具有抗真菌活性的新型微生物產(chǎn)物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了可以成為有前景的創(chuàng)新藥物先導(dǎo)化合物的具有新型母核的化合物、其作為抗真菌劑的用途及其制備方法等。本發(fā)明提供下式所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，和包含上述的抗真菌劑等。NITE BP-0167720140730
【專利說明】
具有抗真菌活性的新型微生物產(chǎn)物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及具有新型母核的化合物、其作為抗真菌劑的用途及其制備方法等。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，高齡人群的增加、先進(jìn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展、晚期癌癥患者的免疫缺陷等真菌感染 有所增加。這些感染帶來嚴(yán)重影響，甚至經(jīng)常導(dǎo)致死亡。由于現(xiàn)有抗真菌藥種類并不多，且 其毒性很高，因此對(duì)不同于現(xiàn)有藥物的新抗真菌劑的母核存在需求。此外，由于抗真菌藥的 使用導(dǎo)致耐藥菌出現(xiàn)的增加，急需對(duì)新型藥物進(jìn)行開發(fā)。而基于念珠菌的抗真菌劑顯示低 毒性，但由于其分子量大，與血清的反應(yīng)性會(huì)帶來問題?；谶蝾惖目拐婢鷦╄b于其毒性， 難以以高濃度施用。因此，對(duì)顯示與血清低反應(yīng)性和低毒性的低分子量有效化合物存在強(qiáng) 烈需求。
[0003] 目前，在從微生物產(chǎn)物尋求藥物產(chǎn)品的種子化合物中，主要收集陸地分離來源并 對(duì)其進(jìn)行微生物分離。至今發(fā)現(xiàn)的微生物代謝產(chǎn)物包括青霉素（penicillin)和阿霉素 (adriamycin)，且發(fā)現(xiàn)了多種抗生素和抗癌劑，并將其用作針對(duì)感染、癌癥等的治療藥物。 然而，由于長期的連續(xù)探索，從陸地區(qū)域獲得的微生物代謝產(chǎn)物大多為已知化合物，而用于 新型藥物候選的次級(jí)代謝產(chǎn)物非常難于獲得。因此，天然物質(zhì)藥物開發(fā)公司的新型藥物開 發(fā)迅速減少。為克服該狀況，使用化學(xué)庫(天然物質(zhì)和合成化合物）的篩選已在全球范圍展 開。然而意外的是，未從所述化學(xué)庫獲得有前景的新型藥物候選化合物。在這種情勢(shì)下，獲 得新型藥物候選化合物極為困難。
[0004] 發(fā)明概述
[0005]本發(fā)明所解決的問題
[0006] 本發(fā)明是鑒于技術(shù)領(lǐng)域中的上述狀況而進(jìn)行，且目的是提供可以成為有前景的創(chuàng) 新藥物先導(dǎo)化合物的具有新型母核的化合物、其作為抗真菌劑的用途及其制備方法等。
[0007] 解決問題的方式
[0008] 鑒于上述在尋求新型藥物候選化合物中的現(xiàn)有狀況，本發(fā)明注意到了海洋微生物 來源。海洋微生物來源幾乎未經(jīng)利用，具有得到新型次級(jí)代謝產(chǎn)物的高可能性。然而，需要 有用于收集分離來源的特殊技術(shù)，對(duì)其培養(yǎng)的技術(shù)尚未有效建立。本發(fā)明對(duì)從海洋收集樣 品的方法、微生物的培養(yǎng)方法和評(píng)估方法等實(shí)施了深入研究，并在分離用于開發(fā)抗真菌劑 的有前景的微生物菌株中取得了成功。16S核糖體堿基序列分析揭示了該微生物菌株是鏈 霉菌屬(genus Streptomyces)的放線菌(actinomycetes)。此外，本發(fā)明成功從微生物培養(yǎng) 基分離并純化了顯示活性的化合物。所述化合物具有小分子量、與血清的低反應(yīng)性和強(qiáng)抗 真菌作用。此外，結(jié)構(gòu)分析結(jié)果是，發(fā)現(xiàn)了該化合物具有新型母核，且作為用于新型藥物研 發(fā)的種子化合物具有前景。發(fā)明人進(jìn)一步實(shí)施了基于這些發(fā)現(xiàn)的研究并完成了本發(fā)明。
