專利名稱：2-芳基丙酸衍生物的代謝產(chǎn)物及包含它們的藥物組合物的制作方法
發(fā)明概述 本發(fā)明涉及新穎的2-(R)-芳基丙酸衍生物的活性代謝產(chǎn)物以及包含它們的藥物組合物，它們可用作多形核與單核細(xì)胞趨化性的抑制劑，尤其可用于治療中性粒細(xì)胞依賴性疾病。

背景技術(shù)：
特定血細(xì)胞(巨噬細(xì)胞，粒細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，多形核細(xì)胞)對化學(xué)刺激物的應(yīng)答反應(yīng)(受稱為趨化因子的物質(zhì)刺激時)是沿著刺激物的濃度梯度方向移行，此過程稱為趨化。目前已知的主要刺激因子或趨化因子的代表是補(bǔ)體C5a的分解產(chǎn)物，細(xì)菌表面溶解或合成來源的肽所產(chǎn)生的某些N-甲?；?，例如甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(f-MLP)，主要是各種細(xì)胞因子，包括白細(xì)胞介素-8(IL-8，也稱為CXCLB)。白介素-8是一種內(nèi)源性趨化因子，它由大多數(shù)有核細(xì)胞，比如成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。
在某些病理學(xué)狀況下，中性粒細(xì)胞的不良募集標(biāo)志著中性粒細(xì)胞浸潤的相關(guān)部位發(fā)生了更嚴(yán)重的組織損傷。近年來，中性粒細(xì)胞活化在決定局部缺血后再灌注和肺部高含氧量相關(guān)損傷中的作用已被廣泛得到證明。
IL-8的生物學(xué)活性是通過白介素與屬于七大跨膜受體家族的CXCR1和CXCR2膜受體相互作用而介導(dǎo)的，這些受體表達(dá)在人中性粒細(xì)胞和某些類型T細(xì)胞的表面上(L.Xu等人，J.Leukocyte Biol.，57，335，1995)。已知可以區(qū)分CXCR1與CXCR2的選擇性配體是GRO-α，它是CXCR2選擇性趨化因子的一個例子。
IL-8通過CXCR2受體途徑在肺部疾病(肺損傷、急性呼吸窘迫綜合征、哮喘、慢性肺炎和囊性纖維化)、特別在COPD(慢性阻塞性肺病)發(fā)病機(jī)制中有潛在致病作用已有廣泛描述(D.WP Hay和H.M.Sarau.，Current Opinion inPharmacology2001，1∶242-247)。
補(bǔ)體系統(tǒng)對免疫和感染事件的應(yīng)答是通過直接膜作用與通過釋放一系列由補(bǔ)體片段C3、C4和C5經(jīng)酶裂解產(chǎn)生的肽片段(通稱為過敏毒素)，來活化補(bǔ)體系統(tǒng)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的放大。這些肽包括由77個氨基酸組成的C3a、C4a；而C5轉(zhuǎn)化酶使C5補(bǔ)體片段裂解，生成74個氨基酸的糖蛋白C5a。
補(bǔ)體的C5a肽片段被定義為“完全”促炎介質(zhì)。相反，其它炎癥介質(zhì)如選定的細(xì)胞因子(例如IL-8、MCP-1和RNATES)對自身可被吸引細(xì)胞(self-attracted cell)具有高度選擇性，而其他如組胺和緩激肽只是很弱的趨化劑。
有一些令人信服的證據(jù)支持?jǐn)?shù)種病理狀況在體內(nèi)涉及C5a，這些病理狀況包括缺血/再灌注、自身免疫性皮炎、膜增生性自發(fā)性腎小球腎炎、氣道不反應(yīng)性(airway irresponsiveness)、慢性炎癥性疾病、ARDS和COPD、阿爾茨海默病、幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(N.P.Gerard，Ann.Rev.Immunol.，12，755，1994)。
考慮到由局部補(bǔ)體的產(chǎn)生和淀粉樣蛋白活化，加上星形細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞趨化以及C5a直接誘導(dǎo)的活化可能引起的C5a/C5a-desArg神經(jīng)炎，有人提出用補(bǔ)體抑制劑治療神經(jīng)疾病，如阿爾茨海默病(McGeer & McGeer P.L.，Drugs，55，738，1998)。
因此，控制補(bǔ)體片段的合成被認(rèn)為對于治療休克和預(yù)防器官移植排斥(多種器官衰竭和超急性移植排斥)有很好的治療前景(Issekutz A.C.等人，Int.J.Immunopharmacol，12，1，1990；Inagi R.等人，Immunol.Lett.，27，49，1991)。最近據(jù)報導(dǎo)，補(bǔ)體片段抑制與預(yù)防原發(fā)性和移植腎損傷有關(guān)，這是考慮到慢性間質(zhì)性和急性腎小球性腎損傷與補(bǔ)體有關(guān)(Sheerin N.S.&Sacks S.H.，Curr.OpinionNephrol.Hypert.，7，395，1998)。
在急性和慢性病理狀況下，例如銀屑病皮損的嚴(yán)重發(fā)炎和難治部位，可觀察到中性粒細(xì)胞的特征性積聚。受到刺激的角化細(xì)胞釋放出來的趨化因子、IL-8和Gro-a以及通過另一條補(bǔ)體途徑途徑活化而產(chǎn)生的片段C5a/C5a-desArg的協(xié)同作用都可以使中性粒細(xì)胞趨化吸引和活化(T.Terui等，Exp.Dermatol.，9，1，2000)。因此，在許多情況下，非常需要在一種單一藥物中將C5a刺激的細(xì)胞活化、細(xì)胞因子受體的調(diào)控和趨化性的抑制偶聯(lián)起來。
