型例4及比較劑型例5的洗發(fā)水1個(gè)月后，測(cè)定頭皮肩減少率。
[0221]試驗(yàn)開(kāi)始前，通常用常規(guī)的洗發(fā)水清洗頭發(fā)，然后采集洗發(fā)后累積兩天的頭皮肩， 并將采集的頭皮肩的重量與分別用劑型例4及比較劑型例5的洗發(fā)水隔兩天洗一次頭發(fā)而 試驗(yàn)結(jié)束后累積兩天的頭皮肩的重量進(jìn)行比較而評(píng)價(jià)。此時(shí)，將累積的頭皮肩用真空吸入 裝置直接從頭皮采集，并且依據(jù)下述數(shù)學(xué)式7求出頭皮肩減少率，并將其結(jié)果表示在下述表 25中。
[0222] 數(shù)學(xué)式7
[0223] 頭皮肩減少率（％) =(試驗(yàn)開(kāi)始前的頭皮肩重量(mg)--個(gè)月后的頭皮肩重量 (mg))/試驗(yàn)開(kāi)始前的頭皮肩重量(mg) X 100
[0224] 表25
[0226]從上述表26中可以知道，含有人參皂苷Mc的劑型例4顯示出優(yōu)異的頭皮肩防止效 果。
[0227][試驗(yàn)例20]頭皮瘙癢癥防止效果的試驗(yàn)
[0228] 選定24名比較嚴(yán)重感覺(jué)到頭皮瘙癢的25歲至45歲的男女，以每組12名分為兩組， 并以三天一次的頻率使用各劑型例4及比較劑型例5的洗發(fā)水兩周后，通過(guò)下述評(píng)價(jià)基準(zhǔn)對(duì) 頭皮瘙癢癥防止效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并將其結(jié)果表示在下述表26中。
[0229] [評(píng)價(jià)基準(zhǔn)]
[0230]非常優(yōu)異-5分 [0231 ]優(yōu)異-4分
[0232] -般-3 分
[0233] 不良-2分 [0234]非常不良-!分
[0235]表26
[0237] ~從上述表26中可以知道，含有人參皂苷Mc的劑型例4對(duì)頭皮瘙癢癥的防止顯示出 更優(yōu)異的效果。
[0238] [試驗(yàn)例21]鉀離子通道活性增加效果評(píng)價(jià)
[0239] 作為脫發(fā)治療劑的米諾地爾已知為潛在的線粒體鉀離子通道開(kāi)放劑（KATP channel opener)，是在雄激素性脫發(fā)的治療中使用的代表性藥物。為了評(píng)價(jià)這種米諾地爾 的機(jī)制，使用了下述試驗(yàn)法。所述試驗(yàn)法為使用組成頭皮真皮的成纖維細(xì)胞中的阻止Katp通 道的甲苯磺丁脲(SIGMA AIDRICH，T0891)進(jìn)行處理，從而抑制細(xì)胞的增殖，并且再次打開(kāi)鉀 離子通道而恢復(fù)細(xì)胞增殖。
[0240] 為了評(píng)價(jià)作為本組合物的Katp通道開(kāi)放劑的功能，本發(fā)明使用了作為成纖維細(xì)胞 系的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系（Mouse embryonic fi broblast cell line，NIH3T3:)。本細(xì) 胞系為用3T3方案(protocol)，對(duì)從NIH瑞士小鼠胚胎(Swiss mouse embryo)中分離的成纖 維細(xì)胞系進(jìn)行自然永生化而得到的細(xì)胞系。所述細(xì)胞系，在含有10%FBS的DMEM(Gibco BRL，蓋瑟斯堡，MD，美國(guó)）中，在維持5 % CO2，37°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。將NIH3T3接種于 96孔板中，并在37°C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，用2.5mM的甲苯磺丁脲進(jìn)行處理，并且在10 分鐘后，分別用作為陽(yáng)性對(duì)照組的1 〇μΜ的米諾地爾和2.5ppm、5ppm及I Oppm濃度的人參皂苷 Mc進(jìn)行處理，并且藥物處理后經(jīng)過(guò)48小時(shí)后，使用WST-I試劑盒(羅氏（Roche))測(cè)定細(xì)胞增 殖能力。結(jié)果表示在下述表27中。
[0241] 表 27
[0243] ~從上述表27中可以知道，用人參皂苷Mc處理時(shí)，成纖維細(xì)胞的增殖得到恢復(fù)，并且_ 細(xì)胞增殖能力依賴(lài)于處理的人參皂苷Mc的濃度而增加，并且可以確認(rèn)用IOppm人參皂苷Mc 處理時(shí)，細(xì)胞增殖恢復(fù)到用米諾地爾處理時(shí)的水平。
[0244] [試驗(yàn)例22]人參皂苷Mc的黑色素生成促進(jìn)效果試驗(yàn)
