專利名稱：新型三萜衍生物及其藥物用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及齊墩果酸或烏蘇酸衍生物及其藥物用途，具體為不同類型的一氧化氮(簡 稱NO，下同)供體通過酯鍵或酰胺鍵與具有肝病治療作用的齊墩果酸或烏蘇酸偶聯(lián)的化合 物，及其在抗肝腫瘤方面的應用。
背景技術：
齊墩果酸(簡稱OA，下同)或烏蘇酸(簡稱UA，下同)廣泛存在于植物界，臨床上 用于治療慢性肝炎、肝硬化及惡性腫瘤等，但尚存在生物利用度較低、療效不十分理想等 問題(參見熊筱娟，陳武，肖小華，等.烏索酸與齊墩果酸對小鼠實驗性肝損傷保護作 用的比較[J].江西師范大學學報(自然科學版)，2004， 28(6): 540~543.王立新，韓廣軒， 劉文庸，等.齊墩果酸的化學及藥理研究[J].藥學實踐雜志，2001, 19 (2): 104-107; 陳武，熊筱娟，李開泉，等.烏索酸治療急性病毒性肝炎的臨床研究[J]. 2001， 13(1): 1~3.OA UA近年來，大量研究表明，細胞凋亡是引起各種肝細胞損傷的重要原因。而NO在細胞 凋亡過程中具有雙向調節(jié)作用體內持續(xù)低濃度的NO (無論是內源性的還是外源性的)可 抑制細胞凋亡，對細胞具有保護和促其生長的作用；體內高濃度的NO可產(chǎn)生細胞毒性， 誘導腫瘤細胞凋亡，阻止腫瘤細胞的擴散和轉移。NO供體是一類在體內經(jīng)酶和非酶作用釋 放一定量NO的化合物，己有報道一些NO供體選擇性地在肝臟內釋放少量NO，可用于治 療肝炎、肝硬化等肝臟疾病。另有報道一些NO供體可經(jīng)酶的活化特異性地在肝腫瘤部位 釋放NO，殺滅癌細胞。發(fā)明內容本發(fā)明要解決的技術問題是基于NO的雙向調節(jié)作用，如何應用藥物設計的基本理 論，設計、合成結構類型新穎、釋放NO機制多樣化的NO供體型OA或UA衍生物，并 對它們進行生物活性篩選，以獲得具有保肝作用或特異性抗腫瘤效應的新型肝病治療藥物。 本發(fā)明還要于提供一種新型肝病治療藥物的可工業(yè)化生產(chǎn)的制備方法。為解決上述問題本發(fā)明提供如下技術方案。 1.通式I化合物其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H或CH3; R3代表H或CH3; R4代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。 2.通式II化合物其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H, CH3; R3代表H， CH3; R4代表不同碳鏈長度的脂 肪烴基或芳香烴基；Rs代表Ph，S02Ph; X代表O, NH。3.通式ra化合物， CH2Ph; R2代表H， CH3; 113代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH-CH-:-Ph-(O); R5代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。4.通式IV化合物其中，Ri代表H， C2H5， CH2Ph; R2代表H， CH3; 113代表H， CH3; R4代表-(012)2-， -CH-CH-,-Ph-(O); R5代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基，R6代表Ph,S02Ph。通式I化合物的制備方法，其特征在于OA(UA)與相應的BrR4Br反應生成酯la;或者 OA (UA)與三氟乙酸酐反應制得混合酸酐，再與HOR4Br反應，生成酯lb， la或lb再與硝酸銀反應得目的物；其中一些在碳酸氫鈉(鉀)存在下脫三氟乙?；闷渌麵類化合物。la或lb其中，R4代表H， CF3CO; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。