我們最近描述了新型的“r-2-芳基-丙酸的ω-氨基烷基酰胺”作為多形核細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化性的抑制劑(WO02/068377)。這新一類化合物的范圍包括從選擇性C5a抑制劑到C5a/IL-8雙重抑制劑。
而且，這類新穎的IL-8生物活性強(qiáng)效和選擇性的抑制劑(R-2-芳基丙酸酰胺和N-酰基磺酰胺)已經(jīng)被描述成為是IL-8誘導(dǎo)的嗜中性白細(xì)胞趨化和脫粒的有效抑制劑(WO01/58852；WO00/24710)。
發(fā)明詳述 我們發(fā)現(xiàn)一類新的2-(R)-芳基丙酸衍生物，可作為多形核及單核細(xì)胞趨化性的抑制劑。具體地說，本發(fā)明的化合物是IL-8誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞趨化性和C5a誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化性的強(qiáng)效抑制劑，具有改善的藥物動力學(xué)特性和藥理學(xué)活性譜。
因此，本發(fā)明提供式(I)所示的2-(R)-芳基丙酸衍生物化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
其中 X選自H、鹵素、C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基 R基團(tuán)選自 -H、OH、C1-C5-烷基、C1-C5-環(huán)烷基、C1-C5-烯基、C1-C5-烷氧基； -選自吡啶、嘧啶、吡咯、噻吩、呋喃、吲哚的雜芳基； -由直鏈或支鏈C1-C6-烷基、C1-C6-環(huán)烷基、C1-C6-烯基、C1-C6-苯基烷基組成的被另一個羧基(COOH)任選取代的氨基酸殘基； -式-CH2-CH2-Z-(CH2-CH2O)nR’所示殘基，其中R’是氫或C1-C5-烷基，n是0-2的整數(shù)并且Z是氧或硫； -式-(CH2)n-NRaRb所示殘基，其中n是0-5的整數(shù)，并且各Ra和Rb可以相同或不同地為C1-C6-烷基、C1-C6-烯基，或者Ra和Rb和與它們相連接的氮原子一起形成式(II)所示3-7元雜環(huán)
其中W代表一單鍵、O、S、N-Rc，Rc是H、C1-C6-烷基或C1-C6-烷基苯基，n是0-4的整數(shù)； -式SO2Rd所示殘基，其中Rd是C1-C6-烷基、C1-C6-環(huán)烷基、C1-C6-烯基。
式(I)化合物是手性化合物，本發(fā)明提供(2R，2”R，S)混合物和(2R，2”S)、(2R，2’R)單一對映體。
本發(fā)明進(jìn)一步提供式(I)化合物用作藥物。具體地說，這些藥物是多形核及單核細(xì)胞趨化性的抑制劑。
式(III)化合物，其中R和X如上定義，之前在WO01/58852、WO00/24710和WO02/068377中被描述為多形核及單核細(xì)胞趨化性的特別優(yōu)選的抑制劑。

“體內(nèi)”給予式(III)化合物有助于說明藥物的代謝過程。細(xì)胞色素介導(dǎo)的異丁基基團(tuán)的氧化在鏈的1、2和3位生成三羥基化異構(gòu)體；C-末端位置的徹底氧化導(dǎo)致式(I)化合物的生成。
所有已檢出的代謝產(chǎn)物已在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模被獨(dú)立地合成出來并在趨化試驗(yàn)中進(jìn)行測試。
上述代謝產(chǎn)物中，我們發(fā)現(xiàn)只有式I的化合物具有抑制多形核及單核細(xì)胞趨化性的活性。
這個發(fā)現(xiàn)與2-(4-異丁基苯基)丙酸(布洛芬)的相應(yīng)代謝產(chǎn)物缺乏生物活性形成對照，事實(shí)上，2-(4-異丁基苯基)丙酸(布洛芬)的相應(yīng)代謝產(chǎn)物被報導(dǎo)為沒有任何抗炎活性(“Ibuprofen.A critical bibliographic review”KD Rainsford編輯，Sheffield Hallam University1999，pag.42)，(American Society of Health-SystemPharmacists，AHFS Drug Information2001，pag.1918)。
與式(III)化合物相比，式(I)化合物表現(xiàn)出顯著的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明化合物抑制IL-8和/或C5a誘導(dǎo)的PMN趨化，其IC50與優(yōu)選的式(III)化合物的IC50相當(dāng)，但意外地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物是比式(III)化合物更強(qiáng)效的抑制GRO-α誘導(dǎo)的PMN趨化的抑制劑，因此顯示其對CXCR2所介導(dǎo)途徑的特異性作用。
而且，式(I)化合物的藥物動力學(xué)性質(zhì)特別有利于治療使用。實(shí)際上，與式(III)化合物相比，本發(fā)明化合物通過i.v.途徑“體內(nèi)”給藥，表現(xiàn)出更長的T1/2，與之相關(guān)的是清除時間的縮短。
這些特征與較低的血漿蛋白結(jié)合有關(guān)，使這些藥物在整體上具有更好的藥理學(xué)性質(zhì)。
