專利名稱：用于防治心血管疾病的含有珍珠菜提取物的組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種用于防治心血管病的含有珍珠菜(Lindera obtusiloba)的提取 物的組合物，以及功能保健食品。更具體地，本發(fā)明的特點是含有珍珠菜的提取物作為活性 成分，所述提取物通過直接抑制NAD (P)H氧化酶抑制氧化應激，同時激活內(nèi)皮型一氧化氮 合酶，從而調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞的收縮和舒張，具有防治心血管疾病的作用。
背景技術：
根據(jù)世界衛(wèi)生衛(wèi)生組織的統(tǒng)計信息(WHO)的報告，1999年，世界范圍內(nèi)心血管疾 病的死亡率為30%或更高，到2010年，在發(fā)達國家心血管疾病將成為致死率排名第一的疾 病，而在亞洲國家包括日本、韓國等，心血管疾病的增長率尤其高。人們推測這是由于冠狀 動脈疾病的危險因素增加所致，是正在到來的老齡化社會、飲食習慣的改變等因素導致的結果。內(nèi)皮功能障礙是誘導范圍廣泛的心血管疾病包括高血壓、動脈硬化、高血脂、糖 尿病、肥胖等的主要機制(Brunner H.等，J. Hypertens.，2005，23 :233_246)，在 1990 年， 人們就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)高血壓患者的血管異常舒張(Panza JA等，New England Journal of Medicine, 323 :22_27，1990)。內(nèi)皮細胞為沿著血管和淋巴管腔排列的上皮細胞，其主要功 能為生成血管舒張物質(zhì)和血管舒張介質(zhì)以調(diào)節(jié)血管張力和結構。心血管疾病開始時表現(xiàn)為內(nèi)皮功能障礙并最終導致心臟和血管系統(tǒng)異常。心血管 疾病是心臟和血管中的一組異常的泛稱，包括但不限于，動脈硬化、高血壓、高脂血癥、冠狀 動脈疾病(心臟病)、腦血管疾病(中風、老年癡呆癥)，周圍性血管疾病、心律失常、心力衰 竭、充血性心臟病、心肌疾病，等等。對于導致心血管疾病的主要因素，已知的多種因素為例如遺傳因素、生活方式、以 及糖尿病并發(fā)癥。從現(xiàn)代醫(yī)學的角度看，已知還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH) 氧化酶活性增加導致活性氧(ROS)和血管的氧化應激增加，以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶 (eNOS)減少導致一氧化氮減少為主要因素。由內(nèi)皮型一氧化氮合酶生成的一氧化氮是一 種強力血管舒張因子，通過抑制血小板聚集、血管平滑肌細胞增殖、單核細胞的血管粘附， 以及動脈粥樣硬化相關蛋白的表達而在心血管系統(tǒng)的整體穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中起到?jīng)Q定性作用 (Forstermann 等，Circulation, 113 1708-1714，2006)。然而，多種因子導致的負責生成 血管中活性氧的NADPH氧化酶的增加導致一氧化氮生成的減少[Gryglewski等.，Nature， 320 :454-456，1986 ；Paravicini 等，Circulation Research, 91 :54_61，2002 ；Dusting 等， Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology,25 :S34-41,1998], Μ Ι3 此生成的活性氧調(diào)節(jié)粘附分子的表達[Lo等，Am. J. Physio 1.，264 L406-412，1993]，刺 激血管平滑肌細胞(VSMC)的增殖和遷移[Griendling and Ushio-Fukai, J. Lab. Clin. Med. , 132 :9-15，1998]，調(diào)節(jié)具有氧化能力的脂蛋白等等，從而導致心血管疾病[Lynch and Frei, J. Lipid Res. ,34 :1745_1753，1993]。此外，NAD (P) H氧化酶引起的血管中活性氧生 成增加，與具有動脈粥樣硬化和冠狀動脈疾病的臨床風險因素的患者的內(nèi)皮一氧化氮(NO)