具體反應步驟為OA or UA +BrR4Br~ 1a AgNQ3 |或1) (CF3CO)20 AgN03 OAorUA - ib ~^——2) HOR4Br通式II化合物的制備方法，其特征在于OA(UA)與三氟乙酸酐反應生成混合酸酐，再與含 羥基或氨基的呋咱氮氧化物2a反應制得部分II類化合物；其中一些在碳酸氫鈉(鉀)存在 下脫三氟乙?；闷渌麵I類化合物。HXR4 R5 Wo其中，R4代表碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基；R5代表Ph，S02Ph; X代表O， NH。 具體反應步驟為1) (CF3CO)20 OA or UA ~^~^~~||2) 2a3) NaHC03通式ni化合物的制備方法，其特征在于OA (UA)與相應的溴代烷(&Br)反應成酯，再 與丁二酸酐或鄰苯二甲酸酐在4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化下得3a, 3a與阿魏酸或對羥 基桂皮酸的酯類衍生物在二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)及DMAP催化下縮合，最后與硝酸銀 進行取代反應。、COOF^HOOCF^COO,3ii其中，R！代表H, C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH=CH-， -Ph-(o)。具體反應步驟為O一UA + RlBr_^ O, & HOR嚴A,通式IV化合物的制備方法，其特征在于3a與含羥基或氨基的呋咱氮氧化物2a在DCC及DMAP催化下縮合。(3a， 2a的結構同上)。 具體反應步驟為
，。+ ,。 DCC/DMAP 3a十2a_iv
以下為本發(fā)明化合物的實施例，這些實施例并不意味著對本發(fā)明的限制。


圖1不同濃度下樣品對HepG2的抑制率(％) 實施例1
1) 烏蘇酸-2-溴乙酯(la!)
UA (1.0g，2.19mmo1)懸浮于15ml丙酮中，加三乙胺(2ml)使完全溶解，室溫攪拌下 加入l， 2-二溴乙烷(l.Oml， 11.5mmo1),攪拌回流反應6小時，濾除不溶物，濾液濃縮， 柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~卯°0=1: 4(V: V)]，得白色固體0.80g,收率65%， mp: 150-152。C。
2) 烏蘇酸-2-硝氧乙酯(I。
lai (0.4g, 0.71mmo1)溶于乙腈和四氫呋喃的混合溶劑中，加入硝酸銀(177tng， 1.06mmoD ，閉光回流反應6小時，濾除黃色的溴化銀沉淀，濾液濃縮，得淡黃色油狀物， 柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)]，得純品0.3g，收率77.6%,mp: 178 ~180°C。
ESI-MS : 568 [M+Na]+ ;
IR (KBr, em"): 3447 (OH)， 1730 (C=0), 1632 (ON02);
!H-NMR (300MHz, CDC13)， S (ppm): 0.71(s, 3H， CH3)， 0.78 (s, 3H, CH3)， 0.90(s, 3H, CH3), 0.93 (s, 3H, CH3), 0.98 (s， 3H, CH3)， 1.13 (s, 3H， CH3), 1.49 (s, 3H， CH3), 2.82 2.86(m, 1H， Ci8-H ), 3.20~3.24(m, 1H, 3 a -H)， 4.53 (t， 2H， OCH2， J = 6Hz)， 4.13 (t， 2H， OCH2, J = 6Hz)， 5.27~5.29 (brs， 1H，C12-H);
Anal. C32H5iN06Found: (%) N2.14 C 70.90 H9.14200810053893.0
說明書第6/9頁
Calcd:(%) N2.57 C 70.42 H9.42
實施例2
烏蘇酸-3-(3-苯磺?；?2-氧-呋咱-4-氧)-l-甲基丙酯(II!)
