專利名稱：：作為5-HT₄受體激動(dòng)劑的苯并咪唑甲酰胺化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及可用作5-HT4受體激動(dòng)劑的苯并咪唑甲酰胺化合物。本發(fā)明還涉及包含所述化合物的醫(yī)藥組合物；使用所述化合物治療或預(yù)防由5-HT4受體活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病況的方法；和可用于制備所述化合物的方法和中間物。
背景技術(shù)：
：血清素(5-羥色胺，5-HT)是一種在體內(nèi)(中樞神經(jīng)系統(tǒng)與周圍系統(tǒng))廣泛分布的神經(jīng)遞質(zhì)?，F(xiàn)已鑒別出血清素受體的至少七種亞型，并且血清素與這些不同受體的相互作用與多種生理學(xué)功能有關(guān)。因此，關(guān)于研發(fā)靶向特異性5-HT受體亞型的治療劑已引起人們的廣泛關(guān)注。具體說(shuō)來(lái)，5-HT4受體的特征和對(duì)于與其相互作用的醫(yī)藥劑的鑒別已成為當(dāng)前主要活動(dòng)的關(guān)注焦點(diǎn)。(例如參看Langlois和Fischmeister,J.Med.Chem.2003,46，319-344的綜述。)5-HT4受體激動(dòng)劑可用于治療胃腸道蠕動(dòng)減弱的病癥。所述病癥包括腸易激綜合癥UBS)、慢性便秘、功能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流病(GERD)、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗阻和藥物誘導(dǎo)的運(yùn)輸延緩。此外，還提出，一些5-HT4受體激動(dòng)劑可能用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、情緒障礙和自主神經(jīng)功能控制障礙。盡管可能廣泛利用調(diào)節(jié)5-HT4受體活性的醫(yī)藥劑，但目前僅極少數(shù)5-HT4受體激動(dòng)劑化合物在臨床上使用。因此，需要能夠?qū)崿F(xiàn)所需的作用并且具有最小副作用的新穎5-HT4受體激動(dòng)劑。優(yōu)選藥劑可具有改進(jìn)的選擇性、效力、藥物動(dòng)力學(xué)特性和/或作用持續(xù)時(shí)間等特性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供具有5-HT4受體激動(dòng)劑活性的新穎化合物。尤其就其特性而言，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物為有效的選擇性5-HT4受體激動(dòng)劑。此外，還發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的優(yōu)選化合物在動(dòng)物模型中展現(xiàn)出有利的藥物動(dòng)力學(xué)特性，這預(yù)示著經(jīng)口投與后其將具有良好的生物可用性。因此，本發(fā)明提供一種式(I)的化合物其中W為視情況經(jīng)-OH取代的C3—5烷基；且x選自(a)-C(O)OR2，其中112為Cm焼基或-(CH2)n-苯基，其中n為0或l;(b)-C(O)R3，其中R3選自視情況經(jīng)l、2或3個(gè)選自Cm院基、鹵基、d-4垸氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基，Cj_5烷基，c4—5環(huán)烷基，和-(CH2)m-A，其中m為0或l，且A選自氨基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯垸基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、l，l-二氧代異噻唑垸基和2，4-二甲基異噁哇基；(c)-C(0)NR4R5,其中R4為氫或C!.3烷基，且R5為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C"烷基、卣基、cm烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；(d)-C(0)C(R6R7)R8，其中R6為氫或Cw烷基，且R7為氫、-OH或d-3垸基；或RS和W—起形成氧基或-(CH2)2-;且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C!-4烷基、鹵基、d-4垸氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；(e)-C(0)C(HR9)OR1Q，其中R9為氫或Cw垸基，且R^為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Cm院基、鹵基、CM烷氧基、-CF3、-0〔？3和-0(:1^2的取代基取代的苯基；(f)-S(0)2R11，其中R"選自Cw烷基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、1,1-二氧代異噻唑烷基、2,4-二甲基異噁唑基和苯基，其視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自CL4烷基、鹵基、Cw烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。本發(fā)明還提供一種包含本發(fā)明的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物。另一方面，本發(fā)明提供一種結(jié)晶游離堿形式的式(I)的特殊化合物。已發(fā)現(xiàn)，結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯具有在約145'C到約155'C的范圍內(nèi)、通常介于約146。C與約148。C之間的熔點(diǎn)溫度，大于約240'C的降解溫度，并且當(dāng)在室溫下暴露于介于約2%與約90%之間的一系列相對(duì)濕度時(shí)，展現(xiàn)出小于約0.25%的重量改變。4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的其它結(jié)晶形式將在本發(fā)明的其它方面中提供。在一方法方面中，本發(fā)明提供一種治療與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病況(例如，胃腸道蠕動(dòng)減弱的病癥)的方法，所述方法包含向哺乳動(dòng)物投與治療有效量的本發(fā)明的化合物。另外，本發(fā)明提供一種治療哺乳動(dòng)物的與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病況的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與治療有效量的本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明的化合物還可以用作研究工具，也就是用于研究生物系統(tǒng)或樣本，或用于研究其它化學(xué)化合物的活性。因此，在另一個(gè)方法方面中，本發(fā)明提供一種使用式(I)的化合物或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體作為用于研究生物系統(tǒng)或樣本或用于發(fā)現(xiàn)新穎5-HT4受體激動(dòng)劑的研究工具的方法，所述方法包含使生物系統(tǒng)或樣本與本發(fā)明的化合物接觸，和測(cè)定由所述化合物引起的對(duì)所述生物系統(tǒng)或樣本的影響。在單獨(dú)且不同的方面中，本發(fā)明還提供可用于制備本發(fā)明的化合物的合成方法和本文所述的中間物。本發(fā)明還提供一種如本文所述用于醫(yī)學(xué)治療中的本發(fā)明的化合物，以及本發(fā)明的化合物于制備供治療哺乳動(dòng)物的與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病況(例如，胃腸道蠕動(dòng)減弱病癥)的調(diào)配物或藥物的用途。本發(fā)明的各個(gè)方面將參考隨附圖示加以說(shuō)明。圖1繪示結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式I)的粉末x射線衍射(PXRD)圖。圖2繪示結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基)-哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式I)的差示掃描量熱(DSC)跡線(頂部跡線，右側(cè)縱軸)和熱重分析(TGA)跡線(底部跡線，左側(cè)縱軸)。圖3繪示結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式I)的等溫動(dòng)態(tài)吸濕曲線(DMS)。圖4繪示結(jié)晶4-(4-{[(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式II)的差示掃描量熱(DSC)跡線(頂部跡線，右側(cè)縱軸)和熱重分析(TGA)跡線(底部跡線，左側(cè)縱軸)。圖5繪示結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式III)的粉末x射線衍射(PXRD)圖。圖6繪示結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基)-哌唆-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式III)的差示掃描量熱(DSC)跡線(頂部跡線，右側(cè)縱軸)和熱重分析(TGA)跡線(底部跡線，左側(cè)縱軸)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供式(I)的新穎苯并咪唑甲酰胺5-HT4受體激動(dòng)劑，或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。預(yù)期以下取代基和值將提供本發(fā)明各個(gè)方面的代表性實(shí)例。這些代表性值意欲進(jìn)一步定義所述方面而不意欲排除其它值或限制本發(fā)明的范圍。在本發(fā)明的特定方面中，R1為視情況經(jīng)-OH取代的C3-5垸基。在另一特定方面中，W為C3-5烷基。在其它特定方面中，Ri為C3-4烷基；或R'為異丙基或叔丁基。在另一特定方面中，W為異丙基。在其它特定方面中，R'為l-羥基-l-甲基乙基或2-羥基-l-甲基乙基。在特定方面中，X為-C(O)OR2，其中W為C"4烷基或-(CH2)n-苯基，其中n為0或1。在另一特定方面中，X為-C(O)OR2，其中尺2為Cw垸基或苯基。在其它特定方面中，X為-C(O)OR2，其中R"為甲基或苯基，或其中W為甲基。在特定方面中，X為-C(O)R3，其中RS選自視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Q-4烷基、鹵基、CM烷氧基、-CF3、-OCF3、-00^2和-0^的取代基取代的苯基；C"烷基；C"環(huán)烷基；和-(CH2)m-A，其中m為0或l，且A選自氨基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑垸基、l，l-二氧代異噻挫烷基和2，4-甲基二甲基異噁唑基。在另一特定方面中，X為-C(O)R3，其中W為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Cm院基、鹵基、Cw垸氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基。在另一特定方面中，X為-C(O)R3，其中113為d-5烷基或C4-5環(huán)垸基。在另一特定方面中，X為-C(0)R3,其中RS為-(CH2)m-A,其中m為0，且A選自氨基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、l，l-二氧代異噻唑垸基和2，4-二甲基異噁唑基。在另一特定方面中，X為-C(0)R3,其中113為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4烷基、齒基和-CF3的取代基取代的苯基呋喃基；或噻吩基。在其它特定方面中，X為-C(0)R3,其中W為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；或R3為呋喃-2-基或噻吩-2-基。在特定方面中，X為-C(0)NR4115，其中R"為氫或d—3烷基，且W為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C,-4烷基、鹵基、d—4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；在另一特定方面中，X為-C(0)NR4115，其中R"為氫。在另一特定方面中，X為-C(0)NI^R5，其中R"為氫，且RS為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d—4垸基和鹵基的取代基取代的苯基。在其它特定方面中，X為-C(0)NR4115，其中R"為氫，且115為視情況經(jīng)1個(gè)鹵基或經(jīng)1個(gè)氟基或氯基取代的苯基。在特定方面中，X為-C(0)C(R6117)118，其中RS為氫或Cw烷基，且W為氫、-OH或3烷基；或Re和R—起形成氧基或-(CH2)2-;且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Cm院基、鹵基、cm烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；在另一特定方面中，X為-C(0)C(R6117)118，其中116為氫。在另一特定方面中，X為-C(0)C(R6117)118，其中R8為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)逸自Cm烷基、鹵基、Ci-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基。在另一特定方面中，X為-C(0)C(R6117)118，其中R8為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C"垸基、鹵基、CM烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的環(huán)己基。在其它特定方面中，X為-C(0)C(R6117)118，其中W為氫，且R為氫、-OH或甲基；或Re和^一起形成氧基或-(CH2)2-;且RS為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4烷基和g基的取代基取代；或R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1或2個(gè)選自甲基、氟基和氯基的取代基取代。在特定方面中，X為-C(0)C(HR9)01110，其中W為氫或C"3垸基，且R"為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Cw垸基、鹵基、C!4烷氧基、-CF3、-0€3和-0(:1^2的取代基取代的苯基。在另一特定方面中，X為-C(0)C(HR"OR^其中W為氫或甲基。在其它特定方面中，X為-C(O)C(HR"OR10,其中W為氫或甲基；且R^為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d—4垸基和鹵基的取代基取代的苯基，或視情況經(jīng)1或2個(gè)選自甲基、氟基和氯基的取代基取代的苯基。在特定方面中，X為-S(0)2R11，其中R"選自C,.3烷基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑垸基、l，l-二氧代異噻唑烷基、2，4-二甲基異噁唑基和苯基，其視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自d-4烷基、鹵基、d—4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代。在另一特定方面中，X為-S(0)2R11，其中R"為d—3烷基、2，4-二甲基異噁唑基或苯基，其視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自Cm焼基、鹵基、d-4垸氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代。在其它特定方面中，X為-S(0)2R11，其中R"為甲基或苯基，其視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4垸基和鹵基的取代基或1或2個(gè)選自甲基、氟基和氯基的取代基取代。一方面，本發(fā)明提供一種式(I)的化合物，其中R1為C34垸基；且X選自(a)-C(O)OR2，其中112為Cw烷基或苯基；(b)-C(O)R3，其中W為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自Cm院基、鹵基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；(c)-C(0)NR4R5，其中R"為氫，且115為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4烷基和鹵基的取代基取代的苯基；(d)-C(0)C(R6R7)R8，其中R6為氫，且R7為氫、-OH或甲基；或116和117—起形成氧基或-(CH2)2-;且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1或2個(gè)選自Cm烷基和卣基的取代基取代；(e)-C(0)C(HR9)OR1()，其中&為氫或甲基，且R"為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自Cm烷基和齒基的取代基取代的苯基；和(f)-SODhR11,其中RU為甲基或苯基，其視情況經(jīng)1或2個(gè)選自CM烷基和鹵基的取代基取代。本發(fā)明另外提供一種式(I)的化合物，其中W為異丙基或叔丁基；且X選自(a)-C(O)OR2，其中R2為甲基或苯基；(b)-C(O)R3，其中W為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃-2-基；或噻吩-2-基；和(c)-C(0)NR4R5，其中R"為氫，且RS為視情況經(jīng)1個(gè)氟基或氯基取代的苯基。在其它特定方面中，本發(fā)明提供實(shí)例和下表I到IX中所列的化合物。以實(shí)例1的化合物來(lái)說(shuō)明本文中所使用的化學(xué)命名習(xí)慣根據(jù)MDLInformationSystems,GmbH(Frankfurt,Germany)所提供的AutoNom軟件，將其命名為4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基卜哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯。稠環(huán)結(jié)構(gòu)"苯并咪唑(benzoimidazole)"另外稱為"苯并咪唑(benzimidazole)"。如本文所使用，兩個(gè)術(shù)語(yǔ)相同。如通過(guò)下表中所列的特定化合物所例示，本發(fā)明的化合物可以含有手性中心。因此，除非另作指示，否則本發(fā)明包括外消旋混合物、純立體異構(gòu)體和所述異構(gòu)體的富集立體異構(gòu)體的混合物。當(dāng)展示特定立體異構(gòu)體時(shí)，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，除非另作指示，否則本發(fā)明的組合物中可能存在極少量的其它立體異構(gòu)體，但所述組合物作為整體的任何效用不會(huì)因所述其它異構(gòu)體的存在而消除。一方面，本發(fā)明提供一種選自以下物質(zhì)的化合物4_(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯4-(4—([(2-異丙基-m-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸苯酯；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氯苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-[l-(2，4-二氟-苯甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(呋喃-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸ll-[l-(噻吩-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-5-三氟甲基苯甲?；哙?4-基甲基]哌啶-4-基]甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯基氨甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基卜酰胺；4-(4-U(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]-甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氟-苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(4-氟苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺。定義當(dāng)描述本發(fā)明的化合物、組合物和方法時(shí)，除非另作指示，否則以下術(shù)語(yǔ)具有以下含義。術(shù)語(yǔ)"垸基"意謂可能為直鏈或支鏈或其組合的單價(jià)飽和烴基。除非另作定義，否則所述垸基通常含有1到IO個(gè)碳原子。代表性垸基例如包括甲基(Me)、乙基、正丙基(n-Pr)、異丙基(iPr)、正丁基(n-Bu)、仲丁基、異丁基、叔丁基(tBu)、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。術(shù)語(yǔ)"烷氧基"意謂單價(jià)基團(tuán)-O-烷基，其中烷基如上文所定義。代表性烷氧基例如包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。術(shù)語(yǔ)"環(huán)烷基"意謂可能為單環(huán)或多環(huán)的單價(jià)飽和碳環(huán)基團(tuán)。除非另作定義，否則所述環(huán)烷基通常含有3到10個(gè)碳原子。