；攪拌混合物在5℃溫度下進行2小時；然后在室溫下進行16小時；在低于40℃的室溫下，將其濃縮至干，用二氯甲烷和甲醇的混合液作為洗脫劑，使殘渣在150g硅膠上進行層析，得到2.4g所需產物，m.p.(K)98℃。實施例2-10
用實施例1所述方法制備下列實施例化合物2)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-乙酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(K)166℃。3)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(4-羧基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)190-200℃。4)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-11-甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)180℃(分解)。5)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(6-羧基己酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.190-196℃。6)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(7-羧基庚酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)210-215℃。7)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(4-羧基-3，3-二甲基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)190℃(分解)。8)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6，10-三甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)215-225℃。9)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6，11-三甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)185-195℃。10)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(4-羧基-3-甲基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)170-175℃(分解)。實施例11(R，S)-1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(反式-苯基環(huán)丙基羧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
將1g的1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑和0.29g三乙胺溶解在50ml四氫呋喃中，將混合物冷卻至5℃，在15分鐘的時間內引入0.53g溶解在5ml四氫呋喃中的(R，S)-反式-2-苯基環(huán)丙基羧酰氯化物；攪拌混合物在5℃溫度下進行1小時，然后在室溫下進行20小時；將其濃縮至干，將殘渣溶解在二氯甲烷中，用水洗滌，用硫酸鈉干燥并濃縮至干，用二氯甲烷和甲醇的混合液(90∶10)作為洗脫劑，使其在70g硅膠上進行層析，得到0.9g所需產物，m.p.(cap)176-178℃。實施例12-15用實施例11所述方法制備下列實施例化合物12)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(4-甲氧羰基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)120-122℃。13)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(2-苯基乙酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，m.p.(cap)84-86℃。14)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-壬酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)122-125℃。15)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-[2-乙氧基丙酰氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)116-118℃。實施例161-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-[3-芐氧羰基丙酰氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
在室溫下攪拌4.5g的琥珀酸單芐酯、4.95g二環(huán)己基碳化二亞胺、2.85g1-羥基苯并三唑和240ml二甲基甲酰胺達4小時，加入3g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，在室溫下攪拌該混合物16小時，并濃縮至干，將殘渣溶解在二氯甲烷中，用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，并將其濃縮至干，用甲苯、乙醇和三乙胺(90∶10∶0.5)混合液作為洗脫劑，使殘渣在280g硅膠上進行層析，將所需餾份濃縮至干，并溶解在乙醇中再次濃縮至干，將殘渣溶解在乙醚中，抽吸過濾，并于60℃、13.328帕下干燥，得到3.3g所需產物，m.p.(cap)174-176℃。實施例17-18用實施例16所述方法制備下列實施例化合物17)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(5-芐氧羰基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)88-90℃。18)(R，S)5-[二[1，2]thiolan-3-基]戊酸{[1-(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-9-基}酯m.p.(cap)140-142℃。實施例191-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-乙酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑N-氧化物二鹽酸化物
在室溫下、二氯甲烷中，使1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-乙酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑與3-氯代過苯甲酸反應，得到所需產物，m.p.(cap)120℃(分解)。實施例201-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(4-哌啶子基哌啶子基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
