專(zhuān)利名稱(chēng)：新的凝血酶功能化合物和基于其的藥物組合物的制作方法
新的凝血酶功能化合物和基于其的藥物組合物本發(fā)明涉及新的化合物，這些化合物作為凝血酶抑制劑的用途，以及基于它們的 藥物組合物，且其可用于治療和預(yù)防凝血酶-相關(guān)的血栓栓塞性事件，以及用于研究目的。凝血酶為血液凝結(jié)系統(tǒng)(將可溶血漿蛋白(纖維蛋白原)轉(zhuǎn)化為不溶的纖維蛋白 凝塊)的主要的酶。凝血酶形成(造成纖維蛋白聚合反應(yīng)的過(guò)程)和凝血酶抑制(亦即抑 制凝血酶活性的過(guò)程)之間存在脆弱的平衡。過(guò)量的凝血酶形成造成血栓形成。直接凝血酶抑制劑是對(duì)強(qiáng)烈直接結(jié)合至活性酶中心且阻斷纖維蛋白原(天然底 物)脫離活性中心的抑制劑的命名。該阻斷中止了凝血酶-催化的纖維蛋白從纖維蛋白原 的轉(zhuǎn)化，且(作為結(jié)果)阻止纖維蛋白凝固并減緩或完全阻止血液凝固。因此，為了具有強(qiáng) 烈的抗凝血酶活性，直接凝血酶抑制劑應(yīng)當(dāng)與活性凝血酶中心具有最大可能強(qiáng)度的結(jié)合。 為此目的，它們應(yīng)當(dāng)滿(mǎn)足由凝血酶分子的活性中心的結(jié)構(gòu)所指示的幾個(gè)條件?；钚阅钢行耐ǔ榱吮憷譃閹讉€(gè)穴(cavity)或袋(pocket)，以接受在酰 胺解反應(yīng)發(fā)生點(diǎn)附近的其纖維蛋白原底物的不同氨基酸。袋S1為一個(gè)深且窄的穴，其具有 由憎水性氨基酸殘基和負(fù)電荷源形成的壁，且該負(fù)電荷源事實(shí)上在該穴的底部并在氨基酸 Asp 189的羧基基團(tuán)存在下產(chǎn)生。袋S1起到將纖維蛋白原中的主要氨基酸殘基(賴(lài)氨酸或 精氨酸)直接結(jié)合至肽鍵斷裂點(diǎn)(在賴(lài)氨酸或精氨酸的C-端)的作用。該主要氨基酸的 長(zhǎng)直鏈烴殘基延伸了袋S1的全長(zhǎng)，而在烴殘基末端的正電荷主要片段對(duì)袋S1底部的負(fù)電 荷天冬氨酸殘基形成了鹽橋。因此，袋S1對(duì)于鑒定纖維蛋白原的多肽鏈中的主要氨基酸殘 基是最適宜的。另一個(gè)袋S2，通過(guò)非極性氨基酸殘基形成，緊鄰著袋S1，且起到鑒定纖維蛋白原 的氨基酸序列中在袋S1接收的主要氨基酸后(在主要氨基酸的N-端)的次要憎水性氨基 酸(纈氨酸、異亮氨酸和亮氨酸)的作用。袋S2具有比袋S1稍微較小的容積，且其并不含 有任何帶電氨基酸基團(tuán)。因此，袋S2對(duì)于結(jié)合非極性脂肪氨基酸的小型烴殘基是理想適宜 的。發(fā)現(xiàn)另一個(gè)袋S3在凝血酶表面上與袋S2相接。其也是憎水性袋，但是其具有相 當(dāng)大的容積且不是精確限定的，因?yàn)槠湎喈?dāng)大的一部分為開(kāi)放的，且直接暴露于溶劑。袋S3 起到了接收纖維蛋白原的大型脂肪和芳香憎水性氨基酸片段的作用，其中該片段在肽鏈中 距離斷裂處兩至三個(gè)單元(link)。直接凝血酶抑制劑必須以?xún)?yōu)化的方式填充于凝血酶分子的活性中心的這三個(gè)袋 中。例如，公知的三肽抑制劑D-Phe-Pro-Arg通過(guò)X-射線結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)與活性凝血酶中心 反應(yīng)如下精氨酸殘基填充袋S1，脯氨酸殘基占據(jù)袋S2，和D-苯丙氨酸占據(jù)袋S3。在目前臨床實(shí)踐中使用以控制血栓形成的藥物通常并不適于抑制血液中已經(jīng)形 成的過(guò)量的凝血酶。醫(yī)生傾向于自由地使用間接凝血酶抑制劑，如未分級(jí)的肝素和低分子 量肝素，和維生素K拮抗劑(華法林(warfarin))。所有的這些藥物本身并不能抑制在系 統(tǒng)中累積的過(guò)量凝血酶。各種肝素僅加速了存在于血漿中的天然凝血酶抑制劑-抗凝血酶 III (AT III)-的抑制作用，且因此如果患者血漿中的AT III含量出于這種或那種原因非常 低時(shí)，肝素僅具有弱的抗凝血作用，。維生素K拮抗劑通過(guò)抑制肝中凝血因子的前體的合成
6而降低凝固速率。明顯地，這為相對(duì)較慢的選擇，其在需要快速抑制血液中存在的凝血酶的 緊急情況下不能提供幫助。間接凝血藥治療的限制已經(jīng)導(dǎo)致了藥物公司意欲開(kāi)發(fā)強(qiáng)效的且具選擇性的直接 凝血酶抑制劑。當(dāng)目前為止，大量的此類(lèi)凝血酶抑制劑已經(jīng)被開(kāi)發(fā)出來(lái)。然而，它們中的大 部分并沒(méi)有顯示出藥物所需的所有性質(zhì)。繼續(xù)進(jìn)行研究以改善它們的藥理學(xué)性質(zhì)如有效時(shí) 間、低毒性、水中的溶解度、口服生物利用度等。理想的凝血酶抑制劑還必須對(duì)固定于血塊 中的凝血酶有效。其必須對(duì)凝血酶具有選擇性，而不抑制血纖蛋白溶解中涉及的蛋白酶，在 血液中保持很長(zhǎng)時(shí)間，在肝中抵抗酶和細(xì)胞色素P450的作用，保持于水性介質(zhì)中，對(duì)于血 液蛋白結(jié)合免疫(或僅稍微結(jié)合)，且為無(wú)毒的。然而，對(duì)化合物的初步測(cè)試對(duì)于其滿(mǎn)足這 些要求中的合適性而言是非決定性的。盡管大量有效的低分子量凝血酶抑制劑已經(jīng)被合成 了，但是在今天使用的僅有一個(gè)(阿加曲班，合成于日本)(U.S.專(zhuān)利5，214，052，1993)，其 已經(jīng)通過(guò)了所有必須的臨床測(cè)試。然而，其并不是理想的抑制劑，因?yàn)槠湓谌芤褐芯哂械腿?解度(其血漿中T1/2為36分鐘)。這意味著對(duì)于開(kāi)發(fā)新的有效且安全合成凝血酶抑制劑仍 然存在著挑戰(zhàn)。目前可得到的公開(kāi)的專(zhuān)利和科學(xué)研究描述了大量的凝血酶抑制劑。