專利名稱：甘草黃酮的提取純化方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種甘草黃酮(Glycyrrhiza Uralensis Fisch.，G.lnflata Bat.，G.glabra L.，等甘草)的提取及純化新方法，本法改革了國內外文獻所敘述的以溶劑萃取后相分配及以大孔徑樹脂吸附雜質等，以獲得甘草黃酮，代之以使用膜技術或/和層析進行純化，使生產(chǎn)工藝大為簡便，流程縮短，收率提高，成本降低。
此工藝十分繁復，流程多，生產(chǎn)周期長，且得率低(按甘草黃酮含量而浮動)，并要消耗大量溶劑和昂貴的吸附材料。
所述的膜分離方法是使用孔徑為分子量1000～15000的膜。該超濾壓力為1～10公斤(kg)，換言之為0.1-1mPa.。
所述的溶劑萃取是用有機溶劑及它們的混合溶劑在回流溫度下萃取或0～40℃時冷浸或滲漉萃取，萃取時間為1～48小時。所述的有機溶劑可以是乙醚、乙醇、氯仿、醋酸乙酯、石油醚、苯等。
本發(fā)明的方法中，所述的過濾通常用濾布予以粗過濾就能滿足要求。也可以用分子篩、硅藻土或微孔膜進行過濾。
所述的濃縮可以是低溫濃縮、冷凍干燥、減壓濃縮或粉末噴霧干燥的方法。
經(jīng)濃縮所得的甘草黃酮可以進一步柱層析純化，所述的層析柱可以采用硅膠柱、聚酰胺柱或分子篩柱等柱層析的方法。層析溶劑為包括醇、烷烴、酯、氯代烴，芳香烴等在內的一種或二種混合有機溶劑。
此工藝所得產(chǎn)品和舊工藝所得產(chǎn)品，經(jīng)HPLC和紅外、質譜、核磁等光譜數(shù)據(jù)核證得到確認，無黃酮丟失。本發(fā)明所采用的工藝大為簡便，收率提高。由于節(jié)省了大量溶劑和消耗性吸附材料，成本也大為降低。
其中，①甘草酸；②芒柄花黃素Formononetin⑧甘草啶Licoricidin；④甘草醇Glycyrol⑤甘草利酮Licoricone⑥光甘草定Glabridine；⑦光甘草醇Glabrol；⑧HISPA光甘草定HISPA Glabridin；⑨4′-O-甲基光甘草啶(4′-O-Methylglabridin)；⑩3′-甲氧基光甘草啶(3′-Methoxyglabridin)。
實施例2按實施例1的操作得乙醇提取液，以0.5μM微孔膜作預濾，然后以2000分子量膜進行超濾，(外壓4kg，溫度25～40℃)濾液經(jīng)減壓(溫度35～100℃下)濃縮得產(chǎn)品甘草黃酮2.3公斤。
實施例3按實施例1操作，先以水提取除去極性有機物質，干燥后再以乙醇萃取，萃取液以0.5μM微孔膜過濾，然后以10000分子量膜進行超濾，(外壓3kg，溫度25～30℃)濾液經(jīng)減壓濃縮(溫度35～100℃下)，得產(chǎn)品甘草黃酮1.56公斤。
實施例45g上述實施例3萃取得到的粗甘草黃酮，用氯仿溶解，加入含250ml聚酰胺柱，然后用氯仿-甲醇(94∶4～80∶20)進行洗脫，得各種活性甘草黃酮，共1.56g(化合物1～10)。
實施例55g上述實施例3萃取得到的粗甘草黃酮，用氯仿溶解，加入裝有150g硅膠的柱，用氯仿-甲醇(99∶1～90∶10)進行洗脫，得各種(化合物1～10)含量不同的甘草黃酮。
實施例6以上實施例1采用西北蘭州產(chǎn)甘草所得甘草黃酮經(jīng)高壓液相色譜(HPLC)并和標準樣品對照得譜圖如

圖1所示。
HPLC條件如下
儀器Agilent 1100 Series，流速1.8ml/min，柱150×4.6mm 5μ C18， 進樣量0.4mg/ml；10μl，流動相CH3CN∶2％CH3COOH＝1∶1， 壓力150bar，波長282nm， 滯留時間2.6min。
經(jīng)層析得樣品，分析數(shù)據(jù)如下甘草醇(Glycyrol)紫外，u.vλETOHmaxnm228，247，256inf，349，358inf.
紅外，RνKBrmaxcm-13400，2920，1715，1612，1595，1516，1446.
