專(zhuān)利名稱(chēng)：川芎內(nèi)酯在制備抗血栓藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥化學(xué)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及一種從川芎中提取的有效組分及其制備方法，以及該組分在制備抗血栓藥物中的用途。
背景技術(shù)：
血栓形成(thrombosis)是指在心臟和血管腔內(nèi)，血液發(fā)生凝固或血液中的某些有形成分互相粘集，形成固體質(zhì)塊的過(guò)程。在病理情況下，血栓造成的血管管腔阻塞和其他影響，會(huì)對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重甚至致命的危害，成為心肌梗死、卒中、深靜脈血栓、肺栓塞等心腦血管疾病的重要致病因素。血管內(nèi)膜損傷是血栓形成的重要誘因之一。血管內(nèi)皮細(xì)胞是一層分隔內(nèi)皮下結(jié)締組織和血液中凝血因子、血小板的單細(xì)胞薄膜，具有抗凝、抗血小板粘集的功能。但是當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，內(nèi)皮下結(jié)締組織內(nèi)的基底膜膠原、原纖維性膠原、彈性蛋白都有強(qiáng)烈的促凝作用，導(dǎo)致血小板粘集形成血栓。在觸發(fā)凝血過(guò)程中起核心作用的是血小板的活化。能激活血小板的物質(zhì)包括膠原、凝血酶、ADP等，在內(nèi)皮損傷后，首先激活血小板的是與血小板接觸的膠原，繼后凝血鏈鎖反應(yīng)被啟動(dòng)而產(chǎn)生了凝血酶，并且血小板繼續(xù)地被活化又不斷釋出ADP和血栓素A2，隨血流而來(lái)的是血小板在局部不斷地被激活。因此，阻斷血小板活化和防止內(nèi)皮損傷是預(yù)防和治療血栓性疾病的有效途徑?？寡ㄖ委熞恢笔悄X卒中、冠狀動(dòng)脈血栓引起心肌梗塞、血栓閉塞性脈管炎等疾病預(yù)防和治療的有效手段。常用的抗血栓藥物主要包括三類(lèi)，即抗凝血?jiǎng)?、抗血小板藥及溶栓藥，分別以肝素、阿司匹林和尿激酶為代表。現(xiàn)代藥理研究表明，一些活血化瘀類(lèi)中藥如血府逐瘀湯等能夠改善血液流變學(xué)特性，減少血小板的黏附和聚集，降低血小板的表面活性，同時(shí)通過(guò)抑制血小板聚集、保護(hù)受損內(nèi)皮細(xì)胞等多個(gè)途徑預(yù)防和治療血栓性疾病。因此，從傳統(tǒng)中藥尋找具有抗血小板聚集和內(nèi)皮保護(hù)活性的有效組分成為開(kāi)發(fā)抗血栓藥物的新來(lái)源。川彎為傘形科植物川彎chuanxiong Hort.的干燥根莖,其性味辛，溫。歸肝、膽、心包經(jīng)?；钛铕鲎饔脧V泛，適宜瘀血阻滯各種病癥；祛風(fēng)止痛，效用甚佳，可治頭風(fēng)頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，川芎提取物對(duì)離體豚鼠心臟有劑量依賴(lài)性抑制作用，對(duì)離休大鼠或豚鼠心臟均具有顯著的增加冠脈流量作用，其主要活性成分川芎嗪能擴(kuò)張大鼠肺血管，抑制缺氧性肺血管收縮反應(yīng)和右心室肥大。此外，川芎還具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制作用，對(duì)動(dòng)物大腦的活動(dòng)具有抑制作用，而對(duì)延腦呼吸中樞、血管運(yùn)動(dòng)中樞及脊髓反射中樞具有興奮作用。川芎中主要化合物川芎嗪可抑制血栓素A2 (TXA2)的合成，其作用與TXA2合成酶抑制劑作用相類(lèi)似。但目前研究大都集中在川芎嗪和阿魏酸等成分，對(duì)于川芎內(nèi)酯類(lèi)組分是否具有抗血栓活性及其作用機(jī)制尚不清楚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種川芎有效組分，該有效組分主要含有藁本內(nèi)酯，含量為30 90%。本發(fā)明的另一目的是提供該川芎有效組分的制備方法，通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)將川芎藥材粉碎后加入20°/Γ90%的乙醇浸泡5 12小時(shí)，加熱回流提取O. 8^1. 2小時(shí)，提取f 3次，合并濾液得提取液，將提取液用石油醚萃取，將萃取液濃縮后用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行純化，以體積比為50:1的石油醚與乙酸乙酯為洗脫劑，收集洗脫液濃縮后得到有效組分。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供該)11芎有效組分在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明第一方面提供了一種川芎提取物，其中含有3(Γ90%的藁本內(nèi)酯。根據(jù)本發(fā)明第一方面的川芎提取物，其中含有8(Γ97%(例如85%_95%)的藁本內(nèi)酯。