專利名稱：一種從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種從燈盞花素中大量快速分離高純度野黃芩苷的方法，屬于植物 中有效成分提取分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
燈盞花素是從菊科植物短葶飛蓬(Erigeronbreviscapus (Vant.) Hand. -Mazz., 又名燈盞細(xì)辛，燈盞花)中分離出來的一類黃酮類成分，主要含有野黃芩苷、燈盞花甲素 等，其中野黃芩苷(Scutellarin)的含量在80%左右(HPLC法檢測)是其主要活性成 分，又名燈盞乙素、燈盞花乙素，化學(xué)名為3’，5，6-三羥基-7-0-葡萄糖醛酸苷，分子式為 C21H18O12，結(jié)構(gòu)式見式I。<formula>formula see original document page 3</formula>燈盞花素在臨床上應(yīng)用于治療心腦血管疾病療效顯著，需求量大，已被開發(fā)成注 射齊 、片劑、膠囊劑等各種劑型。由于野黃芩苷的水溶性和脂溶性均較差，只溶于堿水，因 此，制備99%以上高純度野黃芩苷的難度很大，因而目前市場上的各種燈盞花制劑主要以 95% (紫外法檢測)的燈盞花素投料，由于原料藥中雜質(zhì)成分含量去除不完全，導(dǎo)致燈盞花 制劑的不良反應(yīng)多，特別是注射劑質(zhì)量問題讓人擔(dān)憂。有報(bào)道采用甲醇反復(fù)結(jié)晶的方法分離高純度野黃芩苷，但由于燈盞花甲素等雜質(zhì) 成分與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相似，重結(jié)晶并不能去除干凈，因此此種方法的分離野黃芩苷純度只 能達(dá)到97%左右。中國專利申請200610075982. 6報(bào)道采用堿水溶解后，加入沉淀劑沉淀，然后再一 定濃度的復(fù)合溶劑中酸化解離，經(jīng)過多次重復(fù)上述步驟，可以得到99%以上的野黃芩苷。該 方法操作步驟繁瑣，多次重復(fù)操作使得產(chǎn)品得率低，不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。中國專利申請200910068662. 1公開了一種燈盞花提取物中燈盞花乙素的吸附樹 脂法分離工藝，該工藝以市售提取物為原料，通過“吸附_解吸” 一步連續(xù)工藝，制備燈盞花 乙素含量高于98%、燈盞花甲素含量低于0.5%的樣品。此方法采用吸附樹脂分離，而用樹 脂方法制備注射劑原料藥存在樹脂殘留的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，提供一種從燈盞花素中大量快速 分離高純野黃芩苷的方法，該方法操作簡單、消耗溶劑少、產(chǎn)品得率高，安全無毒、環(huán)保，適 于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下一種從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法，按如下工藝步驟進(jìn)行(1)、原料溶解取80 95%的燈盞花素(UV法檢測)，按質(zhì)量比加入8 12倍量 的N，N- 二甲基甲酰胺(DMF)，得到制備原料溶液；(2)、高效制備液相分離將步驟(1)得到的制備原料溶液過濾，經(jīng)高效制備液相 色譜柱分離得到野黃芩苷制備溶液，于60°C 80°C溫度下減壓回收溶劑得野黃芩苷產(chǎn)品， 所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18),柱規(guī)格可以為50CmX10Cm、 50cmX 8cm 或 50cmX 5cm,制備液相的色譜條件為檢測波長135nm，流動(dòng)相為甲醇-DMC-水。所述流動(dòng)相中DMF的體積百分比濃度為10 % 20 %。所述流動(dòng)相中甲醇的體積百分比濃度為20% 40%。所述流動(dòng)相中DMF的體積百分比濃度優(yōu)選15%，所述流動(dòng)相中甲醇的體積百分比 濃度優(yōu)選35%。燈盞花素中的主要有效成分野黃芩苷的水溶性和脂溶性均較差，只溶于堿水，但 多次堿水溶解、沉淀、酸化的工藝不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)；由于雜質(zhì)成分與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相 似，重結(jié)晶也難以去除雜質(zhì)，因此，制備99%以上高純度野黃芩苷的難度很大，導(dǎo)致燈盞花 制劑的不良反應(yīng)多。