這些文獻(xiàn)總結(jié) 如下U.S.專(zhuān)利申請(qǐng) 2006/0014699 (Astra Zeneca AB) ,2006,和 U. S.專(zhuān)利 5，795，896 (Astra Aktiebolag)，1998，描述了包含美拉加群抑制劑的抗凝血藥物化合物?，F(xiàn)有技術(shù)中也已知吡咯烷凝血酶抑制劑(其描述于U. S.專(zhuān)利5，510，369 (Merck & Co)，1996中)和吡啶凝血酶抑制劑(如描述于U. S.專(zhuān)利5，792，779 (Merck & Co)，1998 中的那些)。本申請(qǐng)人已經(jīng)研究了許多科技文獻(xiàn)和著作，其含有關(guān)于已有抑制劑的結(jié)構(gòu)以及抑 制劑和凝血酶分子之間的反應(yīng)機(jī)理的信息。研究的文獻(xiàn)，如表1中所顯示，事實(shí)上包括已知 為凝血酶抑制劑的所有種類(lèi)的化合物。表1中所列的文獻(xiàn)已經(jīng)相當(dāng)足夠了(即使不使全部 的話)。由于我們開(kāi)發(fā)了自己的凝血酶抑制劑，我們故意避開(kāi)了這些文獻(xiàn)中描述的結(jié)構(gòu)。我 們引用的文獻(xiàn)并不含有具有我們作為發(fā)明所要求保護(hù)的新化合物的機(jī)構(gòu)特征的凝血酶抑 制劑的信息。本發(fā)明的實(shí)際目標(biāo)為開(kāi)發(fā)能夠作為直接凝血酶抑制劑的新化合物。這些抑制劑可 用于治療在各種病理學(xué)影響下的有機(jī)體中發(fā)展的急性血栓性病癥。有機(jī)體大量的不同的病 理學(xué)病癥涉及止血體系的病癥。作為疾病如心肌梗死、中風(fēng)、深靜脈或肺動(dòng)脈的血栓形成的 的結(jié)果而出現(xiàn)的血栓栓塞性病癥為全世界死亡的主要原因。并不令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，進(jìn)行了 多年研究努力以開(kāi)發(fā)能夠用作有效安全臨床藥物的藥品。這些藥物主要為具有抗凝血性質(zhì) 的抗凝血藥物。除非另有說(shuō)明，在本說(shuō)明書(shū)中使用下列定義活性中心為蛋白質(zhì)大分子在生化反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用的區(qū)域。蛋白質(zhì)是指蛋白質(zhì)大分子。目標(biāo)蛋白質(zhì)是指在結(jié)合過(guò)程中涉及的蛋白質(zhì)大分子。配體是指低分子量化學(xué)結(jié)構(gòu)的集合。結(jié)合過(guò)程是指配體和目標(biāo)蛋白質(zhì)的活性中心之間形成范德華力或共價(jià)絡(luò)合
7(complex)0篩選是指在一組化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物中鑒定與蛋白質(zhì)大分子的特定區(qū)域選擇性反 應(yīng)的化合物。校正定位(Correct positioning)是指將配體置于相應(yīng)于配體-蛋白絡(luò)合物的最 小自由能的位置。選擇性配體是指以特異性方式結(jié)合至具體目標(biāo)蛋白的配體。有效性(Validation)是指一系列計(jì)算和比較方法學(xué)以評(píng)估操作系統(tǒng)的質(zhì)量和其 在從隨機(jī)組的配體中選擇可靠結(jié)合至所給目標(biāo)蛋白的配體中的效力。參照蛋白是指用于調(diào)節(jié)模型計(jì)算(評(píng)分)參數(shù)以符合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的蛋白，或在操作 系統(tǒng)有效性期間，或以評(píng)價(jià)具體抑制劑的特異性結(jié)合。特異性結(jié)合配體是指僅結(jié)合至特定蛋白而不結(jié)合至其他蛋白的配體。抑制劑是指結(jié)合至具體目標(biāo)蛋白的活性中心且阻止生化反應(yīng)的正常進(jìn)行的配體。對(duì)接(Docking)是指在蛋白的活性中心定位配體。分?jǐn)?shù)(Scoring)是指估算結(jié)合配體至蛋白所需的自由能的計(jì)算。A G結(jié)合是指結(jié)合配體至目標(biāo)蛋白所需的最終自由能計(jì)算增益(freeenergy calculation gain)(使用 SOL 軟件)。(V6烷基是指具有1-6個(gè)碳原子的包括直鏈或支鏈烴鏈的烷基，例如，甲基、乙基、 正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基等。(V6烷氧基是指具有1-6個(gè)碳原子的包括直鏈或支鏈烴鏈的烷氧基，例如，甲氧 基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基等。鹵素是指氯、溴、碘或氟?？伤幱名}是指由式(I)活性化合物形成的任何鹽，除了為有毒的或抑制活性化合 物的吸收和藥效的鹽。此類(lèi)鹽可通過(guò)式(I)化合物和有機(jī)堿或無(wú)機(jī)堿之間的反應(yīng)來(lái)制備， 如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、甲胺、乙胺等。溶劑合物是指式(I)的活性化合物的結(jié)晶形式，其晶格包含該式(I)活性化合物 從其中結(jié)晶的水或其他溶劑的分子。可藥用載體是指必須與組合物的其他成分相容的且對(duì)于接受者無(wú)害的載體，亦 即，以對(duì)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物無(wú)毒的劑量和濃度使用。通常，可藥用載體為水性PH緩沖溶液。 