代表性環(huán)烷基例如包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。術(shù)語(yǔ)"卣基"意謂氟基、氯基、溴基或碘基。術(shù)語(yǔ)"氧基"意謂雙鍵氧原子(=0)。術(shù)語(yǔ)"化合物"意謂合成性地制備或以任何其它方式(諸如代謝作用)產(chǎn)生的化合物。術(shù)語(yǔ)"治療有效量"意謂當(dāng)投與需要治療的患者時(shí)足以實(shí)現(xiàn)治療作用的量。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)"治療"意謂對(duì)于患者(諸如哺乳動(dòng)物，尤其人類)的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的治療，其包括(a)預(yù)防所述疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況發(fā)生，也就是對(duì)患者進(jìn)行預(yù)防治療；(b)改善所述疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，也就是消除患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況或引起患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的消退；(C)抑制所述疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，也就是減緩或阻止患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的發(fā)展；或(d)緩解患者的所述疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的癥狀。術(shù)語(yǔ)"醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽"意謂由向患者(諸如哺乳動(dòng)物)投與可接受的酸或堿制備的鹽。所述鹽可以由醫(yī)藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸和醫(yī)藥學(xué)上可接受的堿衍生得到。通常，本發(fā)明化合物的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽是由酸制備。由醫(yī)藥學(xué)上可接受酸衍生得到的鹽包括(但不限于)乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷磺酸、反丁烯二酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、粘酸、硝酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、xinafoic(l-羥基-2-萘甲酸)、萘-l，5-二磺酸等。術(shù)語(yǔ)"溶劑化物"意謂由一個(gè)或一個(gè)以上溶質(zhì)分子(也就是，本發(fā)明的化合物或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽)與一個(gè)或一個(gè)以上溶劑分子形成的復(fù)合物或聚集體。所述溶劑化物通常為具有實(shí)質(zhì)固定的溶質(zhì)與溶劑摩爾比的結(jié)晶固體。代表性溶劑例如包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等。當(dāng)溶劑為水時(shí)，所形成的溶劑化物為水合物。應(yīng)理解，術(shù)語(yǔ)"或其立體異構(gòu)體的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物"意欲包括鹽、溶劑化物和立體異構(gòu)體的所有排列，諸如式(I)化合物的立體異構(gòu)體的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑化物。術(shù)語(yǔ)"氨基保護(hù)基"意謂適于防止氨基氮發(fā)生不合需要的反應(yīng)的保護(hù)基。代表性氨基保護(hù)基包括(但不限于)甲?；货；?，例如垸?；?，諸如乙酰基；垸氧羰基，諸如叔丁氧羰基(Boc);芳基甲氧羰基，諸如苯甲氧基羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc);芳基甲基，諸如苯甲基(Bn)、三苯甲基(Tr)和l，l-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；硅垸基，諸如三甲基硅垸基(TMS)和叔丁基二甲基硅垸基(TBDMS)等。通用合成程序本發(fā)明的化合物可使用以下通用方法和程序由易于獲得的原材料制備。盡管本發(fā)明的特定方面在下文的流程中得以說(shuō)明，但所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的所有方面都可以使用本文所述的方法或通過(guò)使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員己知的其它方法、試劑和原材料來(lái)制備。應(yīng)了解，當(dāng)給定典型或優(yōu)選加工條件(也就是反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時(shí)，除非另作說(shuō)明，否則也可使用其它加工條件。最佳反應(yīng)條件可隨所使用的特定反應(yīng)物或溶劑變化，但所述條件可由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)優(yōu)化程序確定。另外，如所屬領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)，需要常規(guī)保護(hù)基防止某些官能團(tuán)遭受不合需要的反應(yīng)。此項(xiàng)技術(shù)中眾所周知特定官能團(tuán)的適當(dāng)保護(hù)基以及進(jìn)行保護(hù)和去保護(hù)的適當(dāng)條件的選擇。舉例來(lái)說(shuō)，多種保護(hù)基和其引入與去除都已描述于T.W.Greene和GM.Wuts，ProtectingGroupsinOrganicSynthesis,第3版，Wiley,NewYork,1999和其中所引用的參考文獻(xiàn)中。在一種合成方法中，式(I)的化合物是通過(guò)使式(II)的哌啶甲基-哌啶甲基中間物o與式(III)的試劑反應(yīng)來(lái)制備L—X卿，其中L為離去基團(tuán)，例如，諸如氯基的鹵基或酰氧基、磺酸酯或氧基琥珀酰亞胺；且W和X如式(I)中所定義。反應(yīng)通常是在至少1當(dāng)量胺堿(諸如，N,N-二異丙基乙胺)存在的情況下，通過(guò)使中間物(II)與介于約1當(dāng)量與約1.5當(dāng)量之間的中間物(III)在極性質(zhì)子惰性稀釋劑(諸如二氯甲烷)中接觸來(lái)進(jìn)行。用于這種方法和下文所述的方法中的適當(dāng)惰性稀釋劑還包括N,N-二甲基甲酰胺、三氯甲烷、1,1,2,2-四氯乙烷、四氫呋喃等。用于本發(fā)明的方法中的適當(dāng)胺堿還包括三乙胺、吡啶等。反應(yīng)通常是在約0'C到約3(TC的范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行約一刻鐘到約2小時(shí)的時(shí)間，或直到反應(yīng)大體上完成為止。示范性試劑L-X(其中L為氯基)包括氯甲酸甲酯、氯甲酸苯酯、氯苯甲酰氯和甲烷磺酰氯。在另一合成方法中，式(I)化合物(其中X選自-C(O)R3、-C(0)C(R6R7)R8和-C(0)C(HR9)OR1Q)可以通過(guò)式(II)中間物與式(IV)羧酸的酰胺偶合反應(yīng)來(lái)制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>(IV)。在式(iv)中，x表示r3、c(r6r7)rs或c(hr9)or10，因此-c(o)x'對(duì)應(yīng)于如上式(IV)中所述的X。在中間物(II)的酰胺偶合反應(yīng)中，首先使介于約1當(dāng)量與約1.5當(dāng)量之間的羧酸(IV)與介于1當(dāng)量與約1.5當(dāng)量之間的偶合劑(諸如，六氟磷酸0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N，N，，N，-四曱基脲(HATU))在極性質(zhì)子惰性溶劑(諸如二甲基甲酰胺或上文所述的溶劑)中接觸。隨后，在介于約2當(dāng)量與約4當(dāng)量之間的胺堿(例如，N,N-二異丙基乙胺)存在的情況下，使酸混合物與中間物(II)接觸。反應(yīng)通常是在約O'C到約3(TC范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行約一刻鐘到約2小時(shí)的時(shí)間，或直到反應(yīng)大體上完成為止。適當(dāng)?shù)奶娲己蟿┌∟-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亞胺鹽酸鹽(EDC)、l，l'-羰基二咪唑(CDI)、1，3-二環(huán)己基碳化二酰亞胺(DCC)和六氟磷酸苯并三唑-l-基氧基三吡咯垸-鱗(PyBop)。偶合劑可以與增效劑組合，例如l-羥基-7-氮雜苯并三唑(HOAt)、羥基苯并三唑(HOBt)或1,4-二氮雜雙環(huán)[2，2，2]辛烷(DABCO)。在另一替代方法中，可以通過(guò)使式(II)的中間物與以下形式的異氰酸酯反應(yīng)來(lái)制備式(I)的化合物(其中X為-C(0)nhr5):0=C=N-R5(V)。反應(yīng)通常是在介于約2當(dāng)量與約4當(dāng)量之間的胺堿存在的情況下通過(guò)使中間物(II)與介于約1當(dāng)量與約1.5當(dāng)量之間的中間物(V)在極性質(zhì)子惰性稀釋劑中接觸來(lái)進(jìn)行。反應(yīng)通常是在約0'C到約3(TC的范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行約一刻鐘到約24小時(shí)的時(shí)間，或直到反應(yīng)大體上完成為止。通過(guò)常規(guī)程序?qū)κ?I)的產(chǎn)物進(jìn)行分離和純化。舉例來(lái)說(shuō)，可以在減壓下將產(chǎn)物濃縮至干并且通過(guò)HPLC色譜法對(duì)殘余物進(jìn)行純化。式(II)的哌啶甲基-哌啶甲基中間物是由易于獲得的原材料通過(guò)流程A中所述的程序制備。流程A(n)其中pi和^獨(dú)立地表示氨基保護(hù)基，諸如叔丁氧羰基(Boc)。首先，使式(VI)的羧酸與經(jīng)保護(hù)的氨甲基哌啶反應(yīng)以形成經(jīng)保護(hù)的式(VII)的中間物。這一反應(yīng)通常是在上文所述的酰胺偶合劑(例如，N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亞胺鹽酸鹽(EDC)與羥基苯并三唑(HOBt)的組合或l，l'-羰基二咪唑(CDI)與1,4-二氮雜雙環(huán)[2，2，2]辛烷(DABCO)的組合)存在的情況下，通過(guò)使(VI)與介于約1當(dāng)量與約2當(dāng)量之間的經(jīng)保護(hù)氨甲基哌啶在極性質(zhì)子惰性稀釋劑中接觸來(lái)進(jìn)行。反應(yīng)通常是在約O'C到約6(TC的范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行介于約1小時(shí)到約24小時(shí)之間的時(shí)間，或直到反應(yīng)大體上完成為止。通過(guò)常規(guī)方式將保護(hù)基p從中間物(vn)去除以提供中間物(vm)。舉例來(lái)說(shuō)，當(dāng)將Boc用作保護(hù)基時(shí)，可通過(guò)用諸如三氟乙酸或鹽酸的酸處理來(lái)將其去除。隨后，通過(guò)用經(jīng)保護(hù)哌啶-甲醛使中間物(VIII)還原胺化來(lái)形成式(IX)的中間物。這一反應(yīng)通常是在介于約1當(dāng)量與約2當(dāng)量之間的還原劑存在的情況下，通過(guò)使(VIII)與介于約1當(dāng)量與約2當(dāng)量之間的經(jīng)保護(hù)哌啶-甲醛在惰性稀釋劑中接觸來(lái)進(jìn)行。視情況，可以包括約1當(dāng)量弱酸(諸如乙酸)以加速反應(yīng)。反應(yīng)可以在介于約O'C與約30'C之間、通常介于約2(TC與約3CTC之間的溫度下進(jìn)行約0.25小時(shí)到約2小時(shí)，或直到反應(yīng)大體上完成為止。適當(dāng)?shù)亩栊韵♂寗┌ǘ燃综⑷燃淄椤?,1,2，2-四氯乙烷等。典型的還原劑包括三乙酰氧基硼氫化鈉、硼氫化鈉和氰基硼氫化鈉。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)程序分離產(chǎn)物(IX)。當(dāng)以酸鹽的形式提供胺(VIII)時(shí)，反應(yīng)中通常包括介于約1當(dāng)量與約3當(dāng)量之間的胺堿，諸如N,N-二異丙基乙胺。最后，通過(guò)常規(guī)程序?qū)⒈Ｗo(hù)基pz從中間物(IX)中去除以提供哌啶甲基-哌啶甲基中間物(n)。式(VI)的羧酸可以由二氨基苯甲酸或酯通過(guò)流程B中所述的方法制備流程B其中R表示甲基或氫。使中間物(XI)與羧酸RiC(0)OH反應(yīng)以形成酸中間物(VI)。這一反應(yīng)通常是通過(guò)使酸或酯(XI)與介于約2當(dāng)量與約4當(dāng)量之間的羧酸RiC(0)OH在酸性水溶液中接觸來(lái)進(jìn)行。所述反應(yīng)通常是在約80。C與約IOO'C范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行約12小時(shí)到約72小時(shí)的時(shí)間。隨后通過(guò)加入堿(諸如氫氧化鈉)來(lái)升高溶液的pH值并且通過(guò)常規(guī)方式分離產(chǎn)物。提供甲酯形式的中間物(xi)的常規(guī)方法中使用2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(X):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>作為原材料。通常，將2-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(X)溶解于極性稀釋劑中，并且通過(guò)在過(guò)渡金屬催化劑存在的情況下使其暴露于氫氣氛來(lái)進(jìn)行還原，從而提供二氨基苯甲酸甲酯(XI)。所述反應(yīng)通常是在環(huán)境溫度下進(jìn)行約12小時(shí)到約72小時(shí)。當(dāng)取代基R!的空間體積較大時(shí)，例如當(dāng)Ri為叔丁基時(shí)，可以通過(guò)如例如流程C中所述的兩步驟方法轉(zhuǎn)化甲酯(xr)來(lái)制備叔丁基苯并咪唑甲酸(vr):流程c如下文的制備3中所詳述，首先使甲酯(xr)與2，2-二甲基丙酰氯反應(yīng)來(lái)提供中間物(XII)，在強(qiáng)酸溶液中使其回流通常介于約12小時(shí)與約72小時(shí)的時(shí)間，來(lái)提供叔丁基苯并咪唑甲酸(vr)。在其它合成方法中，可以根據(jù)流程D中所述的工藝路線使用還原胺化和上述其它反應(yīng)，和/或使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的其它反應(yīng)來(lái)制備式(I)的化合物。流程D如工藝路線(i)中所示，使式(VIII)的中間物與式(XIII)的中間物反應(yīng)以提供式(I)的化合物。所述反應(yīng)通常是在上文流程A中關(guān)于胺(VIII)與經(jīng)保護(hù)哌啶-甲醛的反應(yīng)中所述的條件下進(jìn)行?？梢酝ㄟ^(guò)使4-羥甲基哌啶與式(III)的試劑L-X反應(yīng)，隨后氧化所得中間物來(lái)制備中間物(Xin)。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)于X為-C(0)0CH3的特定情況而言，中間物(XIII)可以如流程E中所示來(lái)制備。流程E首先，使4-羥甲基哌啶與氯甲酸甲酯反應(yīng)來(lái)形成羥甲基哌啶中間物(XV)。通常通過(guò)在介于約3當(dāng)量與約5當(dāng)量之間的堿存在的情況下，使4-羥甲基哌啶水溶液與介于約3當(dāng)量與約5當(dāng)量之間的氯甲酸甲酯接觸來(lái)進(jìn)行所述反應(yīng)。所述反應(yīng)通常是在約0'C到約3(TC的范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行約12小時(shí)到約72小時(shí)的時(shí)間，或直到反應(yīng)大體上完成為止。隨后，氧化中間物(xv)以形成甲?；哙せ虚g物(xm')。氧化反應(yīng)通常利用氧化試劑，諸如草酰氯與二甲亞砜(Swern氧化)、鉻酸鹽試劑(諸如氯鉻酸吡錠)或氧化劑(諸如次氯酸鈉)連同催化劑(諸如2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基(TEMPO))。根據(jù)流程D的工藝路線(i)使用中間物(xiir)制備式(I)化合物將描述于下文的實(shí)例214與216中。如工藝路線(ii)所示，式(I)化合物還可通過(guò)使式(VI)的羧酸與式(XIV)的中間物反應(yīng)來(lái)制備。如流程F中所述，可以通過(guò)使經(jīng)保護(hù)的氨甲基哌啶與中間物(XIII)反應(yīng)流程F<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>(其中P為氨基保護(hù)基)以提供經(jīng)保護(hù)的式(XVI)的中間物，隨后進(jìn)行去保護(hù)步驟來(lái)制備中間物(XIV)。根據(jù)工藝路線(ii)制備化合物將于制備4和下文的實(shí)例14和15中予以描述。試劑L-X(III)、X'C(O)OH(IV)、0=C=N=R5(V)和R'C(0)OH為市售或易于通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)程序由常用原材料制備。有關(guān)特定反應(yīng)條件的其它細(xì)節(jié)和制備本發(fā)明的代表性化合物或其中間物的其它程序?qū)⒚枋鲇谙挛牡膶?shí)例中。因此，在一個(gè)方法方面中，本發(fā)明提供一種制備式(I)的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體的方法，所述方法包含(a)使式(II)的化合物與式(III)的化合物反應(yīng)；(b)使式(VIII)的化合物與式(XIII)的化合物反應(yīng)；或(c)使式(VI)的化合物與式(XIV)的化合物反應(yīng)，從而提供式(I)的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體。在另一方法方面中，本發(fā)明提供一種制備式(I)的化合物(其中X選自-C(O)R3、-C(0)C(ReR^R8和-C(0)C(HR"ORW)或其鹽或立體異構(gòu)體的方法，所述方法包含使式(11)的化合物與式(iv)的化合物(其中X'表示r3、C(Wr)rS或C(HR9)0111。)反應(yīng)，從而提供式(I)的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體。本發(fā)明另外提供一種式(II)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體或經(jīng)保護(hù)衍生物，其中R'如式(I)中所定義。結(jié)晶形式另一方面，本發(fā)明提供結(jié)晶游離堿形式的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌淀-1-甲酸甲酯或其溶劑化物。已觀察到三種可區(qū)別形式的結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(下文的化合物丄)。本發(fā)明的結(jié)晶形式I為結(jié)晶游離堿。形式I的特征在于粉末x射線衍射(PXRD)圖在選自以下值的26值處具有兩個(gè)或兩個(gè)以上衍射峰15.08±0.20、15.41±0.20、19.00±0.20、19.70土0.20和23.68±0.20。具體說(shuō)來(lái)，形式I的特征在于粉末x射線衍射圖在19.00±0.20和19.70±0.20的26值處具有衍射峰。如粉末x射線衍射領(lǐng)域中眾所周知，與相對(duì)峰高度相比，PXRD譜的峰位置對(duì)于諸如樣本制備和儀器幾何學(xué)細(xì)節(jié)的實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)相對(duì)不太敏感。因此，一方面，結(jié)晶形式I的特征在于粉末x射線衍射圖的峰位置大體上與圖1中所示的峰位置一致。形式I的特征還另外在于晶體結(jié)構(gòu)的x射線衍射分析，提供以下晶格參數(shù)單位晶格為尺寸a=16.9053A、b=9.5172A、c=15.4659A的斜方晶系；空間群為Pna21;計(jì)算密度為1.22g/cm3。所得分子結(jié)構(gòu)確定化學(xué)組成為化合物1_的組成，并且不對(duì)稱單元不含有水或其它溶劑分子。由所得原子位置預(yù)測(cè)的粉末x射線衍射峰與所觀察的結(jié)果極為符合。本發(fā)明結(jié)晶形式I的特征還在于如通過(guò)其差示掃描量熱(DSC)曲線所證實(shí)的高溫?zé)岱€(wěn)定性，如圖2所示，所述DSC曲線展現(xiàn)在約145'C到約155'C的范圍內(nèi)、通常介于約146'C與148'C之間的吸熱熱流的峰值，其可以確定為熔點(diǎn)。此外，熱重分析(TGA)曲線展示在低于降解溫度(其高于約24(TC)時(shí)無(wú)顯著重量改變事件。另一方面，本發(fā)明結(jié)晶形式的特征在于其紅外吸收光譜，所述光譜在約766、1097、1251、1413、1449、1579、1609、1640和1696cm—1處展示顯著的吸收譜帶。如圖3所示，經(jīng)證實(shí)，本發(fā)明的結(jié)晶形式具有可逆的吸附/解吸附曲線和異常低的吸濕性水平(也就是，室溫下，在2%相對(duì)濕度到90%相對(duì)濕度的濕度范圍內(nèi)小于約0.25%的重量增益)。此外，已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)暴露于高溫和高濕時(shí)，化合物L(fēng)的結(jié)晶形式I穩(wěn)定。在40'C和75免的相對(duì)濕度下存儲(chǔ)3個(gè)月后，在DSC、TGA或PXRD曲線中無(wú)任何可檢測(cè)到的改變，如通過(guò)HPLC分析所測(cè)定化學(xué)純度也無(wú)任何改變，并且外觀也無(wú)可觀察到的改變。