專利名稱：2－苯基苯并咪唑化合物和2－苯基吲哚化合物,它們的制備和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的2-苯基苯并咪唑類和2-苯基吲哚類化合物，它們的制備方法以及它們用于制備作為聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP(EC2.4.2.30)抑制劑藥物的用途。
聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)或又稱為聚(ADP-核糖)合成酶(PARS)是一種在細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性酶(K.Ikai等人，J.Histochem.Cytochem.1983，31，1261-1264)。人們假設(shè)PARP在DNA橋的修復(fù)中起著作用(M.S.Satoh等人，Nature 1992，356，356-358)。DNA鏈的損傷或斷裂活化了酶PARP，后者活化后，可以催化從NAD的ADP-核糖的轉(zhuǎn)化(S.Shaw，Adv.Radiat.Biol.，1984，11，1-69)。在此過(guò)程期間，尼古丁酰胺從NAD中釋放出來(lái)。伴隨著其它酶的能量載體ATP的消耗，尼古丁酰胺再次轉(zhuǎn)化為NAD。因此，PARP的過(guò)度活化可以導(dǎo)致ATP消耗非生理性的增高，這種現(xiàn)象在極端的情況下將導(dǎo)致細(xì)胞損傷和細(xì)胞死亡。已知象超氧陰離子、NO和過(guò)氧化氫的游離基可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)DNA的損傷及隨后的PARP活化。在許多病理狀況下觀察到有大量游離基形成，因此人們由此假設(shè)積蓄的游離基可以導(dǎo)致細(xì)胞和器官的損傷或?qū)λ^察到的細(xì)胞和器官的損傷有所貢獻(xiàn)。這不僅包括器官的例如在中風(fēng)、心肌梗塞中所出現(xiàn)的局部缺血(C.Thiemermann等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1997，94，679-683)或腎臟的局部缺血，而且還包括再灌注損傷，例如心肌梗塞癥狀消退后出現(xiàn)的局部缺血(參見(jiàn)上文C.Thiemermann等人)。因此可以將PARP的抑制作為防止或減輕這類損傷(至少是部分地)的一種方法，PARP抑制劑也成為治療許多疾病的一種新治療手段。
PARP酶可以影響DNA的修復(fù)并因此可以在腫瘤疾病的治療過(guò)程中起到一定的作用，因?yàn)樵谂c抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的其它活性物質(zhì)聯(lián)合使用時(shí)，觀察到更強(qiáng)的抗腫瘤組織活性作用(G.，Chen等人，Cancer Chemo.Pharmacol.1988，22，303)。
非限定性的腫瘤的實(shí)例有白血病、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤[sic]、淋巴瘤、黑色(素)瘤、乳房瘤和子宮頸瘤。
進(jìn)一步地，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)PARP抑制劑具有免疫抑制作用(D.Weltin等人，Int.J.Immunopharmacol.1995，17，265-271)。
現(xiàn)還發(fā)現(xiàn)，PARP涉及一些免疫失調(diào)或疾病，在這些免疫失調(diào)或疾病中免疫系統(tǒng)起著重要的作用，例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和膿毒性休克，PARP抑制劑對(duì)控制這些疾病的進(jìn)程顯示出有益的作用(H.Kroger等人，Inflammation1996，20，203-215；W.Ehrlich等人Rheumatol.Int.1995，15，171-172；C.Szabo等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95，3867-3872；S.Cuzzocrea等人，Eur.J.Pharmacol.1998，342，67-76)。
在本發(fā)明的含義中，PARP還被理解為上述PARP酶的同功酶。