生理學(xué)上可接受的載體的實(shí)例包括緩沖液如基于磷酸鹽、檸檬酸鹽或其他有機(jī)酸的鹽的溶 液；抗氧化劑，包括抗壞血酸、低分子量的多肽(小于10個(gè)殘基)；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、 明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天 冬酰胺、精氨酸或賴(lài)氨酸；單糖、二糖，和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯 合劑，如EDTA ；和糖醇，如甘露糖醇或山梨糖醇。治療有效量是指在哺乳動(dòng)物有機(jī)體中達(dá)到所需凝血酶抑制程度需要的量。哺乳動(dòng)物，在本文中所使用的意義，包括靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如，人類(lèi)、類(lèi)人猿、非_類(lèi) 人猿，和低等猴類(lèi))，食肉動(dòng)物(例如，貓、犬和熊)，嚙齒類(lèi)動(dòng)物(例如，小鼠、大鼠和松鼠)， 食蟲(chóng)動(dòng)物(例如，駒鼯和鼴鼠)等等。發(fā)明人所設(shè)定的實(shí)際目標(biāo)通過(guò)開(kāi)發(fā)通式(I)化合物包括其可藥用鹽或溶劑合物 而達(dá)到
8
A-B-C (I)其中C選自下列結(jié)構(gòu) 其中禮、R2、R3和R4彼此獨(dú)立地為氫或C^烷基；B為-(CH2)n-，其中n為1至5的整數(shù)；和A選自下列結(jié)構(gòu)
其中 R5 選自氫、Ch-烷氧基、CH2NR10Rn 和 CH(CH3)NR10Rn,
Ar
其中R6和R7彼此獨(dú)立地為氫、C^e烷基、(V6烷氧基或鹵素； R8為氫或Cm烷基； R9選自下列基團(tuán)
Rl2
I
zN\ Z Ar /s；
/\ o o
r12
Ar'
O
R10和R12彼此獨(dú)立地選自氫、。烷基、(CH2)mC00R13和(CH2)mC0N(R丄，
CN 101861304 A
說(shuō) 明 書(shū)5/45頁(yè)
o、
r7vvv
5
v/
,R8
I
/
N
O
,R7
Re \
Rs
10 其中m為1至4的整數(shù)，R13為氫或Ch烷基，Rn 為 Ch 烷基或 Ar ；Ar為苯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吲哚 基、苯并呋喃基或苯并噻吩基，其具有1-5個(gè)選自下列的取代基氫、Ch烷基、CH 烷氧基、鹵素、N(R13)2、OH、N02、CN、C00R13、C0N(R13)2 禾口 S02R13。所述通式⑴化合物中排除從該列表排除的化合物是已知的，具體而言，4-氨基-1-[3-[(2_甲基苯基)氨 基]-3-氧代丙基]吡啶鐺氯化物描述于Journal of Medicinal Chemistry, 17 (7), 739-744,1974,題目為“Carbocyclic Derivatives Related to Indoramin” ；4_ 氨 基-l-(2-苯氧基乙基)-吡啶鐺氯化物描述于Journal of Organic Chemistry, 26, 2740-7,1961,題目為"Application of Sodium Borohydride Reduction toSynthesis of Substituted Aminopiperidines, Aminmopiperazines, AminopyridinesAnd Hydrazines，，。 但是，應(yīng)當(dāng)注意，這些來(lái)源并沒(méi)有指出這些化合物用作凝血酶抑制劑的可能性。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案描述了下列的權(quán)利要求1的化合物，和它們的可藥用鹽或 溶劑合物
接基也位于袋S3中。從結(jié)合至活性凝血酶中心的角度來(lái)看，該連接基可表示為親水性和憎 水性分子基團(tuán)，但需要其通過(guò)選擇憎水連接基從而作為整體來(lái)部分地平衡抑制劑的憎水性 質(zhì)，以對(duì)抑制劑分子給出有利的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。同樣出于該目的，位于袋S3中的憎 水性片段可使用位于該袋中的在暴露于溶劑一側(cè)的憎水性殘基來(lái)修飾。本文中描述的凝血 酶抑制劑完全滿(mǎn)足上述要求。本權(quán)利要求通過(guò)本發(fā)明的凝血酶抑制劑對(duì)活性凝血酶中心的選擇性定位(對(duì)接) 按照下述程序來(lái)證明。對(duì)接受到抑制劑分子的總能量的全局最小化的影響?？傄种苿┠芰?由抑制劑結(jié)合至活性凝血酶中心的對(duì)應(yīng)構(gòu)象中的抑制劑的內(nèi)部張力能量和處于凝血酶區(qū) 域的抑制劑能量所構(gòu)成。反過(guò)來(lái)，凝血酶區(qū)域引起與抑制劑分子的靜電、范德華力反應(yīng)，且 許多反應(yīng)由凝血酶分子和配體的單獨(dú)部分的溶劑化和脫溶劑化反應(yīng)而引發(fā)。這些反應(yīng)已經(jīng) 描述于很多文獻(xiàn)中，且對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是熟悉的。使用遺傳算法重復(fù)多次進(jìn)行 全局最小化。最小化程序得到凝血酶抑制劑在該酶的活性中心的空間位置和功能分?jǐn)?shù)值， 該值用于估計(jì)形成本文所述的凝血酶抑制劑和凝血酶分子的絡(luò)合物的自由能。對(duì)于本文描 述的抑制劑，功能分?jǐn)?shù)通常小于-5kCal/mol，這與在小分子范圍和下面的抑制常數(shù)所一致。 