將形式I的顆粒從約470微米的基于體積的平均粒徑研磨成約15微米、約22微米或約29微米的基于體積的平均粒徑后，通過(guò)DSC、TGA或PXRD也未檢測(cè)到任何改變?；衔風(fēng)的結(jié)晶形式II的特征在于圖4的DSC和TGA曲線。TGA分析表明在約95'C到約105i:的溫度范圍內(nèi)、通常在約IO(TC開始的重量損失在與水或溶劑損失一致的階梯輪廓(stepprofile)中，而DCS曲線展現(xiàn)在介于約143。C到約145。C之間的溫度下吸熱熱流的峰與熔解事件同時(shí)發(fā)生。形式II的PXRD圖與形式I的PXRD圖并無(wú)區(qū)別。盡管尚未作出準(zhǔn)確鑒別，但形式II的TGA曲線與形式II為溶劑化物的解釋相符。本發(fā)明的第三種結(jié)晶形式已確定為一水合物。如圖5所示，形式III的特征在于粉末x射線衍射(PXRD)圖在選自以下值的26值處具有兩個(gè)或兩個(gè)以上衍射峰9.14±0.20、12.41±0.20、12.74±0.20、17.75±0.20、18.47±0.20、20.63±0.20、21.13±0.20禾B27.05±0.20。具體說(shuō)來(lái)，形式III的特征在于粉末x射線衍射圖在9.14±0.20和20.63±0.20的20值處具有衍射峰。圖6中所示的形式III的DSC和TGA曲線表明，所述材料經(jīng)受在約65'C到約75°C的溫度范圍內(nèi)、通常在約70'C開始的具階梯輪廓的重量損失，和在介于約卯'C與約100'C之間的溫度下的吸熱熱流峰，這與一水合物水損失和隨后的熔解相符。形式III的特征還另外在于晶體結(jié)構(gòu)的x射線衍射分析，提供以下晶格參數(shù)單位晶格為尺寸a=14.8101A、b=9.9985A、c=17.9222A,(3=106.3020°的單斜晶系；空間群為P2!/n;計(jì)算密度為1.23g/cm3。所得分子結(jié)構(gòu)確定化學(xué)組成為化合物jj勺組成，并且不對(duì)稱單元含有單一水分子。本發(fā)明的單獨(dú)結(jié)晶形式可能由以下程序可再現(xiàn)地獲得。可以通過(guò)以每毫升稀釋劑介于約15mg與約25mg之間的化合物L(fēng)的比例將化合物L(fēng)分散于選自乙腈、醚、環(huán)己垸和乙酸乙酯的惰性稀釋劑中以形成混合物，并且使所述混合物在環(huán)境溫度下蒸發(fā)，引起晶體形成，由此來(lái)制備結(jié)晶形式I?；蛘?，可以如下文實(shí)例216中所述，在不首先分離非晶形化合物L(fēng)的情況下，通過(guò)溶液中的粗化合物U勺溶劑交換過(guò)程來(lái)獲得形式I。通常，制備化合物L(fēng)的反應(yīng)是在化合物高度可溶于其中的極性質(zhì)子惰性稀釋劑(諸如二氯甲浣)中進(jìn)行。為制備結(jié)晶形式I，在真空蒸餾粗反應(yīng)產(chǎn)物以去除二氯甲烷的同時(shí)，加入乙腈。由蒸餾后剩余的殘余物來(lái)制備具有每毫升乙腈介于約1mg與約200mg之間的化合物丄，通常每毫升乙腈介于約50mg與約125mg化合物L(fēng)的混合物，并且將其加熱到足以溶解殘余物的溫度，例如約75。C的溫度。隨后，將混合物冷卻到不超過(guò)約2(TC的溫度，以提供結(jié)晶形式I,通過(guò)常規(guī)程序?qū)ζ溥M(jìn)行分離。在示范性方法中，將混合物冷卻直到發(fā)生成核現(xiàn)象(通常在介于約55'C與約65。C之間的溫度下)，并且在所述溫度下保持約1小時(shí)。隨后以每分鐘介于約0.25。C與約0.4。C之間的速率將其冷卻到約20'C的溫度。為增加結(jié)晶形式I的產(chǎn)量，可以另外以每分鐘介于約0.5'C與約0.75。C之間的速率將混合物冷卻到介于約O'C到約5。C之間的溫度。為制備形式II，在環(huán)境溫度下將非晶形化合物1_分散于己烷中直到約10mg/mL的最終濃度并且通過(guò)超聲波處理所得混合物。在環(huán)境溫度下約24小時(shí)后，獲得形式II的結(jié)晶固體。通過(guò)在環(huán)境溫度下，將非晶形化合物L(fēng)溶解于1:1的乙醇:水溶劑混合物中直到約20mg/mL的最終濃度，并且用超聲波處理所述溶液約30秒來(lái)制備形式III。使溶液在未封蓋小瓶中進(jìn)行部分蒸發(fā)。約24小時(shí)后，獲得形式III的結(jié)晶固體。醫(yī)藥組合物本發(fā)明的苯并咪唑甲酰胺化合物通常是以醫(yī)藥組合物的形式投與患者。所述醫(yī)藥組合物可通過(guò)任何可接受的投藥路線投與患者，包括(但不限于)經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道、經(jīng)鼻、吸入、局部(包括透皮)和不經(jīng)腸投藥模式。因此，在有關(guān)其組合物的一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及一種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑和治療有效量的式(I)化合物或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。視情況，所述醫(yī)藥組合物必要時(shí)可含有其它治療劑和/或調(diào)配劑。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常含有治療有效量的本發(fā)明的化合物或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。通常，所述醫(yī)藥組合物將含有約0.1重量％到約95重量％的活性劑，包括約5重量％到約70重量％和約10重量％到約60重量％的活性劑?？蓪⑷魏纬Ｒ?guī)載劑或賦形劑用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。對(duì)特定載劑或賦形劑或載劑或賦形劑組合的選擇將視用于治療特定患者或醫(yī)學(xué)病況或疾病狀態(tài)類型的投藥模式而定。從這一點(diǎn)看，用于特定投藥模式的適當(dāng)醫(yī)藥組合物的制備處于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
技術(shù)人員的技術(shù)范圍內(nèi)。此外，所述組合物的成分是從例如Sigma，P.O.Box14508，St.Louis,MO63178購(gòu)得。借助進(jìn)一步說(shuō)明，常規(guī)調(diào)配技術(shù)描述于Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,第20版，LippincottWilliams&White,Baltimore,Maryland(2000);和H.C.Ansel等人，PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,第7版，LippincottWilliams&White,Baltimore,Maryland(1999)中?？捎米麽t(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的材料的代表性實(shí)例包括(但不限于)下述材料(1)糖，諸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素，諸如微晶纖維素和其衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)粉末狀黃芪膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石；(8)賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟；(9)油，諸如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇類，諸如丙二醇；(11)多元醇，諸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)褐藻酸；(16)無(wú)熱原質(zhì)水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液(Ringer'ssolution);(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)用于醫(yī)藥組合物中的其它無(wú)毒可相容物質(zhì)。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常是通過(guò)將本發(fā)明的化合物與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和一種或一種以上可選成分充分且緊密混合或摻合來(lái)制備。如果必需或需要，那么隨后可使用常規(guī)程序和設(shè)備使所得均勻摻合的混合物成形為片劑、膠囊、丸劑等或裝載入片劑、膠囊、丸劑等。優(yōu)選將本發(fā)明的醫(yī)藥組合物包裝成單位劑型。術(shù)語(yǔ)"單位劑型"是指適于向患者給藥的物理上離散的單位，也就是各單位都含有經(jīng)計(jì)算以單獨(dú)或與一個(gè)或一個(gè)以上其它單位組合產(chǎn)生所需治療作用的預(yù)定量的活性劑。舉例來(lái)說(shuō)，所述單位劑型可為膠囊、片劑、丸劑等。在優(yōu)選實(shí)施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適于經(jīng)口投與。經(jīng)口投與的適當(dāng)醫(yī)藥組合物可為膠囊、片劑、丸劑、糖錠、扁囊劑、糖衣丸、散劑、顆粒劑的形式；或?yàn)橛谒曰蚍撬砸后w中的溶液或懸浮液的形式；或?yàn)樗托突蛴桶鸵后w乳液的形式或?yàn)轸齽┗蛱菨{的形式等；其各自含有預(yù)定量的本發(fā)明的化合物作為活性成分。當(dāng)打算以固體劑型(也就是，以膠囊、片劑、丸劑等形式)經(jīng)口投藥時(shí)，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常將包含作為活性成分的本發(fā)明的化合物，和一種或一種以上醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑，諸如檸檬酸鈉或磷酸氫鈣。視情況或另外，所述劑型也可包含(1)填充劑或增量劑，諸如淀粉、微晶纖維素、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(b)粘合劑，諸如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽和/或碳酸鈉；(5)溶解延緩劑，諸如石蠟；(6)吸收促進(jìn)劑，諸如季銨化合物；(7)潤(rùn)濕劑，諸如十六烷醇和/或單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，諸如高嶺土和/或膨潤(rùn)土；(9)潤(rùn)滑劑，諸如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和/或其混合物；(10)著色劑；和(11)緩沖劑。本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中也可存在脫模劑、潤(rùn)濕劑、涂布劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。醫(yī)藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括(l)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒(méi)食子酸丙酯、(X-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。用于片劑、膠囊、丸劑等的涂布劑包括用于腸包衣的涂布劑，諸如鄰苯二甲酸醋酸纖維素(CAP)、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纖維素(CAT)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、乙酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS)等。必要時(shí)也可使用例如各種比例的羥丙基甲基纖維素或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球體調(diào)配本發(fā)明的醫(yī)藥組合物以提供活性成分的緩釋或控釋。此外，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可視情況含有遮光劑，并且可經(jīng)調(diào)配從而使其僅在胃腸道某部分中或優(yōu)先在胃腸道某部分中視情況以延緩的方式釋放活性成分?？墒褂玫陌窈衔锏膶?shí)例包括聚合物質(zhì)和蠟。適當(dāng)時(shí)，活性成分也可為與一種或一種以上上述賦形劑一起微封裝的形式。經(jīng)口投與的適當(dāng)液體劑型舉例來(lái)說(shuō)包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。所述液體劑型通常包含活性成分和諸如水或其它溶劑的惰性稀釋劑；增溶劑和乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃甲醇、聚乙二醇和山梨聚糖脂肪酸酯和其混合物。除活性成分外，懸浮液還可含有懸浮劑，諸如乙氧化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和山梨聚糖酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤(rùn)土、瓊脂和黃芪膠，和其混合物?；蛘?，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物經(jīng)調(diào)配以供吸入投藥。通過(guò)吸入投與的適當(dāng)醫(yī)藥組合物通常將為氣霧劑或粉末的形式。所述組合物一般是使用眾所周知的傳遞裝置投與，諸如定計(jì)量吸入器、干粉吸入器、噴霧器或類似傳遞裝置。當(dāng)使用加壓容器通過(guò)吸入投與時(shí)，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常將包含活性成分和適當(dāng)推進(jìn)劑，諸如二氯二氟甲垸、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當(dāng)?shù)臍怏w。此外，醫(yī)藥組合物可為包含本發(fā)明化合物的膠囊或藥筒(例如由明膠制成)和適用于粉末吸入器中的粉末的形式。適當(dāng)粉末基質(zhì)包括(例如)乳糖或淀粉。本發(fā)明的化合物還可使用己知的透皮傳遞系統(tǒng)和賦形劑透皮投與。舉例來(lái)說(shuō)，可將本發(fā)明的化合物與滲透增強(qiáng)劑(諸如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)垸-2-酮等)混合且并入貼片或類似傳遞系統(tǒng)中?？梢曅枰獙z凝劑、乳化劑和緩沖劑的其它賦形劑用于所述透皮組合物中。以下調(diào)配物說(shuō)明本發(fā)明的代表性醫(yī)藥組合物調(diào)配物實(shí)例A經(jīng)口投與的硬質(zhì)明膠膠囊制備如下成分_量本發(fā)明的化合物50mg乳糖(經(jīng)噴霧干燥)200mg硬脂酸鎂_10ms代表性程序:將所述成分充分摻合且隨后將其裝載于硬質(zhì)明膠膠囊中(每粒膠囊260mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例B經(jīng)口投與的硬質(zhì)明膠膠囊制備如下:m_本發(fā)明的化合物淀粉微晶纖維素硬脂酸鎂20mg89mg89mg2mg代表性程序?qū)⑺龀煞殖浞謸胶锨译S后使其通過(guò)45號(hào)篩目的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)(No.45meshU.S.sieve),并且將其裝載于硬質(zhì)明膠膠囊中(每粒膠囊200mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例C經(jīng)口投與的膠囊制備如下成分_量本發(fā)明的化合物聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯淀粉粉末_10mg50mg250mg代表性程序:將所述成分充分摻合且隨后將其裝載于明膠膠囊中(每粒膠囊310mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例D經(jīng)口投與的片劑制備如下成分_*_本發(fā)明的化合物淀粉微晶纖維素聚乙烯吡咯烷酮(10重量％的水溶液)羧甲基淀粉鈉硬脂酸鎂M_5mg50mg35mg4mg4.5mg0.5mg1mg代表性程序:使活性成分、淀粉和纖維素通過(guò)45號(hào)篩目的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，且隨后使所述混合物通過(guò)14號(hào)篩目的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)。在50-60'C下干燥由此得到的顆粒并使其通過(guò)18號(hào)篩目的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng)。然后將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石(先前已通過(guò)60號(hào)篩目的美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)篩網(wǎng))加到所述顆粒中?；旌虾?，在制片機(jī)上壓制混合物以得到重100mg的片劑,調(diào)配物實(shí)例E經(jīng)口投與的片劑制備如下成分_量本發(fā)明的化合物微晶纖維素?zé)熿F狀二氧化硅硬脂酸_25mg400mg10mg5mg_代表性程序:將所述成分充分摻合且隨后進(jìn)行壓制以形成片劑(每片片劑440mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例F經(jīng)口投與的單刻痕片劑制備如下成分量本發(fā)明的化合物15mg玉米淀粉50mg交聯(lián)羧甲基纖維素鈉"mg乳糖120mg硬脂酸鎂5mg代表性程序:將所述成分充分摻合且進(jìn)行壓制以形成單刻痕片劑(每片片劑215mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例G經(jīng)口投與的懸浮液制備如下成分_^_____ft_本發(fā)明的化合物反丁烯二酸氯化鈉對(duì)羥基苯甲酸甲酯對(duì)羥基苯甲酸丙酯砂糖山梨糖醇(70%溶液)0.1g0.5g2.0g0.15g0.05g25.5g12.85gVeegumk(VanderbiltCo.)1-0g調(diào)味劑0.035mL著色齊U0.5mg蒸餾^<:_補(bǔ)足到100mL代表性程序?qū)⑺龀煞只旌弦孕纬擅縧OmL懸浮液含有10mg活性成分的懸浮液。調(diào)配物實(shí)例H經(jīng)吸入投與的干粉制備如下成分_量本發(fā)明的化合物1.0mg乳糖_25mg代表性程序:將活性成分微粉化且隨后與乳糖摻合。然后將這一經(jīng)摻合混合物裝載于明膠吸入藥筒中。所述藥筒中的內(nèi)容物是使用粉末吸入器投與。調(diào)配物實(shí)例I通過(guò)在定劑量吸入器中吸入來(lái)投與的干粉制備如下代表性程序:通過(guò)將10g平均尺寸小于lOpm的微粉化顆粒狀活性化合物分散于由0.2g卵磷脂溶解于200mL去礦物質(zhì)水中所形成的溶液中來(lái)制備含有5重量％本發(fā)明的化合物和0.1重量％卵磷脂的懸浮液。對(duì)所述懸浮液進(jìn)行噴霧干燥并且使所得物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5pm的顆粒。將所述顆粒裝載于具有加壓1，1，2，2-四氟乙烷的藥筒中。調(diào)配物實(shí)例J可注射調(diào)配物制備如下_*_本發(fā)明的化合物0.2g乙酸鈉緩沖溶液(0.4M)40mLHC1(0.5N)或NaOH(0.5N)補(bǔ)足到pH4水(經(jīng)蒸餾，無(wú)菌)_補(bǔ)足到20mL代表性程序:將上述成分摻合并且使用0.5NHC1或0.5NNaOH將pH值調(diào)節(jié)到4±0.5'調(diào)配物實(shí)例K經(jīng)口投與的膠囊制備如下-成分_本發(fā)明的化合物4.05mg微晶纖維素(AvicelPH103)259.2mg硬脂酸鎂_0.75mg代表性程序:將所述成分充分摻合且隨后將其裝載于明膠膠囊(1號(hào)尺寸，白色，不透明)中(每粒膠囊264mg組合物)。調(diào)配物實(shí)例L經(jīng)口投與的膠囊制備如下成分_量本發(fā)明的化合物8.2mg微晶纖維素(AvicelPH103)139.05mg硬脂酸鎂_0.75mg代表性程序:將所述成分充分摻合且隨后將其裝載于明膠膠囊(1號(hào)尺寸，白色，不透明)中(每粒膠囊148mg組合物)。應(yīng)了解，適于特定投藥模式的本發(fā)明化合物的任何形式(也就是，游離堿形式、醫(yī)藥鹽的形式或溶劑化物的形式)可以用于上文所述的醫(yī)藥組合物中。效用本發(fā)明的苯并咪唑甲酰胺化合物為5-HT4受體激動(dòng)劑，且因此，預(yù)期其可用于治療由5-HT4受體介導(dǎo)或與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病況，也就是通過(guò)用5-HT4受體激動(dòng)劑治療可得以改善的醫(yī)學(xué)病況。所述醫(yī)學(xué)病況包括(但不限于)腸易激綜合癥(IBS)、慢性便秘、功能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流病(GERD)、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗阻和藥物誘導(dǎo)的運(yùn)輸延緩。此外，還提出，一些5-HT4受體激動(dòng)劑可能用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)病癥，包括認(rèn)知障礙、行為障礙、情緒障礙和自主神經(jīng)功能控制障礙。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的化合物會(huì)增加胃腸(GI)道蠕動(dòng)且因此預(yù)期其可用于治療哺乳動(dòng)物(包括人類)的由蠕動(dòng)減弱引起的胃腸道病癥。所述胃腸蠕動(dòng)病癥包括(舉例來(lái)說(shuō))慢性便秘、便秘型腸易激綜合癥(C-IBS)、糖尿病性和特發(fā)性胃輕癱和功能性消化不良。因此，一方面，本發(fā)明提供一種增加哺乳動(dòng)物胃腸道蠕動(dòng)的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與治療有效量的包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物。