[0009] 相應(yīng)地，本發(fā)明如下所述：
[0010] [1]下式所示的化合物：
[0012] 或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0013] [2]化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物使用氘代甲醇作為測(cè)量溶劑測(cè)量 時(shí)顯示下列13C-NMR和1H-NMR譜：
[0014] 表1
[0016] [3]藥物或農(nóng)藥，其包含上述[1]或[2]的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0017] [4]上述[3]的藥物或農(nóng)藥，其是抗真菌藥。
[0018] [5]上述[4]的藥物或農(nóng)藥，其革E向選自下組的屬的真菌:念珠菌(genus Candida) 屬和曲霉屬(genus Aspergillus)。
[0019] [6 ]制備上述[1 ]或[2]的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，該方法包括:在包 含碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)登錄號(hào)為NITE BP-01677的鏈霉菌屬(genus Streptomyces)的細(xì)菌 或其變體從而在培養(yǎng)基中產(chǎn)生所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并從所述培養(yǎng)物中回收 所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0020] [7]登錄號(hào)為NITE BP-01677的鏈霉菌屬的細(xì)菌或其變體。
[0021] 本發(fā)明還提供下列：
[0022] [8]用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防或治療真菌病的方法，其包括將治療有效量的上述[1] 或[2]的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥至有需要的哺乳動(dòng)物。
[0023] [9]防除植物疾病的方法，其包括:用治療有效量的上述[1]或[2]的化合物或其藥 學(xué)上可接受的鹽處理對(duì)象作物和/或?qū)ο笞魑锏姆N子。
[0024] [10]上述[1]或[2]的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于在哺乳動(dòng)物中預(yù)防或治 療真菌病的用途。
[0025]發(fā)明效果
[0026] 由于本發(fā)明的化合物具有小分子量、與血清的低反應(yīng)性和強(qiáng)抗真菌作用，可將其 用作抗真菌劑。此外，由于本發(fā)明的化合物具有新型母核，因此其在作為種子化合物用于開 發(fā)新型藥物中具有前景。本發(fā)明還提供本發(fā)明的化合物的制備方法。
[0027] 附圖簡述
[0028]圖1顯示了本發(fā)明化合物的NMR分析結(jié)果。
[0029]圖2顯示了抗真菌藥敏感性測(cè)試的結(jié)果(MIC(yg/mL))，其中KKRM是本發(fā)明的化合 物，MCFG是米卡芬凈(Micafungin)、AMPH是兩性霉素 B(amphotericin B)、5_FC是氟胞啼啶 (flucytosine)、FLCZ是氣康唑（fluconazole)、ITCZ是伊曲康唑（itraconazole)、VRCZ是伏 立康唑（Voriconazole)且MCZ是味康唑（miconazole) 〇
[0030] 實(shí)施方案的說明
[0031] 本發(fā)明在下文進(jìn)行詳細(xì)解釋。
[0032] 本發(fā)明提供通過下式所示的化合物：