3的功能削弱有關。基本上，活性氧的產(chǎn)生導致血管收縮[Guzik等，Cir. Res. ,86 :E85_90， 2000]。一般來說，通過直接抑制AD(P)H氧化酶造成的活性氧減少、下游活性氧的產(chǎn) 生的抑制，以及內(nèi)皮型一氧化氮合酶的活性誘導被認為是心血管防治中非常重要的靶 標[Forstermann 等，Circulation, 113 :1708_1714，2006 ;Doggrell SA, Drug News Perspect. ,17(9)615-632,2004 ；Inoguchi Τ. , Curr. Drug Targets,6(4) :495_501，2005 ； Muzaffar S.等，Trends Cardiovasc Med. , 15(8) :278_282]。迄今為止，已知二亞苯基碘鐺(DPI)和4-羥基-3-甲氧基苯乙酮(夾竹桃麻素) 為抑制NAD (P) H氧化酶的物質(zhì)[Holland J，等，US5902831]。然而，因為毒性和專一性問題， 這些物質(zhì)尚未投入商用或臨床應用。此外，作為一氧化氮調(diào)節(jié)劑，可用的有硝普鈉和硝酸甘 油。然而，因為臨床應用中出現(xiàn)的抵抗和毒性問題，這些物質(zhì)也僅在緊急情況下，例如心臟 病發(fā)作時使用。同時，珍珠菜為多年生報春花科植物，是一種通常長在陽光底下的多年生草本植 物。它長到50至100厘米高，并以野生狀態(tài)生長于朝鮮全境以及生長于日本、滿洲諸省和 中國。它也被稱為鵝頸珍珠菜，已知可治療女性月經(jīng)不調(diào)、白帶異常、嬰兒體重減輕、水腫， 痢疾，擦傷、耳后疼痛等。私下里，珍珠菜已長期被用于治療月經(jīng)不調(diào)、痢疾和瘀傷。因為其 強酸味，珍珠菜還可在烹調(diào)時在酸味食品中應用[Illustrated Book of Korean Plants, by Chang-Bok Lee,1980 ；Illustrated Book of Korean Folk Medicines, by Jong-Hee Park,2005,Encyclopedia of Local Medicines ；Illustrated Book of Korean Medicinal Plants,by Chang-Su Yook,1989,Natural Herbs,Healthy Herbs,Young-Han Kwon,2006]o關于對珍珠菜成分的研究，已經(jīng)報道了黃芪甙、異槲皮甙、山奈酚-3-0-蕓香糖 苷、山奈酚-3-0-(2，6-di-0-吡喃鼠李糖基吡喃葡萄糖苷)、山奈酚-3-0-(吡喃鼠李糖基 吡喃葡萄糖苷)、(3-0-甲基-槲皮素-7-0-[a-L-吡喃鼠李糖基(1-2)-β-D-吡喃葡萄 糖苷)、(-)_表兒茶素，槲皮素-3-0- β -D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-0- β -D-吡喃葡萄糖 苷、和山奈酚-3-0-[ α-L-吡喃鼠李糖基(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖苷](Yasukawa K.，等， Yakugaku Zasshi,106,939,1986 Jin-Suk Kim，等，Yakhak Hoeji，4，325-330，1993)。