當(dāng)用于治療胃腸道蠕動(dòng)減弱病癥或由5-HT4受體介導(dǎo)的其它病況時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單一每日劑量或以每日多劑量經(jīng)口投與，但也可使用其它投藥形式。每次給藥所投與的活性劑的量或每日所投與的總量通常將由醫(yī)師根據(jù)相關(guān)情況確定，所述情況包括待治療的病況、所選擇的投藥路線、所投與的實(shí)際化合物和其相對(duì)活性、個(gè)別患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重程度等。用于治療胃腸道蠕動(dòng)減弱病癥或由5-HT4受體介導(dǎo)的其它病癥的適當(dāng)劑量將在約0.0007毫克/千克/天到約20毫克/千克/天的活性劑、包括約0.0007毫克/千克/天到約1毫克/千克/天的范圍內(nèi)。對(duì)于一個(gè)平均體重為70千克的人來(lái)說(shuō)，這將為約每天0.05毫克活性劑到約每天70毫克活性劑的量。在本發(fā)明的一個(gè)方面中，本發(fā)明的化合物用于治療慢性便秘。當(dāng)用于治療慢性便秘時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單一每日劑量或每天多劑量經(jīng)口投與。用于治療慢性便秘的劑量?jī)?yōu)選將在約每天0.05毫克到約每天70毫克的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一方面中，將本發(fā)明的化合物用于治療腸易激綜合癥。當(dāng)用于治療便秘型腸易激綜合癥時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單一每日劑量或以每天多劑量經(jīng)口投與。用于治療便秘型腸易激綜合癥的劑量?jī)?yōu)選將在約每天0.05毫克到約每天70毫克的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一方面中，將本發(fā)明的化合物用于治療糖尿病性胃輕癱。當(dāng)用于治療糖尿病性胃輕癱時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單一每日劑量或以每天多劑量經(jīng)口投與。用于治療糖尿病性胃輕癱的劑量?jī)?yōu)選將在約每天0.05毫克到約每天70毫克的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一方面中，將本發(fā)明的化合物用于治療功能性消化不良。當(dāng)用于治療功能性消化不良時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單一每日劑量或以每天多劑量經(jīng)口投與。用于治療功能性消化不良的劑量?jī)?yōu)選將在約每天0.05毫克到約每天70毫克的范圍內(nèi)。本發(fā)明還提供一種治療患有與5-HT4受體活性相關(guān)的疾病或病況的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與治療有效量的本發(fā)明的化合物，或包含本發(fā)明化合物的醫(yī)藥組合物。如上文所述，本發(fā)明的化合物為5-HT4受體激動(dòng)劑。因此，本發(fā)明另外提供一種使哺乳動(dòng)物的5-HT4受體激動(dòng)的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與本發(fā)明的化合物。此外，本發(fā)明的化合物還可用作調(diào)查或研究具有5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣本或用于發(fā)現(xiàn)新穎5-HT4受體激動(dòng)劑的研究工具。此外，由于當(dāng)相比與其它5-HT亞型的受體、尤其5-HT3受體的結(jié)合時(shí)，本發(fā)明的化合物展現(xiàn)出對(duì)5-HT4受體的結(jié)合選擇性，故所述化合物尤其可用于研究生物系統(tǒng)或樣本中5-HT4受體的選擇性激動(dòng)作用。具有5-HT4受體的任何適當(dāng)?shù)纳锵到y(tǒng)或樣本都可用于可在活體外或活體內(nèi)進(jìn)行的所述研究中。適于所述研究的代表性生物系統(tǒng)或樣本包括(但不限于)細(xì)胞、細(xì)胞提取物、質(zhì)膜、組織樣本、哺乳動(dòng)物(諸如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等。在本發(fā)明的這個(gè)方面中，使包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣本與5-HT4受體激動(dòng)量的本發(fā)明的化合物接觸。隨后使用常規(guī)程序和設(shè)備(諸如放射性配體結(jié)合分析和功能分析)測(cè)定使5-HT4受體激動(dòng)的作用。所述功能分析包括配體介導(dǎo)的胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)改變；配體介導(dǎo)的酶腺苷?；h(huán)化酶(其合成cAMP)活性改變；經(jīng)由受體催化的以GDP類似物交換GTP類似物來(lái)將鳥苷三磷酸(GTP)類似物(諸如["S]GTPyS，也就是鳥苷5'-0-(y-硫基)三磷酸；或GTP-Eu)并入分離膜的配體介導(dǎo)的改變；配體介導(dǎo)的游離胞內(nèi)鈣離子改變(例如，通過(guò)熒光成像平板讀取器或購(gòu)自MolecularDevices,Inc.的FLIPI^測(cè)量)；和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的測(cè)量。本發(fā)明的化合物可在上文所列的任何功能分析或具有類似性質(zhì)的分析中激動(dòng)或增強(qiáng)5-HT4受體的活化。5-HT4受體激動(dòng)量的本發(fā)明的化合物通常將在約1納莫爾濃度到約500納摩爾濃度的范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明的化合物可以用作發(fā)現(xiàn)新穎5-HT4受體激動(dòng)劑的研究工具。在這一實(shí)施例中，將測(cè)試化合物或一組測(cè)試化合物的5-HT4受體結(jié)合或功能數(shù)據(jù)與本發(fā)明化合物的5-HT4受體結(jié)合或功能數(shù)據(jù)相比較，以鑒別(如果有)具有優(yōu)良結(jié)合或功能活性的測(cè)試化合物。本發(fā)明的這個(gè)方面包括作為單獨(dú)實(shí)施例的產(chǎn)生比較數(shù)據(jù)(使用適當(dāng)分析)和分析測(cè)試數(shù)據(jù)以鑒別所關(guān)注的測(cè)試化合物。在眾多特性中，己發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物為有效的5-HT4受體激動(dòng)劑，并且在放射性配體結(jié)合分析中對(duì)5-HT4受體亞型展現(xiàn)出優(yōu)于5-HT3受體亞型的實(shí)質(zhì)選擇性。此外，經(jīng)證實(shí)，特別提及的本發(fā)明的化合物在大鼠模型中具有優(yōu)良的藥物動(dòng)力學(xué)特性。因此，經(jīng)口投與后，預(yù)期所述化合物具有高度的生物可用性。另外，還證實(shí)，這些化合物在使用表達(dá)hERG心臟鉀通道的分離全細(xì)胞進(jìn)行的活體外電壓鉗模型中并未展現(xiàn)對(duì)鉀離子電流的不可接受的抑制水平。電壓鉗分析是一種公認(rèn)的評(píng)定醫(yī)藥劑改變心臟復(fù)極模式、尤其引起與心律不齊有關(guān)的所謂QT延長(zhǎng)的可能的臨床前方法。(Cavero等人，OpiniononPharmacotherapy,2000,1，947-73，F(xiàn)ermini等人，NatureReviewsDrugDiscovery,2003,2，439-447。)因此，預(yù)期包含本發(fā)明的化合物的醫(yī)藥組合物具有可接受的心臟概況。本發(fā)明化合物的這些特性以及效用可以使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的各種活體外和活體內(nèi)分析來(lái)證實(shí)。代表性分析將于以下實(shí)例中予以詳細(xì)描述。實(shí)例提供以下合成和生物學(xué)實(shí)例以說(shuō)明本發(fā)明，且不應(yīng)將其解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。在以下實(shí)例中，除非另作說(shuō)明，否則以下縮寫將具有以下含義。下文未定義的縮寫將具有其通常所接受的含義。Boc=叔丁氧羰基DMSO=二甲亞砜MeCN=乙腈TFA=三氟乙酸Rf=保留因子試劑和溶劑都是從貿(mào)易供應(yīng)商(Aldrich、Fluka、Sigma等)購(gòu)得，并且不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。除非另作說(shuō)明，否則反應(yīng)都是在氮?dú)夥障逻M(jìn)行。反應(yīng)混合物的進(jìn)程是通過(guò)薄層色譜(TLC)、分析型高效液相色譜(分析型HPLC)和質(zhì)譜監(jiān)測(cè)，所述技術(shù)的細(xì)節(jié)將于下文且在特定反應(yīng)實(shí)例中單獨(dú)提供。如在各反應(yīng)中進(jìn)行的具體描述對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行處理；通常，所述混合物是通過(guò)萃取和諸如溫度和溶劑依賴性結(jié)晶和沉淀的其它純化方法予以純化。此外，反應(yīng)混合物通常通過(guò)制備型HPLC進(jìn)行純化。一種通用方案描述于下文中。反應(yīng)產(chǎn)物通常是通過(guò)質(zhì)譜和iH-NMR譜表征。對(duì)于NMR測(cè)量來(lái)說(shuō)，將樣本溶解于氘化溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，并且用VarianGemini2000儀器(300MHz)在標(biāo)準(zhǔn)觀察條件下獲取NMR譜?；衔锏馁|(zhì)譜鑒別是用AppliedBiosystems(FosterCity,CA)型API150EX儀器或Agilent(PaloAlto,CA)型1100LC/MSD儀器通過(guò)電噴霧電離方法(ESMS)進(jìn)行。制備1:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的合成a.2.3-二氨基苯甲酸甲酯的制備向經(jīng)氮?dú)怙柡偷?-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(ChessGmbH,50g，0.26mol)于無(wú)水乙醇(800mL)中的溶液中加入氫氧化鈀(Deguss，20呢w/w于碳上，58.75%w/w水，10g)。使?jié){液脫氣隨后在室溫下在氫氣氛(4個(gè)大氣壓)下用力振蕩48小時(shí)。將催化劑過(guò)濾并且在真空中濃縮濾液得到呈深橙色油狀物的2,3-二氨基苯甲酸甲酯，靜置后凝固(43g，0.26mol，100%)?！?i/z):CsH1()N202的[M-OCH3]+計(jì)算值:135.05，實(shí)驗(yàn)值135.3。NMR(300MHz,DMSO-d6):S(ppm)3.74(s，3H),4.80(brs,1H),6.20(brs,1H),6.38(t,1H)，6.70(d,1H)，7.06(d,1H)。b.2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸的制備回流下，將2，3-二氨基苯甲酸甲酯(21.5g，0.13mol)和異丁酸(36.2mL，0.39mol)于鹽酸水溶液(4M，210mL)中的漿液攪拌24小時(shí)以提供均勻溶液。將溶液冷卻到10匸，并且在保持低于3(TC的溫度的同時(shí)，使用氫氧化鈉水溶液(4M，約2l0mL)將pH值升高到3.5。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，將其冷卻到IO'C并且濾出所得沉淀。將固體濾餅轉(zhuǎn)移到燒杯中并且加入乙腈(300mL)。在室溫下攪拌漿液1小時(shí)并且過(guò)濾以提供灰色固體。真空下干燥固體從而提供標(biāo)題中間物(23g，0.11mol,87%)?！糾々J:CnHnN202的[M+H]+計(jì)算值205.09，實(shí)驗(yàn)值205.3HNMR(300MHz，DMSO-d6):5(ppm)1.27(d，6H)，3.39(m，1H)，7.29(t,1H)，7.78(m，2H)。c.4-(「(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基l甲基卜哌啶-l-甲酸叔丁酯的制備向2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(9.0g，44.1mmol)于無(wú)水N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液中加入4-氨甲基-哌啶-l-甲酸叔丁酯(9.4g，44.1mmo1),隨后加入N,N-二異丙基乙胺(16.9mL，97.0mmo1)。室溫下將溶液攪拌15分鐘，隨后加入羥基苯并三唑(5.9g，44.1mmo1)、N-乙基-N-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亞胺鹽酸鹽(8.4g，44.1mmol)和額外的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)。在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)，用二氯甲烷(300mL)進(jìn)行稀釋，并且依次用1M磷酸水溶液、1M氫氧化鈉水溶液和鹽水加以洗滌。隨后將溶液用硫酸鈉干燥并且真空濃縮以提供褐色油狀物，加入己烷后凝固。過(guò)濾固體得到呈淺褐色固體狀的標(biāo)題中間物(13.8g，36.0mmol，78%)。(m/z):C22H32N403的[M+H]+計(jì)算值為401,26，實(shí)驗(yàn)值為401.5;[M-Boc+H]+為301.5。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-90%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=3.7min。&NMR(300MHz,DMSO-d6):5(ppm)1.20(m，2H),1.37(s'9H)，1.37(s，6H),1.72(m，1H)，1.75(m,2H)，2.73(brs，2H),3.22(七重峰，1H)，3.36(m，2H)，3.95(m,2H)，7.26(t，1H),7.63(d，1H)，7.79(d,1H)，10.11(t，1H)。d.2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的合成(TC下，向溶解于二氯甲垸(50mL)4-{[(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基)-哌啶-l-甲酸叔丁酯(10.8g，27.0mmol)溶液中以每份5mL緩慢加入三氟乙酸(50mL)。將溶液溫到室溫，再攪拌20分鐘，隨后真空干燥。通過(guò)與甲苯共蒸發(fā)去除過(guò)量的三氟乙酸。隨后，在0。C下將殘余物溶解于極少體積的二氯甲垸中并且將其緩慢加人乙醚(1L)中。室溫下，將所得漿液攪拌2小時(shí)，隨后過(guò)濾得到呈淺褐色固體狀的標(biāo)題化合物的雙-三氟乙酸鹽(12.7g,24.0mmol,89%)。(WzJ:C17H24N40的[M+H]+計(jì)算值:301.21，實(shí)驗(yàn)值301.5。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-50%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=1.65min。6NMR(300MHz,DMSO-d6):S(ppm)1.59(d,6H),1.60(m,1H),2.03(m，2H)，2.04(m，1H),3.00(m，2H),3.43(m,2H),3.45(m,2H)，3.63(七重峰，1H)，7.63(t,1H),7.卯(d，1H)，7.96(d,1H)，9.04(t,1H)。制備2:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成a.4-(4-(「(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基1甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制備室溫下，在氮?dú)庀?，?-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺雙-三氟乙酸鹽(6.84g，12.95mmol)于二氯甲烷(65mL)中的懸浮液中依次加入N，N-二異丙基乙胺(1.67g，2,25mL)、1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-甲醛(3.16g，14.89mmol)于二氯甲烷(5mL)中的溶液和三乙酰氧基硼氫化鈉(3.84g，18.13mmol)。在室溫下將所得混合物攪拌1.5小時(shí)，隨后用1M鹽酸水溶液將其酸化到pH值1。將水層去除，并且用1M鹽酸水溶液萃取有機(jī)層直到有機(jī)相中無(wú)產(chǎn)物殘留為止。將已合并的水層用二氯甲烷洗滌，將其冷卻到0'C并且用氫氧化鈉顆粒將其堿化到pH值12。隨后，將溶液用二氯甲垸萃取直到水相中無(wú)產(chǎn)物殘留為止，并且將己合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并且濃縮得到呈褐色油狀物的所需產(chǎn)物(5.4g，10.8mmol，84%)，不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。(m/z):C2sH43N503的[M+H]+計(jì)算值498.35，實(shí)驗(yàn)值498.5。b.2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成將前一步驟中的產(chǎn)物(5.4g，10.8mmo1)溶解于二氯甲烷(40mL)中并且將其冷卻到O'C。加入三氟乙酸(30mL)并且在0。C將溶液再攪拌0.5小時(shí)。隨后，將混合物濃縮并且在真空下將其與二氯甲垸共蒸發(fā)兩次。將所得殘余物溶解于二氯甲烷(20mL)中，將其冷卻到0。C并且用20%w/w氫氧化鈉水溶液(50mL)進(jìn)行堿化。經(jīng)10分鐘將溶液溫到室溫，隨后過(guò)濾。將固體用乙腈漂洗并且真空干燥得到淺灰色粉末(3.09g,7.8mmol，72%)，不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。(Wz):C23H35N50的[M+H]+計(jì)算值:398.29，實(shí)驗(yàn)值398.4。制備3:2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成a.2-氨基-3-(2,2-二甲基丙酰胺基)苯甲酸甲酯的制備室溫下，向2,3-二氨基苯甲酸甲酯(2.3g，13.8mmol)于吡啶(40mL)中的溶液中加入2，2-二甲基丙酰氯(1.7g，14.0mmo1)。將溶液攪拌16h，并且使殘余物在乙酸乙酯(100mL)與1M鹽酸水溶液(100mL)之間分配。分離有機(jī)相，用1M鹽酸水溶液(100mL)加以洗滌，用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)得到呈深色油狀物的標(biāo)題化合物(2.7g，10.8mmol，78%)，不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。〖m/z):C13H18N203的[M+H]+計(jì)算值:251.14，實(shí)驗(yàn)值250.8。b.2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸的制備回流下，將前一步驟中的產(chǎn)物(2.7g,10.8mmoD于4M鹽酸水溶液(100mL)中的漿液攪拌24小時(shí)以提供均勻溶液。蒸發(fā)溶劑以提供呈磚紅色固體狀的標(biāo)題中間物的鹽酸鹽(2.5g,9.8mmol,91%)。(m/":C12H14N202的[M+H]+計(jì)算值219.12，實(shí)驗(yàn)值219.3。丄HNMR(300MHz,DMSO-d6):S(ppm)1.45(d,9H),3.39(m，1H),7.91(d,1H),7.95(d，1H)。c."「(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基慮基l甲基口底啶-l-甲酸叔丁酯的制備向2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸鹽酸鹽(1.11g，4.37mmo1)于無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中加入l，l'-羰基二咪唑(0.77g，4.75mmo1)。5(TC下將溶液攪拌2小時(shí)，隨后加入4-氨甲基-哌啶-l-甲酸叔丁酯(0.94g，4.39mmo1)，接著加入1，4-二氮雜雙環(huán)[2，2，2]辛垸(1.46g，13mmol)。50'C下將溶液攪拌16小時(shí)，使其冷卻并且用水(20mL)和乙酸乙酯(60mL)加以稀釋。去除水層，將有機(jī)層用水(20mL)洗滌，用硫酸鈉干燥并且在真空中濃縮以提供標(biāo)題中間物(1.32g，3.18mmol，73%)，不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。〖m/z〗C23H34N403的[M+H]+計(jì)算值415.27,實(shí)驗(yàn)值415.5。d.2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的制備將4-U(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基)-哌啶-l-甲酸叔丁酯(13.5g，32.6mmol)溶解于二噁垸(200mL)中的4NHC1中并且在室溫下攪拌0.5小時(shí)。過(guò)濾所得固體以提供標(biāo)題中間物的二鹽酸鹽(11.3g，29.3mmol，89C18H26N40的[M+H廣計(jì)算值315.22，實(shí)驗(yàn)值315.3。'