[0034]或其藥學(xué)上可接受的鹽(這些在下文將統(tǒng)稱為本發(fā)明的化合物）。本發(fā)明的化合物 可包含一種以上的異構(gòu)體如基于不對(duì)稱碳原子的光學(xué)異構(gòu)體、基于雙鍵的幾何異構(gòu)體等， 全部這些異構(gòu)體及其混合物都涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍中。在上述式中，與雙鍵部分鄰接 的波浪線意在涵蓋下列兩種幾何異構(gòu)體。
[0036]藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括:與無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成 的鹽，或與有機(jī)酸如乙酸、苯二甲酸、富馬酸、草酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸、甲磺 酸、對(duì)甲苯磺酸等形成的鹽。
[0037] 本發(fā)明的化合物可使用通過本發(fā)明的發(fā)明人從鹿兒島縣加計(jì)呂麻島（Kakeroma Is land, Kagoshima Prefecture)的海砂分離的鏈霉菌屬細(xì)菌（以下也稱為本發(fā)明的細(xì)菌） 或其變體而產(chǎn)生。該細(xì)菌保藏于千葉縣木更津市如f $鎌足2-5-8，獨(dú)立行政法人制品評(píng)價(jià) 技術(shù)基盤機(jī)構(gòu)特許微生物保藏中心（National Institute of Technology and Evaluation(NITE)Patent Microorganisms Depositary,Kazusa-kamatari,Kisarazu, Chiba 2-5-8，Japan)(登錄號(hào)：NITE P-1677,保藏日期：2013年8月1 日），提交了將 NITE P- 01677轉(zhuǎn)移至基于布達(dá)佩斯條約的保藏的移管請(qǐng)求，該請(qǐng)求于2014年7月30日（移管日期)受 理，且該細(xì)菌的國際保藏登錄號(hào)為NITE BP-01677。
[0038] 所述細(xì)菌具有灰色的氣生菌絲，具有短的螺旋形的孢子鏈。可溶性色素產(chǎn)生黃色 系的色素。背面的顏色為奶油色至淡黃色的色系。成熟的孢子形成孢子團(tuán)。
[0039] 所述變體是源自本發(fā)明細(xì)菌的菌株，只要能產(chǎn)生本發(fā)明的化合物，其并不受特定 限制。例如，所述變體的16S rRNA基因核苷酸序列與本發(fā)明細(xì)菌的16S rRNA基因核苷酸序 列相同（即100%-致)或?qū)嵸|(zhì)上相同（例如如下文所述的，當(dāng)通過在變異原性物質(zhì)的存在下 產(chǎn)生突變時(shí)等）。所述變體還可顯示與本發(fā)明細(xì)菌相似的形態(tài)、生理學(xué)特征。
[0040] 當(dāng)用于本發(fā)明的說明書時(shí)，"與本發(fā)明細(xì)菌的16S rRNA基因核苷酸序列實(shí)質(zhì)上相 同"的核苷酸序列是指，所比較的核苷酸序列具有99%以上，優(yōu)選99.1 %以上，更優(yōu)選 99.2%以上，進(jìn)一步優(yōu)選約99.5%以上的核苷酸序列同一性。核苷酸序列的同一性可通過 本身已知的方法確定，且例如使用同源性計(jì)算算法NCBI BLAST(National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool)在下列條件下（預(yù)期 (expectancy) = 10;允許空格(gap allowed);過濾(filtering) = ON;匹配得分=1;錯(cuò)配得 分=-3)計(jì)算。
[00411所述變體，可通過例如修飾處理本發(fā)明的細(xì)菌來制作。修飾處理的實(shí)例包括:在變 異原性物質(zhì)等存在下的突變、導(dǎo)入能夠提高本發(fā)明的細(xì)菌的有用性的基因（例如提高本發(fā) 明化合物的可生產(chǎn)性的基因）和破壞本發(fā)明的細(xì)菌所保有的基因，以及這些操作的組合等。