利用功能分?jǐn)?shù)預(yù)測(cè)的可靠性可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法來(lái)測(cè)試。尤其是，所謂 的凝血酶抑制劑增強(qiáng)系數(shù)(表明在隨機(jī)分子中已知的活性凝血酶抑制劑的選擇性)基于功 能分?jǐn)?shù)值等于0. 85，這充分證明了預(yù)測(cè)的可靠性。本文中描述的抑制劑的幾何位置通過(guò)前 述的對(duì)接程序獲得，且也滿(mǎn)足對(duì)于凝血酶抑制劑結(jié)合至活性凝血酶中心的優(yōu)化條件，其中 它們的內(nèi)在抑制活性由凝血酶催化的纖維蛋白原酰胺解反應(yīng)來(lái)顯示。所要求保護(hù)的化合物可通過(guò)對(duì)于有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言已知的常用方法 而獲得。生物體的許多各種病理學(xué)病癥涉及在止血系統(tǒng)中發(fā)展的病癥。在此類(lèi)病癥如心肌 梗死、中風(fēng)、深靜脈或肺動(dòng)脈的血栓形成中出現(xiàn)的血栓栓塞性病癥為世界范圍的主要的死 亡的原因。本發(fā)明也包括藥物組合物，其用于治療和預(yù)防凝血酶-相關(guān)的血栓栓塞性事件， 其包含治療有效量的權(quán)利要求1的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物，和可藥用載體。本發(fā)明的化合物可以以它們的生物累積于血液中的任何適宜的方式給藥。這可通 過(guò)腸胃外給藥方法得到，包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、經(jīng)皮、皮下和腹膜內(nèi)注射。也可以使用其他的給 藥方法，如經(jīng)由口服施用適宜的組合物通過(guò)胃腸道吸收?？诜┯糜捎谄涫褂萌菀锥鴥?yōu)選。 或者，藥物可通過(guò)陰道和直腸肌肉組織給藥。此外，本發(fā)明的化合物可以通過(guò)皮膚注射(例 如，透皮)或通過(guò)吸入給藥。應(yīng)當(dāng)理解，優(yōu)選的給藥方法取決于患者的病癥、年齡和易感性。對(duì)于口服施用，藥物組合物可以封裝為(例如)片劑或膠囊，還含有可藥用添加 劑，如粘合劑(例如，膠溶玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羥基丙基甲基纖維素)。填料(例 如，乳糖、微晶纖維素、磷酸氫鈣；硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅；馬鈴薯淀粉或淀粉羥乙酸 鈉)；或潤(rùn)濕劑(例如，月桂基硫酸鈉)。片劑可以為包衣的。液體口服組合物可以以下列 形式制備，例如，溶液、糖漿或懸浮液。此類(lèi)液體組合物通過(guò)通常方法利用可藥用添加劑，如 助懸劑(例如，纖維素衍生物)；乳化劑(例如，卵磷脂)，稀釋劑(純化的植物油)；和防腐 劑(例如，甲基或丙基-n-羥基苯甲酸酯或山梨酸)而得到。組合物也可含有適宜的緩沖 鹽、調(diào)味劑、色素和甜味劑。
在這些組合物中的活性成分的含量介于0. 至99. 9%組合物重量之間，優(yōu)選為 5%至 90%。這些凝血酶抑制劑的毒性使用標(biāo)準(zhǔn)藥物規(guī)則在實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中測(cè)量LD5(I(50%數(shù)量 的致死劑量)來(lái)確定。對(duì)于本發(fā)明的優(yōu)選化合物，LD5(I劑量為超過(guò)367mg/kg，這與臨床測(cè)試 后阿加曲班的致死劑量相一致，阿加曲班的LD5Q = 475mg/kg。為了更好地理解本發(fā)明的主題，下面為一些實(shí)施例，其示例性地說(shuō)明新化合物的 合成，以及用于它們合成的中間體產(chǎn)物的原料，還有用于研究本發(fā)明所要求保護(hù)的新化合 物的抗凝血活性的方法的說(shuō)明。實(shí)施例僅為示例性的，且本發(fā)明的思想并不限于下面所給出的實(shí)施例的范圍。實(shí)施例1
中間體產(chǎn)物3-(3-氯丙氧基)-5-甲基苯酚的合成 將3. 8g(27mmol)的二羥基甲苯(orcin)水合物、4. 8g(30mmol)的 1-溴-3-氯丙 烷，和4.0g(29mmol)的碳酸鉀的混合物于30ml乙腈中在攪拌下沸騰36小時(shí)。然后蒸發(fā)反 應(yīng)混合物，溶于30ml乙醚中，用15ml飽和碳酸鉀溶液洗滌兩次，棄去水層，乙醚層用15ml 的10%氫氧化鈉溶液萃取3次。棄去乙醚層，水層小心地用濃HC1酸化，然后用15ml乙醚 萃取3次。合并乙醚萃取物，用少量的飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，并用無(wú)水硫酸鈉干燥，用約 1/3份(體積)的己烷稀釋?zhuān)⑼ㄟ^(guò)硅膠層過(guò)濾。蒸發(fā)得到1.7g黃色油狀物，為約70%二 羥基甲苯(RfO. 10)和約30% 3-(2-氯丙氧基)-5-甲基苯酚(RfO. 26，產(chǎn)量約1. 2g(22%純 度))的混合物。類(lèi)似方法用于制備3-(2-氯乙氧基)-5-甲基苯酚(Rf 0.26，產(chǎn)率約1. lg(20%純 度))，從二羥基甲苯水合物和1-溴-2-氯乙烷，以及3- (4-氯丁氧基)-5-甲基苯酚從二羥 基甲苯水合物和1-溴-4-氯丁烷得到。實(shí)施例2中間體產(chǎn)物苯磺酸的3-(3-氯丙氧基)-5-甲基苯基酯的合成 將3g(17mmol)苯磺酰氯和2g(20mmol)三乙胺加至1. 6g前述實(shí)施例混合物于 30ml無(wú)水四氫呋喃(THF)中的溶液中。將該混合物攪拌7小時(shí)，將沉淀三乙基氯化銨過(guò)濾出，并蒸發(fā)。