核磁，N.M.Rδ4-DXSOPPm1.62(3H，S，CH3ofγ，γ-dimethylallyl)，1.73(3H，S，CH3ofγ，γ-dimethylallyl)，3.24(2H，d，8，CH2ofγ，γ-dimethylallyl)，3.86(3H，S，Ome)，5.15(1H，b.s，OH-5 and OH-4′，exchangeable with D.Q).
質譜，M.S m/e366(M+).
甘草利酮(Licoricone)紫外，UVλETOHmaxnm(ε)238(20640)，248(19720)，284(10240)，302(7800)；紅外，λEtOH-NaoaCmaxnm250，253(inf.)，303(sh.)，330.IRγchclmaxcm-13500，3160，1631，1612，1585，1570；γKBrmaxcm-13140，1628，1611，1584.
核磁NMR(60MC，dδ-DMSO)δ1.63(3H，br.s)，1.69(3H，br.s，-CH2-CH＝C(CH3)2，3.20(2H，br.d，J＝7Hz，-CH2-CH＝C(CH3)2)，3.40(3H，s)(OCH3)，5.14(1H，brt，J＝7Hz，-CH2＝CH-C(CH3)2)，6.35(1H，s，H-3)，6.89(1H，d，J＝2.5Hz，H-8)，6.96(1H，d.d，J＝9，2.5Hz，H-6)，7.92(1H，d，J＝9Hz，H-5)，8.01(1H，s，H-2)，9.2(1H，br.)，10.6(1H，br.)(-OH，disappeared after the addition of D2O).
質譜，M.S m/e382(M+，base peak)，367(M-CH3，57％)，351(m-och3，44)，327(M-CH＝C(CH3)2，17)，314(M-CHCH＝C(CH3)2，19)，257(25)，137(37).元素分析計算值C22H22O6C，69.10；H，5.80.分析值C，68.95；H，5.87.
光甘草定(Glabridin)紫外，UVλEtohmaxnm(logε)281.5(4.18)，288(4.13inf)，312(3.47sh.).
紅外，IRγKBrmaxcm-13270，2940，1611，1587，1526，1480.
核磁，NMRδCDCLPPM1.42(3H×2，s，CH3-2″)，2.87(1H，d，6.0，H-4eq)，2.89(1H，d，10.0，H-4ax)，3.3-3.4(1H，m，H-3ax)，4.00(1H，t，10，H-2ax)，4.35(1H，q，10 and 3.5，H-2eq)，5.53(1H，d，10，H-3″)，5.80(2H，broad s，OH-2′and 4′，disappeared by the addition of D2O)，6.23(1H，d，2，H-3′)，6.31(1H，d.d，8 and 2，H-5′)，6.34(1H，d，8H-6)，6.61(1H，d，10，H-4″)，6.76(1H，d，8，H-5)，6.86(1H，d，8，H-6′).M.S m/e324(M+).
元素分析計算值C20H20O4C，74.05；H，6.22.分析值C，74.33；H，6.23光甘草醇(Grabrol)紫外，UVλEtohmaxnm(logε)281(4.35)，312.5(4.06).
紅外，IRγKBrmaxcm-13360，2920，1649，1586，1505，1442.
核磁，NMRδCDCLPPM1.70(3H×2，broad s，CH3of dimethylallyl)，1.76(3H×2，broad s，CH2of dimethylallyl)，2.8-2.9(2H，m，H-3)，3.38(4H，d，7，benzylic of dimethylallyl)，5.3(2H，m，H-2 andolefinic of dimethylallyl)，5.54(1H，s，OH-4′)，6.48(1H，s，OH-7，exchangeable with D2O)，6.52(1H，d，8.5，H-6)，6.80(1H，d，8.5，H-5′)，7.18(1H，d.d，8.5)HISPAGLABRIDIN A；ir(KBr)υmax3500，3350，2920，1632，1610，1582，1500，and 1472cm-1；pmr(CDCL3，100mHz)δ1.38(s，6H，C(CH3)2)，1.75(s，3H，CH3)，1.81(s，3H，CH3)，2.85(dd，1H，J＜1Hz，A of ABMXX′)，2.88(dd，1H，J＝10Hz，J＜1Hz，B of ABMXX′)，3.30-3.50(m，1H，MofABMXX′)，3.42(br.d.，2H，J＝7Hz，CH2-CHC(CH3)2)，3.97(t，1H，J＝10Hz，X of AMBXX′)，4.36(br.dd，1H，J＝10 and 4Hz，X′of ABMXX′)，4.87(s，1H，exchange D2O)，5.24(br.t.，1H，J＝7Hz，CH2-CHC(CH3)2)，5.42(s，1H，exchangesD2O)，5.51(d，1H，J＝10Hz，HC＝)，6.32(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.35(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.65(d，1H，J＝10Hz，HαC＝)，and 6.78(d，2H，J＝8Hz，2Xhc＝)；紫外，uv λmax(MeOH)281nm(logε4.05)，290infl.(3.95)and 312(3.14)；質譜，ms，m/e 392(M+，23％)，377(76％)，204(5％)，189(30％)，187(39％)，174(23％)，173(100％)，and 47(19％)；ord(C＝0.000036，mEoh)，[φ]306O，[φ]295+2725，[φ]278-7625，[φ]268-1850，元素分析計算值C25H28O4C，76.50；H，7.19.C.H分析值C，76.47；H，7.39.