[0245] 在無(wú)血清細(xì)胞凍存培養(yǎng)基(RPMI培養(yǎng)基）中添加5%的牛胎兒血清、100IU的青霉素 G及0.2μΜ的對(duì)苯二甲酸(TPA)的培養(yǎng)基中，將黑色素細(xì)胞，以50，000細(xì)胞/孔，接種于24孔板 中。第二天，對(duì)接種的細(xì)胞，用IOppm或50ppm的最終濃度的作為試驗(yàn)物質(zhì)的人參阜苷Mc處 理。將用0.1 %的DMSO處理的組作為陰性對(duì)照組，將用100μΜ的異丁基甲基黃嘌呤（IBMX)處 理的組作為陽(yáng)性對(duì)照組，將上述各組在37°C溫度下培養(yǎng)三天。培養(yǎng)后，用磷酸鹽緩沖液 (PBS)清洗孔板，并在每孔中加入100μ1的IN NaOH后，溶解細(xì)胞中的黑色素。利用平板培養(yǎng) 測(cè)定儀(microplate reader)，在405nm下測(cè)定被溶解的黑色素的吸光度(協(xié)同效應(yīng)2,酶標(biāo) 儀(VT，美國(guó)）。將人參皂苷Mc的黑色素生成促進(jìn)效果與對(duì)照組進(jìn)行比較的結(jié)果表示在下述 表28中。
[0246] 表28

[0248] 從上述表28中可以知道，人參皂苷Mc促進(jìn)黑素細(xì)胞的黑色素合成，從而增加黑色 素的生成，因此能夠顯示出優(yōu)異的黑色素生成促進(jìn)效果。
[0249] [試驗(yàn)例23]人參皂苷Mc在黑素細(xì)胞中的促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)及酪氨酸酶表達(dá)的 效果
[0250] 利用501mel細(xì)胞系，以500，000細(xì)胞/孔，接種于6孔板中，并且在各孔中，用0.1 % 的二甲基亞砜(DMSO)處理的作為陰性對(duì)照組，用100μΜ的IBMX處理的作為陽(yáng)性對(duì)照組，以及 用IOppm的人生皂苷Mc處理的作為實(shí)驗(yàn)組，并在37°C溫度下培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)及72小時(shí) 后，得到蛋白質(zhì)。對(duì)于如此獲得的蛋白質(zhì)，利用MITF及酪氨酸酶進(jìn)行蛋白印跡(Western Blot)法試驗(yàn)。蛋白質(zhì)提取和蛋白印跡是通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員通常使用的標(biāo)準(zhǔn)方法來(lái)實(shí)施。 實(shí)施蛋白印跡后，將其結(jié)果中的陰性對(duì)照組設(shè)為100,并與該值進(jìn)行比較而表示在下述表29 中。
[0251]表29
[0253] 如上述表29中所示，可以確認(rèn)人參皂苷Mc在黑素細(xì)胞中提高M(jìn)ITF和酪氨酸酶蛋白 質(zhì)的表達(dá)。
[0254] [試驗(yàn)例24]人參皂苷Mc的抗菌力評(píng)價(jià)
[0255] 為了評(píng)價(jià)人參皂苷Mc的抗菌力，實(shí)施了抗菌實(shí)驗(yàn)。具體的試驗(yàn)方法如下所述。
[0256] 實(shí)驗(yàn)中使用的金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、大腸桿菌 (Escherichia coli)及銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是在膜蛋白酶大豆肉湯 培養(yǎng)基（Tryptic Soy Broth)中培養(yǎng)；白色念珠菌（Candida albicans)及黑曲霉 (Aspergillus niger)是在沙氏葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（Sabouraud Dextrose Broth)中培養(yǎng)。 將培養(yǎng)液在各培養(yǎng)基中以1/1〇〇(白色念珠菌菌株是以1/10)進(jìn)行稀釋的稀釋液作為試驗(yàn)菌 液來(lái)使用。對(duì)于黑曲霉，將制備成2X10 8cfu/ml的孢子懸浮液作為試驗(yàn)菌液。
[0257] 將在15ml的各培養(yǎng)基中添加0.15ml的試驗(yàn)菌液而混合好的混合液作為稀釋溶液 來(lái)使用。
[0258] 在96孔板1號(hào)排中，以每孔16μ1的量分別加入IOppm的人參阜苷Mc，并且分別加入 184μ1的稀釋溶液。在其它的孔中分別加入100μ1的稀釋溶液。將1號(hào)排的混合液混合均勻 后，取出100μ1的混合液加入到2號(hào)排中，并混合均勻后，再次取出1 οομL的混合液加入到3號(hào) 排中。通過(guò)這種方式進(jìn)行了二倍稀釋。
[0259]金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及銅綠假單胞菌是在32°C的恒溫槽中培養(yǎng)；白色念珠 菌及黑曲霉是在25°C的恒溫槽中培養(yǎng)。
[0260] 48小時(shí)后，用懸浮率和顯微鏡來(lái)確認(rèn)菌的增值與否，從而決定最小抑制濃度(MIC) 值，并將其結(jié)果表示在下述表30中。