將得到的油狀物溶于20ml乙醚中，并在10ml的10-12%氨水溶液中洗滌幾 次，以分離過(guò)量的未反應(yīng)的苯磺酰氯(通過(guò)薄層層析(TLC)控制)，然后用10ml約20%的 鹽酸洗滌。用無(wú)水硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)，得到1.94g黃色油狀物，其含有約等量的苯磺酸的 3_(3_氯丙氧基)-5_甲基苯基酯(Rf 0.36)和二羥基甲苯的二苯甲?；撬狨?Rf 0.25) (根據(jù)TLC)。類(lèi)似地，3_(2_氯乙氧基)_5_甲基苯酚，3_(3_氯丙氧基)_5_甲基苯酚，和 3_(4_氯丁氧基)-5_甲基苯酚和適宜的芳基磺酰氯得到2-氯苯磺酸的3-(3-氯丙氧基)-5-甲基苯基酯(77%純度)2-氟苯磺酸的3- (3-氯丙氧基)-5-甲基苯基酯(88% )2-甲酯基苯磺酸的3_(3_氯丙氧基)_5_甲基苯基酯(56% )苯磺酸的3_(2_氯乙氧基)_5_甲基苯基酯(72%)2-氯苯磺酸的3-(2-氯乙氧基)-5-甲基苯基酯(35% )2-氟苯磺酸的3-(2-氯乙氧基)-5-甲基苯基酯(34% )2-甲酯基苯磺酸的3_(2_氯乙氧基)_5_甲基苯基酯(37% )苯磺酸的3-(4-氯丁氧基)-5-甲基苯基酯(45% )2-氯苯磺酸的3-(4-氯丁氧基)-5-甲基苯基酯(27% )2-氟苯磺酸的3_(4_氯丁氧基)_5_甲基苯基酯(32% )2-甲酯基苯磺酸的3-(4-氯丁氧基)-5-甲基苯基酯(21%).實(shí)施例3中間體產(chǎn)物2-氯苯磺酸的3_(3_碘丙氧基)_5_甲基苯基酯的合成
下文簡(jiǎn)稱(chēng)為ClPhO-3-I將2g(13mmol)經(jīng)煅燒的碘化鈉加至于30ml無(wú)水丙酮中的2. 6g混合物(含有 2-氯苯磺酸的3-(3-氯丙氧基)-5-甲基苯基酯，類(lèi)似于上面實(shí)施例制備)，并煮沸48小 時(shí)。然后使用10ml己烷稀釋反應(yīng)混合物，并蒸發(fā)。得到2. 45g亮黃色油狀物，其含有苯磺酸 的3-(2-碘乙氧基)-5-甲基苯基酯(RfO. 35)和相應(yīng)的二羥基甲苯的二苯甲酰磺酸酯(Rf 0. 25)。類(lèi)似技術(shù)用于將適宜的氯化物制備為苯磺酸的3_(3_碘丙氧基)_5_甲基苯基酯2-氟苯磺酸的3_(3_碘丙氧基)_5_甲基苯基酯2-甲酯基苯磺酸的3_(3_碘丙氧基)_5_甲基苯基酯苯磺酸的3_(2_碘乙氧基)_5_甲基苯基酯 2-氯苯磺酸的3-(2_碘乙氧基)-5_甲基苯基酯2-氟苯磺酸的3_(2_碘乙氧基)_5_甲基苯基酯2-甲酯基苯磺酸的3_(2_碘乙氧基)_5_甲基苯基酯苯磺酸的3-(4-碘丁氧基)-5-甲基苯基酯2-氯苯磺酸的3-(4-碘丁氧基)-5-甲基苯基酯2-氟苯磺酸的3-(4-碘丁氧基)-5-甲基苯基酯2-甲酯基苯磺酸的3-(4-碘丁氧基)-5-甲基苯基酯實(shí)施例44-氨基-1-(3-(3-甲基-5-(2-氯苯磺酰基氧基)苯氧基)丙基)_吡啶鐺碘化物 (HC_023s_I0C)的合成 將0. 55g的“粗碘化物”(來(lái)源于前面實(shí)施例)(計(jì)算為70 %活性物質(zhì))和 0. 08g(0. 85mmol)的4-氨基吡啶于10ml無(wú)水二噁烷中的混合物煮沸20小時(shí)。將混合物冷 卻后，將溶液蒸發(fā)，并將得到的油狀物用幾批乙醚研磨直到其變?yōu)楣腆w。將固體沉淀過(guò)濾， 并從二噁烷和乙腈的混合物(5 1)重結(jié)晶兩次，將鹽沉淀物濾出，并用乙醚洗滌。真空下干燥，得到0.35g(65%)白色鹽。NMR ^(Bruker DRX500，500MHz，DMS0_d6， m. d.，J Hz) :2. 21s, 3H ；3. 91t，2H，J = 5. 49 ；2. 18m, 2H, J = 6. 10 ；4. 26t，2H，J = 6. 71 ；
6.40s, 1H, 6. 50s, 1H, 6. 68s, 1H ；7. 59t, 1H, J = 7. 94，7. 83t, 1H, J = 7. 94，7. 87d, 1H, J =
7.93，7. 95d, 1H, J = 7. 93 ；6. 80d, 2H, J = 6. 72,8. lid, 2H, J = 6. 72 ；8. 07s, 2H。類(lèi)似技術(shù)用于將適宜的碘化物和雜環(huán)化合物、硫脲和硫脲衍生物制備為4-氨基-l-(3_(3-甲基_5-(苯磺酰基氧基)苯氧基)丙基)_吡啶鐺碘化物 (HC_016s_I0C)產(chǎn)率78%。NMR ^(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 20s, 3H ；3. 88t，2H，J = 5. 50 ；2. 16m，2H，J = 6. 11 ；4. 25t，2H，J = 6. 71 ；6. 31s, 1H，6. 44s, 1H，6. 66s, 1H ；7. 68t，2H，J = 7. 94，7. 82t, 1H, J = 7. 94，7. 87d, 2H, J = 7. 32 ；6. 81d, 2H, J = 6. 72,8. 17d, 2H, J = 6. 72 ；8. 09s，2H。2-氨基-l-(3_(3-甲基-5_(苯磺?；趸?苯氧基)丙基)_噻唑鐺碘化物 (HC_017s_I0C) 產(chǎn)率65%。NMR (Bruker DRX500，500MHz，DMS0_d6，m. d.，J Hz) 2. 21 s，3H ； 3. 93t，2H，J = 6. 11 ；2. llm，2H，J = 6. 10 ；4. 15t，2H，J = 6. 71 ；6. 35s, 1H，6. 44s, 1H，6. 68s, 1H ；7. 69t，2H， J = 7. 33,7. 84t, 1H, J = 7. 32,7. 88d, 2H, J = 7. 93 ；7. 02d, 1H, J = 4. 27,7. 42d, 1H, J = 4. 27 ；9. 42s，2H。