[0042] 本發(fā)明的細(xì)菌或其變體可通過在包含碳源的營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)而維持和生長。碳 源的實(shí)例包括糖類(例如單糖如葡萄糖、半乳糖等，二糖如蔗糖等，多糖如淀粉等）、甘油等， 優(yōu)選為淀粉。所述營養(yǎng)培養(yǎng)基優(yōu)選還包含氮源、且氮源的實(shí)例包括酪胨(casitone)、酵母提 取物、肉提取物、麥芽提取物等。此外，向培養(yǎng)基中添加 NaH2P〇4可促進(jìn)本發(fā)明化合物的早期 生產(chǎn)。此外，培養(yǎng)基優(yōu)選包含海水，其濃度為通常海水濃度（即人工海水38.4g/L)的約10 % - 40%。因此，培養(yǎng)基的人工海水濃度為，例如為0 · 384g/L-38 · 4g/L，優(yōu)選1 · 92g/L-13 · 04g/L， 更優(yōu)選3.84g/L-15.36g/L。作為鹽分，實(shí)例包括氯化鈉、氯化鎂、硫酸鎂、硫酸鈣、氯化鉀等。 示例的培養(yǎng)基的組成可以是淀粉4%、肉提取物0.4%、酪胨0.4%、NaH2P〇4〇. 1 %，且具有通 常海水濃度的10%的液體培養(yǎng)基。其他培養(yǎng)條件，可列舉在pH 6.8-7.5(例如7.0)，25-35°C (例如28 °C)攪拌培養(yǎng)。
[0043] 通過在上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)本發(fā)明的細(xì)菌或其變體例如2-14天，可在培養(yǎng)物中產(chǎn) 生本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的化合物可從所述培養(yǎng)物回收，且優(yōu)選分離并純化。分離和純化 可通過本技術(shù)領(lǐng)域熟知的方法實(shí)施。例如，可使用濃縮、提取、層析、再沉淀、重結(jié)晶等。
[0044] 如下文實(shí)施例所示，本發(fā)明的化合物針對(duì)范圍廣泛的真菌具有強(qiáng)抗真菌活性。因 此，本發(fā)明的化合物可作為例如抗真菌劑使用。因此，本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的化合物作 為活性成分的抗真菌藥(下文還稱作本發(fā)明的抗真菌藥）。本發(fā)明的抗真菌藥可用作藥物或 農(nóng)藥。
[0045] 本發(fā)明的抗真菌藥靶向的真菌的實(shí)例，可列舉念珠菌屬(genus Candida)(例如旦 念珠菌（Candida albicans)、近平滑念珠菌（Candida parapsilosis) n (Candida tropical i s )、克魯其萬念珠菌（Candida krusei )、光滑念珠菌（Candida glabrata)、季也蒙念珠菌（Candida quilliermondii)、葡萄牙念珠菌（Candida lusitaniae)等)、曲霉屬(genus Aspergillus)(例如煙曲霉(Aspergillus fumigatus)、黃 曲菌（Aspergi 1 lus f lavus)、黑曲霉（Aspergi 1 lus niger)、土曲霉（Aspergi 1 lus terreus)等)、毛癬菌屬(genus Trichophyton)(例如紅色毛癬菌(Trichophyton rubrum)、 須毛癬菌（Trichophyton mentagrophytes)、斷發(fā)毛癬菌（Trichophyton tonsurans)、犬小 抱子菌（Microsporum canis)、石膏狀小抱子菌（Microsporum gypseum)、統(tǒng)狀毛癬菌 (Trichophyton verrucosum)等）等真菌，但不限于此。作為真菌病，其不受特定限制，可列 舉深層皮膚真菌病、深部真菌?。╠eep mycosis)、足菌腫（mycetoma)和真菌血癥 (fungemia)〇
