專利名稱：用作一氧化氮合成酶抑制劑的氨基四唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及氨基四唑衍生物和它們在治療中的應(yīng)用，特別是它們作為一氧化氮合成酶抑制劑的應(yīng)用。
相關(guān)技術(shù)從80年代初期人們已經(jīng)知道由乙酰膽堿引起的血管舒張取決于內(nèi)皮的存在并且該活性歸因于被稱為內(nèi)皮衍生的舒張因子(EDRF)的不穩(wěn)定體液因子。一氧化氮(NO)作為血管舒張藥的活性被公知已經(jīng)有一百多年，NO是戊基亞硝酸酯、甘油基三亞硝酸酯和其他硝基血管舒張藥的活性成分。EDRF用作NO的最近鑒定已經(jīng)與生物化學(xué)途徑的發(fā)現(xiàn)相吻合，通過所述的生物化學(xué)途徑NO合成酶由氨基酸L-精氨酸合成NO。
NO是可溶性鳥苷酸環(huán)化酶的內(nèi)源性刺激素，除了內(nèi)皮素依賴性舒張包括噬細胞的細胞毒性和在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的細胞與細胞之間的聯(lián)系之外，NO還涉及許多生物學(xué)作用(參見Moncada等，《生化藥理學(xué)》，38，1709-1715(1989)和Moncada等，《藥理學(xué)綜述》，43，109-142(1991))?，F(xiàn)在人們認(rèn)為在許多癥狀，尤其是涉及系統(tǒng)低血壓如中毒性休克和用某些細胞分裂質(zhì)治療的癥狀中會涉及過量NO的產(chǎn)生。
從L-精氨酸合成NO可以被L-精氨酸類似物，L-N-單甲基-精氨酸(L-NMMA)抑制，L-NMMA治療中毒性休克和其他類型全身性低血壓的治療用途已經(jīng)被提出(WO91/04024和GB-A-2240041)。除了L-NMMA的相同用途之外，某些其他NO合成酶抑制劑的治療用途在WO91/04024和EP-A-0446699中也被提出。
最近已經(jīng)變得明顯的是至少有如下三種類型的NO合成酶
(i)Ca++/鈣調(diào)節(jié)蛋白依賴性組成酶，位于內(nèi)皮上，應(yīng)答受體或物理刺激釋放NO。
(ii)Ca++/鈣調(diào)節(jié)蛋白依賴性組成酶，位于在腦內(nèi)，應(yīng)答受體或物理刺激釋放NO。
(iii)Ca++非依賴性酶，其在血管平滑肌、巨噬細胞、內(nèi)皮細胞、和許多其他細胞通過內(nèi)毒素和細胞因子活化之后被誘導(dǎo)。一旦被表達，這種可誘導(dǎo)的NO合成酶長時間合成NO。
由組成酶釋放的NO的作用是構(gòu)成一些生理學(xué)應(yīng)答的轉(zhuǎn)導(dǎo)機理的基礎(chǔ)。通過可誘導(dǎo)的酶產(chǎn)生的NO是腫瘤細胞和侵入微生物的細胞毒素分子。同樣明顯的是，過量NO產(chǎn)生的副作用，尤其是病理學(xué)血管舒張和組織損害，可能主要是由可誘導(dǎo)的NO合成酶合成NO的作用所引起的。
另一明顯的發(fā)展點是NO會與軟骨的退化有關(guān)，軟骨退化發(fā)生在某些癥狀如關(guān)節(jié)炎中，人們還知道，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中增加了NO的合成。因此，可由L-精氨酸抑制NO得到益處的其他病癥包括侵襲關(guān)節(jié)的自身免疫和/或發(fā)炎癥狀，例如關(guān)節(jié)炎，腸炎疾病，心血管局部缺血，糖尿病，痛覺過敏(allodynia)，大腦局部缺血(包括病灶性局部缺血，血栓形成的中風(fēng)和球面局部缺血，以及心動停止)，NO介導(dǎo)的其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和NO介導(dǎo)的其他疾病。
可由L-精氨酸抑制NO得到益處的其他病癥包括與敗血病和/或中毒性休克有關(guān)的由各種各樣試劑誘發(fā)的全身性低血壓；使用細胞因子如TNF，IL-1和IL-2的療法；和在移植治療中對短期免疫抑制的輔助療法。
到目前為止，被提出作為治療使用的某些NO合成酶抑制劑，特別是L-NMMA，是非選擇性的，因為它們既抑制組成酶又抑制可誘導(dǎo)的NO合成酶。這種非選擇性NO合成酶抑制劑的使用需要特別小心，以便避免潛在的組成酶NO合成酶過分抑制的嚴(yán)重后果，包括高血壓和可能的血栓形成和組織損害。尤其是L-NMMA在治療中毒性休克的治療使用中，人們已經(jīng)被建議在整個治療過程中患者必須不斷地進行血壓監(jiān)測。因此，雖然采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施，非選擇性NO合成酶抑制劑具有治療效用，但在相當(dāng)大程度上抑制可誘導(dǎo)的NO合成酶比抑制NO合成酶組成酶異構(gòu)形式大的選擇性的NO合成酶抑制劑具有更大的治療好處和更容易使用。
