專利名稱：從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯i的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種洋川芎內(nèi)酯Ksenkyimolide I)的制備方法，特別是涉及一種從 川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)提取物中分離制備洋川芎內(nèi)酯I的方法。
背景技術(shù)：
川彎(Ligusticum chuanxiong Hort.)為傘形科藁本屬植物，其藥用部位為根莖。 川芎為我國傳統(tǒng)中藥，具有活血行氣，祛風止痛的功效，東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品， 是治療抑郁癥與偏頭痛的常用中藥。苯酞類化合物是存在于川芎中的一類化合物，被證明在心血管、血液和平滑肌方 面有活性。其中研究較多的丁基苯酞具有抗腦缺血、保護腦外傷組織等諸多活性，可以被認 為是川芎藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。洋川芎內(nèi)酯KSenkynolide I，式1)是自川芎中分離得到的一種苯酞類化合物， 具有很好的脂溶性和水溶性，能夠迅速進入血液和腦脊液，具有一定的開發(fā)新藥的潛力。其 藥理作用主要包括其能夠減輕ConA引紅細胞的變形性損傷，降低其聚集性時珍國醫(yī)國 藥，2003，14(1 :738 739;抑制豚鼠心肌細胞及人神經(jīng)細胞瘤的鈣內(nèi)流；減低缺血再灌 注動物模型腦干中N0，并抑制NO合酶的活性(Clin ExpPharmacology Physion, 1999, 26 845 846)。目前技術(shù)公開洋川芎內(nèi)酯I的制備方法色譜，2004,22(1) :41 43是通過石油 醚及乙酸乙酯依次萃取，然后依次通過硅膠柱、高效液相制備色譜及MCI gelCHP-20柱分離 而得。該方法非常繁瑣，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，且產(chǎn)率極低(文獻報道僅為百萬分之一點九)。 因此洋川芎內(nèi)酯I分離手段的不足是限制其醫(yī)藥用途的一個主要原因。
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HO、、·^^ OH O式1

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法， 以解決現(xiàn)有技術(shù)中制備手段繁瑣，產(chǎn)率極低的技術(shù)問題。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，包括 步驟(1)大孔樹脂純化步驟將川芎提取物的水溶液(該水溶液濃度相當于生藥0. 5g · ml—1 1. Og · ml—1)上HPD-100大孔樹脂柱大孔樹脂與原藥材(川芎)的重量比為0.3 1 0.5 1，大孔樹 脂柱中的吸附流速為1 2BV · tT1，BV指柱體積，用體積濃度為0% 10%乙醇洗脫4 6BV后棄去洗脫液，再用體積濃度為40% 50%乙醇洗脫4 6BV，收集洗脫液，減壓回收 溶劑，得經(jīng)大孔樹脂純化的浸膏；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏用硅膠柱色譜分離(硅膠為100 200目或200 300目柱 層析硅膠或薄層層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30 1 100)，并以氯仿-甲醇 體積比為50 1 20 1進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣后于紫外燈254nm 下觀察，收集含有洋川芎內(nèi)酯I的部分，并減壓回收溶劑，得經(jīng)硅膠色譜純化的浸膏；(3)反相色譜純化步驟將步驟⑵所得浸膏用C18反相硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18反相硅膠重量比 為=1 30 1 50)，并以甲醇-水體積比為15 85 25 75洗脫4 6BV后棄去 洗脫液，再用甲醇-水體積比為30 70 40 60洗脫4 6BV，收集洗脫液并減壓回收 溶劑，即得純化的洋川芎內(nèi)酯I;其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。所述步驟⑴中川芎提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為0% 95%的乙醇溶液。采用本發(fā)明的方法依次經(jīng)(1)大孔樹脂純化、(2)硅膠色譜純化、(3)反相色譜純 化，或依次經(jīng)(1)大孔樹脂純化、(2)反相色譜純化、(3)硅膠色譜純化，能極大地提高得率， 因此，該方法是一種制備洋川芎內(nèi)酯I的簡化工藝，可用于洋川芎內(nèi)酯I的工業(yè)制備。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步詳細說明。實施例1洋川芎內(nèi)酯I的制備川芎飲片1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粉末，體積濃度為95%乙醇IOL回流提取2次， 每次2小時，合并提取液，回收溶劑得浸膏A約200g。