Lycojaponicumins B在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化合物L(fēng)ycojaponicumins B的新用途，尤其涉及Lycojaponicumins B 在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 本發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Lycojaponicumins B有抗缺血性腦損傷、抗腦缺 血/再灌注損傷的藥理作用，具有預(yù)防或者治療缺血性腦損傷的醫(yī)藥用途。
[0003] 本發(fā)明涉及的化合物 Lycojaponicumins B 是一個 2012 年發(fā)表（Xiao-JingWang, et al. , Lycojaponicumins A-C, Three Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Lycopodium japonicum. Organic Letters，2012, 14 (10) 2614 - 2617.)的新化合物，該化合 物擁有全新的骨架類型（Xia〇-JingWang，et al·，Lycojaponicumins A_C, Three Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Lycopodium japonicum. Organic Letters, 2012, 14(10)2614 - 2617.)，本發(fā)明涉及的Lycojaponicumins B在制備治療缺血性腦損傷 藥物中的用途屬于首次公開。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有Lycojaponicumins B研究中未發(fā)現(xiàn)其具有治療缺血 性腦損傷的報道的現(xiàn)狀，提供了 Lycojaponicumins B在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng) 用。
[0005] 所述化合物L(fēng)ycojaponicumins B結(jié)構(gòu)如式（I )所示：
[0007] 本發(fā)明涉及的Lycojaponicumins B在制備治療缺血性腦損傷藥物中的用途屬于 首次公開，由于骨架類型屬于全新的骨架類型，而且其對于缺血性腦損傷的作用強(qiáng)，具備突 出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)，同時用于治療缺血性腦損傷顯然具有顯著的進(jìn)步。
[0008] 本發(fā)明人通過【具體實(shí)施方式】中的實(shí)驗(yàn)證明了 Lycojaponicumins B具有治療或預(yù) 防缺血性腦損傷的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)ycojaponicumins B的制備方法參見文獻(xiàn)（Xiao-JingWang ，et al. ,Lycojaponicumins A-Cj Three Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Lycopodium japonicum. Organic Letters，2012, 14 (10)2614 - 2617.)
[0010] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
[0011] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)ycojaponicumins B片劑的制備：
[0012] 取5克化合物L(fēng)ycojaponicumins B加入糊精195克，混勾，常規(guī)壓片制成1000片。
[0013] 實(shí)施例2 :本發(fā)明所涉及化合物L(fēng)ycojaponicumins B膠囊劑的制備：
[0014] 取5克化合物L(fēng)ycojaponicumins B加入淀粉195克，混勾，裝膠囊制成1000粒。
[0015] 下面通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步說明其藥物活性。
[0016] 實(shí)驗(yàn)例I :Lycojaponicumins B對大鼠局部腦缺血損傷的影響
[0017] (1)實(shí)施材料：SD大鼠，雌雄兼用，體重190~210g，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。 陽性對照藥：天保寧，康恩貝集團(tuán)制藥有限公司生產(chǎn)，每片含銀杏葉精提取物40mg。
[0018] (2)方法與結(jié)果