WO94/12165，WO94/14780，WO93/13055，EP0446699A1和美國專利US5132453公開了抑制一氧化氮合成和優(yōu)先抑制一氧化氮合成酶的可誘導(dǎo)的異構(gòu)形式的化合物。上述公開內(nèi)容全部在此引入作為參考。
發(fā)明概述概括地說，本發(fā)明涉及在需要所述抑制或調(diào)節(jié)的對象上抑制或調(diào)節(jié)一氧化氮合成的方法，該方法包括施用一種化合物，這種化合物抑制或調(diào)節(jié)一氧化氮合成酶的可誘導(dǎo)的異構(gòu)形式優(yōu)先于抑制或調(diào)節(jié)一氧化氮合成酶的組成酶異構(gòu)形式。本發(fā)明的另一目的是在需要降低一氧化氮水平的對象上降低一氧化氮水平。
本發(fā)明化合物和其可藥用鹽用下列化學(xué)式表示
其中R1，R2獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基；R3，R4獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基，OR6，其中R6是氫、低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、芳基、COR7、或SOR8，其中R7和R8獨立地選自低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基和芳基；X選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基，它們都可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代；或X選自式-(CH2)pQ(CH2)r-，其中p是1-3，r是1-3和Q是氧，C＝O，S(O)t(其中t是0-2)，或NR12，其中R12是氫或可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代的低級烷基；或X選自式-(CH2)sA(CH2)v-，其中s是0-2，v是0-2和A是3至6元碳環(huán)基，其可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代，其中所述的所有基團可以選擇性地用氫，鹵素和低級烷基取代；Y選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，芳基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，和芳基，和R11選自3至8元雜環(huán)基，其中至少一個環(huán)原子是碳原子，其中1至約4個環(huán)原子是獨立地選自氧、氮和硫的雜原子，所述雜環(huán)基可任選地用羥基，低級烷氧基，低級烷基，鹵素，硝基，羧基，SO2R13，氨基，酰氧基，三氟甲基，苯基和萘基取代，其中R13選自低級烷基，低級烷氧基，NR1R2，所述苯基和萘基本身可任選地用鹵素，硝基，低級烷氧基，和低級烷基取代。
本發(fā)明的目的是提供具有作為一氧化氮合成酶抑制劑作用的化合物。這些化合物抑制該合成酶的可誘導(dǎo)的形式比抑制該合成酶的組成酶形式要至少優(yōu)先3倍。
本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明的化合物比現(xiàn)有技術(shù)中的已知化合物更具有選擇性。
本發(fā)明的目的是提供比現(xiàn)有技術(shù)中的已知化合物更具有選擇性的化合物。
本發(fā)明化合物的優(yōu)點還在于它們與現(xiàn)有技術(shù)中的已知化合物相比具有優(yōu)選的物理性質(zhì)。例如，實施例1中揭示的化合物以及它的所有中間體是結(jié)晶產(chǎn)物。相比之下，在WO93/13055中公開的NIL當(dāng)它為鹽酸鹽時才可以作為無色結(jié)晶分離，但它具有潮解性質(zhì)。該化合物暴露于普通室內(nèi)空氣的潮氣中時很快變成非常粘稠的油狀物，這樣會使得操作困難。