優(yōu)選的X基團(tuán)是H； 優(yōu)選的R基團(tuán)是 H、OH、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、C1-C2-羧基烷基； 吡啶、嘧啶； 式-CH2-CH2-O-(CH2-CH2O)nR’所示殘基，其中R’是H或C1-C5-烷基，n是0或1的整數(shù)； 式-(CH2)n-NRaRb所示殘基，其中n是2或3的整數(shù)，更優(yōu)選3，并且NRaRb基團(tuán)是N，N-二甲基胺、N，N-二乙基胺、1-哌啶基、4-嗎啉基、1-吡咯烷基、1-哌嗪基、1-(4-甲基)哌嗪基； 式SO2Rd所示殘基，其中Rd是C1-C2-烷基。
優(yōu)選的式(I)化合物是其單一的(R)對映體和(S)對映體。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０? (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰胺 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(4”’-吡啶基)丙酰胺 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-羧基甲基)丙酰胺 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-甲氧基乙基)丙酰胺 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3”-N’-哌啶子基丙基]丙酰胺 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3”’-N’，N’-二甲基氨基丙基]丙酰胺及它們的(R)單一對映體和(S)單一對映體。
本發(fā)明化合物是IL-8誘導(dǎo)的人PMNs趨化性的強(qiáng)效選擇性抑制劑。當(dāng)R是式-(CH2)n-NRaRb所示殘基時，本發(fā)明化合物是C5a誘導(dǎo)的和IL-8誘導(dǎo)的PMNs趨化性的雙效抑制劑。
通常，分離得到的本發(fā)明式(I)化合物是其與藥學(xué)上可接受的有機(jī)和無機(jī)酸或堿的加成鹽形式。
所述的酸的例子選自鹽酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、富馬酸、檸檬酸。
所述堿的例子有氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、(D，L)-賴氨酸、L-賴氨酸、氨基丁三醇。
式(I)化合物是這樣獲得的在合適的催化劑(例如鈀)存在下，用2-甲基丙烯酸對相應(yīng)的式(IV)所示2-(4’-芳基)丙酰胺衍生物進(jìn)行處理，其中W是Br或OSO2CF3，得到對偶的式(V)和(VI)所示化合物。


然后在合適的催化劑(例如Pd/C)存在下，將式(V)和(VI)的混合物氫化，得到本發(fā)明的式(I)化合物。
根據(jù)另一條新的合成路線，從式(I)中R是SO2Rd的?；谆酋０费苌镩_始，用兩當(dāng)量合適的式NH2R胺處理所述衍生物，所獲得的鹽在約100-140℃，優(yōu)選真空條件下，簡單加熱即可獲得式(I)化合物，其中R如前所述，但不是OH或C1-C5-烷氧基或SO2Rd殘基。
“體外”評估通式(1)化合物抑制由IL-8、GRO-α和補(bǔ)體C5a誘導(dǎo)的多形核白細(xì)胞(下文用PMNs表示)和單核細(xì)胞趨化性的能力，并直接與相應(yīng)的式(III)所示4-異丁基母體化合物進(jìn)行比較。為此，從健康成年志愿者獲得的肝素化血液中分離多形核白細(xì)胞，通過葡萄糖沉降分出單核細(xì)胞(按照W.J.Ming等人公開的方法，J.Immunol.，138，1469，1987)，通過低滲溶液處理分出紅血細(xì)胞。以臺盼藍(lán)(Trypan blue)染色排除法計算細(xì)胞活度，DiffQuinck染色后細(xì)胞離心，用細(xì)胞離心沉淀物估算循環(huán)多形核白細(xì)胞的比例。
IL-8誘導(dǎo)的趨化試驗(yàn)中，趨化試驗(yàn)采用人重組IL-8(Pepro Tech)作為刺激劑將凍干的蛋白溶解于一定體積含有0.2％牛血清白蛋白(BSA)的HBSS中，配成濃度10-5M的儲備液，以HBSS稀釋至濃度10-9M，用于趨化試驗(yàn)。
采用類似的試驗(yàn)評估對GRO-α誘導(dǎo)趨化的抑制。
在C5a誘導(dǎo)的趨化試驗(yàn)中，趨化試驗(yàn)采用人重組C5a和C5a-desArg(Sigma)作為趨化實(shí)驗(yàn)刺激劑，得到實(shí)際同樣的結(jié)果。將凍干C5a溶解于一定體積含有0.2％BSA的HBSS中，配成濃度10-5M的儲備液，以HBSS稀釋至濃度10-9M，用于趨化試驗(yàn)。
在趨化試驗(yàn)中，將多形核白細(xì)胞與本發(fā)明的式(I)化合物于37℃在含5％CO2的氛圍中培養(yǎng)15分鐘。
以每毫升1.5×106PMNs的濃度將人循環(huán)多形核細(xì)胞(PMNs)懸浮于HBSS中，以該懸浮液測定C5a的趨化活性。
趨化試驗(yàn)(按照W.Falket等人，J.Immunol.Methods，33，239，1980)采用孔隙度為5μm的不含PVP濾膜和適合復(fù)制的微室(microchamber)。
本發(fā)明的通式(I)化合物的評估濃度范圍在10-6和10-10M之間；為此，在微室下層孔和上層孔加入相同濃度的本發(fā)明式(I)化合物。按照Van Damme J.等人公開的方法(Eur.J.Immunol.，19，2367，1989)，評估本發(fā)明的式(I)化合物抑制人單核細(xì)胞趨化性的能力。