已 報道了珍珠菜的提取物和分離成分的藥理作用為對食物中毒相關的微生物均有抗菌活性、 還具有抗癌活性、抗氧化作用等(Ji-Sook Han，等，Korean Journal of Food Science and Technology,33,772-783,2001 ；Ki-Hwan Bae,等，Korean Journal of Pharmacognosy,27, 173-177，1996 ；Seung-Eun Lee，等，J. Korean Soc. App 1. Biol. Chem.，47，265—269，2004)。然而，然而，上述文獻未曾披露或教導珍珠菜提取物通過抑制NADPH氧化酶而具 有抑制血管氧化應激、直接舒張血管、增強內(nèi)皮型一氧化氮合酶活性以及調(diào)節(jié)血壓的作用。 據(jù) Seung-Eun Lee 等(J.Korean Soc. Appl. Biol. Chem.，47，265-269，2004)的報道，珍珠菜 抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性。然而，該文章披露了盡管粗提物的濃度很高，高達4000 μ g/ ml，該提取物對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶僅有輕微抑制活性。此外，以此得出的結論是，珍珠菜的 正丁醇餾分對血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性未施加任何影響，相反增加了其活性(增加34%)。

發(fā)明內(nèi)容
技術問題
4
本發(fā)明人使用了大量植物提取物對抑制NAD(P)H氧化酶的活性和舒張作用進行 研究，并最終確證了強烈抑制NAD(P)H氧化酶活性、減少血管的氧化應激、直接增強內(nèi)皮型 一氧化氮合酶的活性、舒張血管和調(diào)節(jié)血壓的效果，從而完成了本發(fā)明。具體而言，與Seimg-Eim Lee等報道的相比，本發(fā)明證實了珍珠菜的粗提物在低濃 度下，低于10μ g/ml時，無論血管緊張素轉(zhuǎn)化酶如何作用，對血管舒張有直接作用。此外發(fā) 現(xiàn)，在采用正丁醇餾分時，前述作用得到增強。基于上述發(fā)現(xiàn)設計了本發(fā)明，，本明的目的是提供一種防治心血管疾病的組合物， 其包括珍珠菜提取物作為活性成分。本發(fā)明的另一個目的是提供一種防治心血管疾病的功能保健食品，其包括珍珠菜 提取物作為活性成分。技術方案為了實現(xiàn)上述目的，用于防治心血管疾病的組合物具有下述特點含有珍珠菜的 提取物作為活性成分。所述珍珠菜的提取物優(yōu)選從珍珠菜的樹葉或整棵植物中提取得到。所述珍珠菜的提取物優(yōu)選由選自水、C1-C5低級醇及其混合物的溶劑提取得到。此外，C1-C5低級醇優(yōu)選為甲醇、乙醇或丁醇。所述珍珠菜的提取物優(yōu)選由30_95wt%的乙醇水溶液提取得到。優(yōu)選所述珍珠菜的提取物由選自水、C1-C3低級醇及其混合物的溶劑提取，并用丁 醇再提取得到。還優(yōu)選珍珠菜的提取物由選自水、C1-C3低級醇及其混合物的溶劑提取，濃縮后得 到粗提物，將粗提物懸浮于水中，按己烷、乙酸乙酯和丁醇的順序進行再提取。珍珠菜的提取物優(yōu)選在30-95 °C下獲得。優(yōu)選粗提物和水以體積比1 5-25混合并懸浮。還優(yōu)選己烷、乙酸乙酯或丁醇與懸浮液以體積比1 0.1-2.0混合提取。所述丁醇優(yōu)選為正丁醇。所述珍珠菜的提取物的特點是具有NAD(P)H氧化酶抑制活性。所述珍珠菜的提取物的特點是具有血管舒張效用。所述珍珠菜的提取物的特點是具有增強內(nèi)皮型一氧化氮合酶活性的效用。所述珍珠菜的提取物的特點是具有降低血壓和減少血管氧化應激的作用。所述心血管疾病可選自下組充血性心臟病、冠狀動脈疾病(心臟病)、缺血性心 臟疾病(心肌缺血)、高脂血癥、動脈硬化、高血壓、低血壓、心律失常、心力衰竭、血管再狹 窄、腦血管疾病(中風、老年癡呆癥)、周圍性血管疾病和代謝性疾病。同時，防治心血管疾病的功能保健食品的特點是含有珍珠菜提取物作為活性成 分。有益效果如上所述，本發(fā)明的珍珠菜提取物能強烈抑制作為血管病主要病因的NAD(P)H氧 化酶，同時顯示出強效的舒張血管效應，因此可用于防治心血管疾病的藥物組合物或功能 性保健食品。