攪拌80ml吡啶中的1.6g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑和1.5g4-哌啶子基哌啶N-氯代甲酸鹽達16小時，濃縮混合物至干，將殘渣溶于二氯甲烷中，用10％碳酸氫鈉溶液洗滌、用硫酸鈉干燥并濃縮至干，加入二噁烷并再次濃縮混合物至干以除去殘余吡啶，在乙酸乙酯和乙醚的混合液中進行研磨，伴隨著乙醚的洗滌進行抽吸過濾，在50℃、66帕下干燥，得到2.3g產物m.p.(cap)190-200℃。實施例21-27用實施例20所述方法制備下列實施例化合物21)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(N-甲基十二烷基氨基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)90-93℃。22)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-(N-苯基-N-甲基氨基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)125-128℃。23)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-二甲基氨基羰基氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)188-190℃。24)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-嗎啉代羰基氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)190-192℃。25)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-[(4-二苯甲基哌嗪-1-基)羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)135-138℃。26)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(4-甲基哌嗪子基羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)134-137℃。27)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(4-芐氧羰基哌嗪子基羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)186-188℃。實施例281-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(十二烷基氨基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
在50℃下，攪拌50ml吡啶中的3.8g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，3.2g異氰酸正十二烷基酯和0.05g 1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十-碳-7-烯達16小時，濃縮混合物至干，加入二噁烷并再次濃縮至干燥，用二氯甲烷、甲醇和氨(95∶5∶0.5)作為洗脫劑，在480g硅膠上進行層析，在乙醚中攪拌得到的產物，抽吸過濾并在50℃、66帕下干燥，得到3.9g所需產物m.p.(cap)162-164℃。實施例29-31用實施例28所述方法制備下列實施例化合物29)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基-5，6-二甲基-9-[(二乙氧基羰基乙基)氨基羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)120℃(分解)。30)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(3-芐氧羰基丙基)氨基羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)125-128℃。31)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(2-芐氧羰基乙基)氨基羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)112-114℃。實施例321-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
在室溫下、3.5×105帕氫氣下和0.2gPd/BaSO4存在下，將溶解在600ml甲醇中的2g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(5-芐氧羰基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑溶解在600ml氫化達36小時，通過過濾除去催化劑，濃縮濾液至干，將殘渣溶解在乙醇中，將其濃縮至干，并加入乙醚，抽吸過濾沉淀，在40℃、133帕下干燥，得到1.9g所需產物m.p.(cap)88-90℃。實施例33-36用實施例32所述方法制備下列實施例化合物33)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(2-羧基乙基氨基)羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)195-198℃。34)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(3-羧基丙基氨基)羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)174-177℃。35)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(5-羧基-2，2，5，5-四甲基-戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)191-193℃。36)1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(4-羧基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑，m.p.(cap)222-228℃。實施例371-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(哌嗪子基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
回流260ml甲醇中的2.6g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-[(4-芐氧羰基哌嗪子基)羰基氧基]-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑、5ml環(huán)己烷和1g 10％Pd/C達45分鐘，通過過濾除去催化劑，濃縮濾液至干，用二氯甲烷、甲醇和氨(85∶15∶1)作為洗脫劑，對殘渣進行硅膠層析，用乙醚和乙醇洗滌得到的產物，得到1.6g所需產物m.p.(cap)230-234℃。實施例381-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(吡啶-3-基羰基氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑
室溫下，攪拌溶解在100ml吡啶中的含有3g1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑、1.5g煙酸、3.7g二環(huán)己基碳化二亞氨和1.5g二甲基氨基吡啶的混合物達16小時，16小時結束時，進一步加入2g二環(huán)己基碳化二亞氨和0.75g煙酸，進一步攪拌混合物達24小時并濃縮至干，將殘渣溶解在二氯甲烷中，用碳酸氫鈉洗滌，通過過濾濃縮二氯甲烷相以盡可能多地除去形成的二環(huán)己基脲，并濃縮濾液至干，用甲苯、乙醇和三乙胺(100∶10∶05)作為洗脫劑，對殘渣進行硅膠層析，得到3.5g所需產物m.p.(cap)190-192℃。實施例39藥理研究A/體外活性細胞毒性所用的四種細胞系-1鼠白血病P388-1鼠肺癌，路易斯肺癌(LLC)-1人表皮樣癌，KB-3-1，-1相應耐受系，KB-A1，通過阿霉素(ADR)誘導的多重藥物耐受性。
