多價腦膜炎球菌制劑盒、疫苗制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及多價疫苗技術領域，特別涉及一種可穩(wěn)定維持多價腦膜炎球菌疫苗抗 原活性的組合制劑及制備方法。
【背景技術】
[0002] 腦膜炎球菌（Meningococcus)，又稱為腦膜炎奈瑟氏球菌，為流行性腦脊髓膜炎 (簡稱流腦）的病原菌。根據(jù)腦膜炎球菌莢膜多糖的抗原不同，通過血凝試驗，將腦膜炎球 菌分為A、B、C、D、X、Y、29E、W135、H、I、K群等十多個血清型。常見的流行株主要分布于A 群、C群、W135群以及Y群。
[0003] 預防接種是控制流腦最經(jīng)濟有效的措施，我國從1980年代開始廣泛使用A群流腦 多糖疫苗，2007年更將A群和A+C群流腦多糖疫苗納入國家免疫規(guī)劃，多年臨床經(jīng)驗證明， 疫苗可有效的防止感染，極大降低致病率。目前，已上市或進入臨床階段的腦膜炎球菌疫苗 包括單價疫苗如A群腦膜炎球菌多糖疫苗和C群腦膜炎球菌多糖-蛋白結合疫苗等，以及 多價疫苗（或組合疫苗）如A群C群腦膜炎球菌多糖疫苗、A群C群腦膜炎球菌多糖-蛋 白結合疫苗、ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗和ACYW135群腦膜炎球菌多糖-蛋白結合疫 苗等。
[0004] 其中，多價疫苗由于含有一種以上病原生物的抗原，相比較單價疫苗具有更廣的 預防譜，臨床優(yōu)勢明顯。然而，多價疫苗由于不同有效組分（抗原組分）之間物理和生化性 質的不相容性以及免疫干擾性等原因，導致其制造較為困難，且疫苗的穩(wěn)定性較難保證；此 外，多價疫苗質量控制的復雜程度遠高于單價疫苗。
[0005] 現(xiàn)有技術中多價流腦疫苗制劑主要包括液體制劑、凍干制劑、凍干和液體制劑組 合。然而，這些制劑雖滿足疫苗申報的相關標準，經(jīng)臨床驗證不影響產(chǎn)品的免疫原性和穩(wěn)定 性，但是疫苗生產(chǎn)工藝復雜，且不易于成品中多組分抗原含量的分析和質量控制。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的一個目的是提供一種多價腦膜炎球菌疫苗制劑，該多價腦膜炎球菌疫苗 制劑可穩(wěn)定維持制劑中抗原活性，且易于對制劑中有效抗原組分活性進行檢測。
[0007] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種多價腦膜炎球菌疫苗制劑的制備工藝，其工藝簡 單，且易于制劑中有效抗原組分活性的測定，便于流腦結合疫苗成品中抗原組分的質控。
[0008] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0009] 本發(fā)明提供一種多價腦膜炎球菌試劑盒，包括凍干組分和液體組分，所述凍干組 分和液體組分分別包括A，C，Y或W135群腦膜炎球菌多糖中的1種、2種或3種，且相同的 腦膜炎球菌多糖不同時存在于凍干組分和液體組分中。
[0010] 本發(fā)明還提供一種多價腦膜炎球菌疫苗制劑，包括凍干組分和液體組分，所述凍 干組分和液體組分分別包括A，C，Y或W135群腦膜炎球菌多糖中的1種、2種或3種，且相 同的腦膜炎球菌多糖不同時存在于凍干組分和液體組分中；通過將液體組分和凍干組分相 混合得到多價腦膜炎球菌疫苗制劑。
[0011] 本發(fā)明還提供一種多價腦膜炎球菌疫苗制劑的制備方法，該方法包括將凍干組分 和液體組分相混合，所述凍干組分和液體組分分別包括A，C，Y或W135群腦膜炎球菌多糖中 的1種、2種或3種，且相同的腦膜炎球菌多糖不同時存在于凍干組分和液體組分中。
[0012] 優(yōu)選的，本發(fā)明試劑盒/疫苗制劑可為2、3、4價腦膜炎球菌試劑盒/制劑；所述 凍干組分包括A、C或AC群腦膜炎球菌多糖；所述液體組分包括血清群Y、W135、YW135或 AYW135群腦膜炎球菌多糖。
[0013] 在本發(fā)明中，A群腦膜炎球菌多糖的功能團為0-乙酰基和磷，C群腦膜炎球菌多 糖的官能團為〇-乙?；屯僖核幔琖群腦膜炎球菌多糖的官能團為半乳糖和唾液酸，Y群 糖的官能團為葡萄糖和唾液酸；本發(fā)明所提供的多價腦膜炎球菌疫苗制劑的優(yōu)勢之一是可 以根據(jù)官能團來測定各多糖的含量，從而獲取各自抗原的含量，進行質量監(jiān)控。本發(fā)明按照 "官能團互不影響含量測定的原則"將腦膜炎球菌多糖以凍干和液體的形式進行組合得到 多價腦膜炎球菌試劑盒，能夠方便快捷的對試劑盒中各有效抗原成分進行含量測定。例如， 本發(fā)明多價腦膜炎球菌試劑盒中凍干組分和液體組分的組合可為（"+"前后分別代表凍干 組分和液體組分）：AC+YW135 ;AC+W135 ;AC+Y;C+AYW135 ;C+YW135 ;C+W135 ;C+Y;A+YW135 ; A+W135 ;A+Y等。
