紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 酢漿草有紅花酢漿草、紫葉酢漿草等多個變種，多為酢漿草科多年生宿根草本植 物。酢漿草廣布于世界各地，在中國，主要分布于華北、華中、華南、江西、四川和云南等地， 是一種極好的地被和盆栽植物。酢漿草全草均可入藥，其性寒、味酸，歸肝、小腸經(jīng)，具有清 熱解毒、消炎止痛、利濕消腫、涼血散瘀之功效。臨床上主要用于治療肺炎、扁桃體炎、急性 肝炎和腮腺炎等多種疾病。鄂西土家常用于內(nèi)服治療跌打青腫、咽喉腫痛、祛痰平喘、痢疾、 黃疸、尿路感染、結(jié)石、小兒肝熱和驚風等;外用治跌打損傷、毒蛇咬傷、腳癬和濕疹等癥。
[0003] 黃酮類化合物是一類在植物中分布很廣而且重要的多酚類天然產(chǎn)物，因黃酮類化 合物的結(jié)構(gòu)與來源不同，溶解特性差異也很大。對于黃酮苷類以及極性稍大的苷元(如羥基 黃酮、雙黃酮等），一般可用水、甲醇、乙醇等進行提取。研究表明，天然植物中提取出來的黃 酮類化合物能有效清除多種自由基，具有抗氧化、抗腫瘤、消炎及免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等生物 活性，在當今科學界抗疲勞、抗衰老研究領(lǐng)域具有十分重要的應(yīng)用價值和研究意義，但是關(guān) 于紅花酢漿草黃酮類物質(zhì)的提取條件研究卻少有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法。
[0005] 本發(fā)明采用單因素實驗法，研究不同的提取劑種類及濃度、料液比、提取溫度、提 取時間對黃酮類化合物提取的影響，先確定各個顯著影響因素的范圍，然后通過4因素3水 平正交實驗分析法，確定紅花酢漿草黃酮類化合物提取的最佳條件。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于該方法的具體步驟為： a. 將紅花酢漿草干燥后研磨成粉； b. 將步驟a所得紅花酢漿草粉浸沒在乙醇溶液中，浸提后得到提取液； c. 將步驟b所得提取液離心分離除去沉淀，得到上清液； d. 將步驟c所得上清液濃縮，脫除溶劑，再冷凍至干，得紅花酢漿草黃酮類化合物。
[0007] 上述步驟b的具體步驟為:將紅花酢漿草粉浸沒在體積百分比濃度為60~80 %乙 醇溶液中，其中紅花酢漿草粉質(zhì)量與乙醇溶液的體積的比值范圍為1: (40~60)g/mL，浸提 1.0~2.0小時后得到提取液，浸提溫度為60~80°C。
[0008] 上述的步驟c的具體步驟為:將提取液采用高速離心機離心除去沉淀;離心機轉(zhuǎn)速 為4000-10000 r/min，離心時間為10-15 min;取出上清液，殘渣再重復提取2次，將3次得到 的上清液合并。
[0009] 上述的步驟d的具體步驟為:將上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，其中 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空度為〇 .09 MPa，水浴溫度控制在50~55°C之間，當脫溶瓶中剩余料液能傾 倒出來時，停止脫溶，將脫除溶劑后的料液倒入表面皿中，置于真空冷凍干燥機中冷凍至 干，得紅花酢漿草黃酮類化合物。
[0010] 本發(fā)明新穎之處和優(yōu)點在于:本發(fā)明首次對紅花酢漿草黃酮類化合物提取方法和 工藝進行研究，通過粉碎、乙醇提取、高速離心去沉淀、濃縮、脫溶、干燥等工藝制備黃酮類 化合物，有效提高了產(chǎn)品的得率和品質(zhì)，從而使紅花酢漿草不僅可以觀賞，也可以作為黃酮 類化合物提取的原料，為紅花酢漿草的藥物及抗氧化作用研究提供參考，加大了紅花酢漿 草的利用范圍。
【附圖說明】
[0011] 圖1為蘆丁標準曲線圖。
[0012] 圖2為提取劑種類對黃酮類化合物提取的影響。
[0013]圖3為乙醇濃度對黃酮類化合物提取的影響。
