專(zhuān)利名稱(chēng)：生產(chǎn)具有優(yōu)異處理性質(zhì)的還原型輔酶q的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生產(chǎn)還原型輔酶Q10晶體的方法。與氧化型輔酶Q10相比，還原型輔酶Q10顯示高水平的口服可吸收性，是可用作食品、功能性營(yíng)養(yǎng)食品、特定保健食品、營(yíng)養(yǎng)添加劑、營(yíng)養(yǎng)劑、飲料、飼料、動(dòng)物藥、化妝品、藥品、治療藥、預(yù)防藥等成分的化合物。
背景技術(shù)：
氧化型輔酶Q10是一種廣泛分布在生物界中的苯醌衍生物，由于它的維生素樣功能，也被稱(chēng)為維生素Q，是在恢復(fù)已被削弱的細(xì)胞活性至其健康條件中，以及在使機(jī)體復(fù)原中充當(dāng)營(yíng)養(yǎng)劑的一種成分。另一方面，還原型輔酶Q10是從氧化型輔酶Q10減少兩個(gè)電子衍生而來(lái)，是白色晶體，而氧化型輔酶Q10是橙色晶體。還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10已知位于線粒體、溶酶體、高爾基體、微粒體、過(guò)氧化物酶體和細(xì)胞膜等部位，作為電子傳遞系統(tǒng)的組分，參與ATP的產(chǎn)生與活化、體內(nèi)抗氧化活性和膜的穩(wěn)定化；它們因而是維持機(jī)體功能所不可缺少的物質(zhì)。
已知還原型輔酶Q10可以借助按照常規(guī)方式生產(chǎn)輔酶Q10加以制備，例如合成，發(fā)酵，或者從天然產(chǎn)物中提取，濃縮來(lái)自色譜法的含有還原型輔酶Q10的洗脫部分(JP-平-10-109933-A)。在這種場(chǎng)合下，正如上面引用的出版物所述，可以在利用還原劑、例如硼氫化鈉或連二亞硫酸鈉(sodium dithionite)還原包含在還原型輔酶Q10中的氧化型輔酶Q10之后進(jìn)行色譜濃縮，或者可以使上述還原劑與現(xiàn)有的高純級(jí)輔酶Q10(氧化形式)反應(yīng)，來(lái)制備還原型輔酶Q10。
不過(guò)，如此得到的還原型輔酶Q10不能總是順利地結(jié)晶而沒(méi)有什么麻煩，而是趨于以低純度結(jié)晶性、半固體或油性產(chǎn)物存在，含有氧化型輔酶Q10等雜質(zhì)。而且，即使多少實(shí)現(xiàn)了結(jié)晶，由于它的漿液性質(zhì)差等，也會(huì)存在一些麻煩。例如，漿液流動(dòng)性差導(dǎo)致攪拌上的麻煩或者從結(jié)晶容器上刷去的難度，可濾性差需要長(zhǎng)時(shí)間的晶體分離。此外，還原型輔酶Q10在各種有機(jī)溶劑中的溶解度趨于較高，于是存在結(jié)晶收率并不總是高問(wèn)題。
另外，還原型輔酶Q10具有容易被分子氧氧化為氧化型輔酶Q10的特征。在商業(yè)生產(chǎn)規(guī)模上，完全地消除氧是非常難以實(shí)現(xiàn)的，此外，個(gè)別操作需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間階段，不象實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的生產(chǎn)，因此殘留的氧發(fā)揮較大的不利影響。長(zhǎng)時(shí)間的分離過(guò)程增加了上述氧化作用的危險(xiǎn)，并且直接與收率和質(zhì)量問(wèn)題有關(guān)，因?yàn)樯闪藥缀醪豢上难趸洼o酶Q10，并且有氧化型輔酶Q10混入產(chǎn)物中。
在這樣的環(huán)境下，迫切需要確立一種結(jié)晶方法，提高漿液性質(zhì)和結(jié)晶性質(zhì)，由此以較高收率生產(chǎn)具有充分可濾性的還原型輔酶Q10，以及確立一種生產(chǎn)方法，其中縮短和簡(jiǎn)化了用于生產(chǎn)高純度還原型輔酶Q10的、包括晶體分離的分離過(guò)程或者包括所述分離過(guò)程的全部過(guò)程。
發(fā)明概述鑒于上述，本發(fā)明的另一目的是提供杰出的獲得晶體形式的還原型輔酶Q10的方法，適合在商業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)還原型輔酶Q10。
作為使還原型輔酶Q10晶體生長(zhǎng)良好的廣泛研究的結(jié)果，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使還原型輔酶Q10從醇和/或酮的溶液中結(jié)晶，可以以高收率得到具有優(yōu)異漿液性質(zhì)和結(jié)晶性質(zhì)的還原型輔酶Q10晶體，從而完成了本發(fā)明。
因而，本發(fā)明涉及生產(chǎn)還原型輔酶Q10晶體的方法，該方法包含使還原型輔酶Q10在醇和/或酮的溶液中結(jié)晶。
此外，本發(fā)明涉及上述方法，其中使還原型輔酶Q10從含有可通過(guò)在醇和/或酮溶液中使氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10而得到的還原型輔酶Q10的醇和/或酮溶液中結(jié)晶。
按照本發(fā)明的方法，有可能縮短和簡(jiǎn)化包括晶體分離的分離過(guò)程或者包括所述分離過(guò)程的全部過(guò)程，從而能夠以較高收率得到高純度還原型輔酶Q10。
發(fā)明詳述下面詳細(xì)描述本發(fā)明。
首先，解釋生產(chǎn)還原型輔酶Q10晶體的方法，也就是使還原型輔酶Q10結(jié)晶的方法。
本發(fā)明用于生產(chǎn)還原型輔酶Q10晶體的方法是使還原型輔酶Q10從醇和/或酮溶液中結(jié)晶。優(yōu)選地，使用一種醇。
用于結(jié)晶的還原型輔酶Q10可以是借助常規(guī)方法得到的，例如合成、發(fā)酵或從天然產(chǎn)物中提取。優(yōu)選地，它是這樣得到的，還原包含在還原型輔酶Q10中的氧化型輔酶Q10，或者使氧化型輔酶Q10還原，更優(yōu)選地，它是這樣得到的，利用本發(fā)明的還原反應(yīng)，如下所述。
盡管本發(fā)明的結(jié)晶方法也適用于含有相當(dāng)高比例氧化型輔酶Q10的來(lái)源，不過(guò)該方法對(duì)借助下述還原方法制備的高純度還原型輔酶Q10是尤其有效的。在本發(fā)明的實(shí)施中，非常有效的是純化還原型輔酶Q10和使其結(jié)晶，同時(shí)除去包含在按照常規(guī)方式所得或者借助上述還原方法等所得反應(yīng)混合物或提取物中的雜質(zhì)。在這種場(chǎng)合下，雜質(zhì)應(yīng)當(dāng)優(yōu)選地被消除在母液中。這使除去共存的雜質(zhì)成為可能，特別是具有相似結(jié)構(gòu)且一般總是不容易除去的類(lèi)似化合物(具體而言，還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8、還原型輔酶Q7等)。醇和/或酮是特別有效除去上述具有相似結(jié)構(gòu)的化合物的溶劑。毋庸贅述，利用該方法作為使還原型輔酶Q10晶體重結(jié)晶的方法也是非常有效的。
本發(fā)明最優(yōu)選的方式是直接分離法(一罐法)，該方法包含使還原型輔酶Q10從在醇和/或酮(優(yōu)選醇)溶液中將氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10而得的溶液中結(jié)晶(優(yōu)選純化并結(jié)晶)。利用該方法，可以得到具有良好性質(zhì)的高質(zhì)量晶體，收率高，方式簡(jiǎn)單高效。
用于本發(fā)明的醇是沒(méi)有特別限制的，但是可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不過(guò)，飽和者是優(yōu)選的。例如，關(guān)于一元醇，例如提到含有1至20個(gè)碳原子者，優(yōu)選1至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至6個(gè)碳原子，進(jìn)而更優(yōu)選1至5個(gè)碳原子，最優(yōu)選1至3個(gè)碳原子。最優(yōu)選的是含有2或3個(gè)碳原子的一元醇。而且，也可以優(yōu)選地使用含有2至5個(gè)碳原子(優(yōu)選含有2至3個(gè)碳原子)的二元醇，和含有3個(gè)碳原子的三元醇等。其中，含有1至5個(gè)碳原子的一元醇具有較高水混溶性，當(dāng)與水一起作為混合溶劑時(shí)，優(yōu)選地使用之。