[0014]更優(yōu)選的，本發(fā)明試劑盒/疫苗制劑為4價腦膜炎球菌試劑盒/制劑，所述凍干組 分為AC群腦膜炎球菌多糖，所述液體組分為WY135群腦膜炎球菌多糖；或所述凍干組分為 C群腦膜炎球菌多糖，所述液體組分為AYW135群腦膜炎球菌多糖。當選擇AC群腦膜炎球 菌多糖為凍干組分，每種抗原含量的檢測可以通過磷含量和唾液酸含量的測定實現(xiàn)，選擇 YW135群腦膜炎球菌多糖為液體組分，有效抗原組分可以通過測定半乳糖和葡萄糖實現(xiàn)。其 中，磷含量、唾液酸含量、半乳糖和葡糖糖含量的測定可按照《中國藥典》(2010)規(guī)定的方法 進行測定。此處給出的實施方式僅為進行示意性說明本發(fā)明。
[0015] 在本發(fā)明中，所述腦膜炎球菌多糖以偶聯(lián)或未偶聯(lián)在蛋白載體上的形式存在。即 所述腦膜炎球菌多糖以獨立的形式存在，或偶聯(lián)在蛋白載體上以結合的形式存在。優(yōu)選的， 所述腦膜炎球菌多糖以偶聯(lián)在蛋白載體上的形式存在。
[0016] 優(yōu)選的，所述的蛋白載體包括突變無毒白喉毒素（CRM197)、白喉類毒素（DT)和/ 或破傷風類毒素（TT)。當凍干組分包括一種以上腦膜炎球菌多糖時，各偶聯(lián)物可采用相同 的蛋白載體（例如，當存在兩種腦膜炎球菌多糖時，可分別偶聯(lián)與CRM197上，然后組合）或 不同的載體蛋白（例如，一種腦膜炎球菌多糖偶聯(lián)在CRM197上，另一種偶聯(lián)在TT上）。
[0017]其中，腦膜炎球菌多糖（例如A、C、Y和W135群腦膜炎球菌多糖及腦膜炎球菌多 糖蛋白偶聯(lián)物）的制造方法是本領域技術人員所公知的技術，本領域技術人員可通過任何 已知的現(xiàn)有方法進行制備，例如獨立的腦膜炎球菌多糖采用相應腦膜炎球菌菌種經(jīng)過發(fā)酵 培養(yǎng)生產(chǎn)出A、C、Y、W135群腦膜炎球菌多糖，其純化步驟可以為通用的常規(guī)步驟（例如超 濾、色譜、透析等方法）。與蛋白載體偶聯(lián)的多糖，例如通過合適的偶聯(lián)反應（采用活性酯、 巰基、碳二亞胺、酰肼、降冰片烷、對硝基苯甲酸、N-羥基琥珀酰亞胺等）進行，或者采用各 種現(xiàn)有的等同的方法實現(xiàn)偶聯(lián)過程。此外，本領域技術人員也可采用市售產(chǎn)品得到與蛋白 載體偶聯(lián)或未偶聯(lián)的腦膜炎球菌多糖。
[0018] 優(yōu)選的，所述凍干組分還可包括保護劑，所述保護劑包括乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露 醇中的一種或多種，例如乳糖/蔗糖混合物、蔗糖/甘露醇混合物等。更優(yōu)選的，所述保護 劑為低濃度（以水為溶劑濃度為10~l〇〇mg/mL)蔗糖/甘露醇的混合物；更優(yōu)選的，甘露 醇的含量為每劑不高于l〇mg，例如5-10mg，優(yōu)選為10mg ;鹿糖的含量為每劑不高于5mg，例 如2_5mg，優(yōu)選為5mg。
[0019] 優(yōu)選的，所述凍干組分通過如下步驟制備：取經(jīng)純化的腦膜炎球菌多糖和/或保 護劑，在溫度為-45 ± 5°C下預凍120~300分鐘；抽真空，保持真空度0. 2 ± 0. 02mBar，在溫 度為-35 ±5°C下真空干燥720~960分鐘；升溫至35 ±5°C，普通干燥300~600分鐘。
[0020] 更優(yōu)選的，所述凍干組分通過如下步驟制備：取腦膜炎球菌多糖和/或保護劑，在 溫度為_45°C下預凍240~300分鐘；抽真空，保持真空度0. 2±0. 02mBar，在溫度為-35°C 下真空干燥840~960分鐘；升溫至35°C，普通干燥300~600分鐘。采用本發(fā)明制備工藝 得到的凍干組分，凍干效果好，凍干組分平整無塌陷且呈蜂窩狀，無萎縮現(xiàn)象，且含水量小。
[0021] 優(yōu)選的，所述試劑盒/疫苗制劑還包括稀釋劑，所述稀釋劑選自磷酸鹽緩沖液， Tris緩沖液，硼酸鹽緩沖液，琥珀酸鹽緩沖液，組氨酸緩沖液、PBS緩沖液、氯化鈉溶液或檸 檬酸緩沖液中的一種或多種；更優(yōu)選的，所述稀釋劑為〇. 45%氯化鈉水溶液和10mM磷酸鹽 緩沖液。采用氯化鈉和磷酸鹽作為緩沖液安全可靠，且〇.