一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，解決現(xiàn)有技術(shù)中動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率和死亡率不斷增高，醫(yī)治手段不足的技術(shù)問題。一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，包括：羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為25?100mg，其中蘆丁占羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7?15％；所述羅布麻葉總黃酮是由下述方法制備得到：將干燥的羅布麻葉粉碎過20?50目篩成藥粉，用10倍量的濃度為75％的乙醇加熱回流2h，提取2次，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，得到濃縮液；將濃縮液用D101大孔樹脂進(jìn)行純化，先用水洗，再用50％乙醇洗脫，濾液合并、濃縮即得羅布麻葉總黃酮。該藥物能夠改善胸主動(dòng)脈壁病變，改善血脂指標(biāo)，具有較好的抗AS作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有明顯的治療作用。
【專利說明】
一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物，具體涉及一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 羅布麻葉，別名：茶葉花、澤漆麻，屬于被子植物門，雙子葉植物綱。羅布麻的葉子 多皺縮卷曲，有的破碎。完整葉片展平后呈橢圓狀披針形或卵圓狀披針形，長2~5cm，寬0.5 ~2cm，淡綠色或灰綠色，質(zhì)脆，氣微，味淡。我國不同地區(qū)出產(chǎn)的羅布麻葉中大多含有總黃 酮和蘆丁，一般用來制備治療高血壓和心腦血管疾病的藥物。
[0003] 動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是指在動(dòng)脈及其分支的動(dòng)脈壁內(nèi)膜及內(nèi)膜 下有脂質(zhì)沉著（主要是膽固醇及膽固醇酯），同時(shí)伴有中層平滑肌細(xì)胞移行至內(nèi)膜下增殖， 使內(nèi)膜增厚，形成黃色或灰黃色狀如粥樣物質(zhì)的斑塊。目前，AS是嚴(yán)重威脅人類健康的疾 病，心、腦、腎是主要的AS靶器官，可導(dǎo)致心肌梗死、缺血性心肌病，腦卒中和慢性腎病，最終 導(dǎo)致多器官功能衰竭和死亡。在西方發(fā)達(dá)國家其年死亡數(shù)可以占到總死亡數(shù)的1/3左右，占 心臟病死亡數(shù)的50%-75%，據(jù)近年來WHO統(tǒng)計(jì)冠心病是目前世界上最常死亡原因，超過所 有腫瘤的總和，列死因的首位。而在我國本病不如歐美多見，但近30年來其發(fā)病率和死亡率 正迅速增高，已嚴(yán)重威脅到我國國民生活水平和質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決現(xiàn)有技術(shù)中動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率和死亡率不斷增高，醫(yī)治手段不 足的技術(shù)問題，提供一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案具體如下：
[0006] -種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，包括:羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為25-100mg，其中蘆 丁占羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7-15% ;
[0007] 所述羅布麻葉總黃酮是由下述方法制備得到：
[0008] 將干燥的羅布麻葉粉碎過20-50目篩成藥粉，用10倍量的濃度為75 %的乙醇加熱 回流2h，提取2次，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，得到濃縮液;將濃縮液用DlOl大孔樹 脂進(jìn)行純化，先用水洗，再用50%乙醇洗脫，濾液合并、濃縮即得羅布麻葉總黃酮。
[0009] 在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 50-100mg〇
[0010] 在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 50mg〇
[0011] 在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 60mg〇
[0012] 在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 75mg〇
[0013] 在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 90mg〇
[0014]在上述技術(shù)方案中，所述治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為 IOOmg0
[0015]服用方法:每日兩次，早晚各服用一次，溫水沖服，每次服用50mg，四周為一個(gè)療 程。
[0016] 本發(fā)明具有以下的有益效果：
[0017] 本發(fā)明提供的治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物是以羅布麻葉為原材料，以乙醇為提取溶 劑，采用最佳的溶劑濃度、提取溫度、提取時(shí)間和溶劑用量提取得到羅布麻葉總黃酮，其中 蘆丁占羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7-15%。該方法制備得到的羅布麻葉總黃酮制備的治 療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物能夠改善胸主動(dòng)脈壁病變，減少胸主動(dòng)脈內(nèi)皮下泡沫細(xì)胞及脂質(zhì)空 泡，并可降低血清中LDL-C、TC、TG水平以及hs-CRP的含量，提高HDL-C，改善血脂指標(biāo)，具有 較好的抗AS作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化具有明顯的治療作用。含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為50-IOOmg的藥物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療效果更明顯，可以抑制p38MAPK的磷酸化，降低NF-kB、 IL-6蛋白的表達(dá)。含有羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為IOOmg的藥物對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的治療效果 最佳。
【附圖說明】
[0018] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0019] 圖1為各組大鼠胸主動(dòng)脈的病理學(xué)觀察(HE，X200)圖。