本發(fā)明包括以鹽形式，尤其是以酸加成鹽形式的式(I)化合物。適當(dāng)?shù)柠}包括與有機酸和無機酸形成的鹽。這種酸加成鹽一般是可藥用鹽，雖然非-可藥用鹽可以用于上述化合物的制備和提純。因此，優(yōu)選的鹽包括那些與下列酸形成的鹽鹽酸，氫溴酸，硫酸，檸檬酸，酒石酸，磷酸，乳酸，丙酮酸，乙酸，琥珀酸，草酸，富馬酸，馬來酸，草酰乙酸，甲磺酸，乙磺酸，對-甲苯磺酸，苯磺酸和羥乙磺酸。式(I)化合物的鹽可以通過將以游離堿形式的適當(dāng)化合物與適當(dāng)?shù)乃岱磻?yīng)制備。
式(I)化合物可以原料化學(xué)藥品給藥，但是它們優(yōu)選作為藥物組合物給藥。本發(fā)明另一方面提供了含有式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑化物，以及一種或多種可藥用載體和選擇性的一種或多種其他治療成分的藥物組合物。載體必須是“可接受的”，它們應(yīng)該與制劑的其他成分相配伍，并且對接受者是無害的。
制劑包括那些適合于口服，非腸道(包括皮下，真皮內(nèi)，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))，直腸和局部(包括皮膚，頰，舌下和眼內(nèi))給藥的制劑，雖然最適合的途徑應(yīng)該取決于例如接受者的疾病和癥狀。制劑可以方便地以單位劑量配制，并且可以通過制藥學(xué)領(lǐng)域中公知的任何方法制備。所有方法包括將式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑化物(“活性成分”)與作為一種或多種輔助成分的載體結(jié)合的步驟。通常，制劑通過將活性成分與液體載體或細粉碎的固體載體或液體和固體載體兩者均勻和緊密地結(jié)合制備，然后，如果需要的話，將產(chǎn)品加工成所需制劑的形狀。
適合口服給藥的本發(fā)明制劑可以以下列形式出現(xiàn)離散單位形式如含有預(yù)先確定數(shù)量的活性成分的膠囊，扁形膠囊劑或片劑；粉末劑或顆粒劑；水或非-水液體的溶液劑或懸浮劑；或水包油液體乳化劑或油包水液體乳化劑?；钚猿煞忠部梢砸源笸鑴幪莿┗蚋鄤┐嬖?。
片劑可以通過選擇性地與一種或多種輔助成分?jǐn)D壓或模壓制備。擠壓的片劑可以通過在適當(dāng)?shù)臋C器中將以自由流動形式如粉末或顆粒形式的活性成分，選擇性地與粘合劑，潤滑劑，惰性稀釋劑，潤滑劑，表面活性劑或分散劑混合和擠壓制備。模壓片劑可以通過在適當(dāng)?shù)臋C器中將用惰性液體載體潤濕的粉末狀化合物的混合物模壓制備。片劑可任選地被涂覆或刻痕，也可以配制成使其活性成分被減慢或控制釋放的形式。
皮下給藥的制劑包括水和非-水消毒注射液，它們可以含有抗氧化劑，緩沖劑，制菌劑和溶質(zhì)，這些物料使得制劑與指定的接受者的血液等滲；和水和非-水消毒懸浮液，該制劑可以包括懸浮劑和增稠劑。制劑可以以單位劑量或多劑量容器形式出現(xiàn)，例如密封的安瓿和藥水瓶，可以在冷凍-干燥(凍干)條件下貯存，在使用之前僅僅需要加入消毒液體載體，例如，鹽水、水以便注射。臨時注射溶液和懸浮液可以從前面描述的各種消毒粉末，顆粒和片劑制備。
直腸給藥制劑可以以帶有通常的載體如可可脂或聚乙二醇的栓劑形式出現(xiàn)。
在口中，例如在頰或舌下給藥的表面制劑包括含有在有香味基質(zhì)如蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中的活性成分的錠劑，和含有在基質(zhì)如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中的活性成分的錠劑。
優(yōu)選的單位劑量制劑是那些含有如下文詳述的有效劑量，或有效劑量的適當(dāng)份額的活性成分的制劑。
可以理解的是，除了上面具體描述的成分之外，本發(fā)明的制劑可以包括現(xiàn)有技術(shù)中考慮到該制劑類型的其他常規(guī)制劑，例如那些適合于口服給藥的制劑可以包括加味劑。
本發(fā)明的化合物可以以每天0.001-2500毫克/千克體重的劑量經(jīng)口服或注射給藥。成年人的劑量范圍通常是0.005毫克-10克/天。片劑或其他以獨立單位提供的劑型通常含有一定數(shù)量的本發(fā)明化合物，該劑量或該劑量的倍數(shù)是對治療有效的，例如，劑量單位含有5毫克-500毫克，通常含有約10毫克-200毫克本發(fā)明化合物。
式(I)化合物優(yōu)選以口服或通過注射(靜脈內(nèi)或皮下)給藥。給患者使用的化合物的精確數(shù)量應(yīng)該由主治醫(yī)師負責(zé)。但是，使用的劑量應(yīng)該取決于許多因素，包括患者的年齡和性別，所治療的明確疾病，和疾病的嚴(yán)重程度。給藥途徑也可以根據(jù)癥狀和疾病的嚴(yán)重程度變化。