將浸膏A用去離子水稀釋至約2000mL (該水溶液濃度相當于生藥0. 5g · ml—1)后 上HPD-100大孔樹脂柱大孔樹脂與原藥材(川芎飲片)的重量比為0.3 1，大孔樹脂柱 規(guī)格Φ150*1500πιπι，吸附流速為2BV化―1，用去離子水洗脫6BV后棄去洗脫液，再用體積濃 度為50%乙醇洗脫4BV，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑得浸膏B約35g。將浸膏B用硅膠柱色譜分離(硅膠為100 200目或200 300目柱層析硅膠， 浸膏B樣品與硅膠重量比為1 30，硅膠柱規(guī)格Φ 100*1000mm)，并以氯仿-甲醇體積比為 20 1進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以氯仿甲醇體積比為10 1展開后 置于紫外燈254nm下觀察，收集含有洋川芎內(nèi)酯I的部分，并減壓回收溶劑，得經(jīng)硅膠色譜 純化的浸膏，減壓回收溶劑得浸膏C約4g。將浸膏C用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏C樣品與C18反相硅膠重量比為= 1 50，Cw反相硅膠柱規(guī)格Φ30*300mm)，并以甲醇-水體積比為15 85洗脫6BV后棄去 洗脫液，再用甲醇-水體積比為40 60洗脫4BV，收集洗脫液并減壓回收溶劑，即得純化的 洋川芎內(nèi)酯I約1.3g。
最終所得洋川芎內(nèi)酯I經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定13C-NMR (⑶Cl3，400M) 169. 3 (C-I)，153. 0 (C-3)，148. 0 (C_3a)，18. 8 (C-4)，26. 3 (C-5) ,71. 4 (C-6)，67. 3 (C-7)， 125. 9 (C-7a), 114. 2 (C-8)，28. 0 (C-9)，22. 2 (C-10)，13. 8 (C-Il) ； δ Η4· 43 (1Η, d，J = 5. IHz， H-7)[phytochemisrty, 1996,41 (1) 233 236，并經(jīng)高效液相法Kromasil-Cw 柱 (4. 6mm*250mm)，檢測波長278nm，流動相體積百分比為1 %的冰醋酸-甲醇(體積比 55 45)，流速lmLiirr1，進樣量10μ1，柱溫25°C，理論塔板數(shù)以洋川芎內(nèi)酯I計不低于 5000檢測含量在98%以上，其得率為0. 13%。實施例2洋川芎內(nèi)酯I的制備川芎飲片1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粉末，體積濃度為50%乙醇IOL回流提取2次， 每次2小時，合并提取液，回收溶劑得浸膏A約200g。將浸膏A用去離子水稀釋至約IOOOmL(該水溶液濃度相當于生藥1. Og · πιΓ1) 后上HPD-100大孔樹脂柱(大孔樹脂與原藥材的重量比為0.5 1，大孔樹脂柱規(guī)格 Φ 150* 1500mm)，吸附流速為IBV化―1，用體積濃度為10%乙醇洗脫4BV后棄去洗脫液，再用 體積濃度為40%乙醇洗脫6BV，收集40%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑得浸膏B約30g。將浸膏B用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏B樣品與C18反相硅膠重量比為= 1 30，Cw反相硅膠柱規(guī)格Φ50*500mm)，并以甲醇-水體積比為25 75洗脫4BV后棄去 洗脫液，再用甲醇-水體積比為30 70洗脫6BV，得浸膏C約7g。將浸膏C用硅膠柱色譜分離(硅膠為薄層層析硅膠，浸膏C樣品與硅膠重量比為 1 100，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以氯仿-甲醇體積比為50 1進行洗脫，將洗脫液 薄層硅膠板(GF254)點樣，以氯仿甲醇體積比為10 1展開后置于紫外燈254nm下觀察， 收集含有洋川芎內(nèi)酯I的部分，并減壓回收溶劑，即得純化的洋川芎內(nèi)酯I約1. 7g。最終所得洋川芎內(nèi)酯I經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定phytochemisrty，1996， 41 (1) 233 236，并經(jīng)高效液相法[Kromasil-C18 柱(4. 6mm*250mm)，檢測波長 278nm，流 動相1 %冰醋酸-甲醇(55 45)，流速ImL · mirT1，進樣量10 μ 1，柱溫25 V，理論塔板數(shù) 以洋川芎內(nèi)酯I計不低于5000檢測含量在98%以上，其得率為0. 17%。實施例3洋川芎內(nèi)酯I的制備川芎飲片1kg，去除雜質(zhì)后粉碎成粉末，去離子水IOL回流提取2次，每次2小時， 合并提取液，回收溶劑得浸膏A約200g。將浸膏A用去離子水稀釋至約1250mL(該水溶液濃度相當于生藥0. Sg · πιΓ1) 后上HPD-100大孔樹脂柱(大孔樹脂與原藥材的重量比為0.4 1，大孔樹脂柱規(guī)格 Φ 150*1500mm)，吸附流速為1. 