進(jìn)一步地，PARP抑制劑3-氨基苯甲酰胺在循環(huán)休克的模型中顯示出保護(hù)活性(S.Cuzzocrea等人，Br.J.Parmacol.1997，121，1065-1074)。
還存在同樣的實(shí)驗(yàn)指征，它們顯示PARP酶抑制劑可用作治療糖尿病的藥物(V.Burkart等人，Nature Med.1999，5，314-319)。
2-苯基苯并咪唑類化合物被廣泛描述。在DE 38 30 060中描述了作為紅細(xì)胞聚集抑制劑的烷基化衍生物。在DE 35 22 230中提到作為血小板聚集抑制劑的2-苯基苯并咪唑的酯類衍生物。在WO 98/06703中描述了作為MCP-1拮抗劑的鹵素-取代的2-苯基苯并咪唑類，其在苯環(huán)上帶有取代胺基團(tuán)。
已知2-苯基苯并咪唑類化合物的苯并咪唑類基團(tuán)上帶有酰胺基基團(tuán)。在WO94/12461中描述了作為cAMP磷酸二酯酶抑制劑的2-苯基苯并咪唑類化合物的5-酰胺基衍生物(其在苯環(huán)上攜帶烷氧基基團(tuán))。對(duì)于同類衍生物來(lái)說(shuō)，已發(fā)現(xiàn)在DE 35 46 575中(例如實(shí)施例15)描述了這些化合物可以具有陽(yáng)性的影響肌收縮力效應(yīng)。在WO 97/48697中也描述了作為cAMP磷酸二酯酶抑制劑的4-酰胺基衍生物(其在3-位上攜帶了一個(gè)吡啶基團(tuán))。
在J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，1979，2303-2307中描述了2-苯基苯并咪唑-4-酰胺的合成。在J.Med.Chem.1990，33，814-819中描述了在酰胺基團(tuán)上攜帶進(jìn)一步的取代烷基鏈的同類化合物，它們被認(rèn)為具有細(xì)胞毒作用。在WO 97/04771中提到了抑制PARS的苯并咪唑-4-酰胺。特別地，描述了作為活性成分的在2-位上攜帶苯環(huán)的衍生物，還可以用其它簡(jiǎn)單的取代基來(lái)取代苯環(huán)，例如硝基、甲氧基和CF3。盡管在某些情況下這些取代基對(duì)PARP酶顯示出良好的抑制作用，但是所描述的衍生物也有不足之處在水溶液中它們僅顯示出非常小的水溶解度或根本不溶于水，因此無(wú)法以水溶液的形式進(jìn)行給藥。
在中風(fēng)的許多療法中，活性化合物是以滴注溶液的形式經(jīng)靜脈內(nèi)給藥。為了達(dá)到這個(gè)目的，必須首先獲得在生理pH或大約生理pH(例如pH5-8)條件下具有足夠的水中溶解度的物質(zhì)，從而才能制備滴注溶液。許多描述的PARP抑制劑，尤其是那些具有較好活性的PARP抑制劑具有這點(diǎn)不足，在這種pH條件下它們僅顯示出非常低的水溶解度或根本不溶于水，因此不適合用于靜脈給藥。這種類型的活性化合物僅可與傾向于介導(dǎo)水溶性的輔助劑一起給藥(參見(jiàn)WO 97/04771)。這些輔助劑的實(shí)例有聚乙二醇和二甲亞砜，它們經(jīng)常會(huì)引起副反應(yīng)甚至是無(wú)法忍受的。迄今為止尚未有關(guān)于具有足夠水溶解度的高效PARP抑制劑的描述。
現(xiàn)已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，在苯環(huán)上另外攜帶胺基團(tuán)的2-苯基苯并咪唑類化合物是高效的抑制劑，由于引入了脂肪性的胺基團(tuán)，使之可與酸形成鹽類，結(jié)果顯著地提高了化合物的水溶解度。
在本發(fā)明中，描述了具通式I的新2-苯基苯并咪唑類和2-苯基吲哚類化合物，與已描述的化合物相比較，它們顯示出一定的優(yōu)勢(shì)，是強(qiáng)PARP抑制劑，同時(shí)它們也顯示出足夠的水溶解度，從而使得以滴注溶液的形式進(jìn)行給藥成為可能。