HNMR(300MHz,D20+MeOD-d3):1.54(s，8H),1.96(m，4H)s2.91(m,4H),3.31(brs，1H),3.45(d，2H),7.56(t,1H)，7.89-7.92(m,2H)。e.4-(4-(「(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基1甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯的制備室溫下，向2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺二鹽酸鹽(4.28g，11.06mmol)于二氯甲烷(55mL)中的懸浮液中依次加入N，N-二異丙基乙胺(1.71g，2.31mL)、l-(叔丁氧羰基)哌啶-4-甲醛(2.58g，12.17mmol)和三乙酰氧基硼氫化鈉(3.28g'15.48mmol)。在室溫下將所得混合物攪拌2小時(shí)，隨后用1M鹽酸水溶液進(jìn)行萃取。將已合并的水層用氫氧化鈉顆粒堿化到pH值12，隨后用二氯甲烷進(jìn)行萃取。將已合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并且蒸發(fā)。在高真空下，干燥所得殘余物得到淺褐色泡沫狀物(4.9g，9.6mmo1，87%),不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。(m/力C29H45N503的[M+H]+計(jì)算值512.35，實(shí)驗(yàn)值512.4。f.2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺的合成室溫下，將如前一步驟中所述制備的粗4-(4-U(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.1g，10mmol)用三氟乙酸(40mL)和二氯甲烷(40mL)處理0.5小時(shí)。在真空中濃縮混合物，將其再溶解于二氯甲烷(25mL)中并且用1M氫氧化鈉水溶液(15mL)進(jìn)行堿化。去除有機(jī)層并且用二氯甲烷對(duì)水層進(jìn)行再萃取。將已合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并且真空濃縮以得到呈褐色泡沫狀的所需產(chǎn)物(3.6g,8.8mmo1，88%)?！糾々)C24H37N50的[M+H]+計(jì)算值:412.31，實(shí)驗(yàn)值412.6。制備4:4-(4-氨甲基哌錠-l-基甲基)-哌啶-l-甲酸甲酯的合成a.4-「4-(叔丁氧羰基氨基-甲基)哌啶-1-基甲基1-哌啶-1-甲酸甲酯的制備向4-叔丁氧羰基氨甲基哌啶(3.62g，16.9mmo1)于二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入4-甲?；哙?l-甲酸甲酯(2.89g，16.9mmo1)和乙酸(0.96mL)。在室溫下將混合物攪拌10分鐘，隨后加入三乙酰氧基硼氫化鈉(5.4g，25.5mmo1)。室溫下將最終混合物攪拌1小時(shí)。通過(guò)加入飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)終止反應(yīng)。用二氯甲垸(100mL)萃取混合物，并且將有機(jī)層用MgS04干燥。蒸發(fā)有機(jī)溶液得到淺黃色油狀殘余物。通過(guò)快速硅膠柱色譜(CH2Cl2至U5%MeOH/CH2Cl2)加以純化得到標(biāo)題中間物(4.4g)。(m々J:C!9H35N304的[M+H]+計(jì)算值370,27，實(shí)驗(yàn)值370.5。b.4-(4-氨甲基哌啶-l-基甲基)-哌啶-l-甲酸甲酯的合成向4-[4-(叔丁氧羰基氨基-甲基)哌啶-1-基甲基]-哌啶-1-甲酸甲酯(4.4g，10.8mmo1)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入三氟乙酸(20mL)。在室溫下攪拌20分鐘后，在真空中蒸發(fā)溶液得到呈淺黃色油狀物的標(biāo)題化合物的雙-三氟乙酸鹽，不經(jīng)進(jìn)一步純化即加以使用。(Wz):C"H27N302的[M+H]+計(jì)算值:270.22，實(shí)驗(yàn)值270.5。!H掘R(CD3OD)S(ppm)4.0(brd，2H),3.6(m，5H)，2.9-2.7(m,6H),2.1-1.9(m,2H)，1.7-1.5(m，6H)，1.2-1.0(m，4H)。實(shí)例1:4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的合成向2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(2.9g，7.3mmol)于二氯甲烷(50mL)中的懸浮液中加入N,N-二異丙基乙胺(1.05mL，7.3mmol)。將所得溶液冷卻到0'C并且逐滴加入氯甲酸甲酯(576^L，7.3mmo1)。在0'C下將混合物攪拌1.5小時(shí)，用乙酸(1L)中止并且在真空中蒸發(fā)得到淺褐色固體(4.8g)，通過(guò)制備型反相HPLC[5-10-25呢的梯度(5-10呢歷時(shí)10min;10-25%歷時(shí)50min);流速15mL/min;在280nm下檢測(cè)]純化得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的雙三氟乙酸鹽(3.5g，5.1mmol，70%)。(Vn々)C25H37Ns03的[M+H]+計(jì)算值456.30，實(shí)驗(yàn)值456.3。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-50%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=3.06min。實(shí)例2:4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌淀-1-基甲基)哌癥-1-甲酸苯酯的合成向2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(0.22g，0.55mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.19mL)于二氯甲烷(5.0mL)中的溶液中加入氯甲酸苯酯(70pL)。在室溫下將混合物攪拌IO分鐘，隨后在真空中進(jìn)行濃縮并且通過(guò)制備型反相HPLC加以純化得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的雙三氟乙酸鹽(98.4mg，0.13mmo1，24%)?！糾々)C30H39N5O3的[M+H]+計(jì)算值518.32，實(shí)驗(yàn)值518.6。NMR(300MHz，MeOD-d3):S(ppm)1.14-1.28(m，2H),1.39-1.53(m，6H)，1.52-1.62(m，2H)，1.70-1.78(m,2H)，1.92-2.06(m，4H)，2.82-2.97(m，6H),3.32-3.38(m,2H)，3.43-3,50(m,1H)，3.52-3.69(m，2H)，4.04-4.12(m，1H)，4.18-4.26(m,1H)，6.91-6.98(m，1H)，7.08-7.13(m，1H)，7.21-7.28(m,1H),7.45-7.50(m，1H)，7.73-7.77(m,1H)，7.81-7.87(m,1H)，9.02-9.32(brs,1H)。實(shí)例3:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氯苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成室溫下，向2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(2.1g，5.29mmol)于四氫呋喃(26mL)中的懸浮液中加入N,N-二異丙基乙胺(2.05g，15.87mmol)、二氯甲烷(12mL)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。向所得懸浮液中緩慢加入鄰氯苯甲酰氯(1.02g，5.82mmo1)并且在室溫下將反應(yīng)混合物攪拌0.5小時(shí)。真空濃縮溶液，將所得殘余物用乙酸(7.5mL)和水(0.5mL)稀釋并且通過(guò)反相制備型HPLC純化產(chǎn)物。使經(jīng)純化的鹽在二氯甲垸與1M氫氧化鈉水溶液之間分溶，去除有機(jī)層并且用二氯甲垸對(duì)水層進(jìn)行再萃取，并且將已合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并在真空中濃縮得到呈白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(1.75g，3.26mmol，62%)?！糾々)C30H38N5O2的[M+H]+計(jì)算值536.28,實(shí)驗(yàn)值536.3。'HNMR(300MHz,DMSO-d6):O,卯(brm，2H)，1.24(d,6H),1.45(brm,2H),1.68(brm,8H)，1.96(m，1H)，2.72(brm，5H)，3.08(m，2H)，(3.20，m，3H)，4.40(brm,1H),7.14(t,1H)，7.28(m,2H)，7.39(m,1H),7.49(dd，1H)，7.66(dd,1H)。實(shí)例4-6使用與實(shí)例3類似地方法，以適當(dāng)?shù)穆然镌噭┨娲徛缺郊柞Ｂ葋?lái)制備實(shí)例4-6的化合物。實(shí)例4:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2，4-二氟-苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z):C3oH37N502的[M+H]+計(jì)算值538,30，實(shí)驗(yàn)值538.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-60%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=2.12min。NMR(300MHz,DMSO-d6):0.92(m,2H)，1.30(m，2H),1.38(d,6H)，1.53(m，2H)，1.60-1.90(m,6H),2.07(d，2H)，2.73-2.85(brm，3H)，3.05(t，1H)，3.22(七重峰，1H),3.38(brm,3H)，4.44(brd，1H)，7.10-7.50(m,4H)，7.62(d,1H)，7.77(d,1H),10.10(brs,1H)。實(shí)例5:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(呋喃-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z):C2sH37Ns03的[M+H]+計(jì)算值492.30，實(shí)驗(yàn)值492.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=1.68min。實(shí)例6:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[1-(噻吩-2-羰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z):(:281137&02的[]^+司+計(jì)算值508.28，實(shí)驗(yàn)值508.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=1.94min。實(shí)例7:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氟-5-三氟甲基苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成室溫下，向2-氟-5-三氟甲基苯甲酸(lOOmg，0.48mmo1)于二甲基甲酰胺(4mL)中的溶液中加入六氟磷酸0-(7-氮雜苯并三唑-l-基)-N,N，N',N'-四甲基脲(200mg，0.48mmo1)。在室溫下，將混合物攪拌0.25小時(shí)，隨后加入2-異丙基-lH-苯并咪哇-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(210mg'0.48mmol)和N,N-二異丙基乙胺(0.184mL，0.96mmol)并且再持續(xù)攪拌0.5小時(shí)。真空中蒸發(fā)溶液并且通過(guò)反相HPLC[5-10-25%的梯度(5-10%歷時(shí)10min;10-25%歷時(shí)50min);流速15mL/min;在280nm下檢測(cè)]純化粗產(chǎn)物得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的雙三氟乙酸鹽(70mg，0.09rnmo1,18%)。(n々〗(:3111374&02的[]^+司+計(jì)算值588.30，實(shí)驗(yàn)值588.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-60%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=2.39min。實(shí)例8:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-[l-(2-氟-苯基氨甲酰基)哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺的合成室溫下，將2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(220mg，0.55mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中。向這一溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(143.2mg，l.lmmol)，隨后加入鄰氟苯基異氰酸酯(75.4mg,0.55mmo1)。在室溫下將所得混合物攪拌整夜，在真空中進(jìn)行濃縮并且通過(guò)制備型反相HPLC純化殘余物得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的雙三氟乙酸鹽(92.6mg，0.12mmol，22%)。0n々)C3oH39FNe02的[M+H]+計(jì)算值535.32，實(shí)驗(yàn)值535.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=2.09min。實(shí)例9:2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸[l-(l-甲垸磺?；哙?4-基甲基)哌啶-4-基甲基]酰胺的合成室溫下，將2-異丙基-1H-苯并咪唑-4-甲酸(l-哌啶-4-基甲基哌啶-4-基甲基)酰胺(40mg，O.lmmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(l.OmL)中。向這一溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(0.175mL,lmmol)，隨后加入甲垸磺酰氯(11.5mg,0.1mmol)。在室溫下將混合物攪拌16小時(shí)，隨后在真空中進(jìn)行濃縮并且通過(guò)制備型反相HPLC純化殘余物得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的雙三氟乙酸鹽(27.2mg，0.04mmol，40%)。(m/^:C24H37N503S的[M+H]+計(jì)算值476.27，實(shí)驗(yàn)值476.2。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=1.66min。實(shí)例10:4.(4-{[(2-叔丁基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶.1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的合成室溫下，向二氯甲烷(29mL)中的制備3的粗產(chǎn)物(2.4g，5.8mmol)中加入N,N-二異丙基乙胺(1.5g，11.6mmol)。將所得混合物冷卻到0'C并且逐滴加入氯甲酸甲酯(660mg，6.98mmo1)。使反應(yīng)溫到室溫并且再攪拌10分鐘。將溶液濃縮，將其再溶解于50%乙酸水溶液中，過(guò)濾并且通過(guò)反相制備型HPLC加以純化。將所得固體溶解于二氯甲烷中并且用1M氫氧化鈉水溶液加以洗滌。將水層用二氯甲烷萃取兩次，并且將已合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并且濃縮得到呈白色泡沫狀的標(biāo)題化合物(1.3g，2.8mmo1，48%)。(m/z):C26H39N503的[M+H]+計(jì)算值:470.32，實(shí)驗(yàn)值470.6。NMR(300MHz,DMSO-d6):5(ppm)1.02-1.16(m，2H)，1.49(s，9H)，1.47-1.7(m，4H),1.82-2.03(m，4H)，2.74-2.94(m,6H)，3.31-3.40(m，2H),3.54-3.58(m,2H),3.56(s,3H)，3.98-4.03(m,2H),7.41-7.46(m,1H),7.71-7,74(m，1H),7.79-7.82(m，1H),9.35(brs,1H)。實(shí)例11-13使用與實(shí)例IO類似地方法，以適當(dāng)?shù)穆然镌噭┨娲燃姿峒柞?lái)制備實(shí)例11-13的化合物。實(shí)例11:2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[1-(2-氟-苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)酰胺；(m/z):C3,H4oFN502的[M+H]+計(jì)算值534.33，實(shí)驗(yàn)值534.4。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20歷時(shí)4分鐘)=2.09min。實(shí)例12:2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(3-甲基-苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；(m/z):C32H43N502的[M+H]+計(jì)算值530.35,實(shí)驗(yàn)值530.42。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=2.22。實(shí)例13:2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(4-氟苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)酰胺；(m/z):C^H4oFN502的[M+H]+計(jì)算值534.33，實(shí)驗(yàn)值534.4。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-65%MeCN/H20，歷時(shí)4分鐘)=2.17。實(shí)例14:4-[4-({[2-(1-羥基-1-甲基乙基)-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的合成a.2-(l-羥基-l-甲基乙基)-lH-苯并咪唑-4-甲酸的制備向2,3-二氨基苯甲酸甲酯(1.5g，9.2mmo1)于4MHC1(50mL)中的溶液中加入2-羥基異丁酸(2.87g，27.6mmo1)。在約90'C下攪拌混合物24小時(shí)。通過(guò)使用氫氧化鈉水溶液將其中和到pH值約3，并且濃縮至干。將殘余物懸浮于甲醇中并且使其濾過(guò)濾紙。濃縮濾液并且用醚漂洗殘余物。將剩余固體殘余物溶解于乙酸乙酯中，并且用鹽水溶液加以洗滌。用MgS04干燥后，在真空中蒸發(fā)有機(jī)溶液得到呈淺黃色油狀物的標(biāo)題中間物(約800mg)。不經(jīng)進(jìn)一步純化即將粗產(chǎn)物用于下一步驟中。(m/z):CuH12N203的[M+H]+計(jì)算值:221.09，實(shí)驗(yàn)值221.1。'H-畫R(CD3OD)S(ppm)7.8(dd，1H),7.7(dd,1H)，7.2(m,lH)，1.3(s，6H)。b.4-r4-(7(2-n-羥基-l-甲基乙基-1H-苯并咪唑-4-羰基l氨基l甲基)哌啶-l-基甲基l哌啶-l-甲酸甲酯的合成向前一步驟的苯并咪唑甲酸產(chǎn)物(0.7g，3.18mmol)、雙三氟乙酸鹽形式的制備4的氨甲基哌啶產(chǎn)物(1.2g，3.13mmo1)和羥基苯并三唑(HOBt)(0.43g'3.18mmol)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入三乙胺(1.3mL，9.3mmo1)和N-乙基-N-(3-二甲基氨基丙基)碳化二酰亞胺鹽酸鹽(EDC)(0.67g，3.5mmo1)。在室溫下將混合物攪拌12小時(shí)并且在真空中濃縮至干。使殘余物在二氯甲烷(150mL)與飽和碳酸氫鈉之間分配。將有機(jī)層用MgS04干燥，并且蒸發(fā)至干，得到淺黃色油狀殘余物。通過(guò)制備型HPLC加以純化得到標(biāo)題化合物的雙-三氟乙酸鹽；(m/z):C25H37N504的[M+H]+計(jì)算值472.29，實(shí)驗(yàn)值472.5。保留時(shí)間(分析型HPLC:5-30%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=3.67min。'H-NMR(CD3OD)5(ppm)7.9-7.8(m,2H)，7.6-7.5(t，1H)，4.0(brd，2H),3.6(s,5H)，2.9-2.75(brm，5H)，2.05-1,9(brd，3H)，1.68(m，6H),1.15(m,4H)。實(shí)例15:4-[4-({[2-(2-羥基-1-甲基乙基)-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌喊-l-甲酸甲酯的合成a.2-(2-羥基-l-甲基乙基)-lH-苯并咪唑-4-甲酸的制備向2，3-二氨基苯甲酸甲酯(2.1g，14.1mmol)于4MHC1(90mL)中的溶液中加入2-甲基-3-羥基丙酸甲酯(5g,42.3mmol)。在約9(TC下攪拌混合物24小時(shí)。通過(guò)使用氫氧化鈉水溶液將其中和到pH值約3，并且濃縮至干。將殘余物懸浮于甲醇中并且使其濾過(guò)濾紙。對(duì)濾液進(jìn)行濃縮后，將剩余固體殘余物溶解于水中并且用乙酸乙酯加以洗滌。在真空中蒸發(fā)水溶液得到呈淺黃色油狀物的標(biāo)題中間物(約800mg)。不經(jīng)進(jìn)一步純化即將粗產(chǎn)物用于下一步驟中。(m/z):CnHuN203的[M+H]+計(jì)算值221.09，實(shí)驗(yàn)值221.3。'