在本文中使用時，術(shù)語“低級烷基”，不管是單獨或結(jié)合使用，都是指含有1至約10，優(yōu)選1至約8個碳原子，和更優(yōu)選1至約6個碳原子的無環(huán)烷基。該類基團的實例包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，異戊基，己基，辛基等。
術(shù)語“低級鏈烯基”指含有至少一個雙鍵的不飽和無環(huán)烴基。該類基團含有約2至約10個碳原子，優(yōu)選約2至約8個碳原子和更優(yōu)選2至約6個碳原子。適當(dāng)?shù)逆溝┗膶嵗ū┗?，丁?1-基，異丁烯基，戊烯-1-基，2-2-甲基丁烯-1-基，3-甲基丁烯-1-基，己烯-1-基，庚烯-1-基，和辛烯-1-基等。
術(shù)語“低級炔基”指含有一個或多個叁鍵的不飽和無環(huán)烴基，該類基團含有約2至約10個碳原子，優(yōu)選具有約2至約8個碳原子，和更優(yōu)選具有約2至約6個碳原子。適當(dāng)?shù)娜不膶嵗ㄒ胰不?，丙炔基，丁?1-基，丁炔-2-基，戊炔-1-基，戊炔-2-基，3-甲基丁炔-1-基，己炔-1-基，己炔-2-基，己炔-3-基，3，3-二甲基丁炔-1-基等。
術(shù)語“雜環(huán)基”指具有大約3至約6個碳原子，其中1至約4個碳原子被氮、氧或硫替代的不飽和環(huán)狀烴基?！半s環(huán)基”可以與芳族烴基稠合。適當(dāng)?shù)膶嵗ㄟ量┗拎せ?，吡唑基，三唑基，嘧啶基，噠嗪基，噁唑基，噻唑基，咪唑基，吲哚基，噻吩基，呋喃基，四唑基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，吡咯烷基，1，3-二氧戊環(huán)基，2-咪唑啉基，咪唑烷基，2-吡唑啉基，吡唑烷基，異噁唑基，異噻唑基，1，2，3-噁二唑基，1，2，3-三唑基，1，3，4-噻二唑基，2H-吡喃基，4H-吡喃基，哌啶基，1，4-二氧雜環(huán)己烷基，嗎啉基，1，4-二噻烷基，硫代嗎啉基，吡嗪基，哌嗪基，1，3，5-三嗪基，1，3，5-三噻烷基，苯并(b)噻吩基，苯并咪唑酮基，喹啉基等。
術(shù)語“芳基”指具有4至約16個碳原子，優(yōu)選6至約12個碳原子，更優(yōu)選6至約10個碳原子的芳族烴基。適當(dāng)?shù)姆甲鍩N基的實例包括苯基，萘基等。
術(shù)語“環(huán)烷基”或“環(huán)烯基”指在環(huán)中具有3至約10個碳原子，優(yōu)選3至約6個碳原子的脂環(huán)基。適當(dāng)?shù)闹h(huán)基的實例包括環(huán)丙基，環(huán)丙烯基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，2-環(huán)己-1-烯-基，環(huán)己烯基等。
術(shù)語“烷氧基”，不管是單獨或結(jié)合使用，都是指烷基醚基，其中術(shù)語烷基如上述定義，并且最優(yōu)選含有1至約4個碳原子的烷基。適當(dāng)?shù)耐榛鸦鶊F的實例包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。
術(shù)語“鹵素”指氟，氯，溴或碘。
術(shù)語“前藥”指在體內(nèi)變成更具有活性的化合物。
當(dāng)在本文中使用時，涉及對患者的“治療”時其含義包括預(yù)防。
本申請文件中引用的美國的或其他國家的所有參考文獻、專利或?qū)＠暾埦诖艘胱鳛閰⒖肌?br> 下列一般的合成路線用于完成本發(fā)明。路線1
不用進一步詳細描述，可以認(rèn)為，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)前面的描述可以在最大程度上利用本發(fā)明。因此下列優(yōu)選的具體實施方案僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是以任何方式來限制本發(fā)明的所揭示內(nèi)容的剩余部分。