HISPAGLABRIDIN B；紅外，ir(KBr)υmax3400，1635，1605，1583，1497，and 1475cm-1；pmr(CDCL3，60mHz)δ1.40(s，12H，2＝C(CH3)2)，2.83(2H，AB of ABMXX′)，3.3-3.5(1H，M of ABMXX)，3.97(1H，X ofABMXX′)，4.33(1H，X′of ABMXX′)，5.00(s，1H，exchangesD2O)，5.47(d，1H，J＝9.5Hz，HβC＝)，5.50(d，1H，J＝10Hz，HβC)，6.13(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.28(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.57(d，1H，J＝9.5Hz，HαC＝)，6.60(d，1H，J＝10Hz，HαC＝)，6.71(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，and 6.74(d，1H，J＝8Hz，HC＝)；紫外，uvλmax(MeOH)280nm(logε4.17)，290infl.(4.11)and 309(3.67)；ms，m/e390(M+，29％)，375(100％)，202(2％)，189(29％)，187(67％)，180(38％)，173(100％)，and 147(17％)；ord(C＝0.000043，MeOH)，[φ]310-8350，[φ]300-10875，[φ]292O，[φ]280+14500，and[φ]264O.
元素分析計算值C25H24O4C，76.88；H，6.71.C.H分析值C，77.16；H，7.21.
3′-甲氧基光甘草定(3′-METHOXYGLABRIDIN)；紅外，ir(KBr)maxυ3480，2980，2940，2850，1630，1610，1580，1508 and1476cm-1；pmr(CDCL3，100mHz)δ1.38(s，6H，C(CH3)2)，2.87(1H，A of ABMXX′)，2.91(1H，B ofABMXX′)，ca.3.5(m，of M of ABMXX′)，3.78(s，3，OCH3)，4.02(1H，X of ABMXX′)，4.37(1H，X′of ABMXX′)，5.51(d，1H，J＝10Hz，HβC＝)，5.58(s，2H，2xOH，D2Oexchangeable)，6.34(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.38(d，1H，J＝8.5Hz，HC＝)，6.58(d，1H，J＝8.5Hz，HC＝)，6.65(d，1H，J＝10Hz，HαC＝)，6.78(d，1H，J＝8Hz，HC＝)；紫外，uvλmax(MeOH)280nm(logυ3.98)，289 infl.(3.89)and 311(3.36)(uv maxima werenot shifted by an addition of excess AlCl3solution.)；ms，m/e354(M+，23％)，339(78％)，189(10％)，187(29％)，173(100％)，166(5％)，153(18％)and 147(6％)；元素分析計算值C21H22O5C，71.19；H，6.25.分析值C，71.21；H，6.42.
4′-O-甲基光甘草定(4′-O-METHYLGLABRIDIN)；紅外，ir(KBr)υmax 3410，2980，2920，2860，1615，1600，1583 and1515cm-1；pmr(CDCL3，100mHz)δ1.40(s，6H，C(CH3)2)，290(2H，AB of ABMXX′)，3.3-3.6(1H，M of ABMXX′)，3.70(s，3H，OCH3)，4.05(1H，X of ABMXX′)，4.38(1H，X′ofABMXX′)，5.20(s，1H，exchangeable D2O)，5.50(d，1H，J＝10Hz，HβC＝)，6.29(d，1H，J＝2Hz，HC＝)，6.32(d，1H，J＝8Hz，HC＝)，6.41(dd，1H，J＝2 and 8Hz，HC＝)，6.61(d，1H，J＝10Hz，HαC＝)，6.77(d，1H，J＝8Hz，HC＝)and 6.96(d，1H，J＝8Hz，HC＝)；紫外，uvλmax(MeOH)281nm(logε4.07)，290 sh(3.96)and 312(3.34)；ms，m/e338(M+，25％)，323(91％)，187(32％)，173(100％)，150(12％)，149(22％)and 137(15％)；元素分析計算值C21H22O4C，74.53；H，6.55；分析值C，74.47；H，6.51.
