桑葚多糖提取物在制備藥物或保健品中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及一種桑甚多糖提取物的新用途，特別是在制備預防或抑制化學性肝損 傷的藥物或保健品中的應用，屬于中藥技術領域。
【背景技術】
[0002] 桑甚（化UC化SMori)又名桑要、桑果、甚子、烏甚等，是?？粕俣嗄晟淙~喬木 桑樹的成熟果穗的統(tǒng)稱，原產于中國中部約有四千年的栽培史，品種較多栽培范圍廣泛，資 源較為豐富。新鮮桑甚不但有甘美的滋味，并且含有大量的維生素、氨基酸、礦物元素、微 量元素、無機鹽類、果膠、黃酬、生物堿、酪類及糖類等多種營養(yǎng)成分，又具有食用和醫(yī)療保 健的作用，因而被廣大人群所喜愛。桑甚是被國家衛(wèi)生部列為首批"既是食品又是藥品"的 農產品之一。我國許多中醫(yī)名著如《本草綱目》、《中藥大辭典》等，認為桑甚性寒，具有滋陰 養(yǎng)血、鎮(zhèn)靜安神、補肝益腎、養(yǎng)顏益智、烏發(fā)明目、生津止渴、延年桂斑、降壓消渴和解酒的功 效，還可W用于治療肝腎陽虛、屯、惇失眠、腸燥便秘、須發(fā)早白等癥。隨著現代醫(yī)學對桑甚 進行藥理、藥效毒理測試的研究，發(fā)現桑甚具有促進造血細胞的生長，提高動物體內酶的活 性，抗誘變，抗菌，抗病毒，抗福射，抑制腫瘤及有害物質的生成，增強免疫力、抗寒功能及耐 勞能力，抗氧化，延緩細胞衰老，防止血管硬化，調節(jié)血糖和血脂，護肝等功效。
[0003] 桑甚多糖提取物是從桑甚中提取出來的W桑甚多糖為主要成分的混合物，其中桑 甚多糖是由多個相同或不同的單糖W糖巧鍵連接而成的高聚合物，具有較為廣泛的生物活 性，主要包括參與機體代謝、調節(jié)機體免疫力、延緩細胞衰老、防止血管硬化、防衰老、調節(jié) 血糖、抗菌、抗病毒、抗福射、抑制腫瘤、抗氧化等作用。
[0004] 雖然已發(fā)現桑甚有護肝功效，但現有技術中并沒有桑甚護肝作用的深入研究報 道，即尚未明確具體是桑甚中的那種或哪些有效成分發(fā)揮了護肝作用，因而也尚未有桑甚 多糖提取物用于化學性肝損傷保護產品的相關報道。

【發(fā)明內容】
陽〇化]為解決現有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供桑甚多糖提取物在制備藥物或保 健品中的應用，所得藥物或保健品能有效抑制或預防化學性肝損傷。
[0006] 為了實現上述目標，本發(fā)明采用如下的技術方案：
[0007] 桑甚多糖提取物在制備預防或抑制化學性肝損傷的藥物或保健品中的應用。
[0008] 桑甚多糖提取物在制備預防或抑制酒精性肝損傷的藥物或保健品中的應用。
[0009] 前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物中含有多糖、糖醒酸、蛋白質和硫 酸醋，其中多糖的重量百分含量大于55%。
[0010] 前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物中糖醒酸的重量百分含量大于 12%。
[0011] 前述桑甚多糖提取物的應用中，按照重量百分數計，桑甚多糖提取物中含有多糖 65%~70%、糖醒酸16%~21 %、蛋白質1 %~2%和硫酸醋5%~7%。
[0012] 前述桑甚多糖提取物的應用中，多糖由質量比為1.8~2.4 : 0.3~1 : 1.9~ 2. 5 : 60~61 : 2. 8~3.4 : 18~18. 8 : 12. 2~13的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖 殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醒酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0013] 前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物是由桑甚的干燥果穗經脫脂、脫 色、生物酶酶解和超聲提取之后濃縮、醇沉得到的。
[0014] 具體地，前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步驟制得 的：
[001引 （1)除雜：將桑甚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0016] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙酸進行回流， 回流完畢后，驚干，備用；
[0017] (3)將步驟（2)所得產物置于容器中，加入水，調節(jié)抑值，保溫，加入葡萄糖氧化酶 進行酶解；
[0018] (4)將步驟（3)中酶解產物進行超聲處理，得提取液；
[0019] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮，醇沉兩次，離屯、，收集沉淀物，沉淀物 用無水乙醇反復洗涂，干燥，即得。
[0020] 進一步地，前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步驟制 得的：
[OOW(1)除雜：將桑甚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用； 陽0巧 似脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 兩次，再加入90%~100%乙酸回流兩次，每次回流60~150分鐘，回流完畢后，驚干，備 用；