[0046] 當(dāng)本發(fā)明的抗真菌藥用作農(nóng)藥時(shí)，對(duì)象作物不受特定限制，且可舉例:植物如谷類 (例如水稻、大麥、小麥、黑麥、燕麥、玉米、高粱等）、豆類(大豆、小豆、蠶豆、豌豆、花生等）、 果樹、果實(shí)類(蘋果、柑橘、梨、葡萄、桃、梅子（日本李子）、櫻桃、核桃、杏仁、香蕉、草莓等）、 蔬菜類(卷心菜、西紅柿、菠菜、西蘭花、生菜、洋蔥、蔥、柿子椒等）、根莖類蔬菜(胡蘿卜、馬鈴 薯、甘薯、蘿卜、蓮藕、蕪青等）、加工用作物（棉、麻、楮、三椏植物、油菜籽、甜菜、啤酒花、甘 蔗、甜菜、橄欖、橡膠、咖啡、煙草、茶葉等）、瓜類(南瓜、黃瓜、西瓜、甜瓜等）、草(果園草、高 粱、梯牧草、苜蓿（clover)、紫花苜蓿（alfalfa)等）、草皮（韓國草坪草(Korean lawn grass)、剪股穎(bentgrass)等）、香料等用的作物(薰衣草、迷迭香、百里香、香菜、辣椒、生 姜等）、花卉類(菊花、玫瑰、蘭花等)等。本發(fā)明的抗真菌藥，通過用其有效量處理對(duì)象作物 和/或?qū)ο笞魑锏姆N子，可用于防除與上文提及的作物中的真菌相關(guān)的疾病。
[0047] 所述農(nóng)藥可以下列形式使用，且一般與在制劑領(lǐng)域中常規(guī)使用的輔助劑共同使 用。本發(fā)明的化合物通過已知方法配制成例如乳劑儲(chǔ)存液、可噴霧糊劑、可噴霧或可稀釋的 溶液、可稀釋乳劑、水和劑、水溶劑、散劑、顆粒劑、懸浮劑、干懸浮劑、煙熏劑、煙蒸劑和例如 由聚合物形成的膠囊劑。
[0048]當(dāng)目標(biāo)是固體劑時(shí)，植物性粉末如大豆粉、小麥粉等，礦物質(zhì)微粉如硅藻土、磷灰 石、石膏、滑石、膨潤土、粘土等、有機(jī)和無機(jī)化合物如苯甲酸鈉、尿素、芒硝等可作為添加劑 和載體使用。
[0049] 當(dāng)目標(biāo)是液體劑型時(shí)，芳香烴如植物油、礦物油、煤油、二甲苯和甲苯等，酰胺如甲 酰胺和二甲基甲酰胺，亞砜類如二甲基亞砜，酮類如甲基異丁基酮和丙酮、三氯乙烯、水等 可作為溶劑使用。為得到均勻和穩(wěn)定形式的這些制劑，根據(jù)需要還可添加表面活性劑。這樣 獲得的水和劑、乳劑、水溶液、懸浮劑和干懸浮劑，用水稀釋至給定濃度并用作懸濁液或乳 濁液，粉劑和顆粒劑可通過散布于土壤或植物而使用。
[0050] 包含本發(fā)明的化合物的農(nóng)藥中，活性成分的含量和用量取決于劑型、施用對(duì)象的 真菌種類、對(duì)象作物等可在廣范圍內(nèi)變化。
[0051] 另一方面，當(dāng)將本發(fā)明的抗真菌藥用作藥物時(shí)，可將其通過口服或非腸胃給藥途 徑(例如靜脈注射、肌肉注射、皮下給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥)給藥至治療對(duì)象，例如，哺乳 動(dòng)物(例如人、小鼠、大鼠、倉鼠、兔、貓、狗、牛、羊、猴等）。
[0052]當(dāng)本發(fā)明的抗真菌藥經(jīng)皮給藥時(shí)，除上述活性成分外，其還可根據(jù)需要包含油性 基質(zhì)、乳化劑和乳化穩(wěn)定劑、增溶劑、粉末成分、高分子成分、粘合性改良劑、成膜劑、pH調(diào)節(jié) 劑、抗氧化劑、防腐劑、保存劑、形狀保持劑、保濕劑、皮膚保護(hù)劑、清涼劑、香料、著色劑、螯 合劑、潤滑劑、血液循環(huán)促進(jìn)劑、收斂劑、組織修復(fù)促進(jìn)劑、止汗劑、植物提取物成分、動(dòng)物提 取物成分、抗炎劑、止癢劑等其它成分。作為這些添加劑，可使用一般用于制劑的那些。 [0053]本發(fā)明的抗真菌藥可通過將有效成分以外的上述組分等由藥物制劑領(lǐng)域常規(guī)使 用的方法配制成如膏劑、液劑、洗劑、乳劑、羾劑、軟膏劑、水性凝膠劑、油性凝膠劑、氣溶膠、 粉末、香波、肥阜，應(yīng)用于指甲的指甲油(enamel agent)等外用藥物而使用。
[0054]當(dāng)本發(fā)明的抗真菌藥口服給藥時(shí)，可將其制備成適于口服給藥的劑型如膠囊、片 劑、顆粒劑、散劑、丸劑、細(xì)粒劑、錠劑等。這些制劑可使用通常用于口服制劑的添加劑如賦 形劑、填充劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、分散劑、緩沖劑、保存劑、增溶 劑、防腐劑、矯味劑、安撫劑、穩(wěn)定劑等由常規(guī)方法制備。