本發(fā)明涉及取代的具有通式I的2-苯基苯并咪唑類和2-苯基吲哚類化合物 其中A為N或CH，R1為氫，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，其中烷基的一個(gè)碳原子可以進(jìn)一步攜帶OR11或基團(tuán)R5，其中R11為氫或C1-C4-烷基，并且R2為氫，氯，氟，溴，碘，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22各自獨(dú)立，為氫或C1-C4-烷基，并且R23為氫或C1-C4-烷基或苯基，并且R3為-(CH2)q-NR31R32，-(CH2)q-NR33R34，其中q為0，1，2或3，R31為氫或C1-C6-烷基，(CH2)4NR33R34，R32[sic]為氫或(CH2)rNR33R34，其中，如果R31和R32各自獨(dú)立，r為2，3，4，5或6，并且R33和R34各自獨(dú)立，為氫，C1-C6-烷基，與氮原子一起形成可額外帶選自O(shè)雜原子的3-8元環(huán)，N-C1-C4-烷基，N-C0-C2-苯基或NH，苯基C1-C4-烷基，其中苯環(huán)上可被上至3個(gè)相同或不同的取代基所取代，所述的取代基選自C1-C6-烷基，鹵素，硝基，SO2NR35R36(其中R35，R36各自獨(dú)立，為氫，C1-C6-烷基，與氮原子一起形成可以攜帶其它選自O(shè)，S，SO2雜原子的3-8元環(huán)，N-C1-C4-烷基，N-C0-C2-苯基或NH)，C1-C4-烷氧基，S(O)0-2-R37(其中R37為氫，C1-C4-烷基)，CF3，(CH2)0-4-COR37，(CH2)0-4NR35R36，(CH2)0-4CONR35R36，(CH2)0-4OR37-CH2COOR37，R4為氫，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，OR41，其中R41和R42各自獨(dú)立，為氫或C1-C4-烷基，并且R43為C1-C4-烷基或苯基。
通式I中基團(tuán)R2優(yōu)選的位置是苯并咪唑環(huán)的3-位和4-位，對(duì)于基團(tuán)R3來(lái)說(shuō)，位于苯并咪唑環(huán)的3-位或4-位上同樣是優(yōu)選的。
A的優(yōu)選的定義是氮。
R1的優(yōu)選的定義是氫。
R2的優(yōu)選的定義是氫，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，硝基，CN，NH2，O-C1-C4-烷基。R2特別優(yōu)選的是氫。
R3為(CH2)1-2NR35R36和N(R37)-(CH2)2-3NR35R36，其中R37為氫或C1-C4-烷基，R35和R36各自獨(dú)立，為氫和C1-C4-烷基，NR35R36還可一起構(gòu)成環(huán)狀的脂肪胺，例如，哌啶，吡咯烷，氮雜和哌嗪，其中哌嗪的第二個(gè)N原子可以進(jìn)一步被氫或C1-C4-烷基取代。
R4優(yōu)選的定義是氫。
上述優(yōu)選含義各自的結(jié)合是特別優(yōu)選的。
式I化合物可以其外消旋、對(duì)映體純化合物或非對(duì)映體形式應(yīng)用。如果需要對(duì)映體純化合物，可以采用合適的光學(xué)活性堿或酸，對(duì)式I化合物或其中間體進(jìn)行經(jīng)典的拆分來(lái)獲得。
本發(fā)明還涉及式I化合物的內(nèi)消旋體和互變異構(gòu)體。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及式I化合物生理上可耐受的鹽類，它們可以通過(guò)使式I化合物與合適的酸或堿反應(yīng)得到。在Fortschritte derArzneimittelforschung，1966，Birkhauser Verlag，Vol.10，pp.224-285中例舉了合適的酸和堿。它們包括，例如，鹽酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、磷酸、甲磺酸、乙酸、甲酸、馬來(lái)酸、富馬酸等，以及氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化鉀和tris。
前藥的含義是它們可在體內(nèi)代謝為通式I化合物。典型的前藥為磷酸鹽、氨基酸的氨甲酸鹽、酯和其它化合物。
根據(jù)本發(fā)明，物質(zhì)I的制備可以采用各種方法，它們與WO 98/06703中所列的用于苯并咪唑和吲哚的方法以及合成路線1-3相類似。合成路線1
使苯甲醛與亞苯基二胺進(jìn)行縮合可以得到苯并咪唑VII。該反應(yīng)優(yōu)選的是在極性溶劑中進(jìn)行，例如乙醇或二甲基甲酰胺，并在提高的溫度(通常為80-120℃)下加入酸，例如乙酸，加入弱氧化劑(例如銅(II)鹽，以水溶液的形式加入)對(duì)于反應(yīng)來(lái)說(shuō)是有利的。合成路線2 如果亞苯基二胺VII中的R＝NH2，則根據(jù)本發(fā)明可在縮合反應(yīng)中直接形成式I化合物。另外，如果R＝O-烷基，此酯可與氨反應(yīng)(如果合適可在提高的溫度和壓力下)，得到酰胺I?；蛘?，酯VIII可在提高的溫度(優(yōu)選的是為80-130℃)和壓力下，與肼在極性溶劑(例如醇類，如丁醇和乙醇或二甲基甲酰胺)中進(jìn)行反應(yīng)，得到酰肼VIII[sic](R＝NHNH2)，后者可在還原條件下進(jìn)行還原，例如在回流的醇中使用Raney鎳，得到式I酰胺。