圖1示出了珍珠菜提取物對豬冠狀動脈的血管舒張作用的測定圖譜；圖2示出了珍珠菜提取物對白色大鼠主動脈的血管舒張作用的測定圖譜；圖3示出了在珍珠菜提取物作用下，內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)和Akt蛋白的活 性水平的測定圖譜；圖4示出了珍珠菜提取物對心率的影響水平的測定圖譜；圖5示出了在珍珠菜提取物作用下，血管氧化應激減少水平的測定圖譜；圖6示出了珍珠菜提取物的細胞毒水平的測定圖譜。
具體實施例方式以下將具體描述本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。下面對各種特征術語例如具體的組成要 素進行了詳細說明，但這些只是為了更全面的理解本發(fā)明，本領域技術人員容易知道沒有 這些特征術語也可以實施本發(fā)明。此外，在本發(fā)明的描述中，如果任何相關的已知功能或組 成的具體解釋被認為是不必要地使本發(fā)明不清楚，則這個具體的解釋應予以刪除。本發(fā)明的珍珠菜提取物可由如下方式獲得?？墒褂谜谜渲椴?，包括根和地上部分，來源形式不限，可以是從自然界收集的植 物、培育的植物、市售獲得的植物等等。提取用的溶劑選自水^1-C5低級醇及其混合物。本 發(fā)明的發(fā)明人對珍珠菜的葉子和樹枝進行了清洗以去除雜質(zhì)和鹽并對其進行干燥。隨后， 用極性溶劑例如水或C1-C5低級醇例如甲醇、乙醇或丁醇或其混合物進行提取，混合溶劑的 混合比例為約1 0.1-1 10，優(yōu)選使用30-95wt%的乙醇水溶液，溶劑的體積約為珍珠菜 樣品的5-50倍，優(yōu)選10-30倍，在50-95°C下提取1小時_7天。重復上述的提取步驟2_5 次，然后將所得產(chǎn)物減壓濃縮和/或凍干，得到珍珠菜粗提物。在本發(fā)明的提取物中，通過下述步驟可獲得非極性溶劑可溶的提取物將前述粗 提物懸浮于蒸餾水中，隨后加入相當于懸浮液體積0. 1-100倍，優(yōu)選1-5倍的非極性溶劑 例如己烷、乙酸乙酯或氯仿，提取分離1-10次，優(yōu)選2-5次。此外，可再進行常規(guī)的分餾步 驟(Harborne, J. B.，Phytochemical methods :A guide to modern techniques of plant analysis, 3rd Ed.，pp. 6-7,1998)。更優(yōu)選地，將前述步驟獲得的珍珠菜粗提物，優(yōu)選地，珍珠菜的乙醇水溶液提取物 用有機溶劑，例如正丁醇、己烷和乙酸乙酯進行順序溶劑分提，溶劑的使用順序為溶劑極性 由低至高，優(yōu)選的順序為己烷、乙酸乙酯和正丁醇，然后減壓濃縮，從而獲得己烷、乙酸乙酯 和正丁醇餾分。本發(fā)明提供防治心血管疾病的組合物，其含有由上述方法獲得的珍珠菜粗提物或 非極性溶劑可溶的提取物作為活性成分。本發(fā)明的防治心血管疾病的組合物按重量計含有0. 1-99%上述提取物，基于該組 合物的總重量。含有本發(fā)明珍珠菜提取物的組合物還可含有組合物制備中常用的合適的載體、賦 形劑和稀釋劑。本發(fā)明的提取物的藥物劑型可以藥用鹽的形式使用，也可單獨使用，或與其它藥 物活性化合物適當組配以復合物的形式使用。
含有本發(fā)明提取物的藥物組合物可根據(jù)常規(guī)方法分別制備成口服制劑例如粉末、 顆粒劑、片劑、膠囊劑、懸浮液、乳液、糖漿和氣霧劑，也可制成局部制劑、栓劑和無菌注射液 后使用。至于可包含于含提取物的組合物的載體、賦形劑和稀釋劑，可提及的有乳糖、右旋 糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、海藻酸鹽、明膠、磷 酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、非結晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、 羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂，及礦物油。