專利名稱：一種亥茅酚苷的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分的分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種亥茅酚苷的分離純化方法。
背景技術(shù)：
防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng) Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根。是我國常用大宗藥材之一，具有解表祛風(fēng)、勝濕、止痙功能，用于感冒頭疼、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)等治療。防風(fēng)主要的活性成分為升麻素苷、升麻素、5-0-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷等色原酮類以及多糖、香豆素類等，現(xiàn)代藥理研究表明防風(fēng)色原酮具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抗血小板聚集等多種功效，用于治療腦震蕩、小兒呼吸道感染、過敏性皮炎、面神經(jīng)炎、牙痛等。迄今為止，防風(fēng)色原酮的藥理活性、應(yīng)用及其制備方法研究較少。專利200710001127. 5提供了一種防風(fēng)總色原酮提取物及其制備方法，該發(fā)明通過溶劑萃取、 大孔吸附樹脂法等多種防風(fēng)制備獲得總色原酮含量5-100%的總色原酮提取物，但并未對各個單體成分進(jìn)行分離純化，只是混合物。本發(fā)明通過對亥茅酚苷的提取純化為亥茅酚苷的含量測定提供有效的對照品來源，從而為防風(fēng)及其制劑的指標(biāo)物的測定、更全面反應(yīng)其內(nèi)在質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種亥茅酚苷的分離純化方法。本發(fā)明通過對亥茅酚苷的提純工藝進(jìn)行全面的考察，確定了最佳的純化工藝，成功對亥茅酚苷進(jìn)行了分離提純。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于包含以下步驟將防風(fēng)色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑，加熱回流溶解，回收試劑至總體積的1/10-6/10， 加入大孔樹脂柱吸附，水洗柱至糖反應(yīng)為陰性，再以50-80%乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮至浸膏狀，將浸膏通過凝膠柱層析分離純化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，收集下注液，薄層檢測，合并相同流分，低溫干燥，丙酮重結(jié)晶，減壓抽濾、冷凍干燥或冷噴霧得亥茅酚苷。所述防風(fēng)色原酮提取物為總色原酮含量5-20%的提取物。所述加熱回流溶解時間為1-4小時，溫度為60_85°C。所述大孔樹脂型號可選D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一種，洗脫劑用量為 3-8BV，柱層析次數(shù)為1-3次。所述萃取步驟中石油醚的用量為浸膏體積的2-4倍，乙酸乙酯的用量為浸膏體積的3-6倍。所述凝膠柱層析柱填料包括kphadex LH-20, Sephadex G, Toyopearl 冊_40。所述凝膠柱層析洗脫條件為甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，體積百分比為 50-100%。
本方法利用大孔樹脂和凝膠層析柱分離等方法，從低純度的防風(fēng)總色原酮提取物中分離得到含量大于95%的亥茅酚苷。該方法工藝簡單、收率高、適合小規(guī)模生產(chǎn)，在分離純化過程可分離得到其他色原酮單體成分，達(dá)到聯(lián)產(chǎn)、提高經(jīng)濟(jì)效益的目的。
具體實施例方式以下將結(jié)合實施例對發(fā)明作進(jìn)一步說明，但并不限制本發(fā)明的范圍。實施例1 取500g防風(fēng)色原酮提取物，用2. 5L90%乙醇加熱回流提取，溫度控制在70°C左右，提取2次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的D140大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以60 %乙醇洗脫，流速1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1. 15，加IOOml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用150ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的 Toyopearl HW-40 (200g)柱層析，用80%甲醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液， 合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 74%。實施例2:取500g防風(fēng)色原酮提取物，用2.0L70%丙酮加熱回流提取，溫度控制在65°C左右，提取3次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的HPD600大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h，吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以80%乙醇洗脫，流速 1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1. 18，加120ml石油醚萃取， 萃取2次，棄去萃取液，再用180ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的kphadex G(200g)柱層析，用60%乙醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分， 低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 。實施例3:取IOOOg防風(fēng)色原酮提取物，用5L90%甲醇加熱回流提取，溫度控制在80°C，提取2次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的D140大孔樹脂柱吸附， 上柱流速0. 5BV/h，吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以75%乙醇洗脫，流速1.0L/ h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1.20，加170ml石油醚萃取，萃取 2次，棄去萃取液，再用200ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的Toyopearl HW-40(400g)柱層析，用70%丙酮水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 87%。實施例4 取1500g防風(fēng)色原酮提取物，用6L80%丙酮加熱回流提取，溫度控制在75°C左右， 提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為2L的HPD100大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以60%乙醇洗脫，流速1. OL/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1. 17，加150ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用300ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的 SephadexLH-20(700g)柱層析，用60%甲醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液， 合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 13%。實施例5
取2500g防風(fēng)色原酮提取物，用7. 5L75 %乙醇加熱回流提取，溫度控制在60°C 左右，提取2次，每次2. 5小時，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為2L的 HPD600大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以 70%乙醇洗脫，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1. 12，加 500ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用400ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好Wkphadex G(Ikg)柱層析，用50%乙醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 22%。實施例6 取5000g防風(fēng)色原酮提取物，用25L85%甲醇加熱回流提取，溫度控制在85°C 左右，提取3次，每次1. 5小時，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為3L的 HPD700大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 8BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以 80%乙醇洗脫，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1. 13，加 800ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用IL乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的kphadex LH-20(2kg)柱層析，用80%丙酮水溶液洗脫，薄層監(jiān)測，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 79%。
權(quán)利要求
1.一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于包含以下步驟將防風(fēng)色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑，加熱回流溶解，回收試劑至總體積的1/10-6/10，加入大孔樹脂柱吸附，水洗柱至糖反應(yīng)為陰性，再以50-80%乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮至浸膏狀，將浸膏通過凝膠柱層析分離純化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，收集下注液，薄層檢測，合并相同流分， 低溫干燥，丙酮重結(jié)晶，減壓抽濾、冷凍干燥或冷噴霧得亥茅酚苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述防風(fēng)色原酮提取物為總色原酮含量5-20%的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述加熱回流溶解時間為1-4小時，溫度為60-85°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述大孔樹脂型號可選 D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一種，洗脫劑用量為3-8BV，柱層析次數(shù)為1_3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述萃取步驟中石油醚的用量為浸膏體積的2-4倍，乙酸乙酯的用量為浸膏體積的3-6倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述凝膠柱層析柱填料包括 S印hadex LH-20、S印hadex G、Toyopearl HW_40o
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述凝膠柱層析洗脫條件為甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，體積百分比為50-100%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征是通過大孔樹脂吸附和凝膠柱層析法從防風(fēng)色原酮提取物中分離純化亥茅酚苷的方法。所述方法以市售防風(fēng)色原酮提取物為原料，包括溶劑回流溶解，樹脂吸附、有機(jī)溶劑萃取、凝膠柱層析分離純化、重結(jié)晶等步驟，其特征在于以甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑為溶解溶媒，加熱回流1-3小時，經(jīng)樹脂吸附分離得到富集亥茅酚苷的部位，再經(jīng)凝膠柱層析分離純化亥茅酚苷。本發(fā)明所述的亥茅酚苷的提取方法簡單，重現(xiàn)性高，干燥溫度低，產(chǎn)品質(zhì)量好，純度高。
文檔編號C07H17/07GK102532220SQ201010603919
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司