在上述的烷基化條件下可在式I化合物(R1＝H)的苯并咪唑基團(tuán)上引入R1基團(tuán)(參見(jiàn)V-VI)，然而其中必須使用反應(yīng)成分R1-L(L為上述離去基團(tuán))(參見(jiàn)路線I)。合成路線3 就路線I中所示的式VI苯甲醛而言，可用如式XI的苯甲酸(參見(jiàn)路線2)或如式XIV的苯甲腈(參見(jiàn)路線3)來(lái)代替它。按照制備取代的式V苯甲醛相類似的方法可以制備這些衍生物。從式XI開(kāi)始，得到式VII的縮合反應(yīng)可分兩步進(jìn)行。首先，使式XI苯甲酸與式VI苯胺以肽樣的偶聯(lián)方式進(jìn)行反應(yīng)，得到式XII酰胺。此反應(yīng)采用常規(guī)的條件進(jìn)行，例如其在Houben-Weyl，“有機(jī)化合物方法”，第4版，E5，第V章或C.R.Larock，“復(fù)雜有機(jī)變化”，VCH出版社，1989，pp.972ff中有所描述。然后在提高的溫度(例如60-180℃)[sic]下，進(jìn)行生成苯并咪唑的環(huán)合反應(yīng)，該反應(yīng)可在有(例如二甲基甲酰胺)或沒(méi)有溶劑的情況下，通過(guò)加入酸(例如乙酸)或直接在乙酸中進(jìn)行。
式VII亞苯基二胺與式XIV苯甲腈的反應(yīng)可在常規(guī)的條件下進(jìn)行。在這種情況下，反應(yīng)可在溶劑中(例如二甲基甲酰胺)并加入酸下進(jìn)行，或也可在提高的溫度下(例如60-200℃)于多膦酸中進(jìn)行。然而，也可以采用從苯甲腈制備脒類的常規(guī)方法，例如在Houben-weyl“有機(jī)化合物方法”，E5，p1304f.，J.Amer.Chem.Soc.1957，427和J.Org.Chen.1987，1017中所描述的方法。
本發(fā)明中含有的取代的式I2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚是多聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP的抑制劑(EC2.4.2.30)。
可以采用文獻(xiàn)中已知的酶測(cè)試方法來(lái)測(cè)定式I2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚的抑制作用，以測(cè)定的K值作為活性標(biāo)準(zhǔn)。用這種方式測(cè)定了式I2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚對(duì)多聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP的抑制作用(EC2.4.2.30)。
通式I的取代2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚I是多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)或也稱為多聚(ADP-核糖)合成酶(PARS)的抑制劑，因此其可以用來(lái)治療和預(yù)防與這些酶活性增加有關(guān)的疾病。
式I化合物可以用來(lái)制備治療局部缺血后損傷的藥物，并可用來(lái)預(yù)防各種器官可預(yù)期的局部缺血。