例如，實(shí)施例1化合物，(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０?，顯示出對IL-8誘導(dǎo)的PMN遷移的抑制，在濃度10-8M時的抑制率為49±9％，在濃度10-6M時為66±8％。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是 (2R)(2”S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰基甲磺酰胺 (2R)(2”R)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０? (2R)(2”R)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3”’-N’-哌啶基丙基]丙酰胺 (2R)(2”S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3”’-N’-哌啶基丙基]丙酰胺. 和式(III)所示2-(4-異丁基苯基)丙酰胺相比，本發(fā)明化合物另具有效抑制GROα誘導(dǎo)的PMN趨化的特性；此活性使這些化合物可用于治療特別涉及CXCR2途徑或者與CXCR1信號傳遞相聯(lián)的IL-8相關(guān)性疾病。
就感興趣的治療應(yīng)用而言，特別優(yōu)選IL-8和GRO-α所誘導(dǎo)生物活性的雙重抑制劑。
根據(jù)完全按照Patrignani等人在J.Pharmacol.Exper.Ther.，271，1705，1994中所公開的步驟進(jìn)行的體外血中測評，本發(fā)明的式(I)化合物不是環(huán)氧化酶(COX)的有效抑制劑。
多數(shù)情況下，式(I)化合物在10-5至10-7M濃度范圍內(nèi)不干擾小鼠巨噬細(xì)胞中脂多糖刺激(LPS，1μg/mL)誘導(dǎo)的PGE2產(chǎn)生?？赡苡蠵GE2生產(chǎn)抑制的記錄，但通常界于統(tǒng)計學(xué)顯著性臨界值，更多情況下，在基數(shù)值的15-20％以下。抑制CO的效率降低對本發(fā)明化合物的治療應(yīng)用來說是一個優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)橐种魄傲邢偎睾铣煽纱碳ぞ奘杉?xì)胞增強(qiáng)TNF-α合成(由LPS或過氧化氫誘導(dǎo)的)，TNF-α是中性粒細(xì)胞活化的重要介質(zhì)，也是細(xì)胞因子IL-8產(chǎn)生的重要刺激物。
如上文詳述，CXCR1和CXCR2活化的抑制劑被發(fā)現(xiàn)可用于特別是慢性炎癥疾病(如銀屑病)的治療，其中IL-8兩種受體的活化被認(rèn)為在疾病發(fā)展上起著重要的病理生理作用。
事實(shí)上，已知CXCR1的活化是IL-8介導(dǎo)的PMN趨化性所必須的(HammondM等，J Immunol，155，1428，1995)。另一方面，CXCR2的活化被認(rèn)為是IL-8介導(dǎo)銀屑病患者表皮細(xì)胞增殖和血管生成所必須的(Kulke R等，J Invest Dermatol，110，90，1998)。
此外，CXCR2拮抗劑特別適用于治療重要肺部疾病，例如慢性阻塞性肺病COPD(D.WP Hay and H.M.Sarau.，Current Opinion in Pharmacology 2001，1∶242-247)。
鑒于上面討論的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和白介素-8(IL-8)及其同源物在涉及中性粒細(xì)胞激活和浸潤過程中的作用，本發(fā)明的化合物特別適用于治療某些疾病，例如銀屑病(R.J.Nicholoff等，Am.J.Pathol.，138，129，1991)、慢性腸道炎癥性病理如潰瘍性結(jié)腸炎(Y.R.Mahida等，Clin.Sci.，82，273，1992)和黑色素瘤、慢性阻塞性肺病(COPD)、大皰性天皰瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(M.Selz等，J.Clin.Invest.，87，463，1981)、特發(fā)性纖維化(前面引用的E.J.Millerand和P.C.Carré等，J.Clin.Invest.，88，1882，1991)、腎小球腎炎(T.Wada等，J.Exp.Med.，180，1135，1994)，以及預(yù)防和治療局部缺血和再灌注引起的損傷。
因此本發(fā)明的另一個目的是提供用于治療銀屑病、潰瘍性結(jié)腸炎、黑色素瘤、血管生成、慢性阻塞性肺病(COPD)、大皰性天皰瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性纖維化、腎小球腎炎及預(yù)防和治療由局部缺血和再灌注所致?lián)p傷的化合物，以及所述化合物在制備治療上述疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明化合物腎清除率降低對于治療諸如銀屑病和潰瘍性結(jié)腸炎等慢性病理性疾病是至關(guān)重要的，由此，在每日給藥次數(shù)減少，甚至減至每日一次的最適情況下，治療仍然有效。而且，藥物與血漿蛋白(主要是白蛋白)結(jié)合的減少關(guān)系到有效劑量的降低。
例如，表I和表II顯示式(I)代謝產(chǎn)物和相應(yīng)的式(III)親本化合物之間在T1/2和蛋白結(jié)合(％)方面的顯著區(qū)別。
表I
*大鼠單次推注i.v.給藥(15mg/Kg)后。
**大鼠血漿蛋白體外結(jié)合(化合物濃度10μg/mL)。
表II