就制劑的配制而言，可使用常規(guī)使用的稀釋劑或賦形劑，例如填充劑、膨脹劑、粘 合劑、潤濕劑、崩解劑和表面活性劑?？诜腆w制劑的示例包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊等，這些固體制劑通過混 合至少一種賦形劑例如，淀粉、碳酸鈣、蔗糖、乳糖、明膠等前述提取物中制得。此外，除了簡 單的賦形劑之外，也可使用乳化劑例如硬脂酸鎂和滑石粉?？诜后w制劑的示例包括懸浮液、內(nèi)用液體、乳液、糖漿等。這些液體制劑可包括 各種賦形劑，例如，潤濕劑、甜味劑、香精、防腐劑等，此外，水和液體石蠟是常規(guī)使用的簡單 稀釋劑。胃腸外給藥的制劑的示例包括菌水溶液、非水溶液、懸浮液、乳液、凍干制劑和栓 劑。作為非水溶劑或懸浮劑，可使用丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、注射酯如油酸乙酯 等。作為栓劑的底料，半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐溫、可可黃油、月桂精脂肪 (laurin fat)、甘油明膠等均可使用。本發(fā)明提取物優(yōu)選的給藥劑量可根據(jù)患者體重、疾病的嚴重程度、藥物劑型、給藥 途經(jīng)和周期變化有所不同，但可由本領域技術人員對此進行適當?shù)倪x擇。然而，為了得到更 好的效果，施予本發(fā)明提取物的理想的劑量為每天0. 0001-100mg/kg，優(yōu)選0. OOl-IOOmg/ kg?？梢惶旖o藥一次或一天給藥七次。給藥劑量絕不限于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明提供一種功能保健食品，其含有具有預防心血管疾病作用的前述提取物， 和可食用的食品添加劑。對于可添加珍珠菜提取物的功能保健食品。例如，可提及各種普通食品、飲料、口 香糖、茶葉、維生素復合物等。為了獲得預防心血管疾病的效果，也可將珍珠菜提取物添加到食品或飲料中。在 這種情況下，食品或飲料中的提取物含量基于食品的總重量為0. 01-15 %。保健飲料中的提 取物含量相對于飲料的總重量IOOg可為0. 02-5g，優(yōu)選0. 3-lg。本發(fā)明的功能保健飲料組合物除了含有指定比例的提取物作為必需成分外，對含 有的其它組分并不特別限定，其可含有其它成分，例如傳統(tǒng)飲料常用的各種芳香劑或天然 碳水化合物。上述天然碳水化合物的示例包括常見的糖，例如單糖，例如葡萄糖，果糖等，雙 糖，例如麥芽糖，蔗糖等，以及多糖，如糊精，環(huán)糊精等，和糖醇例如木糖醇、山梨醇和赤蘚糖 醇。除了前述的試劑之外，可作為芳香劑善加使用的還有奇異果甜蛋白、甜葉菊提取物，例 如萊鮑迪甙Adevaudioside A)、甘草酸等；以及合成的芳香劑，如，糖精、阿斯巴甜等。碳 水化合物的比例通常為每100克本發(fā)明的組合物，約1至20克，優(yōu)選約5至12克。除了這些，本發(fā)明的提取物可含有各種營養(yǎng)素、維生素、礦物質(zhì)(電解質(zhì))、合成和 天然芳香劑、著色劑和加重劑(奶酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、藻朊酸及其鹽、有機酸，保護性膠體增稠劑、PH值調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、醇，用于碳酸飲料的碳酸化劑等等。除 了這些之外，本發(fā)明的提取物可含有天然果汁、以及制備果汁飲料和蔬菜飲料用的果肉。這 些成分可以單獨或組合使用。在這種情況下，添加劑的比例并不重要，但通常選擇每100重 量份本發(fā)明的提取物，含0. 01至約20份添加劑。以下，將參照下述實施例和實驗例對本發(fā)明作更具體地描述。實施例1 珍珠菜耜提物的制備將從江原道(Kangwon-do)省采集的珍珠菜用水沖洗去除雜質(zhì)。然后干燥粉碎。