一種血清氨檢測(cè)試劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種血清氨檢測(cè)試劑，包括體積比為6:1的試劑1和試劑2。其中試劑1包括pH=8.0的tris緩沖液、乳酸脫氫酶、納米粒子、乙二胺四乙酸、還原型輔酶Ⅰ、牛血清蛋白和二磷酸腺苷；試劑2包括pH=8.0的tris緩沖液、α-酮戊二酸、谷氨酸脫氫酶、牛血清蛋白和二磷酸腺苷。本發(fā)明的試劑為雙試劑，具有操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，普遍適用于各種型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀的優(yōu)異性能，是一種值得推廣的新型氨檢測(cè)試劑。
【專利說(shuō)明】一種血清氛檢測(cè)試劑
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種血清氨檢測(cè)試劑。
[0002]

【背景技術(shù)】 人體內(nèi)血氨（PIasma ammonia)含量極微，但氨對(duì)人體有毒，能影響神經(jīng)細(xì)胞的新陳代 謝。血氨的來(lái)源增加和去路減少，都會(huì)引起血氨增高。正常情況下，氨在肝臟中轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩亍?嚴(yán)重肝臟疾病時(shí)，氨不能從循環(huán)中清除，引起血氨增高，高血氨有神經(jīng)毒，引起肝性腦病(肝 昏迷)，因此成人血氨測(cè)定對(duì)肝性腦病的診斷和鑒別具有極其重要的意義。此外，血氨測(cè)定 對(duì)兒科診斷Reye' s綜合征非常有用，該征有嚴(yán)重低血糖、大塊肝壞死、急性肝衰，并伴有 肝脂肪變性。在肝酶譜增高前，即見(jiàn)血氨增高。
[0003] 氨測(cè)定的方法有微量擴(kuò)散法、離子交換法、酶法和氨電極法等。目前應(yīng)用最多的方 法是酶法和基于離子選擇電極的血氨測(cè)定儀分析法。常規(guī)氨檢測(cè)試劑(谷氨酸脫氫酶兩點(diǎn) 法）為三試劑，主要存在以下缺陷：1.不適用于常見(jiàn)普通全自動(dòng)生化分析儀，目前醫(yī)療檢驗(yàn) 機(jī)構(gòu)中使用的全自動(dòng)生化分析儀只有兩個(gè)試劑盤，因此三試劑檢測(cè)試劑盒不能直接進(jìn)行全 自動(dòng)操作；2.使用過(guò)程繁瑣。使用前須手動(dòng)將試劑1中的a液和b液按照一定比例混合， 才能進(jìn)行全自動(dòng)操作，大大增加操作人員的工作量；3.在手工操作過(guò)程中容易造成操作失 誤，并存在不可避免的操作誤差。
[0004]


【發(fā)明內(nèi)容】
為克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種血清氨檢測(cè)試劑。該試劑為雙試劑， 具有操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，普遍適用于各種型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀的優(yōu)異性 能。
[0005] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 一種血清氨檢測(cè)試劑包括體積比為6:1的試劑1和試劑2 ; 所述的，試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) l〇-50mmol 乳酸脫氫酶 2KU 納米粒子 10_50mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 還原型輔酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 0. 5-lg 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol 去離子水加至IL ; 所述的，試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) l〇-50mmol a _麗戊二酸 30 mmol 谷氨酸脫氫酶 25 KU 牛血清蛋白 0. 5-lg 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol 去離子水加至1L。
[0006] 所述的，納米粒子為Y -Fe2O3納米粒子，其粒徑為3-50nm。
[0007] 優(yōu)選的，試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 3Ommol 乳酸脫氫酶 2KU 納米粒子 25mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 還原型輔酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 8 g 二磷酸腺苷 0. 4mmol 去離子水加至1L。
[0008] 優(yōu)選的，試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 2Smmol a _麗戊二酸 30 mmol 谷氨酸脫氫酶 25 KU 牛血清蛋白 〇.7g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去離子水加至1L。
[0009] 本發(fā)明的有益效果： 1)本發(fā)明的試劑在試劑1中添加乳酸脫氫酶，乳酸脫氫酶可去除血清中干擾氨測(cè)定的 丙酮酸，Y-Fe2O3納米粒子可增強(qiáng)乳酸脫氫酶的活性，使得反應(yīng)進(jìn)行的更徹底，有效去除丙 酮酸的干擾。
[0010] 2)本發(fā)明的試劑在試劑1中添加二磷酸腺苷作為酶反應(yīng)的活化劑，可減弱還原型 輔酶I對(duì)酶活性部位的結(jié)合，防止還原型輔酶I過(guò)量引起的抑制，使谷氨酸脫氫酶在堿性 緩沖液中的穩(wěn)定性增加，并縮短反應(yīng)時(shí)間。
[0011] 3)本發(fā)明的氨檢測(cè)試劑，將傳統(tǒng)的三試劑改為雙試劑，簡(jiǎn)化操作過(guò)程，減輕操作人 員的工作量，提高工作效率，普遍適用于各種型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀。
[0012] 4)本發(fā)明的氨檢測(cè)試劑，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，是一種值得推廣的新型氨檢測(cè)試 劑。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1本發(fā)明實(shí)施例1至3制得的試劑與對(duì)照組試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果圖。