關(guān)于一元醇，例如可以提到甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、異戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、1-十一碳醇、1-十二碳醇、烯丙醇、炔丙醇、苯甲醇、環(huán)己醇、1-甲基環(huán)己醇、2-甲基環(huán)己醇、3-甲基環(huán)己醇、4-甲基環(huán)己醇等。
優(yōu)選的是甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、異戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇和環(huán)己醇。更優(yōu)選的是甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、異戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇和新戊醇。進(jìn)而更優(yōu)選的是甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、異丁醇、2-甲基-1-丁醇和異戊醇。進(jìn)一步優(yōu)選的是甲醇、乙醇、1-丙醇和2-丙醇，特別優(yōu)選的是乙醇、1-丙醇和2-丙醇，最優(yōu)選的是乙醇。
關(guān)于二元醇，例如可以提到1，2-乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇、1，4-丁二醇、2，3-丁二醇、1，5-戊二醇等。優(yōu)選的是1，2-乙二醇、1，2-丙二醇和1，3-丙二醇，最優(yōu)選的是1，2-乙二醇。
關(guān)于三元醇，例如可以優(yōu)選地使用甘油等。
酮是沒(méi)有特別限制的，具有3至6個(gè)碳原子者是優(yōu)選使用的。關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到丙酮、甲乙酮、甲基丁基酮、甲基異丁基酮等。優(yōu)選的是丙酮和甲乙酮，最優(yōu)選的是丙酮。
結(jié)晶的方法是沒(méi)有特別限制的，結(jié)晶是這樣進(jìn)行的，利用冷卻結(jié)晶、濃縮結(jié)晶、溶劑置換結(jié)晶和其他方法中的至少一種。還原型輔酶Q10在醇和/或酮中的溶解度顯示非常可取的溫度依賴性，這適宜有助于有利地減少還原性輔酶Q10在溶液中的量，和以較高收率轉(zhuǎn)化為結(jié)晶狀態(tài)。為了在最大程度上表現(xiàn)這種特征，特別優(yōu)選的是采用冷卻結(jié)晶法，或者冷卻結(jié)晶法與某一其他結(jié)晶方法的組合。
結(jié)晶濃度是重要的因素，關(guān)于在結(jié)晶完成時(shí)的濃度，當(dāng)以在結(jié)晶完成時(shí)基于結(jié)晶溶劑的重量而言還原型輔酶Q10的重量表示時(shí)，優(yōu)選地不高于約15w/w％，更優(yōu)選不高于約13w/w％，進(jìn)而更優(yōu)選不高于10w/w％。通過(guò)保持上述這樣一種濃度，有可能便于按照適合于在工業(yè)規(guī)模上操作的方式進(jìn)行結(jié)晶。從生產(chǎn)率的觀點(diǎn)來(lái)看，結(jié)晶濃度的下限一般不低于約1w/w％，優(yōu)選不低于約2w/w％。
上述結(jié)晶優(yōu)選地是在強(qiáng)迫流動(dòng)下進(jìn)行的。為了防止過(guò)飽和狀態(tài)的出現(xiàn)，并由此允許成核作用和晶體生長(zhǎng)順利進(jìn)行，以及從得到高質(zhì)量產(chǎn)物的觀點(diǎn)來(lái)看，流動(dòng)一般需要每單位體積的攪拌力不弱于約0.01kW/m3，優(yōu)選不弱于約0.1kW/m3，更優(yōu)選不弱于約0.3kW/m3。強(qiáng)迫流動(dòng)一般是由攪拌葉片的旋轉(zhuǎn)所提供的。不過(guò)，攪拌葉片的使用不總是必要的，如果以其他方式也能獲得上述流動(dòng)的話。例如，有可能利用基于液體循環(huán)的方法。
在進(jìn)行結(jié)晶時(shí)，優(yōu)選地加入晶種，以便可以防止過(guò)飽和狀態(tài)的出現(xiàn)，并且可以允許成核作用和晶體生長(zhǎng)順利進(jìn)行。
結(jié)晶溫度(結(jié)晶步驟中的冷卻溫度)是沒(méi)有特別限制的，但是從收率觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選不高于25℃，更優(yōu)選不高于20℃，進(jìn)而更優(yōu)選不高于15℃，特別優(yōu)選不高于10℃。下限是該系統(tǒng)的固化溫度。因而，在優(yōu)選約0℃至25℃的冷卻溫度下，一般能夠有利于結(jié)晶的進(jìn)行。
在結(jié)晶的過(guò)程中，優(yōu)選的是通過(guò)控制每單位時(shí)間結(jié)晶出來(lái)的晶體的量，控制過(guò)飽和的形成。優(yōu)選的每單位時(shí)間結(jié)晶的速率例如不高于每單位時(shí)間導(dǎo)致所要得到的晶體總量的約50％結(jié)晶的結(jié)晶速率(也就是至多50％/小時(shí))，優(yōu)選地不高于每單位時(shí)間導(dǎo)致所要得到的晶體總量的約25％結(jié)晶的結(jié)晶速率(也就是至多25％/小時(shí))。冷卻結(jié)晶中的冷卻速率一般不高于約40℃/小時(shí)，優(yōu)選不高于約20℃/小時(shí)。
在本發(fā)明的結(jié)晶方法中，鑒于可借助結(jié)晶獲得的漿液性質(zhì)和結(jié)晶性質(zhì)，一般優(yōu)選的是使用上述溶劑，但是也可以共同存在或者加入除了上述醇和/或酮以外的其他溶劑。
其他溶劑是沒(méi)有特別限制的，但是例如可以提到烴、脂肪酸酯、醚、脂肪酸、含氮化合物(包括腈和酰胺)、含硫化合物、水等。
關(guān)于烴、脂肪酸酯、醚和腈，可以優(yōu)選地使用下述溶劑作為還原反應(yīng)溶劑。
關(guān)于脂肪酸，例如可以提到甲酸、乙酸、丙酸等。優(yōu)選的是甲酸和乙酸，最優(yōu)選的是乙酸。
關(guān)于含氮化合物，例如可以提到硝基甲烷、三乙胺、吡啶、甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。
關(guān)于含硫化合物，例如可以提到二甲基亞砜、環(huán)丁砜等。
有效的是根據(jù)這些溶劑的特征，按照優(yōu)選的比例使用這些其他溶劑與上述醇和/或酮溶液，目的是改善決定結(jié)晶條件的條件，例如還原型輔酶Q10的溶解度、結(jié)晶濃度、收率、漿液性質(zhì)和結(jié)晶性質(zhì)。
在上述其他溶劑中，從通過(guò)適當(dāng)降低還原型輔酶Q10的溶解度而獲得高收率以及從提高漿液性質(zhì)的方面來(lái)看，水是特別優(yōu)選使用的，特別要注意的是顯著提高固-液可溶性(可濾性)。
這些其他溶劑與上述醇和/或酮的比例依賴于溶劑的種類(lèi)，因此不能絕對(duì)地指定，并且是沒(méi)有特別限制的，只要它是基本上包含上述醇和/或酮作為主要組分的溶劑即可。優(yōu)選地，上述醇和/或酮在溶劑中的比例為約80w/w％或以上，為醇與酮的總和，更優(yōu)選約90w/w％或以上，進(jìn)而更優(yōu)選約93w/w％或以上。
確切而言，當(dāng)鑒于提高上述固-液可溶性而使用水作為輔助溶劑時(shí)，上述醇和/或酮在溶劑中的比例下限為約90w/w％或以上，優(yōu)選約91w/w％或以上，更優(yōu)選約92w/w％或以上，進(jìn)而更優(yōu)選約93w/w％或以上。上限為約99.5w/w％或以下，優(yōu)選約99w/w％或以下，更優(yōu)選約98w/w％或以下，進(jìn)而更優(yōu)選約97w/w％或以下。一般而言，在約90w/w％與約99.5w/w％之間的范圍是優(yōu)選的，在約93w/w％與約97w/w％之間的范圍是最優(yōu)選的。
優(yōu)選地，如此得到的還原型輔酶Q10晶體可以回收到濕產(chǎn)物，例如借助一種固-液分離技術(shù)，例如離心、壓力過(guò)濾或真空過(guò)濾，如果必要的話再用本發(fā)明所述溶劑洗滌濾餅，包括上述醇或酮。也能回收到干燥產(chǎn)物，進(jìn)一步將濕產(chǎn)物裝入內(nèi)部用惰性氣體凈化的減壓干燥器(真空干燥器)，在減壓下干燥之。干燥形式的回收是優(yōu)選的。
鑒于防氧化作用，有效的是在脫氧氣氛中進(jìn)行本發(fā)明的生產(chǎn)方法。脫氧氣氛可以這樣達(dá)到，用惰性氣體置換，減壓，沸騰，或它們的組合。優(yōu)選的是至少用惰性氣體置換，也就是使用惰性氣體氣氛。關(guān)于惰性氣體，例如可以提到氮?dú)?、氦氣、氬氣、氫氣和二氧化碳?xì)?。不過(guò)，氮?dú)馐莾?yōu)選的。