3- (3-甲基-5-(苯磺酰基氧基)苯氧基)丙基-異硫脲鐺碘化物(HC_018s_I0C) 產(chǎn)率80%。NMR ^(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 21s, 3H ；3. 95t，2H，J = 6. 10 ；2. 00m, 2H, J = 6. 71 ；3. 25t, 2H, J = 7. 32 ；6. 40s, 1H, 6. 25s, 1H, 6. 74s, 1H ；7. 69t, 2H, J = 7. 94，7. 84t, 1H, J = 7. 93,7. 89d, 2H, J = 7. 33 ；9. 03s，4H。4-氨基-l-(2_(3-甲基-5_(苯磺酰基氧基)苯氧基)乙基)_吡啶鐺碘化物 (HC_019s_I0C) 產(chǎn)率60%。NMR 屯(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 20s, 3H ；4. 24t，2H，J =
174. 88 ；4. 48t, 2H, J = 4. 89 ；6. 39s, 1H, 6. 45s, 1H, 6. 73s, 1H, ；7. 68t, 2H, J = 7. 93,7. 82t, 1H, J = 7. 93,7. 87d, 2H, J = 7. 32 ；6. 82d, 2H, J = 7. 32,8. 18d, 2H, J = 7. 33 ；8. 14s, 2H。2- (3-甲基-5-(苯磺酰基氧基)苯氧基)乙基-異硫脲鐺碘化物(HC_020s_I0C) 產(chǎn)率45%。NMR ^(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 22s, 3H ；4. llt，2H，J = 5. 49 ；3. 54t, 2H, J = 5. 49 ；6. 41s, 1H, 6. 48s, 1H, 6. 76s, 1H ；7. 69t, 2H, J = 7. 93,7. 84t, 1H, J = 7. 93，7. 89d，2H，J = 7. 32 ；9. 10s，4H。2- (3-甲基-5- (2-氯苯磺?；趸?苯氧基)乙基_異硫脲鐺碘化物(HC_024s_ IOC) 產(chǎn)率53%。NMR ^(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 21s, 3H ；3. 95t，2H，J = 5. 50 ；2. 12m，2H，J = 5. 50 ；4. 15t，2H，J = 6. 10 ；6. 42t, 1H，6. 51s, 1H，6. 70s, 1H ；7. 59t, 1H, J = 7. 32,7. 83t, 1H, J = 7. 94，7. 88d, 1H, J = 7. 94，7. 95d, 1H, J = 7. 94 ；7. Old, 1H, J = 4. 27，7. 42d, 1H, J = 4. 27 ；9. 39s, 2H。3-(3-甲基-5-(2-氯苯磺?；趸?苯氧基)丙基-異硫脲鐺碘化物(HC_026s_ IOC) 產(chǎn)率55%。NMR ^(Bruker DRX500，500MHz，DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 22s, 3H ；3. 97t,2H, J =
6.10 ；2.01m，2H，J = 7. 33，J = 6. 10 ；4. 26t，2H，J = 7. 33 ；6. 47s, 1H, 6. 51s, 1H, 6. 75s, 1H ；
7.60t, 1H, J = 7. 93,7. 84t, 1H, J = 7. 94，7. 88d, 1H, J = 7. 93,7. 96d, 1H, J = 7. 94 ；8. 95s, 2H，9. 07s，2H。4-氨基_l-(2-(3-甲基-5-(2-氯苯磺?；趸?苯氧基)乙基)_吡啶鐺碘化物 (HC_025s_I0O 產(chǎn)率58%。NMR ^(Bruker DRX500, 500MHz, DMS0_d6，m. d.，J Hz) :2. 20s, 3H ；4. 26t，2H，J = 4. 88 ；4. 49t, 2H, J = 4. 88 ；6. 45s, 1H，6. 51s，1H, 6. 74s, 1H ；7. 58t, 1H, J = 7. 93,7. 84t, 1H, J = 7. 94，7. 88d, 1H, J = 7. 93,7. 94d, 1H, J = 7. 94 ；6. 82d, 2H, J = 7. 32,8. 18d, 2H，J = 7. 33 ；8. 14s，2H。以類(lèi)似方式，通過(guò)描述于實(shí)施例1-4中的技術(shù)，從各種芳基苯磺酰氯和雜環(huán)苯磺 酰氯。合成化合物的化學(xué)式、質(zhì)譜參數(shù)和計(jì)算的功能評(píng)分顯示在表2中?；衔锬軌蛞缘?化物、溴化物、氯化物或其他鹽的形式得到。實(shí)施例5化合物的的合成 1. 4-氯-3-硝基苯-1-磺酰氯將鄰-硝基氯苯胺(15g)在攪拌下加至30ml氯磺酸中，并在100°C加熱2小時(shí)， 接著在110°C加熱2小時(shí)，在127°C加熱5小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并傾倒至碎冰 (140g)中。將沉淀過(guò)濾；濾餅用冰水淋洗，并在空氣中干燥。得到15g的4-氯-3-硝基 苯-1磺酰氯。