所有實驗在干燥的氮氣或氬氣下進行。除非另有說明，所有溶劑和試劑直接使用不用進一步提純。反應(yīng)的處理程序涉及將反應(yīng)混合物加入中性、或酸性、或堿性水溶液和有機溶劑的混合物中。水層用指定的有機溶劑提取n次(x)。合并的有機提取液用指定的水溶液洗滌n次(x)，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮，和如所指示的那樣提純。根據(jù)Still描述的條件實現(xiàn)柱色譜分離。(Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra，A.中等解析的快速色譜制備分離技術(shù)，《有機化學(xué)會志》，1978，43，2923-2925)。從1N鹽酸，在乙醇(EtOH)中的HCl，在甲醇中的2NHCl，或在二氧雜環(huán)己烷中的6NHCl中得到鹽酸鹽。在硅膠60F254預(yù)涂覆的0.25mmEM板上進行薄層色譜分離。由從幾個商家處得到的C-8或C-18反相柱得到高效液相色譜(HPLC)。將分析樣品用阿布德哈登干燥器在56℃或78℃干燥。用四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)用Geneal Electric QE-300或Varian VXR400Mhz光譜儀得到1HNMR譜。用四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)用Varian光譜儀在125.8MHz得到13CNMR譜。
實施例1
2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-四唑-5-基)己酰胺水合物二鹽酸鹽1A向Boc-L-Lys(Cbz)-OH(5克，13.18毫摩爾)，5-氨基四唑單水合物(1.36克，13.18毫摩爾)和N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)(5.1克，6.9毫升，39.54毫摩爾)在20毫升二甲基甲酰胺(DMF)在室溫下的攪拌著的溶液中加入苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)膦鎓六氟磷酸鹽(BOP)(6.4克，14.49毫摩爾)。
攪拌1小時之后，真空濃縮反應(yīng)混合物。將剩余物在60毫升乙酸乙酯(EtOAc)和50毫升水之間分配。分離水層。有機層用50毫升1M硫酸氫鉀溶液洗滌，再用50毫升水洗滌2次。產(chǎn)物開始沉淀，真空濃縮懸浮液得到9克粗品化合物。經(jīng)干燥后，產(chǎn)物通過在二氯甲烷中沸騰接著過濾提純得到3.7克1A(62.7％)。該化合物用1HNMR表征。1B在催化氫化條件下在5psi下在50％EtOH/AcOH溶液中使用Pd黑將1A(2克，4.5毫摩爾)還原12小時，得到1.55克(100％)1B。該化合物用1HNMR表征。1C向1B(1.55克，4.15毫摩爾)和乙亞氨酸甲酯鹽酸鹽(0.91克，8.31毫摩爾)在25毫升DMF中的攪拌著的溶液中加入三乙胺(TEA)(1.26克，1.74毫升，12.45毫摩爾)。在室溫下攪拌16小時之后，反應(yīng)混合物中濾出三乙胺鹽酸鹽，真空濃縮濾液，剩余物溶于50％乙酸并凍干。粗產(chǎn)物(2克)使用反相色譜在C-18柱上提純得到0.9克1C(52.3％)。該化合物用1HNMR表征。1將1C(0.9克，2.17毫摩爾)溶于30毫升乙酸中并加入3毫升4N HCl/二氧雜環(huán)己烷。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌20分鐘，然后加入150毫升乙醚。2小時后，過濾沉淀，用乙醚洗滌，干燥，得到0.78克1(96％)。C9H18N8O，2HCl，1.25H2O的元素分析計算值C，30.91；H，6.48；N，32.04；Cl，20.27。測定值C，31.64；H，6.43；N，32.19；Cl，20.19。DSCmp144.9℃。
實施例1化合物也比NIL更具有選擇性。實施例1化合物以及其所有中間體是非常好的結(jié)晶產(chǎn)物。相比之下，NIL是玻璃體，它使操作變得困難。實施例2
2S-氨基-5-[[氨基(硝基亞氨基)甲基]氨基]-N-(1H-四唑-5-基)戊酰胺鹽酸鹽
<p>C)式VII化合物與氨反應(yīng)，生成式VIII化合物
以及D)式VIII化合物與式(IX)化合物反應(yīng)生成式IV化合物
該方法包括a)在反應(yīng)第一步，在酸和亞硝酸鹽(酯)的水溶液存在下，在有機溶劑或它們的混合物中，式I的鄰氨基磺酸重氮化生成式II的鄰重氮磺酸鹽，
b)在反應(yīng)第二步，在鈀催化劑存在下，在水、有機溶劑或它們的混合物中，使式II的鄰重氮鹽磺酸鹽和處于超壓下的CO反應(yīng)，生成式III的鄰磺基苯甲酸，-三唑-3-基)己酰胺二鹽酸鹽4根據(jù)與1中相同的方法從3-氨基三唑制備標(biāo)題產(chǎn)物。實施例5