下面，描述適用于本發(fā)明的合成還原型輔酶Q10的方法，也就是使氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10的反應(yīng)。
如上所述，上述還原反應(yīng)優(yōu)選地是在如上結(jié)晶方法所述醇和/或酮溶液中進(jìn)行的，并且進(jìn)行直接分離法(一罐法)。由此，可以簡(jiǎn)化和縮短操作，以最小化分子氧的氧化作用。在這種情況下，下述抗壞血酸和其有關(guān)化合物是特別優(yōu)選的還原劑。
而且，還優(yōu)選的是使用防氧化效果高的溶劑進(jìn)行上述還原反應(yīng)和/或萃取與水洗操作，目的是當(dāng)延長(zhǎng)操作時(shí)間時(shí)，保護(hù)還原型輔酶Q10免受分子氧的氧化作用。
關(guān)于這類(lèi)防氧化效果高的溶劑，優(yōu)選的是使用選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種，最優(yōu)選烴。
烴是沒(méi)有特別限制的，但是例如可以提到脂族烴、芳族烴、鹵代烴等。優(yōu)選的是脂族烴和芳族烴，更優(yōu)選的是脂族烴。
脂族烴是沒(méi)有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不過(guò)，一般而言它們含有3至20個(gè)碳原子，優(yōu)選5至12個(gè)碳原子。
關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到丙烷、丁烷、異丁烷、戊烷、2-甲基丁烷、環(huán)戊烷、2-戊烯、己烷、2-甲基戊烷、2，2-二甲基丁烷、2，3-二甲基丁烷、甲基環(huán)戊烷、環(huán)己烷、1-己烯、環(huán)己烯、庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3-二甲基戊烷、2，4-二甲基戊烷、甲基環(huán)己烷、1-庚烯、辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、異辛烷、乙基環(huán)己烷、1-辛烯、壬烷、2，2，5-三甲基己烷、1-壬烯、癸烷、1-癸烯、p-薄荷烷、十一烷、十二烷等。
其中，具有5至8個(gè)碳原子的飽和脂族烴是更優(yōu)選的，優(yōu)選使用的是戊烷、2-甲基丁烷和環(huán)戊烷，它們具有5個(gè)碳原子(稱(chēng)之為“戊烷類(lèi)”)；己烷、2-甲基戊烷、2，2-二甲基丁烷、2，3-二甲基丁烷、甲基環(huán)戊烷、環(huán)己烷，它們具有6個(gè)碳原子(稱(chēng)之為“己烷類(lèi)”)；庚烷、2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3-二甲基戊烷、2，4-二甲基戊烷、甲基環(huán)己烷，它們具有7個(gè)碳原子(稱(chēng)之為“庚烷類(lèi)”)；辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、異辛烷、乙基環(huán)己烷，它們具有8個(gè)碳原子(稱(chēng)之為“辛烷類(lèi)”)；和它們的混合物。確切而言，上述庚烷類(lèi)是特別優(yōu)選的，因?yàn)樗鼈兙哂酗@示非常高的防氧化效果的趨勢(shì)，庚烷是最優(yōu)選的。
芳族烴是沒(méi)有特別限制的，但是一般而言它們含有6至20個(gè)碳原子，優(yōu)選6至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選7至10個(gè)碳原子。作為特定實(shí)例，例如可以提到苯、甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、乙基苯、枯烯(cumene)、(mesitylene)、四氫化萘(tetralin)、丁基苯、對(duì)繖花烴(p-cymene)、環(huán)己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、十二基苯、苯乙烯等。優(yōu)選甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、乙基苯、枯烯、、四氫化萘、丁基苯、對(duì)繖花烴、環(huán)己基苯、二乙基苯和戊基苯。更優(yōu)選甲苯、二甲苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、枯烯和四氫化萘，最優(yōu)選枯烯。
鹵代烴是沒(méi)有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不過(guò)，無(wú)環(huán)鹵代烴是優(yōu)選使用的。更優(yōu)選的是氯代烴和氟代烴，氯代烴是進(jìn)而更優(yōu)選的。另外，使用含有1至6個(gè)碳原子者，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至2個(gè)碳原子。
關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1，1，2-四氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2-二氯丙烷、1，2，3-三氯丙烷、氯苯、1，1，1，2-四氟乙烷等。
優(yōu)選的是二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1，2-三氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯和1，1，1，2-四氟乙烷。更優(yōu)選的是二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、氯苯和1，1，1，2-四氟乙烷。進(jìn)而更優(yōu)選的是二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烯和三氯乙烯。
脂肪酸酯是沒(méi)有特別限制的，但是例如可以提到丙酸酯、乙酸酯、甲酸酯等。優(yōu)選的是乙酸酯和甲酸酯，更優(yōu)選的是乙酸酯。其酯官能團(tuán)是沒(méi)有特別限制的，但是可以提到具有1至8個(gè)碳原子的烷基酯、具有1至8個(gè)碳原子的芳烷基酯等。優(yōu)選的是具有1至6個(gè)碳原子的烷基酯，更優(yōu)選的是具有1至4個(gè)碳原子的烷基酯。
關(guān)于丙酸酯，例如可以提到丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸異戊酯等。優(yōu)選的是丙酸乙酯。
關(guān)于乙酸酯，例如可以提到乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸仲己酯、乙酸環(huán)己酯、乙酸芐酯等。優(yōu)選的是乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異丁酯、乙酸仲丁酯、乙酸戊酯、乙酸異戊酯、乙酸仲己酯和乙酸環(huán)己酯。更優(yōu)選的是乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯和乙酸異丁酯。最優(yōu)選的是乙酸乙酯。
關(guān)于甲酸酯，例如可以提到甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸異丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯、甲酸仲丁酯、甲酸戊酯等。優(yōu)選的是甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸異丁酯和甲酸戊酯。最優(yōu)選的是甲酸乙酯。
醚是沒(méi)有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。但是飽和者是優(yōu)選使用的。一般而言，使用含有3至20個(gè)碳原子者，優(yōu)選4至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選4至8個(gè)碳原子。
關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二異丙醚、二丁醚、二己醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚、茴香醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二烷、呋喃、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二醇一甲醚、乙二醇一乙醚、乙二醇一丁醚等。