UA (456mg， lmmol)懸浮于甲苯中，加入三氟醋酐(0.82ml，5.87mmo1),室溫攪拌， 10分鐘后加入中間體2-(3-苯磺酰基-l， 2， 5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧-3-丁醇(305mg， lmmol) (參照文獻李瑞文，張奕華，季暉，等.苯磺?；辉鄣趸锱c雙氯酚酸偶聯(lián)化合物的合 成及抗炎活性[J].藥學學報,2001， 36(11) :821-826),攪拌回流反應，6小時后結束反應， 冷卻，反應液用10MNaOH洗至中性，有機層再分別水洗，飽和食鹽水洗，無水Na2S04干 燥，柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)],得乳白色固體.523mg,將其 懸浮于甲醇中，加碳酸氫鈉溶液(1.2g碳酸氫鈉溶于60ml水)調PH至9，室溫攪拌，減 壓蒸除溶劑，殘余物加水，用乙酸乙酯萃取，有機層分別用水、飽和食鹽水洗，無水硫酸 鈉干燥，過濾，柱層析[乙酸乙酯石油醚(60 卯'C) =1: 4 (V: V)]，得純品484mg，收 率64.4%， mp:66 68。C。 ESI-MS : 775 [M+Na]+ ;
IR (KBr， cm"): 3438 (OH), 1720 (C=0)， 1170， 1367 (S02);
'H-NMR (300MHz ， CDC13), S (ppm): 0.66 (s， 3H， CH3)， 0.73 ( s, 6H， 2 X CH3 )， 0.87 (s， 6H， 2 XCH3 ),0.93 (s, 3H，CH3), 1.11 (s， 3H, CH3)， 2.79~2.81 (m， 1H, C18-H)， 3.14~3.19 (m， 1H, 3 a -H)， 4.14~4.46 (m， 2H， OCH2 )， 5.07~5.08 (m， 1H， OCH )， 5.24~5.25 (brs， 1H, C12-H ), 7.59~7.64 (m, 2H， ArH), 7.71~7.73 (m， 1H， ArH)， 8.03~8.06 (m, 2H, ArH); Anal. C42H60N2O8S Found : (%) N3.45 C 67.06 H7.92
Calcd:(%) N3.72 C 66.99 H 8.03
實施例3
1)3-0-羧丙?；?烏蘇酸(3a。
將UA(2.50 g， 5.48 mmol)、 丁二酸酐(2.19 g， 21.9 mmol)、 DMAP (0.668 g， 5.48 mmol)、 無7KCH2Cl2(60ml)依次加入反應瓶中，加熱回流反應48小時。反應液水洗3次，有機層 無水Na2S04干燥；過濾，濾液濃縮，濃縮物柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4(V: V)]得產(chǎn)品1.696 g，產(chǎn)率53%。 2) 3-0-{4-[2-(2-硝氧基-乙氧羰基)-乙烯萄-苯氧}-琥珀?；?烏蘇酸(I仏)
將3ai (556mg， lmmol), 4-羥基苯丙烯酸-2-溴乙酯 (260mg, lmmol), DCC (206mg，lmmo1)，以及催化量的DMAP分別加入反應瓶，無水CH2C1210ml，室溫攪拌反應， 過濾，濾液減壓濃縮，柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~90°C) =1: 4 (V: V)]得產(chǎn)品598mg， 收率75%。
將上述產(chǎn)品(56.6 mg, 0.071 mmol)、硝酸銀(18mg， 0.11 mmol)、乙腈(5 ml)依次 加入反應瓶中，避光攪拌回流反應過夜，有溴化銀黃色沉淀生成。反應結束后，過濾，濾 液濃縮，柱層析[乙酸乙酯石油醚(60~9(TC) =1: 4 (V: V)]分離得產(chǎn)品34.3mg,收率 61%, mp: U0 112。C。 ESI-MS : 814 [M+Na]+ ;
IR (KBr， cm-1) : 3235 (COOH), 1765(C=0)， 1725 (C=0)， 1637 (0N02);
!H-NMR (300MHz , CDC13), S (ppm) : 0.76 (s， 3H， CH3)， 0.89 (s， 6H， 2XCH3), 0.91 (s, 3H， CH3), 0.93 (s, 3H， CH3), 0.98 (s, 3H， CH3)， 1.14 (s， 3H, CH3)， 2.76 (t ， 2H, COCH2, J=6Hz), 2.77~2.81 (m， 1H, Q8-H)， 2"0 (t , 2H， COCH2 ， J=6Hz)， 4.50 (t , OCH2 ， J=6Hz)， 4.51~4.52(m， 1H, 3 a -H), 4.75 (t ， 2H， OCH2, J=6Hz)， 5.29 (brs,lH， C12-H)， 6.40 (d， 1H， =CH, J=16Hz)， 7.15 (d， 2H， ArH, J=8.7Hz)， 7.55 (d， 2H, ArH， J=8.7Hz), 7.70 (d， 1H， =CH， J=16Hz); Anal. C45H6iNOu . H20Found : (%) N 1.29 C 66.31 H7.79
Calcd:(%) N 1.73 C 66.75 H7.79
實施例4
3-0-[4-(3-苯磺酰基-2-氧-呋咱-4-氧)-丁氧]-琥珀?；?烏蘇酸(IV!)
