專利名稱：一種醋酸去氨加壓素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多肽類藥物生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種制備醋酸去氨加壓素的方法。
背景技術(shù)：
醋酸去氨加壓素,藥物別名彌凝(Minirin),英文名稱Desmopressin Acetate。是一種泌尿系統(tǒng)用藥，主要用于中樞性尿崩癥、夜間遺尿及血友病等，也用于腎尿液濃縮功能的測(cè)試，也可用作術(shù)后止血。
目前國(guó)內(nèi)醋酸去氨加壓素的制備方法主要由液相法和固相法。液相法產(chǎn)生較多廢液，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，難純化、后處理繁瑣等問題，但在合適的濃度氧化成環(huán)效率極高，畐1J 產(chǎn)物較小。固相法合成 Mpa (trt)-Tyr (tBu)-Phe-Gln (trt)-Asn (trt)_Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin雖然高效簡(jiǎn)單,分子間成環(huán)肽產(chǎn)率極低，同時(shí)要求氨基樹脂取代率較小等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明人提供了一種醋酸去氨加壓素的制備方法。本方法具有高收率、低成本、環(huán)境友好、有利于規(guī)?；a(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種醋酸去氨加壓素的制備方法，具體制備方法如下
(1)制備Fmoc-Gly-AM Resin
Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶脹，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌，然后用25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺脫Fmoc保護(hù)基，洗滌后得到A產(chǎn)物；
取Fmoc-Gly-OH，I-羥基苯并三唑，N, N’ - 二異丙基碳二亞胺加入到無水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入A產(chǎn)物，在25 35°C反應(yīng)2 4 h后洗滌，得到Fmoc-Gly-AMResin ；
(2)制備Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin
將步驟(I)所得Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，用25%哌啶/N，N-二甲基甲酰胺脫Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保護(hù)基，，洗滌后得到B產(chǎn)物；
取Fmoc-D-Arg-OH，1_羥基苯并三唑，N，N’ - 二異丙基碳二亞胺加入到無水N，N-二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入B產(chǎn)物，在25 35°C反應(yīng)廣3 h后洗滌，得到Fmoc-D-Arg-Gly-AM Resin ；
重復(fù)上述過程，依次偶聯(lián) Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -OH、Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu) -OH、Mpa (trt) -OH,全部偶聯(lián)完畢后，得到Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin ；
(3 )裂解 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin
將三氟乙酸與苯甲硫醚按照質(zhì)量比94:6混合配制成裂解液，取裂解液，加入步驟(2)制備好的 Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg- Gly-AMResin中，裂解初始溫度為0 5°C，保持O. 5 lh，逐漸升到2(T30°C，保持2h，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-CyS-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ；
(4)氧化成環(huán)
將步驟(3)Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 加入適量純化水中，配制成2g/L溶液,加入氧化劑雙氧水lml/L氧化液,反應(yīng)I. 5^2. Oh,得到Mpa-Cys成環(huán)的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ;最后經(jīng)過高效液相純化和真空凍干得到高質(zhì)量醋酸去氨加壓素。本發(fā)明有益的技術(shù)效果在于
本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，原料投料少，成本低，純度高等優(yōu)點(diǎn)，采用固-液結(jié)合的合成方法，具有固相合成法和和液相合成法高效，簡(jiǎn)單，同時(shí)也避免了二者的缺點(diǎn)相比于液相法減少了大量廢液，同時(shí)沒有固相環(huán)化帶來的聚合副產(chǎn)物，極大地提高了純度和收率。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體描述。步驟I :制備 Fmoc-Gly-AM Resin。稱取Rink AM Resin (一種常見試劑,具體為一種帶連接臂的氨基樹脂)樹脂10 g加入固相合成管中，用50 mL 二氯甲烷浸泡30 min，使樹脂充分溶脹，依次用70 mL N，N-二甲基甲酰胺洗滌2次，依次用70 mL 25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺在30°C脫Fmoc保護(hù)基2次,第一次5 min、第二次15 min,中間用70 mL無水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次。然后依次用70 mL無水N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各洗滌2、1、1、2次。稱取Fmoc-Gly-OH (N-荷甲氧輕基保護(hù)甘氨酸)4 g, I-輕基苯并三唑I. 5 g,N，N’- 二異丙基碳二亞胺1.8 mL加入到10 mL無水N，N-二甲基甲酰胺，在(T5°C活化5min。加入上述固相合成管在30°C反應(yīng)3 h，反應(yīng)終點(diǎn)以茚三酮法檢測(cè)為準(zhǔn)。依次用70 mL無水N, N- 二甲基甲酰胺洗漆2次,每次不少于I min,得到Fmoc-Gly-AM Resin。步驟 2 Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin的制備。將5 g Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，依次用70 mL 25%哌啶/N，N-二甲基甲酰胺在30°C脫Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保護(hù)基2次,第一次5 min、第二次15 min,中間用70 mL無水N, N-二甲基甲酰胺洗漆一次,不少于I min。依次用70 mL無水N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺各洗滌2、1、1、2次，每次不少于lmin。稱取Fmoc-D-Arg-OH 3. 5 g, I-輕基苯并三唑1.3 g, N, N’ - 二異丙基碳二亞胺1.5 mL加入到10 mL無水N，N-二甲基甲酰胺，在(T5°C活化5 min，加入上述固相合成管在30°C反應(yīng)2 h，反應(yīng)終點(diǎn)以茚三酮法檢測(cè)為準(zhǔn)。依次用70 mL無水N，N-二甲基甲酰胺洗滌2 次，每次不少于 I min,得 Fmoc- D-Arg-Gly-AM Resin。