優(yōu)選的是二乙醚、甲基叔丁基醚、二丙醚、二異丙醚、二丁醚、二己醚、茴香醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二烷、2-甲基呋喃、四氫呋喃、四氫吡喃、乙二醇二甲醚、乙二醇二乙醚、乙二醇二丁醚、乙二醇一甲醚和乙二醇一乙醚。更優(yōu)選的是二乙醚、甲基叔丁基醚、茴香醚、二烷、四氫呋喃、乙二醇一甲醚和乙二醇一乙醚。進(jìn)而更優(yōu)選的是二乙醚、甲基叔丁基醚、茴香醚等。最優(yōu)選的是甲基叔丁基醚。
腈是沒(méi)有特別限制的，可以是環(huán)狀的或無(wú)環(huán)的，或者飽和的或不飽和的。不過(guò)，飽和者是優(yōu)選使用的。一般而言，使用含有2至20個(gè)碳原子者，優(yōu)選2至12個(gè)碳原子，更優(yōu)選2至8個(gè)碳原子。
關(guān)于特定實(shí)例，例如可以提到乙腈、丙腈、丙二腈、丁腈、異丁腈、琥珀腈、戊腈、戊二腈、己腈、庚基氰、辛基氰、十一碳腈、十二碳腈、十三碳腈、十五碳腈、硬脂腈、氯乙腈、溴乙腈、氯丙腈、溴丙腈、甲氧基乙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、甲苯腈、芐腈、氯芐腈、溴芐腈、氰基苯甲酸、硝基芐腈、茴香腈、鄰苯二甲腈、溴甲苯腈、氰基苯甲酸甲酯、甲氧基芐腈、乙?；S腈、萘腈、聯(lián)苯甲腈、苯丙腈、苯丁腈、甲基苯乙腈、二苯乙腈、萘乙腈、硝基苯乙腈、氯芐基氰、環(huán)丙烷甲腈、環(huán)己烷甲腈、環(huán)庚烷甲腈、苯基環(huán)己烷甲腈、甲苯基環(huán)己烷甲腈等。
優(yōu)選的是乙腈、丙腈、丁腈、異丁腈、琥珀腈、戊腈、氯丙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、甲苯腈和芐腈。更優(yōu)選的是乙腈、丙腈、丁腈和異丁腈。最優(yōu)選的是乙腈。
在從上述溶劑中選擇所用溶劑時(shí)，優(yōu)選地考慮沸點(diǎn)和粘度等性質(zhì)；例如，溶劑應(yīng)當(dāng)具有下述沸點(diǎn)、熔點(diǎn)以及具有較低粘度(在20℃下不高于約10cp)，所述沸點(diǎn)允許為增加溶解度而適當(dāng)加熱，有利于干燥除去濕材中的溶劑和從結(jié)晶濾液中回收溶劑(約30至150℃，1atm)，所述熔點(diǎn)允許在室溫下處理時(shí)以及冷卻至室溫或以下后(不高于約20℃，優(yōu)選不高于約10℃，進(jìn)而更優(yōu)選不高于約0℃)幾乎不發(fā)生固化。從工業(yè)操作觀點(diǎn)來(lái)看，在常溫下幾乎不揮發(fā)的溶劑是優(yōu)選的；例如，沸點(diǎn)不低于約80℃者是優(yōu)選的，沸點(diǎn)不低于約90℃者是更優(yōu)選的。
還原型輔酶Q10當(dāng)處于溶解狀態(tài)時(shí)，隨著濃度增加，趨于變得更加耐受氧化作用。還原型輔酶Q10高度可溶于上述溶劑，在這方面，上述溶劑也適合于防氧化作用。從防氧化作用的觀點(diǎn)來(lái)看，優(yōu)選的還原型輔酶Q10濃度尤其可以因溶劑種類(lèi)而異，因此不能絕對(duì)地指定。不過(guò)一般而言，還原型輔酶Q10在上述溶劑中的濃度一般不低于1w/w％，優(yōu)選不低于2w/w％。上限是沒(méi)有特別限制的，但是從實(shí)際操作的觀點(diǎn)來(lái)看，濃度為400w/w％或以下，優(yōu)選200w/w％或以下，更優(yōu)選100w/w％或以下，進(jìn)而更優(yōu)選50w/w％或以下。
因此，在還原反應(yīng)的全過(guò)程中使用上述溶劑可以最小化不可取的氧的副反應(yīng)。
還原反應(yīng)可以這樣進(jìn)行，例如使用金屬氫化物、鐵(金屬鐵或鐵鹽形式)、鋅(金屬鋅)、連二亞硫酸或其鹽或者抗壞血酸或其有關(guān)化合物作為還原劑。
而且，優(yōu)選地在上述防氧化效果高的溶劑中使用金屬氫化物、鐵(金屬鐵或鐵鹽形式)、鋅(金屬鋅)或連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行還原。此外，可以使用各種溶劑、例如醇和/或酮以及上述防氧化效果高的溶劑進(jìn)行抗壞血酸或其有關(guān)化合物的還原，但是優(yōu)選地使用醇(尤其優(yōu)選的是水混溶性高的醇)、水混溶性高的醚、水混溶性高的腈和水混溶性高的酮。
金屬氫化物是沒(méi)有特別限制的，但是尤其包括硼氫化鈉和氫化鋁鋰。金屬氫化物的用量可以因其種類(lèi)而異，因此不能絕對(duì)地指定。不過(guò)一般而言，使用1至3倍于理論氫當(dāng)量，有利于還原的進(jìn)行。
用鐵或鋅進(jìn)行的還原一般是用一種酸進(jìn)行的。酸是沒(méi)有特別限制的，但是尤其包括脂肪酸如乙酸，磺酸如甲磺酸，和無(wú)機(jī)酸如鹽酸和硫酸。無(wú)機(jī)酸是優(yōu)選的，硫酸是更優(yōu)選的。
鐵的用量是沒(méi)有特別限制的，但是例如基于氧化型輔酶Q10的加載重量而言約1/5重量或更大適合于進(jìn)行反應(yīng)。上限是沒(méi)有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，約為上述加載重量的兩倍或更低。鐵不僅可以使用金屬鐵形式，而且可以使用鹽形式，例如硫酸亞鐵(II)等。
鋅的用量是沒(méi)有特別限制的，但是例如基于氧化型輔酶Q10的加載重量而言約1/10重量或更大適合于進(jìn)行反應(yīng)。上限是沒(méi)有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，約為上述加載重量的兩倍或更低。
連二亞硫酸或其鹽是沒(méi)有特別限制的，但是一般使用連二亞硫酸的鹽形式。連二亞硫酸的鹽是沒(méi)有特別限制的，但是關(guān)于優(yōu)選的種類(lèi)，包括堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽等。堿金屬鹽是更優(yōu)選的，例如鋰鹽、鈉鹽和鉀鹽，鈉鹽是最優(yōu)選的。連二亞硫酸或鹽的用量是沒(méi)有特別限制的，但是基于氧化型輔酶Q10的加載重量而言一般不小于約1/5重量，優(yōu)選不小于約2/5重量，更優(yōu)選不小于約3/5重量。可以使用更大的量，而不會(huì)導(dǎo)致任何特別的麻煩。不過(guò)從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，用量不大于上述加載重量的約兩倍，優(yōu)選不大于加載重量。因而，用量在上述加載重量的約2/5至約等于加載重量的重量的范圍內(nèi)，能夠更有利于反應(yīng)的進(jìn)行。
抗壞血酸或其有關(guān)化合物是沒(méi)有特別限制的，例如不僅包括抗壞血酸，而且包括鼠李糖型抗壞血酸、阿拉伯糖型抗壞血酸、葡萄糖型抗壞血酸、巖藻糖型抗壞血酸、葡庚糖型抗壞血酸、木糖型抗壞血酸、半乳糖型抗壞血酸、古洛糖型抗壞血酸、阿洛糖型抗壞血酸、赤蘚糖型抗壞血酸、6-脫氧抗壞血酸等抗壞血酸衍生物，并且可以是它們的酯或鹽形式。此外，它們可以是L-型、D-型或外消旋型。更具體而言，例如可以提到L-抗壞血酸、L-抗壞血酰棕櫚酸酯、L-抗壞血酰硬脂酸酯、D-阿拉伯糖型抗壞血酸等。在生產(chǎn)還原型輔酶Q10時(shí)，可以適宜地使用任意上述抗壞血酸和其有關(guān)化合物。不過(guò)，鑒于與所生成的還原型輔酶Q10的可分離性，在上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物中特別適宜使用水溶性者。鑒于易用性、價(jià)格等，最優(yōu)選的是游離形式的L-抗壞血酸、D-阿拉伯糖型抗壞血酸等。
上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物的用量是沒(méi)有特別限制的，但是可以是在轉(zhuǎn)化氧化型輔酶Q10為還原型輔酶Q10中有效的量。一般就每摩爾氧化型輔酶Q10而言，用量不小于1摩爾，優(yōu)選不小于1.2摩爾。上限是沒(méi)有特別限制的，但是從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，就每摩爾氧化型輔酶Q10而言，用量一般不高于10摩爾，優(yōu)選不高于5摩爾，更優(yōu)選不高于3摩爾。
在上述還原劑種類(lèi)中，從還原能力、收率和/或質(zhì)量的觀點(diǎn)來(lái)看，鋅、連二亞硫酸及其鹽，以及抗壞血酸和其有關(guān)化合物尤其是優(yōu)選的，特別是連二亞硫酸(具體為連二亞硫酸鹽)和抗壞血酸或其有關(guān)化合物是優(yōu)選的。