[0019] I) Lycojaponicumins B對大鼠中動脈血栓（MCAO)模型試驗(yàn)
[0020] 將60只大鼠隨機(jī)分為六組，即假手術(shù)對照組、MCAO模型組、給藥組3組，天保寧組 (24mg/kg)。造模前灌胃給藥，一日一次，共給藥七次，假手術(shù)對照組、MCAT模型組、給予等 量的飲用水（lml/100g)，造模后灌胃給藥一次。大鼠腹腔注射12%水合氯醛溶液（350mg/ kg)麻醉，大鼠右側(cè)臥位固定，在眼外眥和外耳道連線中點(diǎn)作一弧形切口，長約115cm，夾斷 顳骨，用牙科鉆在顴骨與顳鱗骨接合處靠近口側(cè)Imm處做一直徑215_骨窗，清理殘?jiān)?，?露大腦中動脈（位于嗅束及大腦下靜脈之間）。將吸有50%氯化鐵溶液IOul的小片定量 濾紙敷在此段大腦中動脈上30min后，取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回 籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組除不滴加氯化鐵溶液外，其余手術(shù)步驟同模型組。MCAO大鼠神經(jīng)癥狀和 梗塞范圍的評定：在手術(shù)不同時間（6h，24h)，按Bederson等方法并加以改進(jìn)，對動物進(jìn)行 行為評分。1.提鼠尾離開地面約一尺，觀察前肢屈曲情況。如雙前肢對稱伸向地面，記為〇 分；如手術(shù)對側(cè)前肢出現(xiàn)肩屈曲、時屈曲、肩內(nèi)旋或既有腕時的屈曲又有內(nèi)旋者，記為1分。 2.將動物置于平滑地面上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動，檢測阻力。如雙側(cè)阻力對等且有力者 記為0分；如向手術(shù)對側(cè)推動時阻力下降者，記為1分。3.將動物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀 察兩前肢的肌張力。雙側(cè)肌張力對等且有力者為〇分；手術(shù)對側(cè)前肢肌張力下降記為1分。 4.提鼠尾離開地面約一尺，動物有不停地向手術(shù)對側(cè)旋轉(zhuǎn)著，記為1分；否則記為0分。根 據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)評分，滿分為4分，分?jǐn)?shù)越高動物的行為障礙越嚴(yán)重。對行為檢測打分值進(jìn)行組 間比較，t檢驗(yàn)。結(jié)果見表1。動物經(jīng)末次行為評分后，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位 腦干，剩余部分在4°C下冠狀切成5片。迅速將腦片置于TTC染液中（每5ml染液中含4% TTCL 5ml，IM K2HPO4O. lml)，37°C避光溫孵30min，再取出置于10%甲醛液中避光保存。經(jīng) 染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占 右側(cè)半腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。結(jié)果進(jìn)行組間比較，t檢驗(yàn)，結(jié)果見表2。
[0021] 表1 Lycojaponicumins B對MCAO大鼠腦梗塞范圍及神經(jīng)癥狀的影響（η = 10)
[0022]
[0023] 注：與模型組相比 *ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01。
[0024] 表2 Lycojaponicumins B對光化學(xué)誘導(dǎo)腦血栓形成大鼠腦梗塞的影響（η = 10)
[0026] 注：與模型組相比 *ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01。
[0027] 結(jié)果顯示，除假手術(shù)未見行為異常改變，MCAO模型組大鼠在術(shù)后6h、24h均出現(xiàn) 偏癱樣癥狀。給藥組與天保寧組的大鼠在術(shù)后6h、24h其神經(jīng)癥狀均有不同程度的改善 (P〈0.01，P〈0.05)。術(shù)后24h，除假手術(shù)組未見腦組織異常改變外，模型組相比具有顯著差 異（Ρ〈0· 01，Ρ〈0· 05)。Lycojaponicumins B可減輕梗塞灶，結(jié)果顯示出一定的量效關(guān)系。
[0028] 實(shí)驗(yàn)例2 :Lycojaponicumins B對大鼠局部腦缺血/再灌注損傷的影響
[0029] (1)實(shí)驗(yàn)材料：SD大鼠，雌雄兼用，體重190~210g。MDA，S0D，蛋白定量（考馬斯 亮藍(lán)）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。