2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(5-嘧啶基)己酰胺單水合物二鹽酸鹽5根據(jù)與1中相同的方法從5-氨基嘧啶制備標(biāo)題產(chǎn)物。實施例6
2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-吡唑-3-基)己酰胺水合物二鹽酸鹽6根據(jù)與1中相同的方法從3-氨基吡唑制備標(biāo)題產(chǎn)物。實施例7
2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(噻唑-2-基)己酰胺二鹽酸鹽7根據(jù)與1中相同的方法從2-氨基噻唑制備標(biāo)題產(chǎn)物。生物學(xué)數(shù)據(jù)上面列出的作為NO合成酶抑制劑的化合物的活性可以通過下列試驗測定一氧化氮合成酶的瓜氨酸試驗通過檢測L-[2，3-3H]-精氨酸向L-[2，3-3H]-瓜氨酸(1，2)的轉(zhuǎn)化測定一氧化氮合成酶的活性。人體可誘導(dǎo)的NOS(hiNOS)，人體內(nèi)皮組成酶NOS(hecNOS)和人體神經(jīng)元組成酶NOS(hnNOS)各自被由人體組織提取的RNA克隆。重組體酶在昆蟲細胞中用桿狀病毒載體表達。從細胞提取物中分離酶活性并且通過DEAE-瓊脂糖色譜(2)部分提純。加入酶和抑制劑得到50μL體積的50mMTris(pH7.6)，通過加入含有50mM緩血酸胺(pH7.6)，2.0毫克/毫升牛血清白蛋白，2.0mM DTT，4.0mM氯化鈣，20μM FAD，100μM四氫生物蝶呤，0.4-2.0mM NADPH和含有0.9μCi的L-[2，3-3H]-精氨酸的60μM L-精氨酸的50μL溶液開始反應(yīng)。對于組成酶NOS，鈣調(diào)節(jié)蛋白從40-100nM的最終濃度被計入。接著在37℃孵化15分鐘，通過加入含有10mM EGTA，100mM HEPES(pH5.5)和1.0mM L-瓜氨酸的300μL冷的緩沖劑終止反應(yīng)。通過Dowex 50WX-8陽離子交換樹脂色譜分離[3H]-瓜氨酸并且用液體閃爍計數(shù)器定量其放射性。1.Bredt，D.S.和Snyder，S.H.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87，682-685。2.Misko，T.P.，Moore，W.M.，Kasten，T.P.，Nickols，G.A.，Corbett，J.A.，Tilton，R.G.，McDaniel，M.L.，Williamson，J.R.和Currie，M.G.(1993)《歐洲藥學(xué)雜志》，233，119-125。
表1實施例序號 hiNOS hecNOS 選擇性(以μM計的 (以μM計的IC50) IC50)1 21.42425113根據(jù)前面的描述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易弄清本發(fā)明的實質(zhì)性特征，在不超出本發(fā)明的實質(zhì)和范圍的情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明做出各種改變和改良以適應(yīng)不同用途和條件。
權(quán)利要求
1.一種具有式(I)的化合物和其可藥用鹽
其中R1，R2獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基；R3，R4獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，OR6，其中R6是氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，芳基，COR7，或SOR8，其中R7和R8獨立地選自低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基和芳基；X選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基，它們都可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代；或X選自式-(CH2)pQ(CH2)r-，其中p是1-3，r是1-3和Q是氧，C＝O，S(O)t，或NR12，其中t是0-2，R12是氫或可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代的低級烷基；或X選自式-(CH2)sA(CH2)v-，其中s是0-2，v是