在進(jìn)行還原反應(yīng)時(shí)，醇和/或水適宜單獨(dú)或聯(lián)合使用，如上所述。水是優(yōu)選的，特別是當(dāng)使用鐵、鋅或者連二亞硫酸或其鹽作為還原劑時(shí)。當(dāng)使用金屬氫化物或者抗壞血酸或其有關(guān)化合物作為還原劑時(shí)，可以聯(lián)合使用醇。水與醇的聯(lián)合使用表現(xiàn)出水和醇的特征，尤其有助于提高反應(yīng)速率和收率。
下面，詳細(xì)描述優(yōu)選的還原方法。
用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原優(yōu)選聯(lián)合使用水來(lái)進(jìn)行，也就是在由至少一種選自上述烴、脂肪酸酯、醚和腈的有機(jī)溶劑和水組成的混合溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行。在這種場(chǎng)合下，從收率等觀點(diǎn)來(lái)看，反應(yīng)時(shí)pH一般不高于7，優(yōu)選pH 3至7，更優(yōu)選pH 3至6?？梢允褂盟?例如無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸或硫酸)或堿(例如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉)調(diào)節(jié)pH。
在用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原中，水量是沒(méi)有特別限制的，但是水量可以是使適量還原劑、即連二亞硫酸或其鹽能夠溶解在其中的量。因而例如，建議一般將連二亞硫酸或鹽的量調(diào)節(jié)為不多于30w/w％，優(yōu)選不多于20w/w％，相對(duì)水的重量而言。尤其從生產(chǎn)率觀點(diǎn)來(lái)看，建議一般將用量調(diào)節(jié)為不少于1w/w％，優(yōu)選不少于5w/w％，更優(yōu)選不少于10w/w％。
上述抗壞血酸或其有關(guān)化合物還原優(yōu)選地是這樣進(jìn)行的，使用水混溶性尤其高的溶劑，選自上述烴、脂肪酸酯、醚和腈，特別是選自醚和腈的至少一種，它們的水混溶性高，更具體為四氫呋喃、二烷、乙腈等。還可以使用醇作為另一種溶劑。此外，從在還原型輔酶Q10的生產(chǎn)中促進(jìn)反應(yīng)(例如降低反應(yīng)溫度或縮短反應(yīng)時(shí)間)的觀點(diǎn)來(lái)看，還有可能在具有反應(yīng)促進(jìn)效果的添加劑的存在下進(jìn)行還原，所述添加劑例如堿性物質(zhì)或亞硫酸氫鹽。
堿性化合物是沒(méi)有特別限制的，但是可以是無(wú)機(jī)化合物或有機(jī)化合物。無(wú)機(jī)化合物是沒(méi)有特別限制的，但是尤其包括金屬(優(yōu)選堿金屬、堿土金屬等)的氫氧化物、碳酸鹽和碳酸氫鹽，以及氨。關(guān)于其典型實(shí)例，可以提到堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉，堿金屬碳酸鹽如碳酸鈉，堿金屬碳酸氫鹽如碳酸氫鈉，和堿土金屬碳酸鹽如碳酸鎂。有機(jī)化合物是沒(méi)有特別限制的，但是尤其包括胺，例如三乙胺。在上面具體提到的堿性物質(zhì)中，優(yōu)選地使用弱堿性物質(zhì)(弱堿(base)或弱堿(alkalis))，例如金屬(優(yōu)選堿金屬、堿土金屬等)的碳酸鹽與碳酸氫鹽、氨等無(wú)機(jī)化合物；胺，例如三乙胺等有機(jī)化合物。更優(yōu)選上述弱堿性無(wú)機(jī)化合物。
關(guān)于亞硫酸氫鹽，優(yōu)選的例如是堿金屬亞硫酸氫鹽，例如亞硫酸氫鈉。
上述添加劑的量是沒(méi)有特別限制的，但是可以是這樣的，使添加劑的反應(yīng)促進(jìn)效果能夠產(chǎn)生至所需程度(有效量)。不過(guò)從經(jīng)濟(jì)上的觀點(diǎn)來(lái)看，用量一般不多于20摩爾，優(yōu)選不多于10摩爾，更優(yōu)選不多于5摩爾，進(jìn)而更優(yōu)選不多于2摩爾，這是就每摩爾抗壞血酸或其有關(guān)化合物而言。下限是沒(méi)有特別限制的，但是一般不少于0.01摩爾，優(yōu)選不少于0.05摩爾，更優(yōu)選不少于0.1摩爾，進(jìn)而更優(yōu)選不少于0.2摩爾，是就每摩爾抗壞血酸或其有關(guān)化合物而言。
本發(fā)明所述還原反應(yīng)優(yōu)選地是在強(qiáng)迫流動(dòng)下進(jìn)行的。攪拌導(dǎo)致這類(lèi)流動(dòng)所需的力每單位體積一般不小于約0.01kW/m3，優(yōu)選不小于約0.1kW/m3，更優(yōu)選不小于約0.3kW/m3。上述強(qiáng)迫流動(dòng)一般是由攪拌葉片的旋轉(zhuǎn)所導(dǎo)致的。攪拌葉片的使用不總是必要的，如果以其他方式也能獲得上述流動(dòng)的話。例如，可以利用基于液體循環(huán)的方法。
還原溫度可以因還原劑種類(lèi)和/或用量而異，因此不能絕對(duì)地指定。例如在用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原中，還原一般是在100℃或以下的溫度中進(jìn)行的，優(yōu)選80℃或以下，更優(yōu)選60℃或以下。下限是該系統(tǒng)的固化溫度。因而，在約0至100℃、優(yōu)選約0至80℃、更優(yōu)選約0至60℃的溫度中，一般有利于還原的進(jìn)行。在用抗壞血酸或其有關(guān)化合物進(jìn)行的還原中，還原一般是在30℃或更高的溫度中進(jìn)行的，優(yōu)選40℃或更高，更優(yōu)選50℃或更高。上限是該系統(tǒng)的沸點(diǎn)。因而，在約30至150℃、優(yōu)選約40至120℃、更優(yōu)選約50至100℃的溫度中，一般有利于還原的進(jìn)行。
反應(yīng)濃度是沒(méi)有特別限制的，但是氧化型輔酶Q10重量相對(duì)于溶劑重量而言一般不小于約1w/w％，優(yōu)選不小于3w/w％，更優(yōu)選不小于10w/w％，進(jìn)而更優(yōu)選不小于15w/w％。上限是沒(méi)有特別限制的，但是一般不高于約60w/w％，優(yōu)選不高于50w/w％，更優(yōu)選不高于40w/w％，進(jìn)而更優(yōu)選不高于30w/w％。因而，在約1至60w/w％、優(yōu)選約3至50w/w％、更優(yōu)選約10至40w/w％的反應(yīng)濃度下，有利于反應(yīng)的進(jìn)行。
還原反應(yīng)時(shí)間可以因還原劑種類(lèi)和/或其量而異，因此不能絕對(duì)地指定。不過(guò)一般而言，反應(yīng)可以在48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行完全，優(yōu)選在24小時(shí)內(nèi)，更優(yōu)選在10小時(shí)內(nèi)，進(jìn)而更優(yōu)選在5小時(shí)內(nèi)。
極為優(yōu)選的是在脫氧氣氛中進(jìn)行還原反應(yīng)。驚人地發(fā)現(xiàn)，特別是在用連二亞硫酸或其鹽進(jìn)行的還原反應(yīng)中，這類(lèi)氣氛大大有助于提高還原反應(yīng)收率和減少還原劑的用量。脫氧氣氛可以這樣達(dá)到，用惰性氣體置換，減壓，沸騰，或它們的組合。優(yōu)選的是至少用惰性氣體置換，也就是使用惰性氣體氣氛。關(guān)于惰性氣體，例如可以提到氮?dú)?、氦氣、氬氣、氫氣和二氧化碳?xì)?。不過(guò)，氮?dú)馐莾?yōu)選的。
從所得還原反應(yīng)混合物中回收含有產(chǎn)物還原型輔酶Q10的有機(jī)相，如果必要的話(優(yōu)選地)，將有機(jī)相進(jìn)一步用水、鹽水等反復(fù)洗滌，以完全消除污染物，然后用醇和/或酮置換溶劑，得到用于上述結(jié)晶的溶液。
鑒于防氧化效果，優(yōu)選的是進(jìn)行溶液的溶劑置換，溶液是這樣制備的，將還原型輔酶Q10溶于至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的溶劑與醇和/或酮。
特別是當(dāng)使用上述連二亞硫酸或其鹽、例如連二亞硫酸鈉作為還原劑時(shí)，需要用水反復(fù)洗滌，以便可以完全除去從連二亞硫酸或其鹽衍生的污染物和/或可以使含水相的pH穩(wěn)定。