*大鼠單次推注i.v.給藥(15mg/Kg)后。
**大鼠血漿蛋白體外結(jié)合(化合物濃度10μg/mL)。
包含本發(fā)明化合物及其合適載體的藥物組合物也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物可與常規(guī)使用的佐劑、載體、稀釋劑或賦形劑一起構(gòu)成藥物組合物及其單位劑量的形式，其劑型可以是口服用的固體(如片劑或填充膠囊)或者液體(如溶液、懸浮液、乳濁液，酏劑或裝有所述液體的膠囊)，或是供腸胃道外(包括皮下)應(yīng)用的無菌注射溶液。這些藥物組合物及其單位劑型可包含配制成常規(guī)比例的諸成分，包括或不包括其它活性化合物或要素物質(zhì)，所述單位劑型可包含與預(yù)期日劑量相適應(yīng)的各種合適的活性成分有效量。
當(dāng)用作藥物時，本發(fā)明的化合物通常以藥物組合物的形式給藥。所述藥物組合物可用制藥行業(yè)熟知的方法制備，包含至少一種活性化合物。通常，本發(fā)明化合物以藥學(xué)有效量給藥。實(shí)際給予的化合物的量一般根據(jù)相關(guān)的情況決定，包括要治療的疾病、選擇的給藥途徑、實(shí)際給予的化合物、每個病人的年齡、體重和反應(yīng)、病人癥狀的嚴(yán)重程度等等。
本發(fā)明的藥物組合物可通過多種途徑給予，包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和鼻內(nèi)給予。較好的是，根據(jù)預(yù)期的給藥途徑將化合物配制成可注射組合物或者口服組合物?？诜o藥的組合物可采用整裝溶液或懸浮液的形式，或整裝粉劑的形式。但是更為通常的是提供單位劑型的組合物以利于精確給藥。術(shù)語“單位劑型”指物理上分離的多個單位，適合各自作為單獨(dú)劑量為人或其它哺乳動物所用，每單位含有計算好了能產(chǎn)生所需治療效果的預(yù)定量的活性物質(zhì)以及合適的藥物賦形劑。典型的單位劑型包括液體組合物的預(yù)充填、預(yù)計量的安瓿瓶或注射器，或固體組合物的丸劑、片劑、膠囊等。在這樣的組合物中，酸化合物通常是小量組分(約0.1-50％重量或優(yōu)選約1-40％重量)，其余的是有助于形成所需劑型的各種賦形劑或載體以及加工助劑。
適合于口服的液體形式可包括合適的水性或非水性載體，含有緩沖劑、懸浮和分散劑、著色劑、調(diào)味劑等。液體形式，包括下述可注射的組合物，通常應(yīng)避光保存，以避免各種光催化效應(yīng)，如氫過氧化物和過氧化物的生成。固體形式可包括例如以下各種成分或類似性質(zhì)的化合物粘合劑，如微晶纖維素、黃芪膠或明膠；賦形劑，如淀粉或乳糖，崩解劑(如海藻酸、Primogel，或玉米淀粉)；潤滑劑，如硬脂酸鎂；助流劑，如膠體二氧化硅；甜味劑，如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑，如薄荷、水楊酸甲酯或橙味劑。
可注射組合物通常以無菌可注射鹽水或磷酸鹽緩沖液或本領(lǐng)域已知的其它注射用載體來配制。如上所述，此類組合物中，式(I)酸衍生物通常是小量成分，通常為0.05-10％重量，其余為注射用載體等。每日平均劑量取決于多種因素，如疾病的嚴(yán)重性和病人的情況(年齡、性別和體重)。每日劑量一般為1mg或幾毫克至多達(dá)1500mg的式(I)化合物，可將該日劑量分成多次給藥。也可以更高劑量給藥，這得益于本發(fā)明化合物長期毒性低。
上述用于口服給藥或可注射組合物的組分只是代表性的。更多材料包括加工技術(shù)等在“Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook”(第18版，1990，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania)的第八部分有闡述，本說明書引述其內(nèi)容作為參考。
本發(fā)明化合物也可以緩釋形式給藥或由緩釋藥物輸送系統(tǒng)給藥。代表性的持續(xù)釋放材料的敘述也可見上述Remington′s Handbook。
下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實(shí)施例不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。
縮寫THF四氫呋喃；DMF二甲基甲酰胺AcOEt乙酸乙酯。
實(shí)施例 實(shí)施例1 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０? 將(R)2-(4-溴苯基)丙酸(1g，4，4mmol)溶解于無水CH2Cl2(10mL)中。加入二甲基氨基吡啶(0，45g，4，8mmol)、甲磺酰胺(0，46g，4，8mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺(0，99g4.8mmol)，反應(yīng)混合物攪拌4小時。溶液倒入1N HCl(10mL)中，分離有機(jī)相；水相用二氯甲烷萃取(2×10mL)。合并后的有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥。濾除Na2SO4后真空除去溶劑得油狀殘留物，再經(jīng)過硅膠柱純化，獲得純的固體(R)2-(4-溴-苯基)丙酰基甲磺酰胺，產(chǎn)率70％。將(R)2-(4-溴-苯基)丙?；谆酋０啡芙庥谌』?2.4mL)中，加入三苯基膦。5分鐘后再加入2-甲基-丙烯酸(0.54g，6.64mmol)和Pd(OAc)2(8mg，0，033mmol)，反應(yīng)混合物于T＝130℃加熱6小時。冷卻后，將有機(jī)溶液倒入1N HCl中，水相用EtOAc萃取(3×15mL)。合并后的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥并減壓蒸干，得油狀殘留物，經(jīng)色譜純化后獲得式(V)和(VI)所示兩種對應(yīng)的異構(gòu)不飽和酸的混合物，產(chǎn)率30％。