近年來，制備型高效液相色譜分離技術(shù)開始廣泛應(yīng)用于藥物單體的分 離純化，但由于高效液相色譜對樣品溶液的純度、色澤等要求均較高，否則既可能達(dá)不到良 好的分離效果，還可以對高效液相色譜系統(tǒng)的色譜柱整配件產(chǎn)生難以逆轉(zhuǎn)的影響，縮短其 使用周期，增加生產(chǎn)成本；而野黃芩苷的水溶性和脂溶性均較差，通常溶劑只能將燈盞花素 配制成混懸液，難以配制成溶液進(jìn)入高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行處理，因而到目前為止還未有 采用制備型高效液相色譜技術(shù)分離純化野黃芩苷的文獻(xiàn)報(bào)道。本發(fā)明人經(jīng)過大量試驗(yàn)，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，N, N- 二甲基甲酰胺對野黃芩苷有助溶 作用，故本發(fā)明采用二甲基甲酰胺作為溶劑，將燈盞花素配制成溶液后送入制備型高效液 相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離提純。在高效液相色譜分離過程中，色譜條件的選擇非常重要，它對樣品溶液中各物質(zhì) 的出峰順序、峰形、分離效果等起著決定性的作用；色譜條件主要包括色譜柱(包括填料、 柱長及直徑等)、流動(dòng)相(包括組成及流速等)、柱溫、檢測波長、檢測器等，各色譜條件的選 擇及其組合至關(guān)重要。本發(fā)明人通過大量的試驗(yàn)研究及對比分析，確定了如上所述的各色譜條件，使樣 品溶液中各物質(zhì)的出峰時(shí)間、峰形、分離效果等最佳化，有利于野黃芩苷得到充分有效的分 離。可很好地解決野黃芩苷溶解性差的難題，以便將燈盞花素制備成溶液，進(jìn)而通過制備型 高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離提純。 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果 1、步驟少，耗時(shí)短，收率高，能夠達(dá)到90%，并且操作簡便，重現(xiàn)性好，容易收集樣品，易于工業(yè)化生產(chǎn)。2、溶劑消耗少，制備液相色譜分離步驟中的溶劑都可回收再利用。3、經(jīng)濟(jì)效益好。能進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，且工序簡便，僅包括2個(gè)步驟，易于控制，分離 效率高，經(jīng)HPLC檢測，野黃芩苷純度能夠得到99%以上。4、具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值。目前國內(nèi)關(guān)于野黃芩苷分離純化的文獻(xiàn)報(bào)道都是堿溶酸 沉、結(jié)晶或是常規(guī)柱層析，高效制備液相色譜用于野黃芩苷的分離純化屬首次。本發(fā)明所得 產(chǎn)品不但可作為野黃芩苷對照品，也為工業(yè)化生產(chǎn)注射劑提供了高純度的原料。



圖1為本發(fā)明A步驟所述HPLC檢測圖譜。圖2為本發(fā)明B步驟所述制備分離在線監(jiān)測圖譜。圖3為本發(fā)明B步驟所述HPLC檢測圖譜。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法 作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1本實(shí)施例的從燈盞花素中提取分離野黃芩苷的方法，按如下工藝步驟進(jìn)行一種高純野黃芩苷的高效分離方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行(1)、原料溶解取80%的(UV法檢測)燈盞花素100g，按質(zhì)量比加入12倍量的 DMF溶解，得到燈盞花素溶液IL ；(2)、高效制備液相分離將步驟(1)得到的燈盞花素溶液過濾，經(jīng)高效制備液相 色譜柱分離得到野黃芩苷制備溶液，所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅 膠(C18)，柱規(guī)格為50cmX 10cm,色譜條件檢測波長350nm，流動(dòng)相為甲醇-DMF-水(體積 比為 30 20 50)，流速 200mL/min。每針進(jìn)樣時(shí)間lmin，即進(jìn)樣量20g，單針運(yùn)行60min。收集制備溶液于80°C溫度、-0. 07Pa條件下減壓回收試劑至約1L，室溫靜置8小 時(shí)，析出大量黃色固體，過濾，固體于80°C干燥12小時(shí)得野黃芩苷產(chǎn)品60g。所得野黃芩苷產(chǎn)品經(jīng)HPLC純度分析為99.2 %。分析條件為C18 (5 μ m， 250mmX4. 6mm)，流動(dòng)相為甲醇水磷酸=45 55 0. 2，檢測波長為335nm，流速為 lmL/min，柱溫為 25 °C。