而且，如上所述，當(dāng)使用上述用在本發(fā)明結(jié)晶方法中的醇和/或酮(優(yōu)選水混溶性高的醇和/或酮(具體而言，關(guān)于醇，為一元醇或二元醇(優(yōu)選一元醇)，含有1至5個(gè)碳原子，優(yōu)選含有1至4個(gè)碳原子，更優(yōu)選含有1至3個(gè)碳原子，關(guān)于酮，為丙酮、甲乙酮等))進(jìn)行抗壞血酸或其有關(guān)化合物的還原時(shí)，相當(dāng)方便和有效的工藝是按照上述結(jié)晶方法使還原型輔酶Q10直接從還原反應(yīng)混合物中結(jié)晶(直接分離法(一罐法))。在這種情況下，優(yōu)選的是在上述方法中，在進(jìn)行還原反應(yīng)之后借助冷卻、濃縮或不良溶劑的加入(優(yōu)選水的加入)使還原型輔酶Q10結(jié)晶，更優(yōu)選借助冷卻或濃縮，進(jìn)而更優(yōu)選借助冷卻。另外，用在還原反應(yīng)中的溶劑在這種情況下是沒(méi)有特別限制的，但是優(yōu)選包含上述醇和/或酮作為主要組分的溶劑。
一般而言，鑒于反應(yīng)速率和反應(yīng)收率，上述醇和/或酮在溶劑中的比例為約50w/w％或以上，優(yōu)選約60w/w％或以上，更優(yōu)選約70w/w％或以上。但是在考慮隨后結(jié)晶的應(yīng)用時(shí)，進(jìn)而更優(yōu)選約80w/w％或以上，特別優(yōu)選約90w/w％或以上，最優(yōu)選約93w/w％或以上。
當(dāng)在反應(yīng)時(shí)聯(lián)合使用水時(shí)，上述醇和/或酮在溶劑中的比例的下限為約90w/w％或以上，優(yōu)選約91w/w％或以上，更優(yōu)選約92w/w％或以上，進(jìn)而更優(yōu)選約93w/w％或以上。上限為約99.5w/w％或以下，優(yōu)選約99w/w％或以下，更優(yōu)選約98w/w％或以下，進(jìn)而更優(yōu)選約97w/w％或以下。在93w/w％與97w/w％之間的范圍是最優(yōu)選的。
按照本發(fā)明，可以得到高質(zhì)量還原型輔酶Q10晶體，可使用性和經(jīng)濟(jì)效率都是優(yōu)異的。根據(jù)本發(fā)明所得到的還原型輔酶Q10晶體預(yù)期還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比能夠不低于96/4，優(yōu)選不低于98/2，更優(yōu)選不低于99/1。
生產(chǎn)還原型輔酶Q10晶體的方法，該方法包含使還原型輔酶Q10在醇和/或酮的溶液中結(jié)晶。
根據(jù)[1]的方法，其中還原型輔酶Q10是在醇溶液中結(jié)晶的。
根據(jù)[1]或[2]的方法，其中該醇是含有1至20個(gè)碳原子的一元醇。
根據(jù)[1]或[2]的方法，其中該醇是含有1至5個(gè)碳原子的一元醇。
根據(jù)[4]的方法，其中含有1至5個(gè)碳原子的一元醇是乙醇。
根據(jù)[1]的方法，其中還原型輔酶Q10是在酮溶液中結(jié)晶的。
根據(jù)[1]或[6]的方法，其中該酮是含有3至6個(gè)碳原子的酮。
根據(jù)[7]的方法，其中含有3至6個(gè)碳原子的酮是丙酮。
根據(jù)[1]至[8]任意一項(xiàng)的方法，其中醇和/或酮在溶劑中的比例為至少80w/w％。
根據(jù)[1]至[9]任意一項(xiàng)的方法，其中使用水作為輔助溶劑。
根據(jù)[10]的方法，其中醇和/或酮在溶劑中的比例為90至99.5w/w％。
根據(jù)[1]至[11]任意一項(xiàng)的方法，其中結(jié)晶是按照冷卻結(jié)晶的方式或者冷卻結(jié)晶與另一種結(jié)晶方法的組合方式進(jìn)行的。
根據(jù)[12]的方法，其中在結(jié)晶步驟中的冷卻溫度為25℃或以下。
根據(jù)[12]或[13]的方法，其中冷卻速率為40℃/小時(shí)或更低。
根據(jù)[1]至[14]任意一項(xiàng)的方法，其中結(jié)晶濃度以在結(jié)晶完成時(shí)基于結(jié)晶溶劑的重量而言還原型輔酶Q10的重量表示，不高于15w/w％。
根據(jù)[1]至[15]任意一項(xiàng)的方法，其中結(jié)晶是在由攪拌所需的力所導(dǎo)致的強(qiáng)迫流動(dòng)下進(jìn)行的，該力每單位體積不弱于0.01kW/m3。
根據(jù)[1]至[16]任意一項(xiàng)的方法，其中在進(jìn)行結(jié)晶時(shí)加入晶種。
根據(jù)[1]至[17]任意一項(xiàng)的方法，其中結(jié)晶是在脫氧氣氛中進(jìn)行的。
根據(jù)[1]至[18]任意一項(xiàng)的方法，其中雜質(zhì)被消除在母液中。
根據(jù)[19]的方法，其中所要消除的雜質(zhì)是選自還原型輔酶Q9、還原型輔酶Q8和還原型輔酶Q7的至少一種。
根據(jù)[1]的方法，其中還原型輔酶Q10在醇和/或酮中的溶液可以通過(guò)將還原型輔酶Q10溶于選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種所得的溶液用醇和/或酮進(jìn)行溶劑置換而得到。
根據(jù)[21]的方法，其中通過(guò)將還原型輔酶Q10溶于至少一種選自烴、脂肪酸酯、醚和腈所制備的溶液，可以通過(guò)使用選自金屬氫化物、鐵、鋅、連二亞硫酸或其鹽和抗壞血酸或其有關(guān)化合物的至少一種作為還原劑，以及使用選自烴、脂肪酸酯、醚和腈的至少一種作為溶劑，使氧化型輔酶Q10還原而得到，然后回收含有所生成的還原型輔酶Q10的有機(jī)相，可選地進(jìn)一步用水洗滌有機(jī)相。
根據(jù)[22]的方法，其中使用連二亞硫酸或其鹽作為還原劑。
根據(jù)[23]的方法，其中還原是在pH 3至7進(jìn)行的。
根據(jù)[22]的方法，其中使用抗壞血酸或其有關(guān)化合物作為還原劑。
根據(jù)[22]至[25]任意一項(xiàng)的方法，其中還原是在脫氧氣氛中進(jìn)行的。
根據(jù)[1]至[20]任意一項(xiàng)的方法，其中還原型輔酶Q10是在醇和/或酮溶液中結(jié)晶的，該溶液含有可通過(guò)在醇和/或酮溶液中將氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10而得到的還原型輔酶Q10。
根據(jù)[27]的方法，其中還原型輔酶Q10是在醇溶液中結(jié)晶的，該溶液含有可通過(guò)在醇溶液中使氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10而得到的還原型輔酶Q10。
根據(jù)[27]或[28]的方法，其中該醇是含有1至20個(gè)碳原子的一元醇。
根據(jù)[27]或[28]的方法，其中該醇是含有1至5個(gè)碳原子的一元醇。
根據(jù)[30]的方法，其中含有1至5個(gè)碳原子的一元醇是乙醇。
根據(jù)[27]的方法，其中還原型輔酶Q10是在酮溶液中結(jié)晶的，該溶液含有可通過(guò)在酮溶液中使氧化型輔酶Q10還原為還原型輔酶Q10而得到的還原型輔酶Q10。
根據(jù)[27]或[32]的方法，其中該酮是含有3至6個(gè)碳原子的酮。
根據(jù)[33]的方法，其中含有3至6個(gè)碳原子的酮是丙酮。
根據(jù)[27]或[34]任意一項(xiàng)的方法，其中使用抗壞血酸或其有關(guān)化合物作為還原劑。
根據(jù)[35]的方法，其中還原是在堿性物質(zhì)或亞硫酸氫鹽的存在下進(jìn)行的。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式下列實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明。不過(guò)，這些實(shí)施例決不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中，還原型輔酶Q10的純度和還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比是借助下述HPLC分析法測(cè)定的。不過(guò)，所測(cè)定的還原型輔酶Q10純度值決不表明按照本發(fā)明所能達(dá)到的有限純度值。同樣，所得還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比值決不表明該比例的上限。
HPLC條件柱SYMMETRY C18(Waters)，250mm長(zhǎng)，4.6mm內(nèi)徑；流動(dòng)相C2H5OH∶CH3OH＝4∶3(v/v)；檢測(cè)波長(zhǎng)210nm；流速1ml/min；還原型輔酶Q10的滯留時(shí)間9.1min；氧化型輔酶Q10的滯留時(shí)間13.3min。