0-2和A是3至6元碳環(huán)基，其可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代，其中所述的所有基團可任選地用氫，鹵素和低級烷基取代；Y選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，芳基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，和芳基，和R11選自3至8元雜環(huán)基，其中至少一個環(huán)原子是碳原子，其中1至約4個環(huán)原子是獨立地選自氧、氮和硫的雜原子，所述雜環(huán)基可任選地用羥基，低級烷氧基，低級烷基，鹵素，硝基，羧基，SO2R13氨基，酰氧基，三氟甲基，苯基和萘基取代，其中R13選自低級烷基，低級烷氧基，NR1R2，所述苯基和萘基可任選地用鹵素，硝基，低級烷氧基，和低級烷基取代。
2.一種具有式(I)的化合物和其可藥用鹽
其中R1，R2獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基；R3，R4獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，OR6，其中R6是氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，芳基，COR7，或SOR8，其中R7和R8獨立地選自低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基和芳基；X選自具有1-6個碳原子的低級烷基，具有2-6個碳原子的低級鏈烯基，和具有2-6個碳原子的低級炔基，它們都可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代；或X選自式-(CH2)pQ(CH2)r-，其中p是1-3，r是1-3和Q是氧，C＝O，S(O)t，或NR12，其中t是0-2，R12是氫或可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代的低級烷基；或X選自式-(CH2)sA(CH2)v-，其中s是0-2，v是0-2和A是3至6元碳環(huán)基，其可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代，其中所述的所有基團可任選地用氫，鹵素和低級烷基取代；Y選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，芳基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，和芳基，和R11選自3至8元雜環(huán)基，其中至少一個環(huán)原子是碳原子，其中1至約4個環(huán)原子是獨立地選自氧、氮和硫的雜原子，所述雜環(huán)基可任選地用羥基，低級烷氧基，低級烷基，鹵素，硝基，羧基，氨基，酰氧基，三氟甲基，苯基和萘基取代，所述苯基和萘基可任選地用鹵素，硝基，低級烷氧基，和低級烷基取代。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中R1，R2獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基和低級炔基；R3，R4獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，OR6，其中R6是氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，或芳基，COR7，SOR8，其中R7和R8獨立地選自低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基和芳基；X選自具有2-6個碳原子的低級烷基，具有2-6個碳原子的低級鏈烯基，和具有2-6個碳原子的低級炔基，它們都可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代；或X選自式-(CH2)pQ(CH2)r-，其中p是1-3，r是1-3和Q是氧，C＝O，S(O)t，或NR12，其中t是0-2，R12是氫或可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代的低級烷基；或X選自式-(CH2)sA(CH2)v-，其中s是0-2，v是0-2和A是3至6元碳環(huán)基，其可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