實(shí)施例2本實(shí)施例的從燈盞花素中提取分離野黃芩苷的方法，按如下工藝步驟進(jìn)行一種高純野黃芩苷的高效分離方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行(1)、原料溶解取90%的(UV法檢測)燈盞花素50g，按質(zhì)量比加入10倍量的DMF 溶解，得到燈盞花素溶液500mL ；(2)、高效制備液相分離將步驟(1)得到的燈盞花素溶液過濾，經(jīng)高效制備液相 色譜柱分離得到野黃芩苷制備溶液，所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅 膠(C18)，柱規(guī)格為50cmX 8cm，色譜條件為檢測波長350nm，流動(dòng)相為甲醇-DMF-水(體積比為 35 15 50)，流速 140mL/min。每針進(jìn)樣時(shí)間lmin，即進(jìn)樣量14g，單針運(yùn)行50min。收集制備溶液于70°C溫度、-0. OSPa條件下減壓回收試劑至約500mL，室溫靜置8 小時(shí)，析出大量黃色固體，過濾，固體于80°C干燥12小時(shí)得野黃芩苷產(chǎn)品40g。所得野黃芩苷產(chǎn)品經(jīng)HPLC純度分析為99. 4%，HPLC檢測條件同實(shí)施例1。實(shí)施例3本實(shí)施例的從燈盞花素中提取分離野黃芩苷的方法，按如下工藝步驟進(jìn)行一種高純野黃芩苷的高效分離方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行(1)、原料溶解取95%的(UV法檢測)燈盞花素20g，按質(zhì)量比加入8倍量的DMF 溶解，得到燈盞花素溶液IL ；(2)、高效制備液相分離將步驟(1)得到的燈盞花素溶液過濾，經(jīng)高效制備液相 色譜柱分離得到野黃芩苷制備溶液，所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅 膠(C18)，柱規(guī)格為50cmX 5cm，色譜條件為檢測波長350nm，流動(dòng)相為甲醇DMF水(體積比 為 40 10 50)，流速 140mL/min。每針進(jìn)樣時(shí)間lmin，即進(jìn)樣量14g，單針運(yùn)行50min。收集制備溶液于60°C溫度、-0. 09Pa條件下減壓回收試劑至約500mL，室溫靜置8 小時(shí)，析出大量黃色固體，過濾，固體于80°C干燥12小時(shí)得野黃芩苷產(chǎn)品40g。所得野黃芩苷產(chǎn)品經(jīng)HPLC純度分析為99. 5%, HPLC檢測條件同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
一種從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法，其特征在于該方法按如下工藝步驟進(jìn)行(1)、原料溶解取80～95％的燈盞花素(UV法檢測)，按質(zhì)量比加入8～12倍量的二甲基甲酰胺，得到制備原料溶液；(2)、高效制備液相分離將步驟(1)得到的制備原料溶液過濾，經(jīng)高效制備液相色譜柱分離得到野黃芩苷制備溶液，60～80℃溫度下減壓回收溶劑得野黃芩苷產(chǎn)品，所述高效制備液相色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠，柱規(guī)格為50cm×10cm、50cm×8cm或50cm×5cm，制備液相的檢測波長135nm，流動(dòng)相為甲醇-DMC-水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法，其特征在于 步驟(2)中所述流動(dòng)相中DMF的體積百分比濃度為10% 20%，所述流動(dòng)相中甲醇的體積 百分比濃度為20% 40%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從燈盞花素中提取分離高純度野黃芩苷的方法，其特征在于 步驟(2)中所述流動(dòng)相中DMF的體積百分比濃度為15%，所述流動(dòng)相中甲醇的體積百分比 濃度為35%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純野黃芩苷的高效分離方法，它按如下工藝步驟進(jìn)行(1)原料溶解DMF作為助溶劑溶解原料；(2)用甲醇-DMF-水作為流動(dòng)相，采用高效制備液相色譜柱分離，回收溶劑，干燥，得到純度99％以上的野黃芩苷產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡易快速，溶劑消耗少，得率高，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，可以一次制備得到大量產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和學(xué)術(shù)價(jià)值。
文檔編號C07H17/07GK101830951SQ20091031130
公開日2010年9月15日 申請日期2009年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月13日
發(fā)明者劉丁, 夏柯, 文煥松, 肖瑩瑩, 郭建華 申請人:成都普思生物科技有限公司