實(shí)施例1在25℃下，將氧化型輔酶Q10(100g；含有0.40％氧化型輔酶Q9，純度99.4％)溶于1000g庚烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，逐漸加入將100g連二亞硫酸鈉(純度至少75％)——作為還原劑——溶于1000ml水所制備的水溶液，在25℃和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將庚烷相用1000g脫氣飽和鹽水洗滌6次。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在50℃減壓下對(duì)該庚烷相進(jìn)行溶劑置換，以制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)乙醇溶液(含有100g還原型輔酶Q10(含有0.40％還原型輔酶Q9))。而且，將溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢?攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。進(jìn)一步在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到95g白色干燥晶體(含有0.19％還原型輔酶Q9，消除百分比53％)(所分離產(chǎn)物的收率95mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.3/0.7，還原型輔酶Q10的純度為99.0％。利用直徑20cm的Nutsche漏斗過(guò)濾漿液，漏斗上鋪有濾紙，借助抽吸器減壓。過(guò)濾所需時(shí)間為12分鐘。
實(shí)施例2在與實(shí)施例1相同的條件下進(jìn)行從還原反應(yīng)到用水洗滌的一系列操作，得到還原型輔酶Q10的庚烷溶液(含有100g還原型輔酶Q10(含有0.40％還原型輔酶Q9))。在50℃減壓下對(duì)該庚烷溶液進(jìn)行溶劑置換，以制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)2-丙醇溶液。將該溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢?，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1一樣好)，將濕晶體按順序用冷2-丙醇、冷水和冷2-丙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到94g白色干燥晶體(含有0.20％還原型輔酶Q9，消除百分比50％)(所分離產(chǎn)物的收率94mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.3/0.7，還原型輔酶Q10的純度為99.0％。
實(shí)施例3在25℃下，將氧化型輔酶Q10(100g；含有0.40％氧化型輔酶Q9，純度99.4％)溶于1000g己烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，逐漸加入將100g連二亞硫酸鈉(純度至少75％)——作為還原劑——溶于1000ml水所制備的水溶液，在25℃和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將己烷相進(jìn)一步用1000g脫氣飽和鹽水洗滌6次。在50℃減壓下對(duì)該己烷相進(jìn)行溶劑置換，以制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)丙酮溶液(含有100g還原型輔酶Q10(含有0.40％還原型輔酶Q9))。將溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢?攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1一樣好)，將濕晶體按順序用冷丙酮、冷水和冷丙酮洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到93g白色干燥晶體(含有0.21％還原型輔酶Q9，消除百分比48％)(所分離產(chǎn)物的收率93mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.2/0.8，還原型輔酶Q10的純度為98.9％。
實(shí)施例4
在與實(shí)施例1相同的條件下進(jìn)行還原反應(yīng)，進(jìn)一步在50℃下進(jìn)行溶劑置換，制備7％(w/w)乙醇溶液(含有100g還原型輔酶Q10(含有0.40％還原型輔酶Q9))。向該乙醇溶液加入50g水，按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢瑁猿恋沓鼍w。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性優(yōu)于實(shí)施例1)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到97g白色干燥晶體(含有0.21％還原型輔酶Q9，消除百分比48％)(所分離產(chǎn)物的收率97mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.2/0.8，還原型輔酶Q10的純度為98.9％。
實(shí)施例5在25℃下，將氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)溶于1000g乙酸乙酯。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，逐漸加入將100g連二亞硫酸鈉(純度至少75％)——作為還原劑——溶于1000ml水所制備的水溶液，在25℃和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將乙酸乙酯相用1000g脫氣飽和鹽水洗滌6次。在48℃減壓下將該乙酸乙酯相從1100g濃縮至300g，加入1100g乙醇和50g水，同時(shí)在氮?dú)夥罩斜３衷摐囟取Ｖ?，將混合物?0℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性優(yōu)于實(shí)施例1)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到91g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率91mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.1/0.9，還原型輔酶Q10的純度為98.8％。
實(shí)施例6在25℃下，將氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)溶于1000g庚烷。向該混合物加入1100g 2.9N硫酸和15g鋅粉，在25℃下進(jìn)行還原反應(yīng)達(dá)6小時(shí)，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)。加入1000g濃鹽酸后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將庚烷相用1000g脫氣飽和鹽水洗滌6次。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在50℃減壓下對(duì)該庚烷相進(jìn)行溶劑置換，以制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)乙醇溶液。而且，將溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢?攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1一樣好)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到95g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率95mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.3/0.7，還原型輔酶Q10的純度為99.0％。