根據(jù)本發(fā)明第一方面的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將川芎藥材粉碎后，用70°/Γ99%乙醇(例如75°/Γ98%)浸泡并回流提取1_4次，合并提取液，濃縮，用石 油醚萃取，將合并的萃取液回收溶劑至干，得石油醚萃取浸膏；取石油醚萃取部分浸膏，力口入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:0. 5 5 (例如50:0. 5^3)的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，即得。根據(jù)本發(fā)明第一方面的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將川芎藥材粉碎后加入20% 90%的乙醇浸泡5 12小時(shí)，加熱回流提取O. 8^1. 2小時(shí)，提取f 3次，合并濾液得提取液，將提取液用石油醚萃取，將萃取液濃縮后用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行純化，以體積比為50:1的石油醚與乙酸乙酯為洗脫劑，收集洗脫液濃縮后得到提取物。根據(jù)本發(fā)明第一方面的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將IOOOg川芎藥材粉碎后，加入4000ml 95%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2小時(shí)，再加入4000ml用95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，濃縮至密度I. 08 ;將濃縮液加至500ml水中分散成混懸液,加入500ml石油醚萃取3次，合并萃取液，回收溶劑至干。取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濃縮后即得。本發(fā)明第二方面提供了制備川芎提取物的方法，其包括以下步驟將川芎藥材粉碎后，用70°/Γ99%乙醇(例如75°/Γ98%)浸泡并回流提取1_4次，合并提取液，濃縮，用石油醚萃取，將合并的萃取液回收溶劑至干，得石油醚萃取浸膏；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:0. 5 5 (例如50:0. 5^3)的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，即得。根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其包括以下步驟將川芎藥材粉碎后加入20% 90%的乙醇浸泡5 12小時(shí)，加熱回流提取O. 8^1. 2小時(shí)，提取f 3次，合并濾液得提取液，將提取液用石油醚萃取，將萃取液濃縮后用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行純化，以體積比為50:1的石油醚與乙酸乙酯為洗脫劑，收集洗脫液濃縮后得到提取物。根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其包括以下步驟將IOOOg川芎藥材粉碎后，加入4000ml 95%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2小時(shí)，再加入4000ml用95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，濃縮至密度I. 08 ;將濃縮液加至500ml水中分散成混懸液，加入500ml石油醚萃取3次，合并萃取液，回收溶劑至干。取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濃縮后即得。
根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其所得川芎提取物中含有3(Γ90%的藁本內(nèi)酯。根據(jù)本發(fā)明第二方面的方法，其所得)11芎提取物中含有8(Γ97% (例如85%_95%)的藁本內(nèi)酯。本發(fā)明第三方面提供了本發(fā)明第一方面的川芎提取物在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明第四方面提供了一種藥物組合物，其中包括本發(fā)明第一方面的川芎提取物以及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。本發(fā)明的川芎有效組分可以作為活性部位，加入藥劑學(xué)上接受的藥物賦形劑或載體，按照藥劑學(xué)上記載的方法制成制劑。
所述藥物的制劑形式包括液體制劑、固體制劑、膠囊劑、膠丸劑。包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“川芎有效組分”亦可稱(chēng)為“川芎組分”、“川芎提取物”、“川芎內(nèi)酯”等，這些術(shù)語(yǔ)可以互換使用。本發(fā)明的有益效果為
I.本發(fā)明的提取分離工藝簡(jiǎn)單，能快速準(zhǔn)確地得到有效組分。2.本發(fā)明提供的川芎有效組分化學(xué)成分簡(jiǎn)單明確，在藥理研究上更易于闡明其作用機(jī)制，在生產(chǎn)中更易于藥物的質(zhì)量控制。3.本發(fā)明首次在模型上，評(píng)價(jià)了川芎內(nèi)酯類(lèi)提取物抗血小板聚集和保護(hù)炎性損傷內(nèi)皮細(xì)胞的作用，得到較好的藥理活性，為其在制備抗血栓藥物中的用途提供了依據(jù)。