將兩種異構(gòu)體的混合物溶解于無水MeOH中，加入催化量的Pd/C10％(50mg)。混合物于室溫氫化過夜。經(jīng)硅藻土層(Celite)過濾除去催化劑后，將濾液蒸干，殘留物經(jīng)色譜柱純化獲得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０?，產(chǎn)率90％，呈白色固體。
1H-NMR(DMSO)δ11.95(bs，1H，COOH)；11.65(bs，1H，SO2NHCO)；7.18(m，4H)；3.70(q，1H，J＝7Hz)；3.18(s，3H)；2.85(m，1H)；2.58(m，2H)；1.32(d，3H，J＝7Hz)；1.02(d，3H，J＝7Hz)。
[α]D＝-12.1(c＝1％，MeOH) 非對映異構(gòu)混合物(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０?10mg)經(jīng)半制備HPLC色譜純化，采用Bondapak C1812515-20μm(7.8×300mm)柱(pH＝4.5磷酸鹽緩沖液/CH3CN90∶10至60∶40梯度，運(yùn)行時間＝50min.)獲得呈無色油狀物的實(shí)施例1a化合物(2mg)和實(shí)施例1b化合物(3mg)。
實(shí)施例1a (2R)(2”R)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０? 1H-NMR(DMSO)δ11.95(bs，1H，COOH)；11.65(bs，1H，SO2NHCO)；7.18(m，4H)；3.70(q，1H，J＝7Hz)；3.18(s，3H)；2.85(m，1H)；2.58(d，2H，J＝7Hz)；1.32(d，3H，J＝7Hz)；1.02(d，3H，J＝7Hz)。
實(shí)施例1b (2R)(2”S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰基甲磺酰胺 1H-NMR(DMSO)δ11.95(bs，1H，COOH)；11.65(bs，1H，SO2NHCO)；7.18(m，4H)；3.70(q，1H，J＝7Hz)；3.18(s，3H)；2.85(m，1H)；2.60(d，2H，J＝7Hz)；1.32(d，3H，J＝7Hz)；1.02(d，3H，J＝7Hz)。
實(shí)施例2 (2R)(2”RS)2-[4’-(2”-羧墓丙-1-基)苯基]丙酰胺 將(R)2-(4-溴苯基)丙酸(1g，4，4mmol)溶解于無水CH2Cl2(10mL)中。加入二甲基氨基吡啶(0，45g，4，8mmol)和二環(huán)己基碳二亞胺(0，99g4.8mmol)，向反應(yīng)混合物中通氨氣鼓泡4小時。溶液倒入1N HCl(10mL)中，分離有機(jī)相；水相用二氯甲烷萃取(2×10mL)。合并后的有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥。濾除Na2SO4后真空除去溶劑，得油狀殘留物，再經(jīng)過硅膠柱純化，獲得純的固體(R)2-(4-溴-苯基)丙酰胺，產(chǎn)率70％。
按照實(shí)施例1中描述的步驟，將(R)2-(4-溴-苯基)丙酰胺(0.70g，3.1mmol)和2-甲基-丙烯酸反應(yīng)，獲得式(V)和(VI)所示兩種對應(yīng)的異構(gòu)不飽和酸的混合物，產(chǎn)率30％。
混合物于室溫氫化過夜。經(jīng)硅藻土層過濾除去催化劑后，將濾液蒸干，殘留物經(jīng)色譜柱純化，獲得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰胺，產(chǎn)率90％，呈白色固體。
1H-NMR(CDCl3)δ11.90(bs，1H，COOH)；7.20(d，2H，J＝7Hz)；7.10(d，2H，J＝7Hz)；5.25(bs，2H，CONH2)；3.58(q，1H，J＝7Hz)；2.70(m，1H)；2.42(m，2H)；1.18(d，3H，J＝7Hz)；0.86(d，3H，J＝7Hz)。
[α]D＝-26.1(c＝1％，MeOH)。
實(shí)施例3 (2R)(2”RS)-[(4’-(2”-羧基丙基)苯基]-N-[3”-N’，N’-一甲基氨基丙基]丙酰胺 將(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０?0.59g，1.8mmol)溶解于CH2Cl2中；隨后加入3-N，N-二甲基氨基丙胺(0.37g，3，6mmol)，溶液于室溫下攪拌15分鐘。將溶劑蒸干，固體殘留物真空條件下于T＝120℃加熱過夜。油狀殘留物冷卻，溶解于水中，向混合物中加入強(qiáng)堿性Amberlite樹脂。除去水溶液后，用0.1N HCl洗滌樹脂以回收所需要的產(chǎn)物。酸性溶液凍干后獲得(2R)-[(4’-(2”-羧基丙基)苯基]-N-[3”-N’，N’-二甲基氨基丙基]丙酰胺(0.35g，1.0mmol，產(chǎn)率＝55％)。
1H-NMR(CDCl3)δ11.85(bs，1H，COOH)；7.10(s，4H)；6.00(bs，1H，CONH)；(3.75(q，1H，J＝7Hz)；3.30(m，2H)；2.75(m，1H)；2.50(m，2H)；2.20(m，8H)；1.85(m，2H)；1.38(d，3H，J＝7Hz)；0.90(d，3H，J＝7Hz)。