重復(fù)上述過程，依次偶聯(lián)Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -ΟΗλ Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu)-OH、Mpa (trt)-OH。全部偶聯(lián)完畢后，得到 Mpa (trt) -Ty r (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly -AM Resin0步驟(3):裂解Mpa (trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln-Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AM Resin。將三氟乙酸與苯甲硫醚按照質(zhì)量比94:6混合配制成裂解液，取30ml該裂解液，加入 15g 步驟(2)制備好的 Mpa(trt)-Tyr (tBu) -Phe-Gly-Asn (trt) -Cys (trt) -Phe-D-Arg-Gly-AM Resin中，裂解初始溫度為0 5°C，保持O. 5h，逐漸升到2(T30°C，保持lh，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH30步驟(4):氧化成環(huán)。將步驟(3)Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3加入適量純化水中，配制成2g/L溶液，加入氧化劑雙氧水lml/L氧化液，反應(yīng)I. 5^2. Oh，得到Mpal_Cys6 二硫健成環(huán)的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3 ;最后經(jīng)過高效液相純化和真空凍干
得到高質(zhì)量醋酸去氨加壓素。以上內(nèi)容是醋酸去氨加壓素合成路線最佳優(yōu)選方案之一，以對(duì)本發(fā)明所做的進(jìn)一步詳細(xì)說明，但并不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只限于這些說明，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演及替換，都應(yīng)當(dāng)視為本發(fā)明保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種醋酸去氨加壓素的制備方法，其特征在于具體制備方法如下(1)制備Fmoc-Gly-AM Resin Rink AM Resin用二氯甲烷浸泡至充分溶脹，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌，然后用25%哌啶/N，N- 二甲基甲酰胺脫Fmoc保護(hù)基，洗滌后得到A產(chǎn)物； 取Fmoc-Gly-OH，I-羥基苯并三唑，N，N’ - 二異丙基碳二亞胺加入到無水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入A產(chǎn)物，在25 35°C反應(yīng)2 4 h后洗滌，得到Fmoc-Gly-AMResin ；(2)制備Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin 將步驟(I)所得Fmoc-Gly-AM Resin加入固相合成管中，用25%哌啶/N，N- 二甲基甲 酰胺脫Fmoc-Gly-AM Resin上的Fmoc保護(hù)基，，洗滌后得到B產(chǎn)物； 取Fmoc-D-Arg-OH，I-羥基苯并三唑，N，N’ - 二異丙基碳二亞胺加入到無水N，N- 二甲基甲酰胺中，在(T5°C活化后加入B產(chǎn)物，在25 35°C反應(yīng)廣3 h后洗滌，得到Fmoc-D-Arg-Gly-AM Resin ； 重復(fù)上述過程，依次偶聯(lián) Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys (trt) -OH、Fmoc-Asn (trt) - OH、Fmoc-Gln (trt) -OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Tyr (tBu)-OH、Mpa(trt)_0H，全部偶聯(lián)完畢后，得到 Mpa(trt) -Tyr(tBu) -Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D- Arg-Gly-AM Resin ；(3)裂解Mpa(trt) -Tyr (tBu) -Phe-Gln (trt) -Asn (trt) -Cys (trt) -Pro-D-Arg-Gly-AMResin 將三氟乙酸與苯甲硫醚按照質(zhì)量比94:6混合配制成裂解液，取裂解液，加入步驟(2)制備好的 Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D -Arg-Gly-AMResin中，裂解初始溫度為0 5°C，保持0. 5 lh，逐漸升到20 30°C，保持I 2h，得到Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3； (4)氧化成環(huán) 將步驟(3)制備得到的 Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 加入適量純化水中，配制成2g/L溶液，加入氧化劑雙氧水lml/L氧化液，反應(yīng)I. 5^2. Oh，得到Mpa-Cys成環(huán)的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D_Arg-Gly-NH3 ;最后經(jīng)過高效液相純化和真空凍干得到高質(zhì)量醋酸去氨加壓素。
全文摘要
一種醋酸去氨加壓素的制備方法，屬于多肽類藥物生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體制備方法為將RinkAMResin和Fmoc-Gly-OH進(jìn)行反應(yīng)，生成Fmoc-Gly-AMResin，然后依次偶合Fmoc-D-Arg-OH等基團(tuán)生成Fmoc-Mpa(trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(trt)-Asn(trt)-Cys(trt)-Pro-D-Arg-Gly-AMResin，脫Fmoc后裂解、氧化得到1-6成環(huán)的Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-D-Arg-Gly-NH3，最后純化、真空凍干得到醋酸去氨加壓素。本方法收率高、成本低、環(huán)境友好、有利于規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C07K7/06GK102863513SQ20121033604
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者楊毅躍, 康國(guó)偉, 姚程成, 蒙相鋒, 魯堯 申請(qǐng)人:無錫市凱利藥業(yè)有限公司