圖I.為本發(fā)明川芎提取物的高效液相色譜分析圖。圖2.不同濃度川芎提取物對(duì)花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集的影響。圖3.不同濃度川芎提取物對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響。圖4.不同濃度川芎提取物對(duì)膠原誘導(dǎo)的血小板聚集的影響。圖5.不同濃度川芎提取物對(duì)TNF-α損傷內(nèi)皮細(xì)胞分泌黏附因子的影響。圖6.不同濃度川芎提取物對(duì)TNF-α損傷內(nèi)皮細(xì)胞核因子NF-κ B蛋白表達(dá)的影響。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明結(jié)合附圖和下面實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而并非對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例一川芎有效組分的制備
將IOOOg川芎藥材粉碎后，加入4000ml 95%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2小時(shí)，再加入4000ml用95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，濃縮至密度I. 08。將濃縮液加至500ml水中分散成混懸液,加入500ml石油醚萃取3次,合并萃取液，回收溶劑至干。取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濃縮后得到淡黃色液體11. 3g，為本發(fā)明川芎提取物，其在本發(fā)明中亦可稱(chēng)為川芎內(nèi)酯，并且用于下文生物學(xué)試驗(yàn)例。實(shí)施例二川芎有效組分的分析
稱(chēng)取如實(shí)施例I所示川芎提取物溶解，取適量轉(zhuǎn)移至棕色液相進(jìn)樣瓶，用于液相色譜分析。分析條件如下Agilent 1100型液相色譜儀,進(jìn)樣量10 μ I ;流速lml/min,柱溫30 0C ο色譜分析的流動(dòng)相梯度為0 40min :水(O. 1%甲酸):70% 20%，乙腈30% 80% ；40-50min :水(O. 1% 甲酸):20% 5%，乙腈80% 95% ;50 55min :水(O. 1% 甲酸):5%，乙腈95% ；檢測(cè)波長(zhǎng)271nm。分析譜圖如圖I所示(橫坐標(biāo)為分鐘)。液相色譜分析顯示川芎提取物在26. 5min有I個(gè)明顯色譜峰，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)后鑒定該峰代表的化合物為藁本內(nèi)酯。分析結(jié)果顯示，川芎內(nèi)酯提取物中主要成分為藁本內(nèi)酯，其含量約為90%。出人意料地發(fā)現(xiàn)，在實(shí)施例I中，如果用濃度低于70%的乙醇提取，或者用石油醚為洗脫劑，或者所用洗脫劑中乙酸乙酯份量大于5，即50份石油醚與5份以上的乙酸乙酯混合液為洗脫劑時(shí)，藁本內(nèi)酯獲得量比實(shí)施例I的獲得量低30%以上。用75%以上乙醇提取，或者用石油醚乙酸乙酯為50 O. 5^3的比例的混合液作為洗脫液時(shí)，藁本內(nèi)酯獲得量是實(shí)施例I的獲得量的909^115%，并且提取物中藁本內(nèi)酯含量均在8(Γ97%。實(shí)施例三川芎有效組分制劑
取實(shí)施例I所得的川芎有效組分O. 5g與10. 5g聚乙二醇-6000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸滴灌中，藥液滴至6 8°C液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實(shí)施例四川芎有效組分制劑
取實(shí)施例I所得的川芎有效組分O. 5g，磨成細(xì)粉，與約1/3的淀粉混勻，加淀粉漿混勻制成軟材，16目篩制粒，70°C干燥，干粒過(guò)14目篩整粒，加剩余淀粉(預(yù)先在100 - 105 V干燥)與吸附有液狀石蠟的滑石粉(將輕質(zhì)液狀石蠟噴于滑石粉中混勻)，再通過(guò)14目篩，壓片，即得。實(shí)施例五川芎內(nèi)酯提取物抗血小板聚集活性評(píng)價(jià)