[0014] 圖4為提取溫度對黃酮類化合物提取的影響。
[0015] 圖5為料液比對黃酮類化合物提取的影響。
[0016] 圖6為提取時間對黃酮類化合物提取的影響。
【具體實施方式】
[0017] 實施例一:黃酮類化合物含量測定方法 首先制定蘆丁標準曲線:取蘆丁標準品0.02 g，置于100 mL容量瓶內(nèi)，用70% (v/v) 乙醇溶解并定容至刻度。分別精確吸取〇 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL蘆丁標準液于10 mL的刻度具塞試管中，各管補純水至2.0 mL，加入5%(w/v)亞硝酸鈉 0.3 mL，搖勾后放置6 min，加入10% (w/v)三氯化錯0.3 mL，搖勾再放置6 min，加入4% (w/v)氫氧化鈉4 mL，最后用純水定容，靜止10 min，510 nm處測其吸光度，建立回歸方程： A(吸光度)=KC(蘆丁濃度)+b。根據(jù)此方法制得蘆丁標準曲線。
[0018] 樣品黃酮類化合物的測定方法：取0.1 mL樣品提取液中于10 mL試管中，補純水 至2.0 mL，加入5%亞硝酸鈉0.3 mL，搖勻后放置6 min，加入10%三氯化鋁0.3 mL，搖 勾再放置6 min，加入4%氫氧化鈉4 mL，最后用純水定容，靜置10 min，510 nm處測其吸光 度。平行測定3組。
[0019] 實施例二:提取劑種類對黃酮類化合物提取的影響 考察在提取溫度為60°C，提取時間為2.0 h，料液比為1:50，研究甲醇、乙醇、水、正丁醇 和乙酸乙酯作為提取劑對黃酮類化合物提取的影響。結(jié)果表明不同提取溶劑對紅花酢漿草 黃酮類化合物的提取有著較大的影響。乙酸乙酯作為提取劑提取黃酮效果較差，顯著低于 其他溶劑提取效果，甲醇提取效果最好，但甲醇有毒性且成本較高，而乙醇的提取效果較好 而且無毒、安全環(huán)保。因此從提取效果和安全角度來說，乙醇都是紅花酢漿草黃酮類化合物 提取的最佳試劑。（見圖2) 實施例三:乙醇濃度對黃酮類化合物提取的影響 在篩選到最佳提取溶劑的基礎(chǔ)上，研究該試劑不同濃度下（40%、50%、60%、70%、80%)對 黃酮類化合物含量的影響，選取適合的濃度。結(jié)果表明，隨著乙醇濃度增高，黃酮類化合物 的提取含量增加，在乙醇濃度為70%時達到最大值，但乙醇濃度超過70%時，提取的黃酮類 化合物有所下降，表明紅花酢漿草黃酮類化合物提取以70%乙醇為佳。（見圖3) 實施例四：提取溫度對黃酮類化合物提取的影響 以70%乙醇作為提取劑，1:50作為料液比，提取時間為2.0 h，研究提取溫度40、50、60、 70、80°C對黃酮類化合物含量的影響，找出最佳的提取溫度。結(jié)果表明，隨著提取溫度的增 加，黃酮類化合物的含量不斷增加，當提取溫度高于70°C，提取效果變化不大。因此，黃酮提 取溫度最佳為70°C。（見圖4) 實施例五:料液比對黃酮類化合物提取的影響 以70%乙醇作為提取劑，提取溫度為70°C，提取時間為2.0 h，考察料液比（紅花酢漿草 粉的質(zhì)量：乙醇的體積，g/mL) 1:30、1:40、1:50、1:60、1:70對黃酮類化合物含量的影響?？?見隨著乙醇體積的增加，紅花酢漿草中黃酮類化合物的含量不斷增加，但當料液比達到1: 50時，黃酮類化合物的含量變化不大。所以紅花酢漿草提取黃酮類化合物時料液比可選取 1:50。（見圖 5) 實施例六:提取時間對黃酮類化合物提取的影響 以70%乙醇作為提取劑，1:50作為料液比，提取溫度為70°C，研究提取時間0.5 h、l .0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h對黃酮類化合物含量的影響，找出最佳的提取時間。結(jié)果表明：提取 時間在0.5 h-2.0 h期間，隨著時間的增加，黃酮類化合物提取含量不斷增加，因此提取時 間以2.0 h為最佳。（見圖6) 實施例七:正交實驗確定提取條件最優(yōu)組合 為了確定紅花酢漿草中黃酮類化合物的最佳提取工藝，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，從提 取時間、料液比、乙醇濃度和提取溫度這四個因素中挑選出單因素試驗結(jié)果中提取效果比 較好的3個水平進行試驗，按正交試驗設(shè)計篩選最佳提取條件，黃酮類化合物提取條件的正 交試驗因素和水平如表1所示。