在 提取容器中，加入25g粉碎的珍珠菜，和總量500ml70wt%的乙醇水溶液，在回流冷卻下于 70°C進行熱提取，重復三次，每次三小時。所得產(chǎn)物用濾紙過濾，并將濾液在40°C水浴中減 壓濃縮并凍干。結果，得到了 5. 3g珍珠菜粗提物。實施例2 珍珠菜耜提物的餾分的制備將實施例1獲得的珍珠菜粗提物，每份5g，分別懸浮于50ml純凈水中，按己烷、乙 酸乙酯和正丁醇的順序，每種溶劑50ml，對所得產(chǎn)物分別進行順序溶劑分提，提取三次，分 別得到各溶劑的餾分，將這些餾分減壓濃縮。結果得到了珍珠菜的己烷餾分、乙酸乙酯餾分 和正丁醇餾分。1 珍珠菜ffl提物對離0伊)!1氧北_舌{牛__1丨效果的測涼對上述實施例1和實施例2得到的珍珠菜粗提物和餾分抑制NAD (P) H氧化酶活 性的效果進行測定，NAD(P)H氧 化 酶為心血管疾病發(fā)展的指標酶。為實現(xiàn) 此目的，采用大白鼠的動脈平滑肌細胞(大鼠動脈平滑肌細胞；RASMC)和牛血管內(nèi)皮細 胞(牛主動脈內(nèi)皮細胞；BAECs)比較NAD(P)H氧化酶活性的變化。結果參見表1。首先， 將動脈平滑肌細胞和血管內(nèi)皮細胞分別與MEM(最基本培養(yǎng)基)、DMEM(Dulbecco’ s最基 本培養(yǎng)基)和10% FBS (胎牛血清)溶液混合，并將這些細胞在5% C02/37°C條件下分別 置于96孔板中培養(yǎng)24小時。然后在不含F(xiàn)BS的培養(yǎng)液中再培養(yǎng)24小時。穩(wěn)定細胞后， 將其用HBSS(Hank' s平衡鹽溶液)沖洗。將這些細胞與實施例1獲得的珍珠菜提取物 一起振蕩，然后使所得混合物反應15分鐘，再用HBSS沖洗。隨后，向反應液中加入IOOmM NAD(P)H 和 5μ M 光澤精(Lucigenin)，使用熒光讀數(shù)器(VictorLight, PerkinElmer)測量NAD (P)H氧化酶的活性1小時。本實驗重復3次，而每次操作重復2_7 次。隨后比較對照組 和樣品處理組的活性，計算IC50值。IC50 值為實驗材料的濃度，以μ g/ml表示，在此濃度下，50% NAD (P)H氧化酶活性受到抑制。表1
珍珠菜提取物對NAD (P) H氧化酶活性的抑制效果(單位μ g/ml)
IC50(BAECs)IC50 (RASMC)珍珠菜的樹枝粗提物3. 64. 6珍珠菜的丁醇餾分3. 62. 2珍珠菜的乙酸乙酯餾分3. 51. 8珍珠菜的己烷餾分20.26.2如表1所示，可以看出本發(fā)明的珍珠菜粗提物在抑制血管細胞的NAD(P)H氧化酶 活性方面具有極好的效果。此外，在這些餾分中，可以看到正丁醇提取物顯示出極好的效^ ο棚列2耳又_血籠碰_雕(■犬云滅禾口棚永)對實施例1和實施例2制備的珍珠菜粗提物和餾分的血管舒張作用進行確證。為 實現(xiàn)此目的，對豬心臟的冠狀動脈和大鼠主動脈的舒張作用進行了比較，結果示于表1、表 2(冠狀動脈)和表3(主動脈)。冠狀動脈取自屠宰場宰殺后即刻購買得到的豬心臟。主 動脈取自雄性SD(Sprague-Dawley)大白鼠，將其浸在含有18mM NaCl, 4. 7mM KC1，1. ImM MgSO4,1. 2mM KH2PO4,1. 5mM CaCl2, 25mMNaHC03 和 IOmM 葡萄糖的 Krebs 溶液中(ρΗ7· 4)以去 除結締組織和脂肪，然后切成長度約為3mm的樣品。將制備的冠狀動脈和主動脈樣品固定于37°C的Krebs溶液中，該溶液已用95% O2 和5% CO2氣體充飽和。用裝配有壓力移動傳感器(Hugo Sachs,Germany)的Grass生理記 錄儀(Grass physiograph) (Hugo Sachs, Germany)測量樣品的等長張力。對于冠狀動脈， 首先使用U46619(l-60nM)，一種血栓素衍生物，將動脈收縮至最大血管收縮的80%。這之 后10分鐘，用10 μ M乙酰膽堿舒張主動脈，測定血管內(nèi)皮細胞的安全性。然后用Krebs溶液 沖洗主動脈三次以進行試驗。