實(shí)施例7在25℃下，將氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)溶于1000g己烷。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，逐漸加入將40g連二亞硫酸鈉(純度至少75％)——作為還原劑——溶于1000ml水所制備的水溶液，在25℃和pH 4-6下進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)2小時(shí)后，從反應(yīng)混合物中除去含水相，將己烷相用1000g脫氣飽和鹽水洗滌6次。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在50℃減壓下對(duì)該己烷相進(jìn)行溶劑置換，以制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)乙醇溶液。而且，將溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)在氮?dú)夥罩袛嚢?攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到95g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率95mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.2/0.8，還原型輔酶Q10的純度為98.9％。
實(shí)施例8按照與實(shí)施例1相同的方式在50℃下制備還原型輔酶Q10的7％(w/w)乙醇溶液(含有1.00％還原型輔酶Q9、0.30％還原型輔酶Q8和0.04％還原型輔酶Q7)，不同僅在于所用氧化型輔酶Q8的純度為98.4％(含有1.0％氧化型輔酶Q9、0.30％氧化型輔酶Q8和0.04％氧化型輔酶Q7)。向該乙醇溶液加入50g水，按3℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)，以沉淀出晶體。漿液顯示相當(dāng)好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性優(yōu)于實(shí)施例1)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到95g白色干燥晶體(含有0.52％還原型輔酶Q9，清除率48％；還原型輔酶Q8和還原型輔酶Q7未檢測(cè)到)(收率97mol％)。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.3/0.7，還原型輔酶Q10的純度為98.7％。
實(shí)施例9向1000g乙醇加入氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)和60g L-抗壞血酸，將混合物溶液在78℃下攪拌，進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)30小時(shí)后，將溶液冷卻至50℃，加入400g乙醇，同時(shí)保持該溫度。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，將該乙醇溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，得到白色漿液。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1一樣好)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到95g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率95mol％)。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.5/0.5，還原型輔酶Q10的純度為99.2％。
實(shí)施例10向1000g乙醇加入氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)和60g L-抗壞血酸，將混合物溶液在78℃下攪拌，進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)30小時(shí)后，將溶液冷卻至50℃，加入330g乙醇和70g水，同時(shí)保持該溫度。將該乙醇溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，同時(shí)攪拌(攪拌所需的力0.3kW/m3)，得到白色漿液。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1相比很優(yōu)秀)，將濕晶體按順序用冷乙醇、冷水和冷乙醇洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到97g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率97mol％)。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.5/0.5，還原型輔酶Q10的純度為99.2％。
實(shí)施例11向1000g丙酮加入氧化型輔酶Q10(100g；純度99.4％)、60g L-抗壞血酸和30g碳酸氫鈉，將混合物溶液在50℃下攪拌，進(jìn)行還原反應(yīng)。經(jīng)過(guò)45小時(shí)后，加入400g丙酮，同時(shí)保持該溫度。在攪拌的同時(shí)(攪拌所需的力0.3kW/m3)，將該丙酮溶液按10℃/小時(shí)的速率冷卻至2℃，得到白色漿液。漿液顯示良好的流動(dòng)性，容易從結(jié)晶容器上刷去。在減壓下過(guò)濾所得漿液(可濾性與實(shí)施例1一樣好)，將濕晶體按順序用冷丙酮、冷水和冷丙酮洗滌(用于洗滌的冷溶劑溫度為2℃)。此外，在減壓下干燥濕晶體(20-40℃，1-30mmHg)，得到93g白色干燥晶體(所分離產(chǎn)物的收率93mol％)。所有上述操作都是在氮?dú)夥罩羞M(jìn)行的。所得晶體的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.5/0.5，還原型輔酶Q10的純度為99.2％。
參照例1在25℃下，將還原型輔酶Q10(1g；還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.6/0.4)溶于20g表1所示不同溶劑中。在大氣中，在25℃下攪拌24小時(shí)后測(cè)量還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比。結(jié)果如表1所示。
表1

R還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比參照例2在35℃下，將還原型輔酶Q10(1g；還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比為99.6/0.4)溶于100g表2所示不同溶劑中。在大氣中，在35℃下攪拌24小時(shí)后測(cè)量還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比。結(jié)果如表2所示。
表2

R還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10重量比工業(yè)實(shí)用性具有上述構(gòu)造的本發(fā)明使借助可使用性和經(jīng)濟(jì)效率都優(yōu)異的方法以方便有效的方式得到高質(zhì)量還原型輔酶Q10晶體成為可能。
權(quán)利要求
1.至少包含還原型輔酶Q9和還原型輔酶Q10的混合物，其中所述還原型輔酶Q9的含量不超過(guò)重量比1％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的混合物，其中所述還原型輔酶Q9的含量不超過(guò)重量比0.52％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的混合物，其為結(jié)晶狀態(tài)。
4.高品質(zhì)的還原型輔酶Q10晶體，其中還原型輔酶Q9在晶體中的含量不超過(guò)重量比0.52％。
全文摘要
本發(fā)明提供適合于商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的生產(chǎn)還原型輔酶Q
文檔編號(hào)C07C43/00GK1861556SQ20061008765
公開(kāi)日2006年11月15日 申請(qǐng)日期2002年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月13日
發(fā)明者植田尚宏, 北村志郎, 上田恭義 申請(qǐng)人:株式會(huì)社鐘化