[0020] 圖2為各組大鼠胸主動(dòng)脈中p38MAPK磷酸化、NF-Kb及IL-6的表達(dá)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明做以詳細(xì)說明。
[0022] 實(shí)施例1
[0023]治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為25mg，其中蘆丁占羅布麻 葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%。
[0024] 實(shí)施例2
[0025] 治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為50mg，其中蘆丁占羅布麻 葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%。
[0026] 實(shí)施例3
[0027] 治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為60mg，其中蘆丁占羅布麻 葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%。
[0028] 實(shí)施例4
[0029] 治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為75mg，其中蘆丁占羅布麻 葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%。
[0030] 實(shí)施例5
[0031] 治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為90mg，其中蘆丁占羅布麻 葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%。
[0032] 實(shí)施例6
[0033] 治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物包含羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為100mg，其中蘆丁占羅布 麻葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%。
[0034] 以下通過實(shí)驗(yàn)并觀察療效，進(jìn)一步闡述本發(fā)明治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物的有益效 果。
[0035] 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、AS模型制備及取材
[0036] 72只Wistar大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為6組(每組12只），分別為：正常對(duì)照 組，模型對(duì)照組，陽性藥對(duì)照組，低、中、高劑量觀察組。除正常對(duì)照組外其他各組連續(xù)注射 VD3 3d(共70U · kg力，然后喂飼高脂飼料(高脂飼料組成:80.8%基礎(chǔ)飼料，3.5%膽固醇、 10%豬油、0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、5%白砂糖)9周。第10周開始低、中、高劑量觀察 組每日分別灌胃實(shí)施例1、2和6制備的治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物25、50、IOOmg · kg<，陽性藥 對(duì)照組灌胃辛伐他丁4mg · kg^1，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給予同體積的生理鹽水，1次· d 一 S連續(xù)給藥4周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組大鼠經(jīng)水合氯醛麻醉后，眼球取血，置于離心管中，4°C、 3000rpm離心15min，分離血清，放入EP管中，-70 °C凍存。取大鼠胸主動(dòng)脈，一部分放入10 % 福爾馬林溶液中固定，供病理學(xué)觀察所用;一部分放入-80°C冰箱中，供相關(guān)蛋白檢測(cè)之用。 [0037] 2、大鼠胸主動(dòng)脈病理學(xué)觀察
[0038] 取固定好的胸主動(dòng)脈，制備石蠟標(biāo)本、切片，蘇木精染色lOmin，流水稍洗，體積分 數(shù)1 %的鹽酸酒精分化，流水沖洗數(shù)分鐘，伊紅染色5min，流水稍洗，梯度酒精常規(guī)脫水，中 性樹膠封片。于光鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)視野，觀察各組大鼠胸主動(dòng)脈的病理變化。
[0039] 3、大鼠血脂指標(biāo)檢測(cè)
[0040] 取凍存血清，室溫下溶解，用直接法測(cè)定血清中HDL-C、LDL-C ,GPO-PAP酶法測(cè)定血 清中TG，COD-PAP法測(cè)定血清中TC，應(yīng)用酶標(biāo)儀在5 IOnm波長下檢測(cè)TC、TG的含量，在546nm波 長下檢測(cè)HDL-C、LDL-C的含量。
[0041 ] 4、Elisa法檢測(cè)血清hs-CRP的水平
[0042]包被液稀釋抗原，各取0.3mL加入酶標(biāo)板孔中，4°C過夜，次日移去包被液，每孔加 被檢血清0.2mL，37 °C孵育Ih，每孔加酶標(biāo)檢測(cè)抗體0.2mL，37 °C孵育Ih，每孔再加入0.2mL ABC液，加終止液，酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定OD值，按照試劑盒的方法轉(zhuǎn)換成濃度水平。
[0043] 5、Western_bloting 法檢測(cè)相關(guān)蛋白
[0044] 取各組大鼠胸主動(dòng)脈組織，制備組織勻漿，每20mg組織加入160yL含Immol · 1/ 1PMSF的裂解液，4°C、12000rpm離心15min，取上清，用BCA法測(cè)定蛋白濃度。50yg總蛋白上樣 量以濃度為10%的凝膠電泳進(jìn)行分離。冰浴下恒流(200mA)濕法轉(zhuǎn)膜2h，體積分?jǐn)?shù)5%的脫 脂奶粉封閉Ih后與相應(yīng)一抗4 °C共孵育過夜。TBST洗液洗滌，與辣根過氧化物標(biāo)記的二抗共 孵育lh，TBST洗液洗滌，用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行顯影，并利用灰度分析軟件定量分析。
[0045] 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0046] 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)以表示，組間差異比較采用方差 分析及T檢驗(yàn)，以P〈0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0047] 7、結(jié)果
[0048] 7.1胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)觀察