[α]D＝-24.4(c＝0.5％，MeOH)。
實(shí)施例4 (2R)(2”R，S)-[(4’-(2”-羧基丙基)苯基]-N-[3”-N’-哌啶子基丙基]丙酰胺 按照實(shí)施例3中描述的步驟，采用3-N-哌啶子基丙胺(0.5g，3.6mmol)，制得(2R)-[(4’-(2”-羧基丙基)苯基))-N-[3”-N’-哌啶子基丙基]丙酰胺(0.3g，0.83mmol，產(chǎn)率＝46％)。
1H-NMR(DMSO)δ11.95(bs，1H，COOH)；7.25(d，2H，J＝7Hz)；7.12(d，2H，J＝7Hz)；5.85(bs，1H，CONH)；3.58(q，1H，J＝7Hz)；3.08(m，3H)；2.60(m，6H)；2.57(m，2H)；1.55(m，6H)；1.50(m，2H)；1.30(d，3H，J＝7Hz)；1.02(d，3HJ＝7Hz)。
[α]D＝-30.4(c＝0.5％，EtOH)。
實(shí)施例5 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(4”’-吡啶基)丙酰胺 按照實(shí)施例3中描述的步驟，采用4-氨基吡啶(0.34g，3.6mmol)，制得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(4”’-吡啶基)丙酰胺(0.38g，1.2mmol，產(chǎn)率＝67％)。
1H-NMR(CDCl3)δ11.95(bs，1H，COOH)；8.45(m，2H)；7.45(m，4H)；7.25(m，2H)；3.75(q，1H，J＝7Hz)；3.68(bs，1H，CONH)；2.75(m，1H)；2.50(d，2H，J＝7Hz)；1.60(d，3H，J＝7Hz)；1.00(d，3H J＝7Hz)。
[α]D＝-14.4(c＝0.5％，MeOH)。
實(shí)施例6 (2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-甲氧基乙基)丙酰胺 將(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙?；谆酋０?0.59g，1.8mmol)溶解于CH2Cl2中；隨后加入2-甲氧基乙胺(0.27g，3，6mmol)，溶液于室溫下攪拌15分鐘。蒸干溶劑，固體殘留物真空條件下于T＝120℃加熱過夜。將油狀殘留物冷卻，溶解于CH2Cl2(20mL)中，鹽水洗滌(2×10mL)。有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥。濾除Na2SO4后真空除去溶劑，得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-甲氧基乙基)丙酰胺，呈油狀殘留物(0.37g，1.26mmol，產(chǎn)率＝70％)。
1H-NMR(CDCl3)δ11.90(bs，1H，COOH)；7.18(d，2H，J＝7Hz)；7.08(d，2H，J＝7Hz)；5.85(bs，1H，CONH)；3.60(q，1H，J＝7Hz)；3.45(m，4H)；3.30(s，3H)；2.70(m，1H)；2.45(d，2H，J＝7Hz)；1.52(d，3H J＝7Hz)；0.90(d，3H，J＝7Hz)。
[α]D＝-32.4(c＝0.5％，EtOH)。
實(shí)施例7 (2R)(2”R，S)-2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-羧基甲基)丙酰胺 按照實(shí)施例6中描述的同樣步驟，采用氨基乙酸甲酯(0.32g，3.6mmol)，獲得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-羧基甲基)丙酰胺甲基酯，為油狀殘留物(0.30g，0.97mmol，產(chǎn)率＝54％)。隨后將2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-羧基甲基)丙酰胺甲基酯溶解于二噁烷(7mL)中，加入1NNaOH(1mL)。溶液于室溫下攪拌過夜。
蒸除二噁烷，水溶液用5％NaH2PO4緩沖液(10mL)稀釋。水相用CH2Cl2萃取(3×20mL)，合并后的有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥。濾除Na2SO4后真空除去溶劑，得(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2”’-羧基甲基)丙酰胺，呈油狀殘留物(0.23g，0.78mmol，產(chǎn)率＝85％)。
1H-NMR(CDCl3)δ11.85(bs，2H，COOH)；7.20(d，2H，J＝7Hz)；7.10(d，2H，J＝7Hz)；5.95(bs，1H，CONH)；4.00(m，2H)；3.60(q，1H，J＝7Hz)；2.75(m，1H)；2.50(m，2H)；1.50(d，3H J＝7Hz)；0.85(d，3H，J＝7Hz)。
[α]D＝-24.0(c＝0.5％，EtOH)。
表III報告了實(shí)施例1-7化合物的化學(xué)命名和結(jié)構(gòu)式。
表III

權(quán)利要求
1.式(I)所示的2-(R)-芳基丙酸衍生物化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽
其中
X選自H、鹵素、C1-C4-烷基、C1-C4-烷氧基、羥基、氰基、硝基、氨基
R基團(tuán)選自