血小板可以被多種物質(zhì)激活，但是主要通過(guò)以下途徑=ADP途徑，AA環(huán)氧酶途徑和PAF(血小板激活因子)途徑。這三條途徑最終均通過(guò)升高血小板內(nèi)Ca2+濃度而激活血小板。外源性膠原主要通過(guò)PAF途徑。本實(shí)施例考察了如實(shí)施例I所得川芎內(nèi)酯內(nèi)酯提取物對(duì)花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)和膠原(COLL)誘導(dǎo)的血小板聚集的影響。采用利多卡因頸部局部麻醉新西蘭大耳白兔，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈取血后加入3. 8%枸櫞酸鈉溶液抗凝。IOOOrmp離心12min，取上清部分即富血小板血漿(PRP)，剩余部分3000rmp離心IOmin,取上清部分即貧血小板血衆(zhòng)(PPP)。用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)血小板，用PPP調(diào)整PRP，使血小板計(jì)數(shù)為(3. 0-5. O) X IO9個(gè)/L。以不同類(lèi)型誘導(dǎo)劑ADP,AA及COLL誘導(dǎo)凝血后，測(cè)定川芎內(nèi)酯提取物(實(shí)施例I所得)在O. 05、0. 1、0. 2、0.4、O. 6、0. 8mg/ml濃度下的抗血小板聚集活性,分別采用O. 05mg/ml的阿司匹林和O. 2mg/ml的氯吡格雷作為陽(yáng)性藥，用570-VS血小板聚集儀測(cè)定血小板聚集率。結(jié)果表明，經(jīng)AA誘導(dǎo)后，迅速聚集，最大聚集率平均為68. 04。在陽(yáng)性藥阿司匹林(Aspirin)干預(yù)下，最大聚集率顯著下降(/Κ . 01 )。實(shí)施例I所得川芎內(nèi)酯提取物在O. 05mg/ml、0. I mg/ml劑量組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異,在O. 2-0. 8 mg/ml各劑量組聚集率顯著下降，與空白對(duì)照組比較差異顯著Οκ . 01)，并且呈劑量依賴(lài)關(guān)系，如附圖2所示(圖中control表示對(duì)照組，aspirin表示阿司匹林組)。富血小板血漿經(jīng)ADP誘導(dǎo)后，迅速聚集，最大聚集率平均為48. 15。在陽(yáng)性藥氯吡格雷干預(yù)下，最大聚集率顯著下降(/KU 01)。實(shí)施例I所得川芎內(nèi)酯提取物在O. 6-1. 4mg/ml濃度范圍內(nèi)使ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率顯著下降，與空白對(duì)照組比較差異顯著(p〈Q. 01),并且呈劑量依賴(lài)關(guān)系,如附圖3所示(圖中contr…表示對(duì)照組,clopi···表示氯吡格雷組)。富血小板血漿經(jīng)經(jīng)膠原誘導(dǎo)后，迅速聚集，最大聚集率平均為70. 77。在阿司匹林及氯卩比格雷干預(yù)，最大聚集率顯著下降01)。川彎內(nèi)酯0.05 mg/ml、0· I mg/ml劑量組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異，0. 2-0. 8 mg/ml各劑量組聚集率顯著下降，與空白對(duì)照組比較差異顯著01)，并且呈劑量依賴(lài)關(guān)系，如附圖4所示(圖中control表示對(duì)照組，aspirin表示阿司匹林組，clopido…表示氯卩比格雷組)。
實(shí)施例六川芎內(nèi)酯提取物抗內(nèi)皮細(xì)胞損傷活性評(píng)價(jià)
考察實(shí)施例I所得川芎內(nèi)酯提取物對(duì)炎性損傷內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。體外分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，TNF-α損傷造模，同時(shí)加以不同濃度(6. 25、12. 5、25ug/ml)的川芎內(nèi)酯提取物進(jìn)行共孵育24h，酶聯(lián)免疫法(Elisa法)測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中黏附分子sICAM-1和sVCAM-1的含量，Western blot測(cè)定細(xì)胞核中NF-κ B蛋白表達(dá)。結(jié)果表明，MTT結(jié)果顯示TNF-α 10ng/ml可以明顯造成細(xì)胞損傷，川芎內(nèi)酯劑量依賴(lài)性的保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受TNF-α損傷；TNF-a顯著性地升高內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子ICAM-I和sVCAM_l的表達(dá)(p〈0. 01)，川芎內(nèi)酯高劑量可以顯著性地降低其表達(dá)；同時(shí)Western blot結(jié)果顯示川芎內(nèi)酯可以劑量依賴(lài)性的減少人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞NF-kB的蛋白表達(dá)。川芎內(nèi)酯提取物可以保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞免受TNF-a的損傷，其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制NF-κ B的蛋白表達(dá)，進(jìn)而減少內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子ICAM-I的含量有關(guān)。結(jié)果見(jiàn)圖5，其中顯示了不同濃度川芎提取物對(duì)TNF-a損傷內(nèi)皮細(xì)胞分泌黏附因子的影響縱坐標(biāo)表示人sICAM-1和sVCAM-1濃度(ug/ml)。另外，圖6顯示了不同濃度川芎提取物對(duì)TNF- a損傷內(nèi)皮細(xì)胞核因子NF- K B蛋白表達(dá)的影響，圖中縱坐標(biāo)表示NF- K B表達(dá)(與對(duì)照相比)。