[0049]正常對(duì)照組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚。內(nèi)膜中血管內(nèi)皮細(xì)胞完整； 中膜可見梭形平滑肌細(xì)胞，彈力纖維層結(jié)構(gòu)清晰完整;外膜為結(jié)締組織。模型對(duì)照組大鼠胸 主動(dòng)脈內(nèi)膜局部增厚，出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤及泡沫樣細(xì)胞，彈力纖維發(fā)生變化、斷裂和崩解， 中膜萎縮，局部出現(xiàn)鈣化灶；陽性藥對(duì)照組及中、高劑量觀察組大鼠胸主動(dòng)脈病理改變較模 型對(duì)照組有所減輕，僅于內(nèi)膜下僅見少量炎細(xì)胞浸潤及泡沫細(xì)胞的浸潤，中膜鈣灶明顯減 少，而低劑量觀察組稍有改善。結(jié)果見圖1(A:正常對(duì)照組;B:模型對(duì)照組;C:陽性藥對(duì)照組； D:低劑量觀察組;E:中劑量觀察組;F:高劑量觀察組）。
[0050] 7.2大鼠血脂情況
[0051 ] 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清TG、TC、LDL-C含量均明顯升高，而HDL-C 含量則降低。與模型對(duì)照組相比，陽性藥對(duì)照組及低、中、高劑量觀察組均可不同程度的降 低大鼠血清TG、TC、LDL-C水平，提高HDL-C水平，其中中、高劑量觀察組及陽性藥對(duì)照組上述 指標(biāo)的改善與模型對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.05)。各觀察組中以高劑量觀察組改善 各項(xiàng)指標(biāo)為最佳，與陽性藥對(duì)照組比較無明顯差異，而低劑量觀察組的變化與模型對(duì)照組 相比，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。
[0052] 表1治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物對(duì)各組大鼠血脂的影響(n = 12 3_)
[0054] 注：與正常對(duì)照組比較卞<0.05,與模型對(duì)照組比較bP<0.05,與陽性藥對(duì)照組比 較叩<0.05
[0055] 7.3血清中118-〇^水平
[0056]與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組大鼠在喂飼高脂飼料后可造成hs-CRP的升高，與 模型對(duì)照組比較，陽性藥對(duì)照組及中、高劑量觀察組可明顯降低hs-CRP的含量，以高劑量觀 察組作用最好，與陽性藥對(duì)照組比較高劑量觀察組與其效果接近。結(jié)果見表2。
[0057] 表2治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物對(duì)各組大鼠 hs-CRP水平的影響(η = 12 A士S)
[0059] 注：與正常對(duì)照組比較叩<0.
05,與模型對(duì)照組比較bP<0.05,與陽性藥對(duì)照組比 較叩<0.05
[0060] 7.4胸主動(dòng)脈中口381^?1(、陬-1〇3及11^-6的表達(dá)
[0061] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組胸主動(dòng)脈中P38MAPK磷酸化水平與正常對(duì)照組相比出 現(xiàn)明顯升高，NF-Kb水平明顯降低，IL-6明顯升高；中、高劑量觀察組胸主動(dòng)脈中p38MAPK磷 酸化水平與模型對(duì)照組相比出現(xiàn)明顯下降(？〈〇.〇5)，即-此明顯升高(？〈0.05)、幾-6明顯降 低(P〈〇.05)，且與陽性藥對(duì)照組相比無明顯差別；而低劑量觀察組各項(xiàng)指標(biāo)稍有改善。具體 結(jié)果見圖2。
[0062] 在其他的觀察療效的實(shí)驗(yàn)中，與上述實(shí)驗(yàn)不同的是，第10周開始低、中、高劑量觀 察組每日分別灌胃實(shí)施例1、3、5或者實(shí)施例1、3、6或者實(shí)施例1、4、5或者實(shí)施例1、4、6或者 實(shí)施例1、2、5制備的治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物25、50、IOOmg · kg<，陽性藥對(duì)照組灌胃辛伐 他丁4mg · kg<，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組給予同體積的生理鹽水，1次· cf1，連續(xù)給藥4周。 得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述實(shí)驗(yàn)類似，這里不再贅述。
[0063] 顯然，上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對(duì)實(shí)施方式的限定。對(duì) 于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或 變動(dòng)。這里無需也無法對(duì)所有的實(shí)施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動(dòng)仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物，其特征在于，包括：羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量為25-lOOmg，其中蘆丁占羅布麻葉總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7-15% ; 所述羅布麻葉總黃酮是由下述方法制備得到： 將干燥的羅布麻葉粉碎過20-50目篩成藥粉，用10倍量的濃度為75%的乙醇加熱回流 2h，提取2次，合并提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，得到濃縮液;將濃縮液用D101大孔樹脂進(jìn) 行純化，先用水洗，再用50%乙醇洗脫，濾液合并、濃縮即得羅布麻葉總黃酮。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為50-100mg。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為50mg。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為60mg。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為75mg。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為90mg。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物，其特征在于，所述羅布麻葉總黃酮的 質(zhì)量為l〇〇mg。
【文檔編號(hào)】A61K127/00GK106074641SQ201610453713
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月22日
【發(fā)明人】任立群, 王亞帝, 李敏, 李相軍, 張洋, 冷曉薇, 李琪
【申請(qǐng)人】任立群