[0055]本發(fā)明在下文通過參照實(shí)施例更詳細(xì)解釋，但其并不應(yīng)理解為是限制性的。 實(shí)施例
[0056] 實(shí)施例1:鏈霉菌屬sp.A84菌株的分離和分析
[0057] 從鹿兒島縣加計(jì)呂麻島（Kakeroma Island,Kagoshima Prefecture)的海沙米集 了分離源。從采集的樣品分離菌株，將分離出的微生物菌株進(jìn)行以抗真菌活性作為指標(biāo)的 評(píng)估篩選。結(jié)果獲得了有前景的菌株，進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)檢驗(yàn)。
[0058]通過16S rRNA的系統(tǒng)分類法分析該菌株，發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)菌是鏈霉菌屬的放線菌，且近 緣種是結(jié)節(jié)鏈霉菌（Streptomyces nodosus) (98 · 8 %同源性）和球團(tuán)鏈霉菌（Streptomyces glomeratus) (99.0%同源性）。由于與最近緣的球團(tuán)鏈霉菌（Streptomyces glomeratus)的 堿基序列的同源性為99.0%，這表明新品種的可能性。將該菌株命名為鏈霉菌屬Sp.A84菌 株。將鏈霉菌屬SP.A84菌株保藏于千葉縣木更津市如鎌足2-5-8,獨(dú)立行政法人制品評(píng) 價(jià)技術(shù)基盤機(jī)構(gòu)特許微生物保藏中心（National Institute of Technology and Evaluation(NITE)Patent Microorganisms Depositary,Kazusa-kamatari,Kisarazu, Chiba 2-5-8，Japan)(登記號(hào)No. :P-01677,保藏日：2013年8月1 日），提交了將NITE P- 01677轉(zhuǎn)移至基于布達(dá)佩斯條約的保藏的移管請(qǐng)求，該請(qǐng)求于2014年7月30日（移管日期)受 理，且該細(xì)菌的國際保藏登錄號(hào)為NITE BP-01677。
[0059] 實(shí)施例2:用于A84菌株的生產(chǎn)培養(yǎng)基的研究 [0060]研究了用于A84菌株的生產(chǎn)培養(yǎng)基。
[0061]培養(yǎng)基的研究結(jié)果是，在下列培養(yǎng)基中顯示了良好的生產(chǎn)性。
[0062]培養(yǎng)基組成：
[0063] 淀粉 4 %
[0064] 酪胨0.1 %
[0065] NaH2P〇4〇. 1 %
[0066] 人工海水（MARINE ART SUPER FORMULA l，Tomita Pharmaceutical Co.，Ltd.生 產(chǎn)）0.384%
[0067] pH 7.0
[0068] 培養(yǎng)條件:將培養(yǎng)基（100ml)填充至300ml容量三角燒瓶，并在28°C，200rpm培養(yǎng)2- 4天。
[0069] 實(shí)施例3:活性成分的分離、純化和分析
[0070]將A84菌株接種至添加有100ml的具有實(shí)施例2中所述組成的培養(yǎng)基的300ml容量 三角燒瓶中，并在28°C，200rpm(旋轉(zhuǎn)式振動(dòng)器)培養(yǎng)3天。使用等量的乙酸乙酯對(duì)培養(yǎng)液進(jìn) 行溶劑提取，然后濃縮乙酸乙酯。將干燥樣品溶于少量甲醇中，并通過使用0DS柱的HPLC進(jìn) 行柱層析分離，進(jìn)行了純化(純度95%以上，lOOyg/lL)。
[0071] 進(jìn)行了活性成分的LC/MS分析、NMR分析和旋光度測(cè)量。測(cè)量條件如下所述：
[0072] LC/MS:
[0073] 裝置：型號(hào) Agilent6540
[0074] 離子源:AJS-ESI、ESI、APC1
[0075] NMR:
[0076] 裝置:ECA-600(JE0L Ltd.制造）