HNMR(CD3OD)S(ppm)8.1(d,1H),7.9(m,1H)，7.6(t，1H)，3.8(m，2H),3.6(m，1H),1.4(d，3H)。b.4-f4-m2-(2-羥基-l-甲基乙基)-lH-苯并咪唑-4-羰基卜氨基}甲基)哌啶-1-基甲基1哌啶-l-甲酸甲酯的合成向前一步驟的苯并咪唑甲酸產(chǎn)物(0.45g，1.75mmo1)、雙三氟乙酸鹽形式的制備4的氨甲基哌啶產(chǎn)物(0.8g，1.6mmol)和HOBt(0.237g，1.75mmol)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中加入三乙胺(0.98mL，7.0mmo1)禾BEDC(0.353g，1.84mmo1)。在室溫下將混合物攪拌12小時(shí)并且在減壓下濃縮至干。使殘余物在二氯甲烷(150mL)與飽和碳酸氫鈉之間分配。將有機(jī)層用MgS04干燥，并且蒸發(fā)至干，得到淺黃色油狀殘余物。通過(guò)制備型HPLC加以純化得到標(biāo)題化合物的雙-三氟乙酸鹽(0.2g)。(m/z):C2sH37N504的[M+H]+計(jì)算值472.29，實(shí)驗(yàn)值472.5。保留時(shí)間(分析型HPLC:10-40%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=3.31minH-NMR(CD3OD)S(ppm)7.9-7.8(m，2H),7.6-7.5(m，1H)，4.0(brd，2H)，3.85-3.7(m,2H),3.6(brs,6H)，3.3(br,2H)，2.9-2.6(brm，6H)，2.0-1.8(br,4H)，1.7-1.5(m,6H)，1.4(m，3H),1.1-1.0(m，4H)。本發(fā)明的其它化合物使用實(shí)例1-13的程序和其變更形式，制備表I到表IX的化合物并且通過(guò)質(zhì)譜加以表征。在下表中，空白引入線表示氫。表I<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage55</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage56</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>實(shí)例214:4-(4-{[(2-異丙基-111.苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌咬-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯的備用合成a.4-羥甲基-哌啶-l-甲酸甲酯的制備將4-羥甲基哌啶(l.Og,8.6mmol)溶解于水(15mL)中并且將其冷卻到0。C。向這一溶液中逐滴加入碳酸鉀(4.8g，34.7mmol)于水(10mL)中的溶液，隨后加入氯甲酸甲酯(2.68mL，34.7mmol)。用力攪拌混合物并且經(jīng)2小時(shí)將其溫到室溫。攪拌整夜(16小時(shí))后，用6M鹽酸水溶液將反應(yīng)混合物酸化并且用二氯甲垸(3x60mL)進(jìn)行萃取。將萃取液合并，用硫酸鈉干燥并且過(guò)濾。將濾液蒸發(fā)得到呈無(wú)色油狀物的標(biāo)題中間物(1.4g，8.1mmol，93%)。〖附/力C8H15N03的[M-H20+H]+計(jì)算值173.11，實(shí)驗(yàn)值156.2HNMR(300MHz,DMSO-d6):5(ppm)0.98(m，2H),1.52(m,1H),1.63(brd，2H)，2.72(brm,2H)，3.23(d,2H)，3.56(s，3H),3.95(brd,2H)，4.48(brs，1H)。b.4-甲?；哙?l-甲酸甲酯的制備-78。C下，向草酰氯(4.1mL，8.2mmo1)于二氯甲垸(4mL)中的溶液中逐滴加入二甲亞砜(1.2mL，16.4mmo1)于二氯甲烷(4mL)中的溶液。攪拌5分鐘后，加入4-羥甲基-哌啶-1-甲酸甲酯(1.3g，7.5mmo1)于二氯甲垸(5mL)中的溶液。將所得溶液再攪拌5分鐘，隨后加入三乙胺(5.2mL，37.3mmo1)并且將混合物溫到-l(TC。攪拌1小時(shí)后，加入二氯甲烷(100mL)并且用1M磷酸水溶液、1M氫氧化鈉水溶液和鹽水洗滌有機(jī)層。將溶液用硫酸鈉干燥，隨后蒸發(fā)得到呈小麥色油狀物的標(biāo)題中間物(1.0g,5.8mmol，78%)。畫R(300MHz,DMSO-d6):S(ppm)1.36(m,2H),1.83(m，2H)，2,48(brm,1H),2.93(brt,2H),3.56(s，3H)，3.80(brd,2H)，9.56(s，1H)。c.4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基l甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的合成將2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺(雙三氟乙酸鹽，1.1g，2.0mmol)懸浮于二氯甲烷(20mL)中并且加入N，N-二異丙基乙胺(0.72mL，4.0mmo1)。當(dāng)懸浮液變?yōu)槌吻迦芤簳r(shí)，加入乙酸(0.13mL，2.0mmoD，隨后加入4-甲酰基哌啶-1-甲酸甲酯(0.54g,3.1mmo1)于二氯甲烷(20mL)中的溶液。在室溫下攪拌5分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(0.628g,3.1mmo1)并且將反應(yīng)再攪拌1小時(shí)。隨后，用1M氫氧化鈉(35mL)水溶液使水層成堿性并且用二氯甲烷(2x20mL)加以萃取。將已合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥并且蒸發(fā)得到呈褐色固體狀的粗產(chǎn)物(1.41g)。將粗產(chǎn)物經(jīng)由制備型HPLC(反相)[5-10-25%的梯度5%MeCN/水(0.1%TFA)到10%MeCN線性梯度，歷時(shí)10rnin;10%MeCN到25%MeCN線性梯度，歷時(shí)50min;流速=15mL/min;在280nm下檢測(cè)]純化從而提供雙三氟乙酸鹽形式的標(biāo)題化合物，隨后將其凍干。將1M氫氧化鈉和二氯甲烷(1:1，100mL)的混合物加到經(jīng)凍干的雙三氟乙酸鹽中。將有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)，并且將所得固體凍干得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物(0.93g，2mmo1,98%產(chǎn)率，純度97.5%)。(m々)C25H37N503的[M+H]+計(jì)算值456.30，實(shí)驗(yàn)值456.3。保留時(shí)間(分析型HPLC:2-50%MeCN/H20，歷時(shí)6分鐘)=3.06min。'HNMR(300MHz,DMSO-d6):0.92(m,2H),1.30(m,2H),1.38(d，6H)，1.53(m,1H),1.60-1.90(m，7H)，2.07(d，2H)，2.73(brm,2H),2.83(brd，2H)，3.22(七重峰，1H)，3.33(t，2H)，3.56(s，3H),3.93(brd,2H)，7.23(t，1H),7.62(d，1H)，7.77(d，1H)，10.10(brs,1H)。實(shí)例215:4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的合成將根據(jù)實(shí)例214的方法制備的非晶形固體形式的4-(4-{[(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(300mg)溶解于乙腈(15mL)中，混合直到完全溶解為止，并且將其暴露于氣氛中，導(dǎo)致部分蒸發(fā)。據(jù)觀察，晶體在2小時(shí)內(nèi)成核。通過(guò)&NMR、液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)和x射線結(jié)構(gòu)分析確定所述晶體的化學(xué)組成。通過(guò)粉末x射線衍射、差示掃描量熱和x射線結(jié)構(gòu)分析來(lái)確定固體產(chǎn)物的結(jié)晶結(jié)構(gòu)。實(shí)例216:結(jié)晶4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式I)的合成a.4-羥甲基-哌啶-l-甲酸甲酯的制備將4-羥甲基哌啶(47.6g,1.0eq)和水(300mL)裝入燒瓶中。將所得混合物冷卻到0-10。C。在將溫度保持在l(TC以下的同時(shí)，加入溶解于水(150mL)中的碳酸鉀(85,7g，1.5eq)和氯甲酸甲酯(38.4mL，1.1叫)。當(dāng)加入完成后，將反應(yīng)混合物溫到20-30'C歷時(shí)1小時(shí)。反應(yīng)完成后，將二氯甲垸(500mL)加到反應(yīng)混合物中。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行收集，并用1M磷酸溶液(200mL)、飽和碳酸氫鈉溶液(200mL)和飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌。將有機(jī)層用硫酸鈉(50g，lw/weq)干燥且隨后在真空下蒸餾得到標(biāo)題中間物(67.0g，90%產(chǎn)率)。b.4-甲?；哙?l-甲酸甲酯的制備將4-羥甲基哌啶-1-甲酸甲酯(34.7g，1.0eq)溶解于二氯甲垸中并且將其冷卻到0-10。C。在將溫度保持在0-10'C的同時(shí)，經(jīng)15min加入碳酸氫鈉(2.35g，0.14eq)和溴化鈉(2.40g，0.10eq)于水(100mL)中的溶液。在將溫度保持在0-10'C的同時(shí)，在充分?jǐn)噭?dòng)下，將2,2，6,6-四甲基-1-哌啶基氧基自由基(TEMPO)(0.32g，0.01eq)加到混合物中，隨后經(jīng)1小時(shí)加入10-13%w/v次氯酸鈉溶液(135mL，1.1叫)。反應(yīng)完成后，分離各層并且將有機(jī)層用水(150mL)洗滌并用硫酸鈉(30g，lw/weq)加以干燥。通過(guò)蒸餾去除溶劑從而提供標(biāo)題化合物(31.0g，90%產(chǎn)率)。c.2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺的制備在將溫度保持在1CTC以下的同時(shí)，將三氟乙酸(56.0mL，IO叫)加到含有約5。C的4-([(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基)-哌啶-l-甲酸叔丁酯(30.0g,1.0eq)于二氯甲烷(300mL)中的溶液的燒瓶中。在20-30。C下將所得混合物攪拌2小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，加入三乙胺(73.2mL，7.0eq)和乙酸(4.3mL，l.O叫)以提供表觀pH值約為4的標(biāo)題中間物的溶液，直接將其用于下一步驟中。d.4-(4-W2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基l甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的合成在將溫度保持在20-30'C的同時(shí)，將4-甲?；哙?l-甲酸甲酯(25.7g，2.0eq)加到前一步驟中所制備的溶液中。攪拌30min后，在溫度保持在20-30'C的同時(shí)，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(24.3g，1.5eq)。在20-30°C下將反應(yīng)混合物攪拌30min。反應(yīng)完成后，加入1M鹽酸(300mL)以中止反應(yīng)。收集含有產(chǎn)物的水層并且用二氯甲垸(150mL)加以洗滌。用活性碳(DarcoG60，6g，20%w/w)處理水層以去除顏色。將懸浮液攪拌l小時(shí)，且隨后使其濾過(guò)硅藻土床。將二氯甲烷(300mL)加到水溶液中，并且使用4N氫氧化鈉通過(guò)將水層的pH值調(diào)到12-13來(lái)使產(chǎn)物游離堿化。收集有機(jī)層并且用水(300mL)加以洗滌。在80'C下蒸餾有機(jī)層并且用乙腈(2x300mL)替換溶劑以去除二氯甲烷和殘余的三乙胺。將固體懸浮于乙腈(600mL)中，并且將混合物加熱直到固體溶解(約75'C)。將溶液冷卻直到出現(xiàn)成核現(xiàn)象(約55-65°C)并且保持1小時(shí)。經(jīng)2小時(shí)將漿液冷卻到2(TC且隨后經(jīng)30分鐘將其冷卻到0-5'C，隨后在0-5'C下攪拌30min。將固體過(guò)濾并且用冷的乙腈(60mL)洗滌。真空下，在6(TC下干燥潮濕濾餅歷時(shí)6小時(shí)從而提供標(biāo)題化合物(28.3g，85%產(chǎn)率)。實(shí)例217:4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式I)的合成將根據(jù)實(shí)例214的方法制備的非晶形固體形式的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯分散于下表X中所列的惰性稀釋劑中。將混合物暴露于所述氣氛中并且使其完全蒸發(fā)。通過(guò)粉末x射線衍射來(lái)表征所得固體。經(jīng)證實(shí)，所有固體都為結(jié)晶，其具有與下文中從實(shí)例215的樣本獲得的實(shí)例220中所報(bào)導(dǎo)的粉末x射線衍射圖相符的圖。表X:結(jié)晶形式的合成<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>實(shí)例218:結(jié)晶4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(形式II)的合成環(huán)境溫度下，將非晶形固體形式的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(42.2mg)分散于己垸(4.22mL)中直到最終濃度為10mg/mL。用超聲波處理溶液以分散較大固體。在環(huán)境溫度(約22'C)下24小時(shí)后，出現(xiàn)結(jié)晶。通過(guò)真空過(guò)濾分離結(jié)晶固體，隨后進(jìn)行分析。實(shí)例219:4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯(形式m)的合成環(huán)境溫度下，將非晶形固體形式的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯(38mg)溶解于1:1的甲醇:水溶劑混合物(1.9mL)中直到最終濃度為20mg/mL。用超聲波處理溶液30秒以確保完全溶解。隨后，使溶液在未封蓋小瓶中緩慢蒸發(fā)。在環(huán)境溫度下24小時(shí)后，出現(xiàn)結(jié)晶。通過(guò)真空過(guò)濾分離結(jié)晶固體。用1:1的乙醇:水溶劑混合物洗滌濾餅一次，隨后進(jìn)行分析。實(shí)例220:粉末X射線衍射用X'TRA型ThermoARLX射線衍射儀(ThermoARLSA，Switzerland)使用1,542埃的CuKa輻射(45kV，40mA)和Si(Li)固態(tài)檢測(cè)器獲得粉末x射線衍射圖。所述分析通常是在2°/min的掃描速率和每點(diǎn)0.03。的步長(zhǎng)于2°到35°的29角范圍內(nèi)進(jìn)行。將以原樣使用或研磨成細(xì)粉的樣本小心包裝于經(jīng)設(shè)計(jì)以適合儀器頂部裝載樣本杯的直徑為7.8mm且深度為0.5mm的石英插管中以供分析。每周通過(guò)與硅金屬標(biāo)準(zhǔn)品相比較來(lái)核實(shí)儀器校準(zhǔn)處在土0.02。的2e角內(nèi)。手工研磨成粉末狀的實(shí)例215的結(jié)晶化合物(形式I)的代表性PXRD圖繪示于圖1中。用Rigaku衍射儀使用CuKa(30kV,15mA)輻射獲得的結(jié)晶形式III的樣本的代表性PXRD圖繪示于圖5中。實(shí)例221:X射線結(jié)構(gòu)分析a.形式I將尺寸為0.33x0.17x0.11mm的實(shí)例215中所制備的塊狀晶體安放在玻璃纖維上。使用通過(guò)SMART5.630版軟件(Bruker，2003)控制的具有13.5cm的窗口直徑的BrukerSMART6KCCD射線區(qū)域檢測(cè)儀使用CuKa輻射獲得X射線結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。樣本與檢測(cè)儀的距離為5.039cm。在-153土rC的溫度下收集數(shù)據(jù)并且使用SHELXS6.14版(Bruker，2003)軟件進(jìn)行分析。得到以下晶格參數(shù)單位晶格為尺寸a=16.9053A、b=9.5172A、c=15.4659A的斜方晶系；空間群為Pna2^計(jì)算密度為1.22g/cm3。如表XI所示，由所得原子位置預(yù)測(cè)的粉末x射線衍射峰與如實(shí)例220中所述獲得的觀察結(jié)果極為符合。表XI:PXRD峰位置觀察到的2e值(度數(shù))預(yù)測(cè)到的26值(度數(shù))15.08±0.2015.1±0.215.41±0.2015.6±0.219.00±0.2019.2±0.219.70±0.2019.5±0.223.68±0.2023.7±0.2b.形式III通過(guò)上文所述的方法分析由實(shí)例219的方法制備的尺寸為0.35x0.12x0.09mm的塊狀晶體。得到以下晶格參數(shù)單位晶格為尺寸a=l4.8101A、b=9.9985A、c=17.9222A，(3=106.3020°的單斜晶系；空間群為P2"n;計(jì)算密度為1.23g/cm3。實(shí)例222:熱分析使用TAInstrumentsModelQ-100模塊進(jìn)行差示掃描量熱測(cè)定(DSC)。收集數(shù)據(jù)并且使用QSeriesTM軟件的TAInstrumentsThermalAdvantage進(jìn)行分析。將約7mg樣本精確稱取到帶蓋子的鋁盤中。使用10'C/min的線性加熱速率從5'C緩慢升高到約20(TC來(lái)評(píng)估樣本。使用過(guò)程中用千燥氮?dú)鈨艋疍SC室。使用TAInstrumentsModelQ-500模塊進(jìn)行熱重分析(TGA)。收集數(shù)據(jù)并且使用TAInstrumentsThermalAdvantageforQSeriesTM軟件進(jìn)行分析。將重約2mg的樣本放入鉑支架上的鋁盤中并且在以lCTC/min的線性加熱速率將環(huán)境溫度升到約300'C的過(guò)程中進(jìn)行掃描。使用期間用氮?dú)鈨艋胶馐液蜖t腔。結(jié)晶形式I(根據(jù)實(shí)例216的方法制備)、形式II和形式m材料的代表性DSC和TGA跡線分別繪示于圖2、4和6中。實(shí)例223:動(dòng)態(tài)吸濕評(píng)定動(dòng)態(tài)吸濕(DMS)評(píng)定是在25。C下使用VTI大氣微平衡SGA-100系統(tǒng)(VTICorp.,Hialeah,FL33016)進(jìn)行。使用約5-10mg的樣本規(guī)格且在開始分析時(shí)將濕度設(shè)置在環(huán)境值。典型的DMS分析是由三次掃描組成以每步驟5%相對(duì)濕度(RH)的掃描速率由環(huán)境RH到2%RH、2%RH到90%RH、90%RH到5%RH。每?jī)煞昼妼?duì)質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量并且當(dāng)5個(gè)連續(xù)點(diǎn)的樣本質(zhì)量在0.02%內(nèi)保持穩(wěn)定時(shí)，將RH變成下一個(gè)值(±5%RH)。實(shí)例215的結(jié)晶化合物(形式I)的代表性等溫動(dòng)態(tài)吸濕曲線繪示于圖3中。本發(fā)明的結(jié)晶化合物在2%到90%RH的整個(gè)范圍內(nèi)展現(xiàn)可逆的吸附/解吸附曲線和小于0.25%的重量改變，且在40%到75呢RH的臨界濕度范圍內(nèi)具有小于0.1%的重量改變。實(shí)例224:紅外分析實(shí)例215的結(jié)晶化合物(形式I)的紅外(IR)吸收光譜是在4000到675cm—1的頻率范圍內(nèi)使用裝備有Nicolet衰減全反射(ATR)樣本固定器的Avatar360FT-IR光譜儀測(cè)定。本發(fā)明的結(jié)晶化合物樣本的代表性IR吸收光譜在766±1、1097±1、1251±1、1413±1、1449±1、1579±1、1609±1、1640±1和1696±1cm—1處具有顯著吸收譜帶。實(shí)例225:固態(tài)穩(wěn)定性評(píng)定在4CTC和75%RH下，將根據(jù)實(shí)例216的方法制備的形式I的結(jié)晶化合物樣本存儲(chǔ)于多個(gè)敞開的玻璃小瓶中。以特定的間隔移出代表性小瓶中的內(nèi)容物并且通過(guò)DSC、TGA、PXRD和HPLC分析化學(xué)純度。存儲(chǔ)3個(gè)月后，DSC或TGA溫譜圖和PXRD圖都無(wú)任何可檢測(cè)到的改變。所存儲(chǔ)的樣本的化學(xué)純度為99.5%。分析1:關(guān)于5-HT4("人類受體的放射性配體結(jié)合分析a.5-HT^的膜制備在5%C02的潮濕恒溫箱中于37。C下，使經(jīng)人類5-HT4^受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞(如使用^H]-GR113808膜放射性配體結(jié)合分析所測(cè)定，Bmax=約6.0皮摩爾/毫克蛋白質(zhì))在T-225燒瓶中的含有4,500mg/LD-葡萄糖和吡哆醇鹽酸鹽且補(bǔ)充有10%胎牛血清(FBS)(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)10437)、2mML-谷氨酰胺和(100單位)盤尼西林(penicillin)-(100微克)鏈霉素/毫升(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)15140)的杜貝卡氏經(jīng)修飾依格氏培養(yǎng)基(Dulbecco'sModifiedEaglesMedium,DMEM)(GIBCO-InvitrogenCorp.,CarlsbadCA:目錄編號(hào)11965)中生長(zhǎng)。通過(guò)將800pg/mL遺傳霉素(geneticin)(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)10131)加到培養(yǎng)基中而使細(xì)胞在連續(xù)選擇壓力下生長(zhǎng)。使細(xì)胞生長(zhǎng)到約60-80%長(zhǎng)滿(<35個(gè)次培養(yǎng)傳代)。在采集前20-22小時(shí)，洗滌細(xì)胞2次并且用無(wú)血清DMEM加以喂養(yǎng)。