【具體實(shí)施方式】
[0014] 為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明。
[0015] 實(shí)施例1 一種血清氨檢測(cè)試劑包括體積比為6:1的試劑1和試劑2 ; 試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 10mmol 乳酸脫氫酶 2KU Y -Fe2O3 納米粒子 50mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 還原型輔酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 5 g 二磷酸腺苷 0. 6 mmol 去離子水加至IL ; 試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 50mmo 1 a _麗戊二酸 30 mmol 谷氨酸脫氫酶 25 KU 牛血清蛋白 〇. 5 g 二磷酸腺苷 0. 6 mmol 去離子水加至1L。
[0016] 其中，Y -Fe2O3納米粒子的粒徑為3nm。
[0017] 實(shí)施例2 一種血清氨檢測(cè)試劑包括體積比為6:1的試劑1和試劑2 ; 試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 130mmol 乳酸脫氫酶 2KU Y -Fe2O3 納米粒子 25mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 還原型輔酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 8 g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去離子水加至IL ; 試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 2Smmol a _麗戊二酸 30 mmol 谷氨酸脫氫酶 25 KU 牛血清蛋白 〇.7g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去離子水加至1L。
[0018] 其中，Y -Fe2O3納米粒子的粒徑為28nm。
[0019] 實(shí)施例3 一種血清氨檢測(cè)試劑包括體積比為6:1的試劑1和試劑2 ; 試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 50mmo 1 乳酸脫氫酶 2KU Y -Fe2O3 納米粒子 IOmmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 還原型輔酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 Ig 二磷酸腺苷 0. I mmol 去離子水加至IL ; 試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 10mmol a _麗戊二酸 30 mmol 谷氨酸脫氫酶 25 KU 牛血清蛋白 Ig 二磷酸腺苷 0. I mmol 去離子水加至1L。
[0020] 其中，Y -Fe2O3納米粒子的粒徑為50nm。
[0021] 本發(fā)明的一種血清氨檢測(cè)試劑的使用方法為：選用具有雙試劑功能的全自動(dòng)生化 分析儀，如東芝40全自動(dòng)分析儀，配制試劑1和試劑2,先將試劑1加至全自動(dòng)生化分析儀 37°C預(yù)孵育3分鐘，再將試劑2加至試劑1中，混勻后于全自動(dòng)生化分析儀37°C延遲孵育5 分鐘，試劑1和試劑2的體積比為4:1，調(diào)整生化分析儀的參數(shù)，在樣品盤的對(duì)應(yīng)位置放置好 蒸餾水、朗道校準(zhǔn)品和樣本，具體操作如表1所示。
[0022] 表1氨檢測(cè)試劑的使用方法

【權(quán)利要求】
1. 一種血清氨檢測(cè)試劑，其特征在于，它包括體積比為6:1的試劑1和試劑2 ; 所述試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) l〇-50mmol/L 乳酸脫氫酶 2KU/L 納米粒子 10_50mmol/L 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol/L 還原型輔酶I 〇. 2 g/L 牛血清蛋白 0.5-1 g/L 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol/L 去離子水加至1L ; 所述試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) l〇-50mmol/L a _ 麗戊二酸 30 mmol/L 谷氨酸脫氫酶 25 KU/L 牛血清蛋白 0.5-1 g/L 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol/L 去離子水加至1L。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨檢測(cè)試劑，其特征在于，所述納米粒子為Y_Fe203納米粒 子，其粒徑為3-50nm。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨檢測(cè)試劑，其特征在于，所述試劑1的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 30mmol/L 乳酸脫氫酶 2KU/L 納米粒子 25mmol/L 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol/L 還原型輔酶I 〇. 2 g/L 牛血清蛋白 0.8 g/L 二磷酸腺苷 0. 4mmol/L 去離子水加至1L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氨檢測(cè)試劑，其特征在于，所述試劑2的組分為： tris 緩沖液（pH=8. 0) 25mmol/L a _ 麗戊二酸 30 mmol/L 谷氨酸脫氫酶 25 KU/L 牛血清蛋白 0. 7g/L 二磷酸腺苷 0. 4 mmol/L 去離子水加至1L。
【文檔編號(hào)】G01N33/52GK104374906SQ201410697748
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】靖百謙, 張永英, 譚柏清, 甘宜梧, 王綺, 趙新, 肖慧 申請(qǐng)人:山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司