[0023] (3)將步驟（2)所得產物置于容器中，加入步驟（2)所得產物重量6~25倍的水， 調節(jié)抑值為3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步驟（2)所得產物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶進行酶解，酶解時間為15~120分鐘；
[0024] (4)將步驟做中酶解產物進行超聲處理，超聲頻率為20~lOOKHz，時間為10~ 40分鐘，得提取液；
[00巧](5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5~1/3,乙醇沉淀兩 次，兩次均加入4~6倍體積、濃度為90 %~100 %的乙醇，均放置于：TC~5°C下保持 1化~48h;醇沉后離屯、，收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇反復洗涂，干燥，即得。
[00%] 優(yōu)選地，前述桑甚多糖提取物的應用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步驟制得 的：
[0027] (1)除雜：將桑甚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；
[00測 似脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入無水乙醇回流兩次，再加 入無水乙酸回流兩次，每次回流105分鐘，回流完畢后，驚干，備用；
[0029] 做將步驟似所得產物置于容器中，加入步驟似所得產物重量11倍的水，調 節(jié)抑值為5,保持溫度在58°C，加入步驟（2)所得產物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶進行 酶解，酶解時間為38分鐘；所述葡萄糖氧化酶配制成0. %~0. 4wt%的水溶液使用；
[0030] (4)將步驟做中酶解產物進行超聲處理，超聲頻率為80KHZ，時間為20分鐘，得 提取液；
[0031] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/4,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入5倍體積、濃度為95%的乙醇，均放置于4°C下保持30h;醇沉后離屯、，收集沉淀物， 沉淀物用無水乙醇反復洗涂，冷凍干燥，即得。
[0032] 前述桑甚多糖提取物的應用中，所述藥物或保健品可采用湯劑、混懸劑、片劑、膠 囊劑、口服液、顆粒劑、糖漿劑、乳劑、沖劑或丸劑等口服制劑形式；也可采用膜劑、凝膠劑、 噴霧劑、膏劑或海綿劑等外用制劑形式；還可W采用注射給藥、局部給藥形式。
[0033] 為了驗證桑甚多糖提取物對化學性肝損傷抑制作用效果，申請人進行了一系列試 驗研究，具體如下：
[0034] 1、桑甚多糖提取物的制備：桑甚多糖提取物經W下步驟提取得到：
[00對 （1)除雜：將桑甚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0036] 似脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 兩次，再加入90%~100%乙酸回流兩次，每次回流60~150分鐘，回流完畢后，驚干，備 用；
[0037] (3)將步驟（2)所得產物置于容器中，加入步驟（2)所得產物重量6~25倍的水， 調節(jié)抑值為3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步驟（2)所得產物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶進行酶解，酶解時間為15~120分鐘； 陽03引 （4)將步驟做中酶解產物進行超聲處理，超聲頻率為20~lOOKHz，時間為10~ 40分鐘，得提取液；
[0039] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5~1/3,乙醇沉淀兩 次，兩次均加入4~6倍體積、濃度為90 %~100 %的乙醇，均放置于：TC~5°C下保持 1化~48h;醇沉后離屯、，收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇反復洗涂，干燥，得到桑甚多糖提 取物。
[0040] 申請人在制備桑甚多糖提取物的過程中，對提取條件進行了試驗篩選，得到最佳 提取條件為：酶解時間為38分鐘、酶的用量為0. 3%、水的用量為11倍、酶解溫度為58°C。
[0041] 2、桑甚多糖提取物組成成分分析
[0042] 取桑甚多糖提取物，采用苯酪-硫酸法檢測，測得多糖含量在65%~70%之間。 采用化a壯ord法檢測，測得蛋白質含量在1%~2%之間。采用氯化領-明膠法檢測，測得 硫酸醋含量在5%~7%之間。采用間徑基聯(lián)苯比色法檢測，測得糖醒酸的含量在16%~ 21%之間。采用斐林試驗和艦化鐘試驗檢測，發(fā)現該提取物中不含淀粉和單糖類物質。其 中一個桑甚多糖提取物樣品的成分含量數據用圖形表示如圖1。
[0043] 采用HPLC法對上述1項提取得到的桑甚多糖提取物中多糖成分進行測定。具體 測試條件和方法如下： W44] (1)水解：取lOmg桑甚多糖提取物，加入4血的2mol/L的立氣乙酸，于120°C下水 解2小時，然后用甲醇萃取3~5次，干燥，得到水解產物；
[0045] (2)衍生化：取桑甚多糖水解產物和對照品（葡萄糖、鼠李糖、k巖藻糖、木糖、甘 露糖、半乳糖和半乳糖醒酸）適量，按照W下步驟分別衍生化：置于水解管中，加入200iiL的蒸饋水，溶解，再加入200yL的0. 50mo