膜制備的所有步驟都是在冰上進(jìn)行。通過(guò)用25mL移液管輕柔地機(jī)械攪動(dòng)并搗碎而使細(xì)胞單層上升。通過(guò)以1000rpm離心(5min)收集細(xì)胞。對(duì)于膜制備來(lái)說(shuō)，將細(xì)胞小球再懸浮于冰冷的50mM4-(2-羥乙基)-l-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(pH7.4)(膜制備緩沖液)中(40mL/從30-40個(gè)T225燒瓶得到的總細(xì)胞產(chǎn)量)并使用Polytron破碎儀(設(shè)置19，2xl0s)在冰上使其均質(zhì)化。4'C下，以1200g將所得勻漿離心5分鐘。丟棄離心塊且以40,000g將上清液離心(20min)。通過(guò)再懸浮于膜制備緩沖液中并以40,000g離心(20min)來(lái)洗滌離心塊一次。將最終離心塊再懸浮于50mMHEPES(pH7.4)(分析緩沖液)(相當(dāng)于1個(gè)T225燒瓶/1mL)中。通過(guò)Bradford(Bradford,1976)方法測(cè)定膜懸浮液中的蛋白質(zhì)濃度。將膜以等分試樣形式冷凍存儲(chǔ)于-80。C下。b.放射性配體結(jié)合分析放射性配體結(jié)合分析是在1.1mL的96深孔聚丙烯分析板(Axygen)中以在50mMHEPES(pH7.4)(含有0.025%胎牛血清(BSA))中含有2pg膜蛋白的400pL總分析體積進(jìn)行。用于測(cè)定放射性配體Kd值的飽和結(jié)合研究是使用[3H]-GR113808(AmershamInc.，Bucks,UK:目錄編號(hào)TRK944;比活性約82Ci/mmol)以8-12種在0.001nM-5.0nM范圍內(nèi)的不同濃度進(jìn)行。用于測(cè)定化合物pKi值的置換分析是使用卩H]-GR113808在0.15nM下和在10pM-100pM范圍內(nèi)的11種不同化合物濃度下進(jìn)行。測(cè)試化合物以于DMSO中的lOmM儲(chǔ)備溶液形式使用，并且在25°C下于含有0.1%BSA的50mMHEPES(pH7.4)中稀釋到400pM，且隨后在同一種緩沖液中進(jìn)行連續(xù)稀釋(1:5)。在存在1pM未經(jīng)標(biāo)記的GR113808的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合。在室溫下將分析物培育60分鐘，且隨后通過(guò)迅速濾過(guò)預(yù)浸于0.3%聚乙烯亞胺中的96孔GF/B玻璃纖維過(guò)濾板(PackardBioscienceCo.，Meriden,CT)來(lái)終止結(jié)合反應(yīng)。用過(guò)濾緩沖液(冰冷的50mMHEPES，pH7.4)洗滌過(guò)濾板3次以去除未結(jié)合的放射性。將板干燥，將35(xLMicroscint-20液體閃爍液(PackardBioscienceCo.,Meriden,CT)加到各孔中并且在PackardTopcount液體閃爍計(jì)數(shù)器(PackardBioscienceCo.，Meriden,CT)中對(duì)板進(jìn)行計(jì)數(shù)。通過(guò)用GraphPadPrism軟件包(GraphPadSoftware,Inc.,SanDiego,CA)使用單4立點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)的3參數(shù)模型進(jìn)行的非線性回歸分析來(lái)分析結(jié)合數(shù)據(jù)。如在存在1GR113808的情況下所測(cè)定，BOTTOM(曲線最小值)固定在非特異性結(jié)合值。測(cè)試化合物的K,值是以Prism由最佳擬合的IC5o值計(jì)算，且放射性配體的Ka值是使用Cheng-Prusoff等式(Cheng禾口Prusoff,丑/oc/簡(jiǎn)'o/泡畫co/柳1973，22,3099-108乂'K;=IC50/(1+[L]/Kd)計(jì)算，其中[L]-卩H]-GR113808的濃度。結(jié)果表示為Ki值的以十為底的負(fù)對(duì)數(shù)pKi。在本分析中，具有較高pKi值的測(cè)試化合物對(duì)5-HT4受體具有較高結(jié)合親和力。在本分析中，所測(cè)試的本發(fā)明的化合物具有在約7.0到約10.0的范圍內(nèi)的pKi值。分析2:關(guān)于5.HT3A人類受體的放射性配體結(jié)合分析受體亞型選擇性的測(cè)定a.5-HT3A膜制備經(jīng)人類5-HT3A受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞是從Dr.MichaelBruess(UniversityofBonn,GDR)獲得(如使用["H卜GR65630膜放射性配體結(jié)合分析所測(cè)定，Bmax二約9.0皮摩爾/毫克蛋白)。在5%C02的潮濕恒溫箱中于37°C下，使細(xì)胞在T-225燒瓶或細(xì)胞工廠中的補(bǔ)充有10%熱滅活胎牛血清(FBS)(Hyclone，Logan,UT:目錄編號(hào)SH30070.03)禾卩(50單位)盤尼西林-(50微克)鏈霉素/毫升(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)15140)的50%杜貝卡氏經(jīng)修飾依格氏培養(yǎng)基(DMEM)(GIBCO-InvitrogenCorp.,Carlsbad,CA:目錄編號(hào)11965)和50%Ham'sF12(GBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)11765)中生長(zhǎng)。使細(xì)胞生長(zhǎng)到約70-80%長(zhǎng)滿(<35個(gè)次培養(yǎng)傳代)。膜制備的所有步驟都是在冰上進(jìn)行。為采集細(xì)胞，抽吸培養(yǎng)基并且用無(wú)C+、M^+的杜貝卡氏磷酸鹽緩沖鹽水(dPBS)漂洗細(xì)胞。通過(guò)輕柔地機(jī)械攪動(dòng)使細(xì)胞單層上升。通過(guò)以1000rpm離心(5min)收集細(xì)胞。膜制備的后續(xù)步驟是遵循上文關(guān)于表達(dá)5-HT4(c)受體的膜所述的方案進(jìn)行。b.放射性配體結(jié)合分析放射性配體結(jié)合分析是在96孔聚丙烯分析板中以在50mMHEPES(pH7.4)(含有0.025%BSA分析緩沖液)中含有1.5-2pg膜蛋白的200pL總分析體積進(jìn)行。用于測(cè)定放射性配體Kd值的飽和結(jié)合研究是使用[3H]-GR65630(PerkinElmerLifeSciencesInc.,Boston,MA:目錄編號(hào)NET1011;比活性約85Ci/mmol)以12種在0.005nM到20nM范圍內(nèi)的不同濃度進(jìn)行。用于測(cè)定化合物pKi值的置換分析是使用[311]-GR65630在0.50nM下和在10pM到100pM范圍內(nèi)的11種不同化合物濃度下進(jìn)行?；衔镆杂贒MSO中的10mM儲(chǔ)備溶液形式使用(參看3.1部分)，在25'C下于含有0.1%BSA的50mMHEPES(pH7.4)中稀釋到400pM，且隨后在同一種緩沖液中進(jìn)行連續(xù)(1:5)稀釋。在存在10未經(jīng)標(biāo)記的MDL72222的情況下測(cè)定非特異性結(jié)合。在室溫下將分析物培育60分鐘，隨后通過(guò)迅速濾過(guò)預(yù)浸于0.3%聚乙烯亞胺中的96孔GF/B玻璃纖維過(guò)濾板(PackardBioscienceCo.,Meriden，CT)來(lái)終止結(jié)合反應(yīng)。用過(guò)濾緩沖液(冰冷的50mMHEPES，pH7.4)洗滌過(guò)濾板3次以去除未結(jié)合的放射性。將板干燥，將35Microsdnt-20液體閃爍液(PackardBioscienceCo.,Meriden,CT)加到各孔中并且在PackardTopcount液體閃爍計(jì)數(shù)器(PackardBioscienceCo.,Meriden，CT)中對(duì)板進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用上文所述的非線性回歸程序分析結(jié)合數(shù)據(jù)以測(cè)定Ki值。如在存在10MDL72222的情況下所測(cè)定，BOTTOM(曲線最小值)固定在非特異性結(jié)合值。將Cheng-Pmsoff等式中[L]的量定義為[3H]-GR65630的濃度。5-HT4受體亞型相對(duì)于5-HT3受體亞型的選擇性是以Ki(5-HT3A)/Ki(5-HTV))比率計(jì)算。在本分析中，所測(cè)試的本發(fā)明的化合物具有在約4000到400,000以上的范圍內(nèi)的5-HT4/5-HT3受體亞型選擇性。分析3:用表達(dá)人類5-HT叫)受體的HEK-293細(xì)胞進(jìn)行的全細(xì)胞cAMP積累Flashplate分析在本分析中，通過(guò)測(cè)量當(dāng)表達(dá)5-HT4受體的HEK-293細(xì)胞與不同濃度的測(cè)試化合物接觸時(shí)所產(chǎn)生的環(huán)AMP的量來(lái)測(cè)定測(cè)試化合物的功能效力。a.細(xì)胞培養(yǎng)制備經(jīng)克隆人5-HT叫)受體cDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK-293(人胚腎)細(xì)胞，其表達(dá)兩種不同密度的受體(1)如使用^H]-GR113808膜放射性配體結(jié)合分析所測(cè)定，約0.5-0.6皮摩爾/毫克蛋白質(zhì)的密度；和(2)約6.0皮摩爾/毫克蛋白質(zhì)的密度。在5呢C02的潮濕恒溫箱中于37'C下，使細(xì)胞在T-225燒瓶中的含有4,500mg/LD-葡萄糖且補(bǔ)充有10%胎牛血清(FBS)(GIBCO-Invi加genCorp.:目錄編號(hào)10437)和(100單位)盤尼西林-(100微克)鏈霉素/毫升(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)15140)的杜貝卡氏經(jīng)修飾依格氏培養(yǎng)基(DMEM)(GIBCO-InvitrogenCoi"p.:目錄編號(hào)11965)中生長(zhǎng)。通過(guò)將遺傳霉素(800嗎/mL，GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)10131)加到培養(yǎng)基中而使細(xì)胞在連續(xù)選擇壓力下生長(zhǎng)。b.細(xì)胞制備使細(xì)胞生長(zhǎng)到約60-80%長(zhǎng)滿。在分析前20-22小時(shí)，洗滌細(xì)胞2次并且用含有4,500mg/LD-葡萄糖的無(wú)血清DMEM(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)11965)喂養(yǎng)。為采集細(xì)胞，抽吸培養(yǎng)基并且將10mLVersene(GIBCO-InvitrogenCorp.:目錄編號(hào)15040)加到各T-225燒瓶中。在室溫下培育細(xì)胞5分鐘，且隨后通過(guò)機(jī)械攪動(dòng)使其從燒瓶中移位。將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到含有等體積預(yù)先加溫(37'C)的dPBS的離心管中，并且以1000rpm離心5分鐘。丟棄上清液且將離心塊再懸浮于預(yù)先加溫(37°C)的剌激緩沖液(每2-3個(gè)T-225燒瓶相當(dāng)于10mL)中。這一時(shí)刻標(biāo)注且標(biāo)為零點(diǎn)。用Coulter計(jì)數(shù)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(計(jì)數(shù)超過(guò)8pm的細(xì)胞，燒瓶產(chǎn)量為每個(gè)燒瓶l-2x107個(gè)細(xì)胞)。將細(xì)胞以5x105個(gè)細(xì)胞/毫升的濃度再懸浮于預(yù)先加溫(37'C)的刺激緩沖液(如flashplate試劑盒中所提供)中并且在37'C下預(yù)先培育10分鐘。根據(jù)制造商的說(shuō)明，使用具有125I-cAMP的FIashplate腺苷酰基環(huán)化酶活化分析系統(tǒng)(SMP004B，PerkinElmerLifeSciencesInc.,Boston,MA)以放身f免疫分析格式進(jìn)行cAMP分析。如上所述生長(zhǎng)和制備細(xì)胞。分析中的最終細(xì)胞濃度為每孔25x103個(gè)細(xì)胞且最終分析體積為100|iL。測(cè)試化合物以于DMSO中的10mM儲(chǔ)備溶液形式使用，在25'C下于含有0.1%BSA的50mMHEPES(pH7.4)中稀釋到400pM，且隨后在同一種緩沖液中進(jìn)行連續(xù)(1:5)稀釋。用11種在10pM到lOO^M(最終分析濃度)范圍內(nèi)的不同化合物濃度進(jìn)行環(huán)AMP積累分析。每個(gè)板上都包括5-HT濃度-反應(yīng)曲線(10pM到100pM)。振蕩下，在37。C下將細(xì)胞培育15分鐘并通過(guò)將100pL冰冷的檢測(cè)緩沖液(如Flashplate試劑盒中所提供)加到各孔中來(lái)終止反應(yīng)。密封板并在4'C下培育整夜。使用Topcoimt(PackardBioscienceCo.,Meriden，CT)通過(guò)閃爍親近光譜測(cè)定結(jié)合放射性的量。根據(jù)制造商的用戶手冊(cè)中所提供的說(shuō)明，從cAMP標(biāo)準(zhǔn)曲線外推每毫升反應(yīng)所產(chǎn)生的cAMP的量。通過(guò)用GraphPadPrism軟件包使用3參數(shù)2形劑量-反應(yīng)模型(斜率被限制為一致)進(jìn)行的非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。以pECso值(即，ECso值的以IO為底的負(fù)對(duì)數(shù))報(bào)導(dǎo)效力數(shù)據(jù)，其中ECso為50%最大反應(yīng)的有效濃度。在本分析中，展現(xiàn)較高pECso值的測(cè)試化合物具有使5-HT4受體激動(dòng)的較高效力。在本分析中于具有約0.5-0.6皮摩爾/毫克蛋白質(zhì)密度的細(xì)胞系(1)中所測(cè)試的本發(fā)明的化合物具有在約7.5到約9.5的范圍內(nèi)的pECM)值。分析4:關(guān)于表達(dá)hERG心臟鉀通道的全細(xì)胞中鉀離子電流的抑制作用的活體外電壓鉗分析經(jīng)hERGcDNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CH0-K1細(xì)胞是從UniversityofWisconsin的GailRobertson獲得。將細(xì)胞低溫存儲(chǔ)待用。使細(xì)胞在補(bǔ)充有10%胎牛血清和200叫/mL遺傳霉素的杜貝卡氏經(jīng)修飾依格培養(yǎng)基/F12中繁殖并傳代。將細(xì)胞以使得能夠選擇經(jīng)分離細(xì)胞用于全細(xì)胞電壓鉗研究的密度接種于35miT^培養(yǎng)皿(含有2mL培養(yǎng)基)中經(jīng)聚D-賴氨酸(lOOpg/mL)涂覆的玻璃蓋玻片上。將培養(yǎng)皿保持在37'C下含5呢C02的潮濕環(huán)境中。至少每7天制備胞外溶液并且在不使用時(shí)于4。C下存儲(chǔ)。胞外溶液含有(mM):NaCl(137)、KC1(4)、CaCl2(1.8)、MgCl2(1)、葡萄糖(10)、4-(2-羥乙基)-l-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(10),pH值經(jīng)NaOH調(diào)至7.4。在不存在或存在測(cè)試化合物的情況下，將胞外溶液放入儲(chǔ)槽中，所述溶液以約0.5mL/min的速度由儲(chǔ)槽流入記錄室。制備胞內(nèi)溶液，將其等分并且存儲(chǔ)于-20。C下待用。胞內(nèi)溶液含有(mM):KC1(130)、MgCl2(1)、乙二醇-雙(p—氨基乙醚)N,N,N'，N'-四乙酸鹽(EGTA)(5)、MgATP(5)、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)(10)，pH值經(jīng)KOH調(diào)至7.2。所有實(shí)驗(yàn)都是在室溫(20-22。C)下進(jìn)行。將接種有細(xì)胞的蓋玻片轉(zhuǎn)移到記錄室中并持續(xù)灌注。細(xì)胞與膜片電極之間形成千兆歐姆阻抗封接。獲得穩(wěn)定膜片后，在電壓鉗模式下以-80mV的初始鉗制電位開始記錄。在獲得穩(wěn)定的全細(xì)胞電流后，將細(xì)胞暴露到測(cè)試化合物下。標(biāo)準(zhǔn)電壓方案為以下步驟經(jīng)4.8秒由-80mV的鉗制電位升到+20mV;經(jīng)5秒恢復(fù)極化到-50mV;和隨后回到最初鉗制電位(-80mV)。每15秒(0.067Hz)執(zhí)行這一電壓方案l次。使用pClamp軟件測(cè)定恢復(fù)極化期過(guò)程中的峰值電流幅值。經(jīng)5分鐘將3pM濃度的測(cè)試化合物灌注到細(xì)胞上，隨后在不存在化合物的情況下進(jìn)行為時(shí)5分鐘的沖洗。最后，將陽(yáng)性對(duì)照(西沙必利(cisapride),20nM)加到灌注液中以測(cè)試細(xì)胞的功能。從-80mV至1」+20mV的步驟將活化hERG通道，從而產(chǎn)生外向電流?；氐?50mV的步驟將由于通道從失活恢復(fù)并失活而產(chǎn)生外向尾電流。使用pCLAMP軟件測(cè)定恢復(fù)極化期過(guò)程中的峰值電流幅值。將對(duì)照和測(cè)試物品的數(shù)據(jù)輸出到Origin(OriginLabCo卬.，NorthamptonMA)，其中將個(gè)別電流幅值標(biāo)準(zhǔn)化為不存在化合物時(shí)的初始電流幅值。計(jì)算各條件下的標(biāo)準(zhǔn)化電流平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差，并相對(duì)于實(shí)驗(yàn)時(shí)程作圖。對(duì)暴露到測(cè)試物品或媒劑對(duì)照(通常為0.3%DMSO)5分鐘后所觀察的K+電流抑制作用進(jìn)行比較。使用兩組獨(dú)立t檢驗(yàn)(MicrocalOriginv.6.0)進(jìn)行兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。將p〈0.05的差異視為顯著。在本分析中，鉀離子電流的抑制百分比越低，那么測(cè)試化合物當(dāng)用作治療劑時(shí)改變心臟恢復(fù)極化模式的可能性就越小。舉例來(lái)說(shuō)，在本分析中所測(cè)試的3pM濃度的實(shí)例1-14的化合物展現(xiàn)小于約30%、包括小于約20%的鉀離子電流抑制作用。分析5:口服生物可用性的活體外模型Caco-2滲透分析進(jìn)行Caco-2滲透分析以模仿測(cè)試化合物經(jīng)口投與后穿過(guò)腸進(jìn)入血流的能力。對(duì)溶液形式之測(cè)試化合物滲透經(jīng)設(shè)計(jì)以模擬人小腸單層的緊密接合的細(xì)胞單層的速率進(jìn)行測(cè)定。Caco-2(結(jié)腸，腺癌；人類)細(xì)胞是從ATCC(AmericanTypeCultureCollection;Rockville,MD)獲得。對(duì)于滲透研究來(lái)說(shuō)，將細(xì)胞以63,000個(gè)細(xì)胞/平方厘米的密度接種于預(yù)先潤(rùn)濕的Transwell聚碳酸酯過(guò)濾器(Costar;Cambridge,MA)上。培養(yǎng)21天后形成細(xì)胞單層。在Transwdl培養(yǎng)板中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)后，將含有細(xì)胞單層的膜從Transwell培養(yǎng)板分離并且將其插入擴(kuò)散室(Costar;Cambridge,MA)中。將擴(kuò)散室插入加熱恒溫器中，所述加熱恒溫器裝備有恒溫調(diào)控于37'C的外部循環(huán)水以控制溫度?？諝馄绻軐?5%02/5%C02傳遞到每一半擴(kuò)散室中并且產(chǎn)生穿過(guò)細(xì)胞單層的層流模式，這將有效減少?zèng)]有被攪動(dòng)過(guò)的邊界層。用100^M濃度的測(cè)試化合物和"C-甘露糖醇進(jìn)行滲透研究以監(jiān)測(cè)單層的完整性。所有實(shí)驗(yàn)都是在37'C下進(jìn)行60分鐘。在0、30和60分鐘時(shí)從所述室的供體側(cè)與接收體側(cè)取樣。通過(guò)HPLC或液體閃爍計(jì)數(shù)來(lái)分析樣本中測(cè)試化合物和甘露糖醇的濃度。計(jì)算滲透系數(shù)(Kp)(以cm/sec為單位)。在本分析中，將大于約10x10—6cm/sec的Kp值視作良好生物可用性的指示。在本分析中所測(cè)試的本發(fā)明的那些化合物通常展現(xiàn)出介于約10x10—6cm/sec與約50x10—6cm/sec之間的Kp值分析6:大鼠的藥物動(dòng)力學(xué)研究制備pH值介于約5與約6之間的測(cè)試化合物于0.1%乳酸中的水溶液調(diào)配物。經(jīng)由靜脈內(nèi)投與(iv)2.5mg/kg劑量或口灌(PO)5mg/kg劑量的測(cè)試化合物對(duì)雄性Sprague-Dawley大鼠(CD品系，CharlesRiverLaboratories,Wilmington,MA)給藥。IV投藥的給藥量為1mL/kg且PO投藥的給藥量為2mL/kg。在給藥前和給藥后2分鐘(僅IV)、5分鐘、15分鐘和30分鐘和1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)和24小時(shí)時(shí)，收集動(dòng)物的連續(xù)血樣。通過(guò)液相色譜-質(zhì)譜分析(LC-MS/MS)(MDSSCIEX，API4000，AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity,CA)測(cè)定血漿中測(cè)試化合物的濃度，其中定量下限為1ng/mL。通過(guò)使用WinNonlin(4.0.1版，Pharsight,MountainView,CA)進(jìn)行的非房室分析(對(duì)于IV為201型且對(duì)于PO為200型)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。血漿中測(cè)試化合物濃度比時(shí)間的曲線中的最大值被稱為Cmax。通過(guò)線性梯形法則計(jì)算濃度比時(shí)間曲線下從給藥時(shí)間到最后可測(cè)量濃度的面積(AUC(O-t))。以下式計(jì)算口服生物可用性(F(%))，即PO投藥的AUC(O-t)比IV投藥的AUC(O-t)的劑量標(biāo)準(zhǔn)化比率F(%)=AUCPO/AUCIVx劑量w/劑量P0x100%。