專利名稱：一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法。
背景技術(shù)：
沙苑子來源于豆科植物扁莖黃芪Astragalus complanatus R.Br.的干燥成熟種子。甘，溫。歸肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)腎助陽，固精縮尿，養(yǎng)肝明目的功效。用于腎虛腰痛，遺精早泄，遺尿尿頻，白濁帶下，眩暈，目暗昏花。有文獻(xiàn)報(bào)道沙苑子對(duì)血液流變學(xué)、免疫功能、血壓和腦血流量均有影響，并且還有解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、耐寒、抗疲勞、抗炎和降脂保肝的作用。沙苑子所含化學(xué)成分主要有氨基酸、黃酮類、三萜類、脂肪酸以及微量元素等。其中黃酮是沙苑子的主要有效成分之一，具有許多藥理活性。藥理研究表明沙苑子總黃酮有明顯的降低血清膽固醇、甘油三脂，減輕肝脂肪變形作用，還可降低脂蛋白-膽固醇含量。近年來研究認(rèn)為沙苑子總黃酮可保護(hù)大鼠重要器官免受運(yùn)動(dòng)損傷，明顯提高大鼠的運(yùn)動(dòng)能力，抑制肝纖維化形成，抗腫瘤E4-63，此外對(duì)SHR和RHR-83有明顯的降壓作用。沙苑子苷A是沙苑子黃酮的主要特征性成分，且在沙苑子中的含量較高，也是沙苑子保肝抗肝纖維化的主要有效成分之一。吳文倩等在文獻(xiàn)“沙苑子中沙苑子苷A對(duì)照品的制備及鑒定”中介紹了沙苑子苷 A對(duì)照品的制備方法，該方法取沙苑子粗粉石油醚脫脂，80%乙醇提取，ZTC-5黃酮大孔吸附樹脂吸附，50%乙醇洗脫，經(jīng)聚酰胺柱層析，水及不同濃度乙醇梯度洗脫，再上硅膠柱，用醋酸乙酯甲醇梯度洗脫，醋酸乙酯甲醇(10 2)洗脫部位析出沙苑子苷A結(jié)晶，甲醇進(jìn)行多次重結(jié)晶，得淡黃色針狀結(jié)晶。此法經(jīng)過三次柱層析，生產(chǎn)周期長，損失較大，回收率低，難以擴(kuò)大生產(chǎn)。申請(qǐng)?zhí)枮?00910057073. 3的中國專利介紹了一種沙苑子苷A的制備方法，該法采用80%乙醇提取、乙酸乙酯萃取、水飽和正丁醇萃取，然后用大孔樹脂吸附，10-30%甲醇、 50-70%甲醇洗脫，50-70%乙醇洗脫部分濃縮至干，甲醇溶解，上反相C18柱，30-50%甲醇洗脫，濃縮至干、重結(jié)晶即得，純度在98 %以上。此法使用大量有機(jī)溶劑和有毒的甲醇溶液， 溶劑殘留較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，尤其是采用膜濾技術(shù)、大孔樹脂吸附、中壓柱層析方法制備高純度沙苑子苷的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于包括以下步驟取沙苑子用堿性水或堿性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統(tǒng)，收集透過液，透過液濃縮后再加酸調(diào)PH至3-5，沉淀加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次，除去脂溶性雜質(zhì)，水層加入沉淀劑澄清，液體經(jīng)大孔樹脂吸附，40-70 %乙醇洗脫，洗脫液濃縮成浸膏，加入中壓硅膠柱分離純化，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶即得沙苑子苷。所述的堿性水為氨水溶液、氫氧化鈉溶液、碳酸氫鈉溶液、石灰水，所述的堿性稀醇溶液中醇為乙醇，濃度為40-60%，液料比為8-20 1。所述的提取方法為加熱回流法、超聲提取、滲漉提取、微波提取或煎煮法。所述的超濾膜為截留分子量4000-10000的管式復(fù)合超濾膜。所述的石油醚加入量為沉淀體積的4-8倍。所述的沉淀劑為ZTC澄清劑、CTS中藥澄清劑、去乙酰殼聚糖中的任一種，加入量為液體的0.6% -2.2%。所述的大孔樹脂為DS401、HZ818、LS-303、ADS-21中的一種，洗脫劑用量為4_8倍柱體積。所述的中壓硅膠柱柱長為50-300cm，柱直徑為5-lOOcm，填充硅膠目數(shù)為100-300 目，柱壓為0. l-4MPa。所述的乙酸乙酯-乙醇混合溶劑比例為20 1-2 1。本發(fā)明的有益效果生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品純度高，所用試劑低毒性，可回收利用，便于工業(yè)連續(xù)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:取沙苑子原料5kg投入小型提取罐中，加入8倍量2 %氫氧化鈉溶液滲漉提取至滲漉液顏色變淺，合并滲漉液，加入截留分子量6000的管式復(fù)合超濾膜系統(tǒng)超濾，透過液濃縮成浸膏后加鹽酸調(diào)PH至3. 5，濾出沉淀，沉淀物加熱回流溶解，放冷，用5倍體積石油醚萃取2次，水層加入2. 2% CTS中藥澄清劑，靜置，離心，清液上HZ818大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質(zhì)，再以50%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將100-200目硅膠4kg用乙酸乙酯混懸后，均勻加入柱長200cm，內(nèi)徑20cm的不銹鋼層析柱中，驅(qū)除氣泡，壓力控制在 0.3MPa，將200g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進(jìn)樣，上樣后以乙酸乙酯-乙醇20 :1-2:1 梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥，得沙苑子苷2. 5g，純度98.4%?；厥盏南疵搫┙?jīng)再生后可作下次重復(fù)使用。實(shí)施例2:取沙苑子原料^g投入小型提取罐中，加入15倍量3%石灰水溶液超聲提取4次， 每次1小時(shí)，合并提取液，加入截留分子量4000的管式復(fù)合超濾膜系統(tǒng)超濾，透過液濃縮成浸膏后加鹽酸調(diào)PH至3. 0，濾出沉淀，沉淀物加熱回流溶解，放冷，用4倍體積石油醚萃取3 次，水層加入1.5%去乙酰殼聚糖，靜置，離心，清液上ADS-21大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質(zhì)，再以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將200480目硅膠6kg用乙酸乙酯混懸后，均勻加入柱長100cm，內(nèi)徑5cm的不銹鋼層析柱中，驅(qū)除氣泡，壓力控制在0. 8MPa，將 200g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進(jìn)樣，上樣后以乙酸乙酯-乙醇20 1-2 1梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥，得沙苑子苷2. 3g，純度98.7%?；厥盏南疵搫┙?jīng)再生后可作下次重復(fù)使用。