由3^和4- (3-苯磺?；?l， 2， 5-噁二唑-2-氧化物-4-)氧丁醇反應制得，收率41.5%， mp: 154~ 156°C。 ESI-MS : 875 [M+Na]+;
IR (KBr, cm") :3326 (OH)， 1731 (OO), 1168,1311 (S02);
'H-NMR (300MHz , CDC13), S (ppm) : 0.75 (s, 3H, CH3), 0.85 (s, 6H， 2xCH3), 0.87 (s, 3H，CH3), 0.92 (s， 6H， 2xCH3)， 1.12 (s， 3H， CH3), 2.64 (s, 4H， CO(CH2)2), 2.80~2.87 (m, 1H, C18-H)， 4.18 (t, 2H, OCH2 ， J=6Hz)， 4.45 (t, 2H, OCH2 ， J=6Hz)， 4.49~4.54 (m, 1H, 3 a -H)， 5.27 (brs， 1H, C12-H), 7.60~7.65 (m， 2H， ArH)， 7.74~7.79 (m， 1H, ArH)， 8.04~8.07 (m， 2H, ArH); Anal. C46H64N2OuS Found : (%) N3.17 C 64.63 H7.90
Calcd : (%) N 3.35 C 64.77 H 7.56
實施例5
通式I -IV化合物的部分藥理實驗如下。
1 IV類目標化合物，以上化合物均溶于DMSO，濃度為0.01M。以UA作為陽性對照藥。
細胞系HepG2 cells (人肝癌細胞) 2.實驗方法
(1) 取處于指數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞一瓶，加入0.25%胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細胞 脫落，計數(shù)2Xl(^ 4X10"個/ml，制成細胞懸液?！?br> (2) 取細胞懸液接種于96孔板上，100nl/孔，置恒溫C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。
(3) 加入受試藥物，100pl/孔，培養(yǎng)48小時。
(4) 將MTT加入96孔板中，20—孔，培養(yǎng)箱中孵育4小時。
(5) 吸去上清液，加入DMSO， 100^1/孔，平板床上振搖5分鐘。
(6) 用酶聯(lián)免疫檢測儀在波長為570nm處測定每孔的吸光值，并計算細胞抑制率。
陰性對照組OD值-化合物組OD值
細胞抑制率％= - X100%
陰性對照組OD值3.實驗結果
抑制率(%)-IC50 (mol/L)No.終濃度 (mol/L)1X IO一41 x 10—5IXI(廠6 IXI(T7Ii*96.5991.727.883.903.1X10-6
I2*97.0843.6315.90.367.1 X10"6
I3*96.3978.842.331.746.2 X10"6
14*96.1983.902.230.167.7X1(T6
I584.191.611.451.28l.OXl(T4
I6*99.4349.557.814.883.4 X10"6
I727.877.605.171.741.5X10-3
n225,1412.555.674.887.7X10墨3
n319.097.695.823.515.5X10-2
i"10.121.821.450.006.3X1(T4
IIfi89.872.271.930.064.1X10-5
n791.994.574.092.033.2X1(T5
n868.104.410.540.25UX10"4
m230.722.411.360.921.8X10-3
iv218.014.632.361.571.3X10-2
UA52.727.545.324.574.1X1(T4
注標*的為活性化合物
權利要求
1.通式I化合物其中，R1代表H，CF3CO；R2代表H或CH3；R3代表H或CH3；R4代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。