[0020] 從表2的結(jié)果可以看出，提取時間、料液比、乙醇濃度和提取溫度這4個因素對紅花 酢漿草中黃酮類化合物提取效果影響的大小次序依次為：乙醇濃度〉料液比〉提取溫度〉提 取時間。黃酮類化合物提取的最優(yōu)組合為A 2B2C2D2，即乙醇濃度70%，料液比1: 50，提取時間 1.5 h，提取溫度70°C。在此優(yōu)化條件下進行提取，黃酮類化合物的含量為45.60 mg/g。



【主權(quán)項】
1. 一種紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于該方法的具體步驟為： a. 將紅花酢漿草干燥后研磨成粉； b. 將步驟a所得紅花酢漿草粉浸沒在提取劑中，浸提后得到提取液； c. 將步驟b所得提取液離心分離除去沉淀，得到上清液； d. 將步驟c所得上清液濃縮，脫除提取劑，再冷凍至干，得紅花酢漿草黃酮類化合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于所述步驟b 的具體步驟為:將紅花酢漿草粉浸沒提取劑中在其中紅花酢漿草粉質(zhì)量與提取劑的體積的 比值范圍為1:(40~60)g/mL，浸提1.0~2.0小時后得到提取液，浸提溫度為60~80°C。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于所述提取 劑為：甲醇、乙醇、水、正丁醇或乙酸乙酯。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于所述提取 劑為體積百分比濃度為60~80 %的乙醇水溶液。5. 權(quán)利要求1所述的紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于所述的步驟c的 具體步驟為:將提取液采用高速離心機離心除去沉淀;離心機轉(zhuǎn)速為4000-10000 r/min，離 心時間為10-15 min;取出上清液，殘渣再重復提取2次，將3次得到的上清液合并。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，其特征在于所述的步 驟d的具體步驟為:將上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，其中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空度 為0.09 MPa，水浴溫度控制在50~55°C之間，當脫溶瓶中剩余料液能傾倒出來時，停止脫 溶，將脫除溶劑后的料液倒入表面皿中，置于真空冷凍干燥機中冷凍至干，得紅花酢漿草黃 酮類化合物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法，該方法的步驟如下：選取紅花酢漿草研磨成粉，在紅花酢漿草粉中加入乙醇溶液浸提后得到提取液，將提取液采用高速離心機離心除去沉淀，得到上清液，將上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進行濃縮，脫除溶劑，置于真空冷凍干燥機中冷凍至干，得紅花酢漿草黃酮提取物。對紅花酢漿草黃酮類化合物的提取方法和工藝進行研究,以期為進一步研究紅花酢漿草黃酮類化合物的抗氧化及藥物作用提供參考，加大了紅花酢漿草的利用范圍。本工藝簡單可行,有較好的參考價值。
【IPC分類】A61K36/185
【公開號】CN105708872
【申請?zhí)枴緾N201610175604
【發(fā)明人】廖鮮艷, 王亞茜, 許慧敏, 陳楠楠, 黃俊逸
【申請人】上海大學