實(shí)施例3:取沙苑子原料IOkg投入小型提取罐中，加入20倍量5%氨水醇溶液(醇濃度為 50% )煎煮，過濾，合并提取液，加入截留分子量5000的管式復(fù)合超濾膜系統(tǒng)超濾，透過液濃縮成浸膏后加鹽酸調(diào)PH至4. 0，濾出沉淀，沉淀物加熱回流溶解，放冷，用8倍體積石油醚萃取2次，水層加入1. 2% CTS中藥澄清劑，靜置，離心，清液上LS-303大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質(zhì)，再以40%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將150-250目硅膠IOkg用乙酸乙酯混懸后，均勻加入柱長250cm，內(nèi)徑50cm的不銹鋼層析柱中，驅(qū)除氣泡，壓力控制在 2. 3MPa，將400g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進(jìn)樣，上樣后以乙酸乙酯-乙醇20 :1-2:1 梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥，得沙苑子苷5. 0g，純度98.2%?；厥盏南疵搫┙?jīng)再生后可作下次重復(fù)使用。實(shí)施例4 取沙苑子原料IOkg投入小型提取罐中，加入16倍量3%碳酸氫鈉醇溶液(醇濃度為40% )微波提取3次，每次45分鐘，合并提取液，加入截留分子量8000的管式復(fù)合超濾膜系統(tǒng)超濾，透過液濃縮成浸膏后加鹽酸調(diào)PH至4. 5，濾出沉淀，沉淀物加熱回流溶解，放冷，用6倍體積石油醚萃取3次，水層加入0. 6% ZTC1+1澄清劑，靜置，離心，清液上DS401大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質(zhì)，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將300-400 目硅膠8kg用乙酸乙酯混懸后，均勻加入柱長300cm，內(nèi)徑80cm的不銹鋼層析柱中，驅(qū)除氣泡，壓力控制在3. 6MPa,將400g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進(jìn)樣，上樣后以乙酸乙酯-乙醇 20 1-2 1梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監(jiān)測(cè)，合并高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試齊U，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥，得沙苑子苷4. 9g，純度98.5%。回收的洗脫劑經(jīng)再生后可作下次重復(fù)使用。
權(quán)利要求
1.一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于包括以下步驟取沙苑子用堿性水或堿性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統(tǒng)，收集透過液，透過液濃縮后再加酸調(diào)PH至3-5，沉淀加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次，除去脂溶性雜質(zhì)，水層加入沉淀劑澄清，液體經(jīng)大孔樹脂吸附，40-70%乙醇洗脫，洗脫液濃縮成浸膏，加入中壓硅膠柱分離純化，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，氯仿-甲醇(3 1)重結(jié)晶即得沙苑子苷。
2.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的堿性水為氨水溶液、氫氧化鈉溶液、碳酸氫鈉溶液、石灰水，所述的堿性稀醇溶液中醇為乙醇， 濃度為40-60%，液料比為8-20 1。
3.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的提取方法為加熱回流法、超聲提取、滲漉提取、微波提取或煎煮法。
4.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的超濾膜為截留分子量4000-10000的管式復(fù)合超濾膜。
5.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的石油醚加入量為沉淀體積的4-8倍。
6.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的沉淀劑為ZTC澄清劑、CTS中藥澄清劑、去乙酰殼聚糖中的任一種，加入量為液體的 0. 6% -2. 2%。
7.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的大孔樹脂為DS401、HZ818、LS-303、ADS-21中的一種，洗脫劑用量為4_8倍柱體積。
8.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的中壓硅膠柱柱長為50-300cm，柱直徑為5-lOOcm，填充硅膠目數(shù)為100-300目，柱壓為 0.l-4MPa。
9.如權(quán)利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特征在于，所述的乙酸乙酯-乙醇混合溶劑比例為20 1-2 1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，取沙苑子用堿性水或堿性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統(tǒng)，收集透過液，透過液酸調(diào)pH至3-5，沉淀加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取除去脂溶性雜質(zhì)，水層再加入沉淀劑澄清，液體經(jīng)大孔樹脂吸附、中壓硅膠柱分離純化、氯仿-甲醇重結(jié)晶得到較高純度的產(chǎn)品，所得產(chǎn)品純度可達(dá)98％以上。本發(fā)明方法采用膜分離技術(shù)，提高了沙苑子苷的純度，并減輕了樹脂的損害，延長了樹脂的使用壽命，另外中壓硅膠柱生產(chǎn)周期短，在提取純化過程中，大部分使用食用乙醇，污染少。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102558259SQ201010603920
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司