在含有10％胎兒小牛血清、2mM谷酰胺、50單位/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素和10mMHepes的PH＝7的完整RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞。
將細胞分布在微量板上并暴露于細胞毒性化合物中，然后，將其孵育2天(P388)或4天(LLC，KB-A1，KB-3-1，)。然后，通過比色定量試驗，即顯微培養(yǎng)四唑試驗(Carmichael J.，DeGraff W.G.，Gazdar A.F.，MinnaJ.D.和Mitchell J.R.，在Cancer Res.47,936-942，1987中的基于四唑的半自動比色定量試驗評價化學敏感試驗的評估)確定活細胞數(shù)量。
用IC50表示結果，該結果是抑制50％處理細胞增殖的細胞毒性濃度，對于所用系得到的結果見于表1。
經(jīng)由實施例，列出了下列得到的特別能代表本發(fā)明的實施例2、3和32化合物的結果和對比物阿霉素(ADR)的結果。
表1
3個試驗化合物的細胞毒性值與阿霉素對于敏感系的細胞毒性值是同一數(shù)量級。對于阿霉素有耐受性的KB-A1系，3個試驗化合物的活性高于阿霉素7-9倍。因此，這些化合物可以成功地用于抵抗對阿霉素有耐受性的和表現(xiàn)出多重藥物耐受顯型的癌癥。B/在體內的活性1/化合物對白血病P388的抗癌活性P388系(鼠白血病)由國家癌癥研究所(Frederick，USA)提供，在第0天，將癌細胞(106細胞)注射進18-20g重的雌性BDF1鼠(Iffa-Credo，F(xiàn)rance，6或7只鼠為一組)腹膜腔中。
在第1天或1、5和9天，以指明的劑量靜脈給入產物。
用％T/C表示抗癌活性
表明60天(長期存活)動物存活數(shù)量。
基于實施例，表2給出了特別能代表本發(fā)明的實施例32化合物得到的結果。
表2靜脈給人的實施例32化合物對于白血病P388(腹膜內)的抗癌活性
該表的研究顯示-第1天靜脈注射的實施例32化合物在20-320mg/kg范圍內具有活性，并且對于處理的7只鼠中的4只在240mg/kg具有活性、7只鼠中的6只在320mg/kg具有活性。-第1、5和9天靜脈注射的實施例32化合物在10-160mg/kg范圍內具有活性，對于處理的7只鼠中的6只在80和160mg/kg具有活性。-對于實施例化合物32(甚至當注射非常高的劑量時)具有良好的耐受性，并且既不導致明顯的減重，又不導致提早死亡，因此，它顯示·非常低的全身毒性和·優(yōu)異的治療指數(shù)。2/在胸膜內種植的人肺癌ZCI-H460正位模型中的化合物抗癌活性源于人肺癌“非小細胞”型的ZCI-H460系由美國典型培養(yǎng)收藏中心(American type culture collection)(Frederick，USA)提供，在falcon型盒中的完整RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞，在種植的當天用胰蛋白酶分離細胞，將其離心并懸浮于完整的培養(yǎng)基中，然后，將該細胞種植在雌性Babe/C裸鼠胸膜腔內(106細胞/鼠)。以指定的劑量在第7和14天給6只一組的鼠靜脈注射產物，用如上所述的％T/C表示抗癌活性。
表3列出了得到的本申請實施例3化合物(特別代表本發(fā)明)的結果，以及作為對比產物的現(xiàn)有技術最接近化合物的結果。
表3靜脈注射的實施例3化合物和對比化合物對胸膜內種植的人肺癌ZCI-H460的抗癌活性
*毒性劑量(1治療期間致死鼠量)**對比物是1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-羥基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物，即歐洲專利EP0591058A1二鹽酸化物形式的實施例1化合物。
表中的數(shù)據(jù)顯示對比物在40-80mg/kg范圍內具有活性，113mg/kg劑量具有毒性；實施例3化合物甚至在強劑量即兩次給入160mg/kg時具有活性而且具有很好的耐受性，提高81％的動物存活率，因此，實施例3化合物的治療指數(shù)是優(yōu)異的。
權利要求
1.式I化合物以及它們的光學異構體和N-氧化物，及其與酸或堿的藥用加成鹽
其中R1代表具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；R2、R5和R6可以相同或不同，各自代表氫原子或具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；R3代表A)氫原子；B)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈的(C1-C20)烷基、(C2-C20)鏈烯基或(C4-C20)鏈二烯基，所述4個基團中的各基團是未被取代或被1-3個選自下列的基團取代的a)(C1-C6)烷氧基，b)羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基，c)單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基；C)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基；上述各芳基和雜芳基能夠任選被1-3個選自下列基團的取代基所取代a)(C1-C6)烷氧基羰基，b)芐氧基羰基，c)各自是直鏈或支鏈、未被取代或被1或2個苯基取代的(C1-C6)烷基，d)各自是直鏈或支鏈的(C1-C6)烷氧基，和e)羧基；D)被1或2個選自下列基團的取代基單或雙取代的氨基a)各自是未被取代或被1或2個各選自基團羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基取代基取代的(C1-C6)烷基，或b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部是未被取代或被1或2個各自選自基團羧基、(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基所取代；E)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)任選被1或2個選自(C1-C6)烷基、二苯甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、芐氧基羰基、羧基和哌啶子基的基團所取代；R4代表-氫原子，-直鏈或支鏈、任選被二(C1-C6)烷基氨基取代的(C1-C6)烷基，或-(C2-C6)鏈烯基；R7和R8可以是相同或不同的，各自代表氫原子或直鏈或支鏈(C1-C6)烷基或(C2-C6)鏈烯基，或R7和R8可以與氮原子鍵合共同形成任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的雜環(huán)，并且此外，R7可以被鍵合到R6上以便共同形成-(CH2)m-鍵，其中m是2或3；和A代表具有1-10個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴鏈。
2.根據(jù)權利要求1所述的相應于式I的化合物以及它們的光學異構體和N-氧化物、及其與酸或堿的藥用加成鹽，其中-R1和R2各自代表甲基；-R3代表羧基烷基，其中，烷基部分是直鏈或支鏈的和含有1-8個碳原子；-R4和R5可以相同或不同，各自代表氫原子或甲基；-R6代表氫原子；-R7和R8各自代表甲基，和-A代表-(CH2)2-或-(CH2)3-