2. 4-氯-N-甲基-3-硝基-N-苯基苯磺酰胺 將4-氯-3-硝基苯-1-磺酰氯(10. 6g,0. 041mol)溶于甲苯(50ml)中；然后加入 三乙胺(4. 14g，0. 041mol)。向得到的溶液中，在攪拌下加入N-甲基苯胺(4. 4g，0. 041mol)。 反應(yīng)混合物在70-80°C進(jìn)行1小時(shí)。此后，將其冷卻。冷卻的溶液用30ml水洗滌兩次，并 真空濃縮。殘余物從乙醇中重結(jié)晶。4-氯-N-甲基-3-硝基-N-苯基苯磺酰胺的產(chǎn)量為 9. 4g(61% )。3. N-甲基-4-(甲基氨基)-3-硝基-N-苯基苯磺酰胺 將4-氯-N-甲基-3-硝基-N-苯基苯磺酰胺(9. 4g，0. 029mol)于乙醇(50ml)中的 溶液與25ml的40%甲胺水溶液混合。將反應(yīng)混合物加熱至70°C，并在此溫度攪拌1小時(shí)。 冷卻并過(guò)濾后，濾餅用乙醇洗滌，并在60°C干燥。N-甲基-4-(甲基氨基)-3_硝基-N-苯 基苯磺酰胺的產(chǎn)量為9. 0g(97% )。4. 3-氨基-N-甲基-4-(甲基氨基)-N-苯基苯磺酰胺 將N-甲基_4-(甲基氨基)-3-硝基-N-苯基苯磺酰胺(9g，0.028mol)溶于異丙 醇(90ml)中。向該溶液中，加入胼水合物(11ml)，活性炭(2g)，和FeCl3 6H20(0.5g，于 10ml乙醇中)。將反應(yīng)混合物沸騰8小時(shí)?；钚蕴客ㄟ^(guò)過(guò)濾除去。將濾液蒸發(fā)至干。3-氨 基-N-甲基-4-(甲基氨基)-N-苯基苯磺酰胺的產(chǎn)量為8. lg(99% )。5.3-氯-N-(5-(N-甲基-N-苯基氨磺酰基)-2-(甲基氨基)苯基)丙酰胺 向在冰上冷卻( 5°C )的3-氨基-N-甲基_4-(甲基氨基)-N-苯基苯磺酰胺 (5. 4g，0. 018mol)和三乙胺(1. 81g，0. 018mol)于二甲基甲酰胺(16ml)中的溶液中，加入氯 丙酰氯(2. 32g，0.018mol)。反應(yīng)在室溫?cái)嚢?小時(shí)。此時(shí)，加入水(14ml)和乙腈(5ml)， 持續(xù)5小時(shí)。形成的沉淀過(guò)濾。3-氯-N-(5-(N-甲基-N-苯基氨磺?；?-2-(甲基氨基) 苯基)丙酰胺的產(chǎn)量為3. lg(45%)。6. 4-氨基-1-(3-(5-(N-甲基_N_苯基氨磺?；?_2_ (甲基氨基)苯基氨 基)-3-氧代丙基)吡啶鐺氯化物 將3-氯-N-(5_(N-甲基-N-苯基氨磺?；?_2_(甲基氨基)苯基)丙酰胺(lg， 0. 0026mol)和4-氨基吡啶鐺(0. 73g,0. 0078mol)在無(wú)水丙酮(50ml)中沸騰50小時(shí)。將 殘余物過(guò)濾，并從10 1的乙腈與乙醇的混合物中進(jìn)行結(jié)晶。4-氨基-1- (3- (5- (N-甲基-N-苯基氨磺?；?_2_ (甲基氨基)苯基氨基)_3_氧 代丙基)吡啶鐺氯化物的產(chǎn)量為0. 54g(43% )。7.4-氨基-1-(2_(1-甲基-5_(N-甲基_N_苯基氨磺?；?-1H_苯并[d]咪 唑-2-基)乙基)吡啶鐺氯化物 向4-氨基-l-(3-(5_(N-甲基-N-苯基氨磺酰基)-2_(甲基氨基)苯基氨 基)_3_氧代丙基)吡啶鐺氯化物(0.2g，0.00042mol)于乙腈(8ml)中的溶液中，加入亞硫酰氯(0. 2ml)。反應(yīng)混合物沸騰10分鐘后，將其在室溫室溫靜置24小時(shí)，然后用乙醚 (8ml)稀釋。形成的沉淀通過(guò)過(guò)濾收集，并從10 1的乙腈與無(wú)水乙醇的混合物結(jié)晶。4-氨 基-l-(2-(l-甲基-5-(N-甲基-N-苯基氨磺?；?-lH-苯并[d]咪唑-2-基)乙基)吡 啶鐺氯化物的產(chǎn)量為0. 055g(26% )。以類(lèi)似的方式，通過(guò)描述于實(shí)施例5中的技術(shù)，合成多種化合物，其化學(xué)式、質(zhì)譜 參數(shù)和計(jì)算的功能評(píng)分顯示在表3中?；衔锬軌蛞缘饣铩寤?、氯化物或其他鹽的形 式得到。實(shí)施例6測(cè)試化合物對(duì)凝血酶活性的作用的研究合成的物質(zhì)對(duì)凝血酶活性的作用通過(guò)下列方法研究測(cè)量凝血酶在水性緩沖 液中水解特異低分子量底物的速率(在上述化合物存在或不存在的情況下)。這些底 物之一為發(fā)色底物 Chromozim TH(CTH) :N-(p-Tosyl)-Gly-Pro-Arg-pNA[Sonder SA, Fenton Jff 2nd. ThrombinSpecificity with Tripeptide Chromogenic Substrates Comparison of Human andBovine Thromibins with and without Fibrinogen Clotting Activities. Clin. Chem.，1986，32 (6) =934-937] 在許多實(shí)驗(yàn)中使用的另一底物為熒光底 物BOC-Ala-Pro-Arg-AMC(S)，其中B0C為丁氧基羰基基團(tuán)，和AMC為7-氨基-4-甲基香豆 基[Kawabata S, Miura T, Morita T,Kato H, Fujikawa K,IvanagaS,Takada K,Kimura T, Sakakibara S. Highly Sensitivepeptide-4-methylcoumaryl-7-amide Substrates for Blood-Clotting Proteases andTrypsin. Eur. J. Biochem. ,1988,172(1) : 17—25]。將普通96-孔板的各孔填充有緩沖液(其含有140mM的NaCl，20mM的HEPES，和 0. 聚乙二醇(Mw = 6000), pH = 8. 0)。加入底物(孔中最終濃度為lOOmcM)、凝血酶(最 終濃度為190pM)和不同濃度的測(cè)試化合物(建議的凝血酶抑制劑)(0. 002mM至3. 3mM)。 當(dāng)使用發(fā)光底物時(shí)，在分光光度計(jì)Molecular Devices板讀數(shù)器(Thermomax，U.S.)上跟 蹤有色反應(yīng)產(chǎn)物_對(duì)硝基苯胺_的累積，在405nm波長(zhǎng)測(cè)量吸光度的增加。在熒光底物的 情況下，凝血酶從熒光底物分裂出氨基甲基香豆基，在水解期間以游離形式顯著地發(fā)熒光 (激發(fā)入_380nm和發(fā)射入_440nm)。反應(yīng)動(dòng)力學(xué)記錄在熒光TitertekFluoroskan板讀數(shù) 器(LabSystem, Finland)上。初始反應(yīng)速率測(cè)量為動(dòng)力學(xué)曲線傾角對(duì)直線部分的斜率(從記錄的10至15分 鐘)。假定沒(méi)有抑制劑的反應(yīng)速率為100%。兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的算術(shù)平均值用作最終結(jié)果。