[0077] 磁體（magnet) :SCM 14. olT
[0078] 孔徑（bore diameter): 54mm
[0079] 探針：3mm、5mm、10mm
[0080] 測(cè)量溶劑:氘化甲醇 [0081 ]旋光度：
[0082] 旋光儀：P-1030(JASC0 Corporation制造）
[0083] 溶劑：甲醇(HPLC用）
[0084]樣品濃度：4mg/ml
[0085] 溫度：28
[0086] 比色池(cell):3.5 ηπη X 丨0 0 ramcps圓筒形玻璃池(m〇d.CG3-io)
[0087] λ： 589nm
[0088] 結(jié)果確定分子式為C15H19N02,且分子量為245.1416,并確定NMR譜如圖1所示。比旋 光度為_3 · 25000deg(Avg)，且旋光是-0 · 0013deg(Avg)。
[0089] 實(shí)驗(yàn)例1:抗真菌活性的測(cè)量
[0090] 通過痕量液體稀釋法測(cè)量了最小發(fā)育抑制濃度(MIC)。使用酵母樣真菌FP'Eiken' (Eiken Chemical Co·,Ltd·)，并根據(jù)產(chǎn)品說明書實(shí)施測(cè)量。
[0091] 各種藥物對(duì)各菌種的MIC(yg/mL)示于圖2中。本發(fā)明活性成分顯示了對(duì)念珠菌屬 spp.和曲霉屬spp.的良好活性。
[0092] 工業(yè)應(yīng)用性
[0093] 由于本發(fā)明的化合物具有小分子量、與血清的低反應(yīng)活性和強(qiáng)抗真菌作用，其作 為抗真菌劑有效。此外，由于本發(fā)明的化合物具有新型母核，其作為用于開發(fā)新型藥物的有 前景的種子化合物具有前景。本發(fā)明還提供本發(fā)明化合物的制備方法。
[0094] 本申請(qǐng)基于日本提交的專利申請(qǐng)?zhí)?013-178707(申請(qǐng)日：2013年8月29日），其全 文內(nèi)容涵蓋于本文之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 下式所示的化合物：或其藥學(xué)上可接受的鹽。2. 化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物使用氘代甲醇作為測(cè)量溶劑測(cè)量時(shí)顯示 下列 13C-NMR 和1H-NMR 譜： 表13. 藥物或農(nóng)藥，其包含根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。4. 根據(jù)權(quán)利要求3的藥物或農(nóng)藥，其是抗真菌藥。5. 根據(jù)權(quán)利要求4的藥物或農(nóng)藥，其祀向選自下組的屬的真菌：念珠菌屬（genus Candida)和曲霉屬（genus Aspergillus) 〇6. 制備根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的方法，該方法包括:在包 含碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)登錄號(hào)為NITE BP-01677的鏈霉菌屬(genus Streptomyces)的細(xì)菌 或其變體從而在培養(yǎng)基中產(chǎn)生所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，并從所述培養(yǎng)物中回收 所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。7. 登錄號(hào)為NITE BP-01677的鏈霉菌屬的細(xì)菌或其變體。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK105960408SQ201480047824
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2014年8月29日
【發(fā)明人】石見盛太, 加藤幸, 松本佳巳, 直木秀夫
【申請(qǐng)人】株式會(huì)社種探索研究所