3.一種權利要求1和2的化合物是1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-乙酰氧基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑。
4.一種權利要求1和2的化合物是1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(4-羧基丁酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物。
5.一種權利要求1和2的化合物是1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6，11-三甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑二鹽酸化物。
6.一種權利要求1和2的化合物是1-[(2-二甲基氨基乙基)氨基羰基]-5，6-二甲基-9-(5-羧基戊酰氧基)-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑。
7.權利要求1化合物的制備方法，其特征在于◆將式II化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如權利要求1所定義，用選自相應于下式的化合物酯化
和
其中X代表不穩(wěn)定原子或基團，和R’3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈的(C1-C20)烷基、(C2-C20)鏈烯基或(C4-C20)二鏈烯基，所述4個基團中各基團是未被取代或被1-3個選自下述基團取代的a)(C1-C6)烷氧基，b)(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基，和c)單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基；上述定義的各芳基和雜芳基能夠任選被1-3個選自下列的取代基所取代a)(C1-C6)烷氧基羰基，b)芐氧基羰基，c)各自是直鏈或支鏈、未被取代或被1或2個苯基取代的(C1-C6)烷基，和d)各自是直鏈或支鏈的(C1-C6)烷氧基；γ)被1或2個各自選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)各自是未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基取代基取代的(C1-C6)烷基，和b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部是未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團所取代；和δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)任選被1或2個各選自(C1-C6)烷基、二苯甲基、(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、芐氧基羰基和哌啶子基的基團所取代；得到式Ia化合物
其中R1、R2、R”3、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義◆將其中作為取代基的R’3至少包括一個芐氧基的式Ia化合物，即將更準確地表示為式I’a
其中R1、R2，R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和R”3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈(C1-C20)烷基，各所述基團被1-3個芐氧基羰基取代；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基，上述定義的各芳基和雜芳基被1-3個芐氧基羰基所取代；γ)被1-2個選自選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)各自被1或2個芐氧基羰基取代的(C1-C6)烷基，b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部被1或2個芐氧基羰基所取代；δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)被1或2個芐氧基羰基所取代，用氫或氫供體處理，得到其中在式I’a起始化合物中任何芐氧羰基取代基已經(jīng)被羧基置換了的相應化合物，即得到式Ib化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和R_3代表α)(C3-C8)環(huán)烷基，或直鏈或支鏈(C1-C20)烷基，各所述基團被1-3個羧基所取代；β)任選被全部或部分氫化的單、雙或三環(huán)芳基或含有1-3個5元和/或6元環(huán)和含有1-3個選自原子氮、氧和硫雜原子的雜芳基，上述定義的各芳基和雜芳基被1-3個羧基取代；γ)被1-2個選自下列的取代基單或雙取代的氨基a)各自被1或2個羧基取代的(C1-C6)烷基，b)各自為單環(huán)或雙環(huán)和部分或全部被氫化的芳基和雜芳基，它們全部被1或2個羧基取代；δ)被包括在任選含有選自原子氮、氧和硫的第二個雜原子的5元或6元環(huán)中的氨基，該環(huán)被1或2個羧基取代；◆如上定義的式II化合物與甲酸和乙酸酐混合物反應，得到其中R3代表氫原子的式I化合物，即得到式Ic化合物
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義。
8.權利要求1中更準確地表示為式I”的化合物的制備方法，
其中·R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如權利要求1所定義和·R’代表被羧基取代的(C1-C20)烷基，-其特征在于-用氫或氫供體處理式I”化合物
其中·R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如上定義和·R”代表被芐氧基取代的(C1-C20)烷基；或者-使如權利要求7所定義的式II化合物與下式環(huán)酸酐反應
其中T代表任選被1或2個具有1-5個碳原子的烷基取代的具有2-10個碳原子的飽和烴鏈。
9.權利要求1中更準確地表示為式I_的化合物的制備方法
其中·R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8和A如權利要求1所定義，和·R_代表被下列基團單取代的氨基被未被取代或被1或2個選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的(C1-C6)烷基，或者任選被全部或部分氫化的、未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的單或雙環(huán)芳基或雜芳基；其特征在于使權利要求7定義的式II化合物與式IV異氰酸酯反應R9-N＝C＝O (IV)其中·R9代表未被取代或被1或2個選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基的基團取代的(C1-C6)烷基，或者任選被全部或部分氫化的、未被取代或被1或2個各選自(C1-C6)烷氧基羰基和芐氧基羰基基團取代的單或雙環(huán)芳基或雜芳基。
10.用作抗癌劑的藥物組合物，包括作為活性成分的、與一種或多種藥用賦形劑或惰性非毒性載體混合或結合的至少一種權利要求1-6任一項中的化合物。
全文摘要
下式化合物、它們的光學異構體和N－氧化物及其與酸或堿的藥用加成鹽:其中,R
文檔編號C07D487/04GK1188767SQ9712087
公開日1998年7月29日 申請日期1997年12月29日 優(yōu)先權日1997年12月29日
發(fā)明者C·古勞尼尤, Y·查唐, E·比薩格尼, G·阿塔希, A·皮里, N·古爾巴德 申請人:阿迪爾公司