權(quán)利要求
1.一種川芎提取物，其中含有3(Γ90%的藁本內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的川芎提取物，其中含有8(Γ97%的藁本內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將川芎藥材粉碎后，用70°/Γ99%乙醇(例如75°/Γ98%)浸泡并回流提取1_4次，合并提取液，濃縮，用石油醚萃取，將合并的萃取液回收溶劑至干，得石油醚萃取浸膏；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:0. 5 5 (例如50:0. 5^3)的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將川芎藥材粉碎后加入20°/Γ90%的乙醇浸泡5 12小時(shí)，加熱回流提取O. 8^1. 2小時(shí)，提取f 3次，合并濾液得提取液，將提取液用石油醚萃取，將萃取液濃縮后用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行純化，以體積比為50:1的石油醚與乙酸乙酯為洗脫劑，收集洗脫液濃縮后得到提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2的川芎提取物，其是通過(guò)以下方法制備得到的將IOOOg川芎藥材粉碎后，加入4000ml 95%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2小時(shí)，再加入4000ml用95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，濃縮至密度I. 08 ;將濃縮液加至500ml水中分散成混懸液,加入500ml石油醚萃取3次，合并萃取液，回收溶劑至干；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濃縮后即得。
6.制備川芎提取物的方法，其包括以下步驟將川芎藥材粉碎后，用709Γ99%乙醇(例如759Γ98%)浸泡并回流提取1-4次，合并提取液，濃縮，用石油醚萃取，將合并的萃取液回收溶劑至干，得石油醚萃取浸膏；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:0. 5 5 (例如50:0. 5^3)的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其包括以下步驟將川芎藥材粉碎后加入20% 90%的乙醇浸泡5 12小時(shí)，加熱回流提取O. 8^1. 2小時(shí)，提取f 3次，合并濾液得提取液，將提取液用石油醚萃取，將萃取液濃縮后用正相硅膠柱對(duì)其進(jìn)行純化，以體積比為50:1的石油醚與乙酸乙酯為洗脫劑，收集洗脫液濃縮后得到提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其包括以下步驟將IOOOg川芎藥材粉碎后，加入4000ml95%乙醇浸泡過(guò)夜，回流提取2小時(shí)，再加入4000ml用95%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，濃縮至密度I. 08 ;將濃縮液加至500ml水中分散成混懸液，加入500ml石油醚萃取3次，合并萃取液，回收溶劑至干；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濃縮后即得。
9.權(quán)利要求1-6的川芎提取物在制備抗血栓藥物中的應(yīng)用。
10.一種藥物組合物，其中包括權(quán)利要求1-6的川芎提取物以及藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及川芎內(nèi)酯在制備抗血栓藥物中的用途。具體地，本發(fā)明涉及一種川芎提取物，其中含有30~90%的藁本內(nèi)酯。該提取物是通過(guò)以下方法制備得到的將川芎藥材粉碎后，用70%~99%乙醇(例如75%~98%)浸泡并回流提取1-4次，合并提取液，濃縮，用石油醚萃取，將合并的萃取液回收溶劑至干，得石油醚萃取浸膏；取石油醚萃取部分浸膏，加入正相硅膠拌樣后過(guò)正相硅膠柱，以體積比為50:0.5~5(例如50:0.5~3)的石油醚和乙酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，即得。
文檔編號(hào)A61K36/236GK102813687SQ20121030165
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月12日
發(fā)明者程翼宇, 張萌, 王怡 申請(qǐng)人:天津中醫(yī)藥大學(xué)