圖1顯示的為對(duì)于發(fā)光底物Chromozim TH(CTH)在凝血酶的作用下的特征動(dòng)力學(xué) 水解曲線的實(shí)例，在不同濃度化合物HC-019S-I0C(參見(jiàn)表4)存在下。沒(méi)有抑制劑的動(dòng)力 學(xué)水解曲線用作對(duì)照。圖2顯示CTH水解抑制程度和體系中另一新合成化合物(HC-018S-I0C)(其為高 度有效的凝血酶抑制劑(參見(jiàn)表4))的濃度之間的關(guān)系。大量新合成化合物對(duì)凝血酶活性的抑制作用程度的數(shù)據(jù)顯示在表4中。因此，如上得到的結(jié)果顯示所有新合成的化合物為直接凝血酶抑制劑。不同的化 合物抑制程度不同，但是大多數(shù)的新化合物為高度有效的凝血酶抑制劑，適于用作用于控 制凝血酶_相關(guān)的血栓栓塞性病癥藥物組合物的基礎(chǔ)，且也用于研究。表1 對(duì)于多種凝血酶抑制劑的公開(kāi)的關(guān)鍵文獻(xiàn)列表
表3通過(guò)實(shí)施例5描述的方法合成的凝血酶抑制劑的質(zhì)譜參數(shù)和計(jì)算的功能分?jǐn)?shù) 表4在不同濃度系列的新合成化合物存在下，凝血酶底物的水解速率的變化的實(shí)例
45
權(quán)利要求
通式(I)化合物及其可藥用鹽或溶劑合物A-B-C(I)其中C選自下列結(jié)構(gòu)其中R1、R2、R3和R4彼此獨(dú)立地為氫或C1-6烷基；B為-(CH2)n-，其中n為1至5的整數(shù)；A選自下列結(jié)構(gòu)其中R5選自氫、C1-6烷氧基、CH2NR10R11和CH(CH3)NR10R11；其中R6和R7獨(dú)立地為氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基和鹵素；R8為氫或C1-6烷基；R9選自R10和R12彼此獨(dú)立地選自氫、C1-6烷基；(CH2)mCOOR13和(CH2)mCON(R13)2，其中m為1至4的整數(shù)，R13為氫或C1-6烷基，R11為C1-6烷基或Ar；Ar為苯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、噠嗪酮基、吡嗪基、吲哚基、苯并呋喃基或苯并噻吩基，其具有1-5個(gè)選自下列的取代基氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基、鹵素、N(R13)2、OH、NO2、CN、COOR13、CON(R13)2和SO2R13；所述通式(I)化合物中排除FPA00001037517500011.tif,FPA00001037517500012.tif,FPA00001037517500021.tif,FPA00001037517500022.tif,FPA00001037517500023.tif,FPA00001037517500031.tif,FPA00001037517500032.tif
2.權(quán)利要求1的化合物，及其可藥用鹽或溶劑合物，尤其為Rn為烷基或Ar ； Ar為苯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、嘧啶基、噠嗪酮基、吡嗪基、吲哚 基、苯并呋喃基或苯并噻吩基，其具有1-5個(gè)選自下列的取代基氫、Ch 烷基、CH 烷氧基、鹵素、N(R13)2、OH、N02、CN、C00R13、C0N(R13)2 禾口 S02R13 ； 所述通式(I)化合物中排除 其中Y選自氫、鹵素、C00R13、C0N(R13)jP S02R13 ；以及 r為2至5的整數(shù)。
3.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽或溶劑合物，其能夠抑制凝血酶。
4.權(quán)利要求1的化合物及其可藥用鹽或溶劑合物的用途，其用作凝血酶抑制劑。
5.藥物組合物，其用于治療和預(yù)防凝血酶_相關(guān)的血栓栓塞性事件，該組合物包含治 療有效量的權(quán)利要求1的化合物、其可藥用鹽或溶劑合物、以及可藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的化合物、這些化合物作為凝血酶抑制劑的用途，以及基于它們的藥物組合物，以及可用于治療和預(yù)防凝血酶-相關(guān)的血栓栓塞性事件以及在研究中的用途。
文檔編號(hào)C07D401/06GK101861304SQ200880104825
公開(kāi)日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2008年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年6月28日
發(fā)明者亞歷克西·A·博戈萊伯夫, 亞歷克西·N·羅馬諾夫, 亞歷山大·S·戈巴坦科, 伊里納·V·格里布科瓦, 埃琳娜·I·西諾里茲, 奧爾加·A·康達(dá)科瓦, 安德雷·A·巴蒂林, 尤里·V·庫(kù)茲涅索夫, 弗拉迪米爾·B·蘇利莫夫, 法佐爾·I·阿陶拉卡諾夫 申請(qǐng)人:Bionika有限責(zé)任公司