-H、OH、C1-C5-烷基、C1-C5-環(huán)烷基、C1-C5-烯基、C1-C5-烷氧基；
-選自吡啶、嘧啶、吡咯、噻吩、呋喃、吲哚的雜芳基；
-由直鏈或支鏈C1-C6-烷基、C1-C6-環(huán)烷基、C1-C6-烯基、C1-C6-苯基烷基組成的被另一個羧基(COOH)任選取代的氨基酸殘基；
-式-CH2-CH2-Z-(CH2-CH2O)nR’所示殘基，其中R’是氫或C1-C5-烷基，n是0-2的整數(shù)并且Z是氧或硫；
-式-(CH2)n-NRaRb所示殘基，其中n是0-5的整數(shù)，并且各Ra和Rb可以相同或不同地為C1-C6-烷基、C1-C6-烯基，或者Ra和Rb和與它們相連接的氮原子一起形成式(II)所示3-7元雜環(huán)
其中W代表一單鍵、O、S、N-Rc，Rc是H、C1-C6-烷基或C1-C6-烷基苯基，n是0-4的整數(shù)；
-式SO2Rd所示殘基，其中Rd是C1-C6-烷基、C1-C6-環(huán)烷基、C1-C6-烯基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物及其(R)單一對映體和(S)單一對映體
其中
X基團(tuán)為H；
R基團(tuán)為選自
-H、OH、C1-C5-烷基、C1-C5-烷氧基、C1-C2-羧基烷基；
-吡啶、嘧啶；
-式-CH2-CH2-O-(CH2-CH2O)nR’所示殘基，其中R’是氫或C1-C5-烷基，n是整數(shù)0或1；
-式-(CH2)n-NRaRb所示殘基，其中n是整數(shù)2或3，更佳為3，并且NraRb基團(tuán)為N，N-二甲基胺、N，N-二乙基胺、1-哌啶基、4-嗎啉基、1-吡咯烷基、1-哌嗪基、1-(4-甲基)哌嗪基；
-式SO2Rd所示殘基，其中Rd為C1-C2-烷基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，選自
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰基甲磺酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]丙酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(4-吡啶基)丙酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-羧基甲基)丙酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-(2-甲氧基乙基)丙酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3”-N’-哌啶子基丙基]丙酰胺
(2R)(2”R，S)2-[4’-(2”-羧基丙-1-基)苯基]-N-[3-N’，N’-二甲基氨基丙基]丙酰胺
及它們的(R)單一對映體和(S)單一對映體。
4.權(quán)利要求1所述式(I)化合物的制備方法，包括在合適的催化劑存在下，用2-甲基丙烯酸對相應(yīng)的式(IV)所示2-(4’-芳基)丙酰胺衍生物進(jìn)行處理，其中W是Br或OSO2CF3，得到式(V)和(VI)所示產(chǎn)物的混合物，
然后在合適的催化劑進(jìn)行氫化。
5.權(quán)利要求1所述式(I)化合物的制備方法，其中R是如權(quán)利要求1定義的基團(tuán)，但不是OH或C1-C5-烷氧基或SO2Rd殘基，所述方法包括用兩當(dāng)量合適的式NH2R胺處理權(quán)利要求1所述式(I)中R是SO2Rd的酰基甲磺酰胺衍生物，于約100-140℃加熱所得的鹽。
6.用作藥物的權(quán)利要求1所述化合物。
7.如權(quán)利要求6所述的化合物，用于抑制多形核細(xì)胞和單核細(xì)胞的趨化性。
8.權(quán)利要求1所述化合物在制備用于治療銀屑病、潰瘍性結(jié)腸炎、黑色素瘤、慢性阻塞性肺病(COPD)、大皰性天皰瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性纖維化、腎小球腎炎及用于預(yù)防和治療由局部缺血和再灌注所致?lián)p傷的藥物上的應(yīng)用。
9.藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述化合物及其合適的載體。
全文摘要
2-(R)-4-異丁基芳基丙酰胺代謝物及含此類化合物的藥物組合物，可用于抑制白細(xì)胞介素-8(IL-8)與CXCR1和CXCR2膜受體相互作用誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞(PMN白細(xì)胞)和單核細(xì)胞趨化性的激活。本發(fā)明化合物用于預(yù)防和治療因所述趨化性激活而產(chǎn)生的病理學(xué)變化。值得注意的是，這些代謝物無環(huán)氧化酶抑制活性，在治療中性粒細(xì)胞依賴性病理變化如銀屑病、潰瘍性結(jié)腸炎、黑色素瘤、慢性阻塞性肺病(COPD)、大皰性天皰瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、特發(fā)性纖維化、腎小球腎炎及預(yù)防和治療由局部缺血和再灌注所致?lián)p傷上特別有用。
文檔編號C07C233/00GK101146764SQ200680009318
公開日2008年3月19日 申請日期2006年1月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月25日
發(fā)明者R·貝爾蒂尼, C·比薩里, M·莫斯卡, M·阿萊格蒂, F·科洛塔 申請人:冬姆佩制藥股份公司