代，其中所述的所有基團可任選地用氫，鹵素和低級烷基取代；Y選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基，和R11選自5至6元雜環(huán)基，其中1至約4個雜原子是獨立地選自氧、氮和硫的雜原子，所述雜環(huán)基可任選地用低級烷氧基，低級烷基，鹵素，硝基，羧基，三氟甲基，和氨基取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1，R2獨立地選自氫和低級烷基；R3，R4獨立地選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基；X選自具有2-6個碳原子的低級烷基，具有2-6個碳原子的低級鏈烯基，和具有2-6個碳原子的低級炔基，它們都可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代；或X選自式-(CH2)pQ(CH2)r-，其中p是1-3，r是1-3和Q是氧，C＝O，S(O)t，或NR12，其中t是0-2，R12是氫或可任選地用低級烷基，低級烷氧基，羥基，鹵素，三氟甲基，硝基，氰基，氨基取代的低級烷基；Y選自低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，和低級炔基，和R11選自5至6元雜環(huán)基，其中1至4個雜原子是氮或硫，所述雜環(huán)基可任選地用羥基，低級烷氧基，低級烷基，鹵素，硝基，和羧基取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R1，R2是氫；R3，R4是氫；X選自具有2-6個碳原子的低級烷基，具有2-6個碳原子的低級鏈烯基，和具有2-6個碳原子的低級炔基；Y選自低級烷基或Y可以是NR9R10，其中R9和R10獨立地選自氫，烷基，低級鏈烯基，低級炔基，硝基，氨基，和低級烷芳基；和B是NR5R11，其中R5選自氫或低級烷基，和R11選自5至6元雜環(huán)基，其中1至4個雜原子是氮或硫。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中所述化合物選自2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-四唑-5-基)己酰胺水合物二鹽酸鹽；2S-氨基-5-[[氨基(硝基亞氨基)甲基]氨基]-N-(1H-四唑-5-基)戊酰胺鹽酸鹽；2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-咪唑-2-基)己酰胺二鹽酸鹽；2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-1，2，4-三唑-3-基)己酰胺二鹽酸鹽；2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(5-嘧啶基)己酰胺水合物二鹽酸鹽；2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(1H-吡唑-3-基)己酰胺水合物二鹽酸鹽；和2S-氨基-6-[(1-亞氨基乙基)氨基]-N-(噻唑-2-基)己酰胺二鹽酸鹽。
7.一種在需要所述抑制的患者中抑制一氧化氮合成的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1，2，3，4，5，6或7的化合物。
8.一種在需要所述抑制的患者中，相對于組成酶形式的NO合成酶產(chǎn)生的一氧化氮而言選擇性地抑制可誘導(dǎo)形式的NO合成酶產(chǎn)生的一氧化氮合成的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1，2，3，4，5，6或7的化合物。
9.一種在需要所述處理的患者中降低一氧化氮含量的方法，該方法包括施用治療有效量的權(quán)利要求1，2，3，4，5，6或7的化合物。
10.一種含有權(quán)利要求1，2，3，4，5，6或7的化合物和一種或多種可藥用載體的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有式(Ⅰ)的化合物和其可藥用鹽,其中B是NR
文檔編號C07D277/46GK1171104SQ95197112
公開日1998年1月21日 申請日期1995年11月8日 優(yōu)先權(quán)日1994年11月9日
發(fā)明者E·A·黑林南, 小D·W·漢森, S·齊巴洛夫 申請人:G·D·瑟爾公司