[0261]表30
[0263] 如上述表30中所示，可以確認(rèn)人參皂苷Mc對(duì)多種菌株顯示出抗菌力，并且通過(guò)這 些可以預(yù)測(cè)人參皂苷Mc能夠在組合物內(nèi)作為天然防腐劑或抗菌劑而起作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述皮膚外用劑組合物包含人參皂巧Me作為 有效成分。2. 如權(quán)利要求1所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述人參皂巧Me用下述化學(xué)式 1表不：3. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述皮膚外用劑組合物含 有W組合物總重量計(jì)為0.001~50重量％的所述人參皂巧Me。4. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于抗老化。5. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于提高皮膚 彈力。6. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于改善皮膚 皺紋。7. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于保濕。8. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于強(qiáng)化皮膚 屏障功能。9. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于誘導(dǎo)皮膚 角質(zhì)形成細(xì)胞的分化。10. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于改善瘦 瘡。11. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于抗菌。12. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于抗炎。13. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于改善過(guò)敏 性皮膚。14. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于改善血色 及膚色。15. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于收縮毛 孔。16. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于調(diào)節(jié)皮 脂。17. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于改善皮膚 問(wèn)題。18. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于美白。19. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于促進(jìn)毛發(fā) 的生長(zhǎng)。20. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于防止白 發(fā)。21. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于抗頭皮 屑。22. 如權(quán)利要求1或2所述的皮膚外用劑組合物，其特征在于，所述組合物用于天然防腐 劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種含有人參皂苷Mc作為有效成分的組合物，所述組合物不僅能夠提供抗老化、改善皮膚皺紋、美白、保濕改善效果，而且還能夠提供抗炎、改善痤瘡和皮膚問(wèn)題，以及過(guò)敏癥狀的效果、收斂皮膚及收縮毛孔效果，并能夠提供皮膚血色改善效果、促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)、改善白發(fā)、抗頭皮屑及防腐效果。
【IPC分類(lèi)】A61K31/70, A61P17/00, A61K31/704
【公開(kāi)號(hào)】CN105555278
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480029499
【發(fā)明人】金東泫, 柳權(quán)烈, 李沃澯, 廉明勛, 曺濬喆
【申請(qǐng)人】株式會(huì)社愛(ài)茉莉太平洋
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月24日
【公告號(hào)】WO2014175675A1