通過下述步驟測量血管舒張作用的變化首先用藥物U46619 收縮動脈，然后以濃度依賴性的方式測定珍珠菜提取物誘導的舒張反應。對于大白鼠的主動脈，用苯腎上腺素將主動脈收縮至最大血管收縮的80%。這之 后15分鐘，用300ηΜ緩激肽(Bradykinin)舒張動脈，測定血管內(nèi)皮細胞的安全性。然后用 Krebs溶液沖洗動脈三次以進行試驗。通過下述步驟測量血管舒張作用的變化首先用藥 物苯腎上腺素收縮主動脈，然后以濃度依賴性的方式測定珍珠菜粗提物和餾分提取物誘導 的舒張反應。采用取自5-10個不同個體的的血管重復進行實驗。ED50值是指樣品的濃度 (μ g/ml)，在此濃度下，用樣品處理的結果為收縮的血管顯示出50%的血管舒張作用。表2珍珠菜提取物對豬冠狀動脈的舒張作用(單位μ g/ml)
ED50珍珠菜的粗提物9. 4珍珠菜的丁醇餾分5. 0珍珠菜樹葉的乙酸乙酯餾分26. 8表3珍珠菜提取物對白大鼠主動脈的舒張作用(單位μ g/ml)
9
權利要求
一種用于防治心血管疾病的組合物，其含有珍珠菜(Lysimachia clethroides)的提取物作為活性成分。
2.根據(jù)權利要求1所述的防治心血管疾病的組合物，其中所述珍珠菜的提取物為其樹 葉或整棵植物的提取物。
3.根據(jù)權利要求1所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物由選 自水、C1-C5低級醇及其混合物的溶劑提取得到。
4.根據(jù)權利要求3所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物由 30-95wt %的乙醇水溶液提取得到。
5.根據(jù)權利要求3所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物由選 自水、C1-C3低級醇及其混合物的溶劑提取，并用丁醇再提取得到。
6.根據(jù)權利要求3所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物由選 自水、C1-C3低級醇及其混合物的溶劑提取，濃縮后得到粗提物，將粗提物懸浮于水中，按己 烷、乙酸乙酯和丁醇的順序進行再提取。具有NAD (P) H氧化酶抑制活性。
7.根據(jù)權利要求1所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物具有 NAD (P) H氧化酶抑制活性。
8.根據(jù)權利要求1所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述珍珠菜的提取物具有 血管舒張作用。
9.根據(jù)權利要求1-8任一項所述的防治心血管疾病的組合物，其中，所述心血管疾病 選自下組充血性心臟病、冠狀動脈疾病(心臟病)、缺血性心臟疾病(心肌缺血)、高脂血 癥、動脈硬化、高血壓、低血壓、心律失常、心力衰竭、血管再狹窄、腦血管疾病(中風、老年 癡呆癥)、周圍性血管疾病和代謝性疾病。
10.用于預防心血管疾病的功能保健食品，含有珍珠菜的提取物作為活性成分。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于防治心血管疾病的組合物，所述組合物含有珍珠菜(Lysimachia clethroides)提取物。更具體地，所述珍珠菜提取物能強烈抑制作為血管病主要誘因的NAD(P)H氧化酶，并同時調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮和舒張，表現(xiàn)出強力的舒張血管效應，從而能改善血壓調(diào)節(jié)以及血管內(nèi)皮功能障礙。因此，含有珍珠菜提取物作為活性成分的組合物可有效地用于防治心血管疾病。
文檔編號A61K36/185GK101969969SQ200880125072
公開日2011年2月9日 申請日期2008年12月17日 優(yōu)先權日2008年1月18日
發(fā)明者孫正德, 崔云善, 李廷鈺, 李正根, 林智雄, 玉珉鎬, 金鐘勛 申請人:楊智化學(株);韓和制藥(株)