5BV · h—1，用體積濃度為5%乙醇洗脫5BV后棄去洗脫液，再 用體積濃度為45%乙醇洗脫5BV，收集45%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑得浸膏B約30g。將浸膏B用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏B樣品與C18反相硅膠重量比為= 1 40，Cw反相硅膠柱規(guī)格Φ50*500mm)，并以甲醇-水體積比為20 80洗脫5BV后棄去 洗脫液，再用甲醇-水體積比為35 65洗脫5BV，得浸膏C約7g。將浸膏C用硅膠柱色譜分離(硅膠為薄層層析硅膠，浸膏C樣品與硅膠重量比為 1 80，硅膠柱規(guī)格Φ100*1000πιπι)，并以氯仿-甲醇體積比為40 1進行洗脫，將洗脫液 薄層硅膠板(GF254)點樣，以氯仿甲醇體積比為10 1展開后置于紫外燈254nm下觀察， 收集含有洋川芎內(nèi)酯I的部分，并減壓回收溶劑，即得純化的洋川芎內(nèi)酯I約1. 5g。
最終所得洋川芎內(nèi)酯I經(jīng)常規(guī)公知的NMR方法鑒定phytOChemiSrty，1996， 41 (1) 233 236，并經(jīng)公知的高效液相法Kromasil_C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測波長 278nm，流動相冰醋酸-甲醇(55 45)，流速ImL · mirT1，進樣量10 μ 1，柱溫25°C，理 論塔板數(shù)以洋川芎內(nèi)酯I計不低于5000檢測含量在96%以上，其得率為0. 15%。以上實驗結(jié)果表明，本方法能簡化洋川芎內(nèi)酯I的制備工藝，并極大程度地提高 得率(由文獻報道的百萬分之一點九提高到千分之一以上)。因此，本發(fā)明可用于洋川芎內(nèi) 酯I的工業(yè)制備。
權(quán)利要求
1.從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，其特征在于包括步驟(1)大孔樹脂純化步驟將川芎提取物的水溶液上大孔樹脂柱，用體積濃度為0% 10%乙醇洗脫4 6BV后 棄去洗脫液，再用體積濃度為40% 50%的乙醇洗脫4 6BV，收集洗脫液，減壓回收溶劑， 得經(jīng)大孔樹脂純化的浸膏；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏用硅膠柱色譜分離，并以氯仿-甲醇體積比為50 1 20 1 進行洗脫，將洗脫液硅膠板點樣，收集含有洋川芎內(nèi)酯I的洗脫液部分，減壓回收溶劑，得 經(jīng)硅膠色譜純化的浸膏；(3)反相色譜純化步驟將步驟(2)所得浸膏用反相Cw硅膠柱色譜分離，并以甲醇-水體積比為15 85 25 75洗脫4 6BV后棄去洗脫液，再用甲醇-水體積比為30 70 40 60洗脫4 6BV，收集洗脫液并減壓回收溶劑，即得純化的洋川芎內(nèi)酯I ；其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能顛倒。
2.如權(quán)利要求1所述的從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，其特征在于所述 步驟(1)中川芎提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為0% 95%的乙醇溶液；川芎提取 物的水溶液濃度相當于生藥0. 5g · πιΓ1 1. Og · Iiir10
3.如權(quán)利要求1所述的從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，其特征在于 所述步驟(1)中的大孔樹脂是HPD-100大孔樹脂，其中，大孔樹脂與原藥材的重量比為 0.3 1 0. 5 1，大孔樹脂柱中的吸附流速為1 2BV · 1Γ1。
4.如權(quán)利要求1所述的從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，其特征在于所述 硅膠色譜純化步驟中，硅膠為100 200目或200 300目柱層析硅膠或薄層層析硅膠，浸 膏樣品與硅膠重量比為1 30 1 100。
5.如權(quán)利要求1所述的從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，其特征在于所述 反相色譜純化步驟中，浸膏樣品與Cw反相硅膠重量比為=1 30 1 50。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從川芎提取物中制備洋川芎內(nèi)酯I的方法，包括步驟(1)大孔樹脂純化；(2)硅膠色譜純化；(3)反相色譜純化，其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能顛倒。本發(fā)明是一種制備洋川芎內(nèi)酯I的簡化工藝，能極大地提高洋川芎內(nèi)酯I得率，可用于洋川芎內(nèi)酯I的工業(yè)制備。
文檔編號C07D307/88GK102108071SQ20091020069
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月24日
發(fā)明者馮怡, 徐德生, 梁爽, 阮克鋒 申請人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術(shù)工程研究中心