異甘草黃酮醇核磁，NMRδH(DMSO-d6)1.68(6H，s，(CH3)2O＝CHCH2)，3.28(2H，d，J＝7Hz，(CH3)2C＝CHCH2)，5.28(1H，t，J＝7Hz，(CH3)2C＝CHCH2)，6.15(1H，d，J＝2Hz，6-H)，6.37(1H，d，J＝2Hz，8-H)，6.90(1H，d，J＝8Hz，5′-H)，7.85(1H，dd，J＝8，2Hz，6-H)，7.87(1H，d，J＝2Hz，2′-H)，9.16，9.98，10.64，12.44(均為1H，bs，OH，D2O交換消失).
質譜，M.S.m/z354.1103(M+-C4H7)，285.0345(M+-C5H9)，269.0482，189.0939，189.0939，153.0188，134.0313，106.0195.
甘草西定(Licoricidin)[α]25D+19.26(MeOH，C＝1)，UVλEtOHmaxnm(logε)282(3.86)。I.R.γKBrmaxcm-13500，3285，1615，1504.NMR(DMSO-d6，δ)1.70(6H.br.S. Ar)，3.25(2H，d，J＝6Hz，-CH2-Ar)，5.12(1H，t，J＝6Hz，-CH＝C)，5.00(1H，J＝6Hz -CH＝C)，3.63(3H，s，OCH3)，6.08(1H，s)，6.23(1H，d，J＝8Hz)，6.67(1H，d，J＝8Hz)，5.36，4.80(各1H，dd，J＝10，3Hz)，3.84(1H，d，J＝10Hz)，2.80(2H，m)。M.S.m/z424.2192(分子式為C26H32O5)，NMR(CDCl3，δ)，1.61(6H，br.s)，1.67(6H，br.s)，2.20，2.24(各3H，s，3xCOCH3)，2.80(2H，m)，3.08，3.15(各1H，d，J＝6Hz)，3.64(3H，s)，3.90(1H，d，J＝10Hz)，4.20(1H，dd，J＝10，3.5Hz)，6.32(1H，s)，6.95(1H，d，J＝8Hz)，7.02(1H，d，J＝8Hz)。
芒柄花黃素(Formononetin)UVλEtOHmaxnm(logε)255(4.45)，310(4.08)。M.S.m/z268(M+)，253，240，225，132。NMR(DMSO-d6，δ)3.73(3H，s)，6.8-6.96(4H，H3′，5′，6，8)，7.43(2H，d，J＝8Hz，H2′.6′)，7.90(1H，d，J＝8Hz)，8.26(1H，s，H2)。
元素分析計算值C21H22O4·1/2H2OC，72.63；H，6.67分析值c，72.82；72.71；H，7.03，6.91UVλMeoHnm(logε)256(4.04)，315(4.15)，380(4.46)；λMeONanm(logε)252(4.07)，355(4.04)，456(4.65)IRυKClmax1576，1595，1613，1660，3190-3280厘米-1NMRM.S.m/eM+338(M+，)，307(M-OCH3)，121(HO-C6H4-C≡O+，).
權利要求
1.種甘草黃酮的提取純化的方法，包括甘草根干燥、粉碎、溶劑萃取、過濾和濃縮，其特征是溶劑萃取液過濾后用膜進行超濾，再濃縮得產(chǎn)品甘草黃酮。
2.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的溶劑萃取是用有機溶劑及它們的混合溶劑在回流溫度下萃取或0～40℃時冷浸或滲漉 萃取，萃取時間為1～48小時。
3.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的超濾膜具有孔徑為分子量1000-15000的膜。
4.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的超濾壓力為0.1～1mPa.。
5.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的濃縮是低溫濃縮、冷凍干燥、減壓濃縮或粉末噴霧干燥的方法。
6.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的過濾通是用濾布予以粗過濾。
7.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是所述的經(jīng)超濾、濃縮所得的甘草黃酮再經(jīng)柱層析純化。
8.如權利要求1所述的一種甘草黃酮的提取純化的方法，其特征是使用的層析為聚酰胺或硅膠或分子篩層析，使用的層析溶劑為有機溶劑(包括醇、烷烴、酯、氯化烴、芳香烴等)或它們的混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種甘草黃酮的提取純化方法，本發(fā)明改進了國內外文獻所敘述的以溶劑萃取后相分配及以大孔徑樹脂吸附雜質等制備得甘草黃酮的方法，代之以使用膜技術得甘草黃酮或再進行層析純化，使生產(chǎn)工藝大為簡便，流程縮短，收率提高，成本降低。
文檔編號C07D311/30GK1477104SQ03141529
公開日2004年2月25日 申請日期2003年7月11日 優(yōu)先權日2003年7月11日
發(fā)明者朱育新, 孫東海 申請人:上海奧利實業(yè)有限公司