預(yù)期在本分析中當(dāng)經(jīng)口投與時(shí)展現(xiàn)較大參數(shù)C^x、AUC(O-t)和F(%)值的測(cè)試化合物具有較高生物可用性。本發(fā)明的優(yōu)選化合物具有通常在0.06嗎/mL到約0.8叫/mL范圍內(nèi)的C歸值和通常在約0.14吸hr/mL到約1.2|ag-hr/mL范圍內(nèi)的AUC(O-t)值。舉例來(lái)說(shuō)，實(shí)例1的化合物在大鼠模型中具有0.8|ag/mL的C匪值、1.2貼.hr/mL的AUC(0-t)值和約75%的口服生物可用性(F(%))。盡管已參考本發(fā)明的特定實(shí)施例描述本發(fā)明，但所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，可在不偏離本發(fā)明的真實(shí)精神和范圍的情況下進(jìn)行多種改變并且可進(jìn)行相當(dāng)內(nèi)容的替代。此外，可進(jìn)行許多修改以使特定情形、材料、相關(guān)組合物、方法、方法步驟與本發(fā)明的目的、精神和范圍相適應(yīng)。所有所述修改都打算處在隨附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。另外，上文所引用的所有公開案、專利和專利文獻(xiàn)都是以全文引用的方式并入本文，就如同個(gè)別地以引用的方式并入一樣。權(quán)利要求1.一種式(I)的化合物id="icf0001"file="S200680017691XC00011.gif"wi="71"he="29"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中R1為視情況經(jīng)-OH取代的C3-5烷基；且X選自(a)-C(O)OR2，其中R2為C1-4烷基或-(CH2)n-苯基，其中n為0或1；(b)-C(O)R3，其中R3選自視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C1-4烷基、鹵基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代的苯基，C1-5烷基，C4-5環(huán)烷基，和-(CH2)m-A，其中m為0或1，且A選自氨基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代異噻唑烷基和2，4-二甲基異噁唑基；(c)-C(O)NR4R5，其中R4為氫或C1-3烷基，且R5為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C1-4烷基、鹵基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；(d)-C(O)C(R6R7)R8，其中R6為氫或C1-3烷基，且R7為氫、-OH或C1-3烷基；或R6和R7一起形成氧基或-(CH2)2；且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C1-4烷基、鹵基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；(e)-C(O)C(HR9)OR10，其中R9為氫或C1-3烷基，且R10為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C1-4烷基、鹵基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；和(f)-S(O)2R11，其中R11選自C1-3烷基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、1，1-二氧代異噻唑烷基、2，4-二甲基異噁唑基和苯基，其視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C1-4烷基、鹵基、C1-4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的化合物，其中RJ為C3.5烷基。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中W為異丙基或叔丁基。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中X為-C(O)OR2。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的化合物，其中Fe為Cw烷基或苯基。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中X為-C(O)R3。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中W為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自d—4烷基、鹵基、d—4垸氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中X為-C(0)NR4115。9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中W為C3—4烷基；且X選自(a)-C(O)OR2，其中W為Cw烷基或苯基；(b)-C(O)R3，其中E^為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4烷基、鹵基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃基；或噻吩基；(c)-C(0)NR4R5，其中W為氫，且RS為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自C,-4垸基和鹵基的取代基取代的苯基；(d)-C(0)C(R6R7)R8，其中R6為氫，且尺7為氫、-OH或甲基；或R6和R7—起形成氧基或-(CH2)2-;且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1或2個(gè)選自d-4垸基和鹵基的取代基取代；(e)-C(0)C(HR9)OR1C)，其中119為氫或甲基，且R"為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自CM烷基和鹵基的取代基取代的苯基；和(f)-S(0)2R11，其中R"為甲基或苯基，其視情況經(jīng)1或2個(gè)選自C!-4烷基和鹵基的取代基取代。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其中W為異丙基或叔丁基；且X選自(a)-C(O)OR2，其中R2為甲基或苯基；(b)-C(O)R3，其中W為視情況經(jīng)1或2個(gè)選自甲基、氯基、氟基和-CF3的取代基取代的苯基；呋喃-2-基；或噻吩-2-基；和(c)-C(0)NR4R5，其中W為氫，且RS為視情況經(jīng)1個(gè)氟基或氯基取代的苯基。11.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中所述化合物選自4-(4-([(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯；4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸苯酯；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氯苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2，4-二氟-苯甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(呋喃-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基l酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(噻吩-2-羰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氟-5-三氟甲基苯甲?；哙?4-基甲基]哌啶-4-基]甲基}酰胺；2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(2-氟-苯基氨甲?；?哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)-酰胺；4-(4-U(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸U-[l-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基)酰胺；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸卩-[l-(3-甲基-苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸{1-[1-(4-氟苯甲?；?-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物和立體異構(gòu)體。12.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中所述化合物選自4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯；4-(4-U(2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯；2-叔丁基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(l-[l-(2-氟-苯甲酰基)-哌啶-4-基甲基]哌啶-4-基甲基}酰胺；和其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑化物和立體異構(gòu)體。13.—種結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯或其溶劑化物。14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物的特征在于粉末x射線衍射圖在選自以下值的29值處具有兩個(gè)或兩個(gè)以上衍射峰15.08±0.20、15.41±0.20、19.00±0.20、19.70±0.20禾口23.68±0.20。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物的特征在于差示掃描量熱曲線在約146。C到約148'C范圍內(nèi)的溫度下吸熱熱流展示最大值。16.根據(jù)權(quán)利要求13所述的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物的特征在于差示掃描量熱曲線在約143。C到約145'C范圍內(nèi)的溫度下吸熱熱流展示最大值。17.根據(jù)權(quán)利要求13所述的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物為一水合物。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的結(jié)晶化合物，其中所述結(jié)晶化合物的特征在于粉末x射線衍射圖在選自以下值的2e值處具有兩個(gè)或兩個(gè)以上衍射峰9.14±0.20、12.41±0.20、12.74±0.20、17.75±0.20、18.47±0.20、20.63±0.20、21.13±0.20禾卩27.05±0.20。19.一種醫(yī)藥組合物，其包含治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。20.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物，其是用于治療。21.—種根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物的用途，其是用于制備藥物。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的用途，其中所述藥物是用于治療哺乳動(dòng)物與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病況。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的用途，其中所述疾病或病況為胃腸道蠕動(dòng)減弱病癥。24.—種用于制備式(i)化合物的方法，Ri為視情況經(jīng)-0H取代的C3—5烷基；且X選自(a)陽(yáng)C(O)OR2，其中W為C"垸基或-(CH2)n-苯基，其中n為0或l;(b)-C(O)R3，其中113選自:視情況經(jīng)l、2或3個(gè)選自CM烷基、鹵基、Q—4烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基，Ci_5焼基，C4.5環(huán)垸基，和-(CH2)m-A，其中m為0或l，且A選自呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯垸基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、l，l-二氧代異噻唑烷基和2,4-二甲基異噁唑基；(c)-C(0)NR4R5，其中R4為氫或Cw烷基，且R5為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C"4烷基、鹵基、CM烷氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；(d)-C(0)C(r6r7)R8,其中Re為氫或d-3烷基，且117為氫、-OH、d—3烷基或氧基；或Re和]^一起形成-(CH2)2:且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自d-4烷基、鹵基、d—4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；(e)-C(0)C(HR9)OR1D，其中R9為氫或d-3垸基，且R^為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C!4烷基、鹵基、C!4垸氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；和(f)-S(0)2R11，其中R"選自C!-3垸基、-CH2-苯基、呋喃基、噻吩基、嗎啉其中:基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯垸基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑垸基、l，l-二氧代異噻唑烷基、2，4-二甲基異噁唑基和苯基，其視情況經(jīng)l、2或3個(gè)選自d-4垸基、鹵基、C"4垸氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，所述方法包含(i)使式(II)的化合物仰與式(III)的化合物反應(yīng)L一X則，其中L為離去基團(tuán)；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(ii)使式(VIII)的化合物:與式(XIII)的化合物反應(yīng):(iii)使式(VI)的化合物:與式(XIV)的化合物反應(yīng):(局以提供式(I)的化合物、或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。25.—種用于制備式(I)化合物的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>其中-W為C3-5垸基；且x選自(b)-C(O)R3，其中R3選自視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C!-4垸基、鹵基、d-4烷氧基、-CF3、-(^^3和-OCHF2的取代基取代的苯基，C"5院基，C4.5環(huán)垸基，和-(CH2)ra-A,其中m為0或l，且A選自呋喃基、噻吩基、嗎啉基、四氫呋喃基、吡啶基、萘基、吡咯基、硫代嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基、氧代氮雜環(huán)丁基、噻唑烷基、l，l-二氧代異噻哇烷基和2，4-二甲基異噁唑基；(d)-C(0)C(R6R7)R8，其中R6為氫或d-3垸基，且R7為氫、-OH、Cw烷基或氧基；或W和W—起形成-(CH2)2;且R8為苯基或環(huán)己基，其中苯基或環(huán)己基視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自d—4烷基、鹵基、d—4烷氧基、-CF3、-OCF3、-OCHF2和-CN的取代基取代；和(e)-C(O)C(HR9)OR10，其中R9為氫或d-3烷基，且R"為視情況經(jīng)1、2或3個(gè)選自C"烷基、鹵基、CM垸氧基、-CF3、-OCF3和-OCHF2的取代基取代的苯基；或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，所述方法包含使式(II)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>與式(IV)的化合物反應(yīng):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中X'選自R3、C(R6R7)R4QC(HR9)OR1Q，以提供式(I)的化合物或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。26.—種產(chǎn)物，其是通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求24或25所述的方法制備。27.—種式(II)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中W為C3—5烷基，或其鹽或立體異構(gòu)體或經(jīng)保護(hù)的衍生物。28.—種制備結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的方法，所述方法包含(a)將4-(4-{[(2-異丙基-111-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯以每毫升惰性稀釋劑介于約15mg與25mg之間的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4—羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的比例分散于選自乙腈、醚、環(huán)己烷和乙酸乙酯的惰性稀釋劑中，從而形成混合物；和(b)使所述混合物蒸發(fā)以提供結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基}哌啶-1-基甲基)哌啶-1-甲酸甲酯。29.—種制備結(jié)晶4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的方法，所述方法包含(a)使2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-甲酸(哌啶-4-基甲基)酰胺與4-甲?；哙?l-甲酸甲酯在極性質(zhì)子惰性稀釋劑中反應(yīng)；(b)蒸餾步驟(a)的產(chǎn)物的同時(shí)，加入乙腈以將所述極性質(zhì)子惰性稀釋劑從所述步驟(a)的產(chǎn)物中去除；(c)在足以溶解從步驟(b)蒸餾得到的殘余物的溫度下，以每毫升乙腈有介于約50mg與約125mg之間的4-(4-U(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基)哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯的濃度來(lái)制備所述殘余物于乙腈中的混合物；和(d)將所述步驟(c)的混合物冷卻到不超過(guò)約20'C的溫度，從而提供結(jié)晶4-(4-{[(2-異丙基-lH-苯并咪唑-4-羰基)-氨基]甲基l哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯。30.—種產(chǎn)物，其是通過(guò)根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的方法制備。31.—種治療患有與5-HT4受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病況的哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與治療有效量的醫(yī)藥組合物，所述醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述醫(yī)學(xué)病況選自腸易激綜合癥、慢性便秘、功能性消化不良、胃排空延遲、胃食管返流病、胃輕癱、手術(shù)后腸梗阻、假性腸梗阻和藥物誘導(dǎo)的運(yùn)輸延緩。33.—種治療哺乳動(dòng)物胃腸道蠕動(dòng)減弱病癥的方法，所述方法包含向所述哺乳動(dòng)物投與治療有效量的醫(yī)藥組合物，所述醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物。34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中所述蠕動(dòng)減弱病癥選自慢性便秘、便秘型腸易激綜合癥、糖尿病性和特發(fā)性胃輕癱和功能性消化不良。35.—種研究包含5-HT4受體的生物系統(tǒng)或樣本的方法，所述方法包含(a)使所述生物系統(tǒng)或樣本與根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的化合物接觸；和(b)測(cè)定由所述化合物引起的對(duì)所述生物系統(tǒng)或樣本的影響。全文摘要本發(fā)明涉及式(I)的苯并咪唑甲酰胺5-HT₄受體激動(dòng)劑化合物，其中R¹和X如本說(shuō)明書中所定義；或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。本發(fā)明還涉及包含所述化合物的醫(yī)藥組合物；使用所述化合物治療與5-HT₄受體活性相關(guān)的疾病的方法；和可用于制備所述化合物的方法和中間物。本發(fā)明另外涉及式(I)化合物的結(jié)晶形式文檔編號(hào)C07D401/00GK101180291SQ200680017691公開日2008年5月14日申請(qǐng)日期2006年5月24日優(yōu)先權(quán)日2005年5月25日發(fā)明者丹尼爾·D·朗,丹尼爾·馬凱斯,保羅·R·法瑟雷,克里斯滕·M·費(fèi)扎克利,嵐姜,崔錫基,羅伯特·默里·麥金內(nèi)爾,羅蘭·根德龍,肖恩·M·達(dá)爾齊爾申請(qǐng)人:施萬(wàn)制藥