[0030] (2)方法與結(jié)果
[0031] 1)實(shí)驗(yàn)方法：120只大鼠隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組、模型組、3個給藥組，每組25 只。除假手術(shù)組不插線外，其余4組造模（MCAO)。給藥組各劑量組ig每天1次，連續(xù)13d。 術(shù)前Ih ig再給藥1次。6%水合氯醛（350mg/kg)腹腔麻醉，頸部正中切開，分離右側(cè)頸總 動脈（CCA)、頸外動脈（ECA)、頸內(nèi)動脈（ICA)。結(jié)扎頸總動脈近心端、頸外動脈起始端后，在 頸總動脈處剪一"V"形小口，沿頸總動脈插入線栓（線栓采用直徑為0. 235_的魚線，頭端 燒成球狀，并于距線球18. 5mm處作標(biāo)記）經(jīng)頸內(nèi)動脈向顱內(nèi)插至大腦中動脈分支叉處，插 入深度為18~20mm，將線與頸內(nèi)動脈一起結(jié)扎。術(shù)中維持體溫（37±015)°C。在灌注時外 拉線使球端回至ECA，拔除插線，結(jié)扎ECA即可。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。大腦 中動脈栓塞后2h恢復(fù)血供，神經(jīng)行為學(xué)評分參照ZeaLonga5分制標(biāo)準(zhǔn)，術(shù)后出現(xiàn)左前肢屈 曲，行走時向左側(cè)轉(zhuǎn)圈即視為造模成功，然后保溫常規(guī)飼養(yǎng)，至24h斷頭處死取材。實(shí)驗(yàn)過 程中，因麻醉意外、MCAO手術(shù)失敗、造模不成功及24h內(nèi)死亡的均棄去不用。
[0032] 腦組織含水量的測定：大鼠造模24h后斷頭取腦，稱量兩側(cè)半腦濕重。再置于烘箱 中，KKTC烘烤24h至恒重，精確稱量干重，計(jì)算含水量。腦組織含水量=(濕重-干重）/ 濕重X 100%。
[0033] 腦梗塞體積測定：斷頭取腦，將大腦作連續(xù)2mm冠狀切片，共5片，然后將腦片放 入2% TTC磷酸鹽緩沖液中37°C恒溫孵育30min，正常腦組織染為紅色，梗死灶呈白死。濾 紙吸去表面液體后用刀片小心刻取未著色部分的質(zhì)量百分比，以此反應(yīng)梗死體積比。腦組 織勻漿SOD活力、MDA含量的檢測：右側(cè)半腦稱重后按I : 10加入冰生理鹽水制成勻漿，參照 SOD、MDA試劑盒說明書，檢測腦組織中SOD、MDA含量。應(yīng)用SPSS13. Ofor windows軟件對 數(shù)據(jù)進(jìn)行處理；計(jì)量數(shù)據(jù)以x±s表示，各組間比較采用單因素方差分析。
[0034] 2)結(jié)果
[0035] 腦組織含水量：左腦組織含水量各組間相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組右腦組織含水 量明顯高于各組（P〈〇. 05)，高于假手術(shù)組（P〈0. 05)，給藥組各劑量組可降低模型腦組織含 水量（ρ〈〇· 05)(表 3)。
[0036] 表3 Lycojaponicumins B對腦組織含水量、梗死體積、S0D、MDA含量的影響（η = 8)
[0038] 與模型組相比 *ρ〈0· 05, **ρ〈0· 01
[0039] 腦梗塞體積：模型組腦組織腦梗塞體積高于各組（Ρ〈0. 05)，給藥組各劑量組可降 低模型腦組織梗死體積（Ρ〈〇. 05)。
[0040] 結(jié)論：Lycojaponicumins B可減少腦缺血后腦組織水腫，縮小梗死體積，提高SOD 活性，降低MDA含量，減輕自由基反應(yīng)對腦組織的損害，對缺血腦組織具有明顯的保護(hù)作 用。Lycojaponicumins B可以用于制備治療缺血性腦損傷藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. Lycojaponicumins B在治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用，所述化合物 Lycojaponicumins B 結(jié)構(gòu)如式（I )所示：
【專利摘要】本發(fā)明公開了Lycojaponicumins？B在制備治療缺血性腦損傷藥物中的應(yīng)用，屬于藥物新用途技術(shù)領(lǐng)域。Lycojaponicumins？B對治療缺血性腦損傷具有治療作用，因此具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景，屬于首次公開，而且其對于治療缺血性腦損傷活性強(qiáng)。
【IPC分類】A61K31/424, A61P9/10
【公開號】CN105267213
【申請?zhí)枴緾N201510738487
【發(fā)明人】田麗華
【申請人】淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年11月4日