2.通式II化合物<formula>formula see original document page 2</formula>其中，R!代表H， CF3CO; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表不同碳鏈長度的脂 肪烴基或芳香烴基；Rs代表Ph,S02Ph; X代表O， NH。
3.通式III化合物<formula>formula see original document page 2</formula>其中，R！代表H， C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H, CH3; R4代表-(CH2)2-, -CH-CH-:-Ph-(O); R5代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。
4.通式IV化合物其中，R!代表H,C2H5，CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-， -CH=CH-，-Ph-(O》R5代表不同碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基，R6代表Ph，S02Ph。
5.權利要求1的通式I化合物的制備方法，其特征在于OA(UA)與相應的BrR4Br反應 生成酯la;或者OA (UA)與三氟乙酸酐反應制得混合酸酐，再與HOILtBr反應，生成酯 lb， la或lb再與硝酸銀反應得目的物:其中一些在碳酸氫鈉(鉀)存在下脫三氟乙?；?其它I類化合物。la或lb其中，Ri代表H， CF3CO: R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基。具體反應步驟為OA or UA +BrR4Br_>1a A9N03 |或1) (CF3CO)20 AgN03 OAorUA - ^ 1b ~^~~2) HOR4Br
6.權利要求2的通式II化合物的制備方法，其特征在于OA(UA)與三氟乙酸野反應生成 混合酸酐，再與含羥基或氨基的呋咱氮氧化物2a反應制得部分II類化合物；其中一些在碳 酸氫鈉(鉀)存在下脫三氟乙酰基得其它II類化合物。<formula>formula see original document page 4</formula>其中，R4代表碳鏈長度的脂肪烴基或芳香烴基；Rs代表Ph，S02Ph; X代表O， NH。 具體反應步驟為1) (CF3CO)20 OA or UA 3~||2) 2a3) NaHC。3
7.權利要求3的通式III化合物的制備方法，其特征在于OA(UA)與相應的溴代烷(R!Br) 反應成酯，再與丁二酸酐或鄰苯二甲酸酐在4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化卞得3a， 3a與 阿魏酸或對羥基桂皮酸的酯類衍生物在二環(huán)己基碳二.亞胺(DCC)及DMAP催化下縮合， 最后與硝酸銀進行取代反應。<formula>formula see original document page 4</formula>其中，Ri代表H， C2H5, CH2Ph; R2代表H， CH3; R3代表H， CH3; R4代表-(012)2-, -CH=CH-， -Ph隱(o)。具體反應步驟為<formula>formula see original document page 4</formula>
8.權利要求4的通式IV化合物的制備方法，其特征在于3a與含羥基或氨基的呋咱氮氧化物2a在DCC及DMAP催化下縮合。(3a， 2a的結構同上)。具體反應步驟為<formula>formula see original document page 4</formula>
9.權利要求1~8中通式I IV化合物用于制備抗肝腫瘤的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及不同類型的NO供體通過連接基團，以酯鍵或酰胺鍵分別與肝病治療藥物齊墩果酸(OA)或烏蘇酸(UA)相偶聯(lián)而成的一氧化氮供體型OA或UA衍生物；生物活性研究表明，部分化合物具有殺傷肝腫瘤細胞的作用，具有治療肝癌的應用前景。
文檔編號C07J63/00GK101633684SQ20081005389
公開日2010年1月27日 申請日期2008年7月21日 優(yōu)先權日2008年7月21日
發(fā)明者王志鳳 申請人:王志鳳