因此通式I的2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚I可以用來(lái)治療和預(yù)防局部缺血、創(chuàng)傷(顱腦創(chuàng)傷)、大出血、蛛網(wǎng)膜下出血以及中風(fēng)后的神經(jīng)變性疾病，還可以治療和預(yù)防其它神經(jīng)變性疾病，例如多發(fā)性梗塞癡呆，Alzheimer’s疾病、Huntington’s疾病，還可以治療和預(yù)防癲癇，特別是一般性癲癇發(fā)作(例如癲癇小發(fā)作、緊張性陣攣發(fā)作)以及部分癲癇發(fā)作(例如顳葉和復(fù)合部分發(fā)作)。進(jìn)一步地，它們可用來(lái)治療和預(yù)防心臟局部缺血后的心臟損傷以及腎臟局部缺血后的腎損傷，例如急性腎功能不全，急性腎衰或在腎移植過(guò)程中或之后出現(xiàn)的損傷。式I化合物可進(jìn)一步用來(lái)治療和預(yù)防急性心肌梗塞及出現(xiàn)在藥物溶解過(guò)程中或之后的損傷(例如TPA、reteplase、鏈激酶或者因激光或Rotablator導(dǎo)致的機(jī)械性損傷)，還可用來(lái)治療和預(yù)防心臟瓣膜替換、動(dòng)脈瘤切除及心臟移植過(guò)程中或之后出現(xiàn)的微梗塞。本發(fā)明式I2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚I同樣可以用來(lái)治療臨界壓縮的冠狀動(dòng)脈的再血管化(例如在PCTA和心臟分流手術(shù)中)、臨界壓縮的外周動(dòng)脈的再血管化(例如腿部動(dòng)脈)。更進(jìn)一步地，式I2-苯基苯并咪唑和2-苯基吲哚對(duì)于腫瘤及其轉(zhuǎn)移的化療是有益的，另外它們還可以治療炎癥和風(fēng)濕性失調(diào)，例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。除了常規(guī)的制藥輔助劑外，本發(fā)明藥物制劑含有治療有效劑量的式I化合物。
對(duì)于局部外用而言，在粉末、軟膏劑或噴霧劑中可以含有常規(guī)濃度的活性化合物。作為常規(guī)，活性化合物的含量為0.001-1％(重量比)，優(yōu)選的是0.001-0.1％(重量比)。
在用于內(nèi)部給藥時(shí)，以個(gè)體劑量給藥。個(gè)體劑量的給藥量為0.1-100mg/Kg體重。根據(jù)疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，每日給藥一或多次。
根據(jù)需要的給藥類型，本發(fā)明藥物制劑中除了活性化合物外還含有常規(guī)的載體和稀釋劑。對(duì)于局部外用而言，可以使用制藥用輔助劑，例如乙醇、異丙醇、乙氧化蓖麻油、乙氧化氫化蓖麻油、聚丙烯酸、聚乙二醇、聚乙二醇硬脂酸酯、乙氧化脂肪醇、石蠟油、石油膠和羊毛脂。對(duì)于內(nèi)部給藥而言，合適的輔助劑有乳糖、丙二醇、乙醇、淀粉、滑石以及聚乙烯吡咯烷酮。
藥物制劑還可以進(jìn)一步含有抗氧劑，例如維生素E和丁基化羥基茴香醚和丁基化羥基甲苯，芳香增強(qiáng)添加劑，穩(wěn)定劑，乳化劑和潤(rùn)滑劑。除了活性化合物外，在制劑中含有的物質(zhì)以及在制備藥物制劑過(guò)程中所用的物質(zhì)是毒理學(xué)上可接受的，并可以與有關(guān)的活性化合物相配伍。藥物制劑的制備是以常規(guī)的方式進(jìn)行的，例如將活性化合物與其它載體和稀釋劑相混合。
可以各種方式給予藥物制劑，例如經(jīng)口服和非腸道如靜脈內(nèi)滴注、皮下、腹膜內(nèi)和局部途徑?？赡艿闹苿┬问接衅瑒?、乳化劑、滴注和注射溶液、膏劑、軟膏劑、凝膠、霜?jiǎng)⑾磩?、粉劑和噴霧劑。
實(shí)施例12-(4-N，N-2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺a)2-(4-N，N-2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酸乙酯將2.0g(12mmol)2，3-二氨基苯甲酸乙酯溶于100ml甲醇中，并與1.7ml(27.7mmol)的乙酸進(jìn)行混合。在30分鐘內(nèi)，將溶于100ml甲醇中的2.4g(10.1mmol)4-(2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯甲醛滴加到其中。再向其中滴加1.7g(8.5mol)的乙酸酮(II)的30ml水溶液，回流加熱50分鐘。冷卻至50℃，小心加入20ml 32％的濃鹽酸溶液。再向其中滴加3.9g(16.2mmol)硫化鈉水合物的20ml水溶液，攪拌10分鐘。抽濾過(guò)濾沉淀，加入碳酸氫鈉水溶液使溶液堿化。水相用乙酸乙酯提取，分出有機(jī)層，干燥，真空濃縮，得到2.6g產(chǎn)物。b)2-(4-N，N-2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-酰肼將2.6g(6.8g mmol)的中間體1和3.4g(68.3mmol)水合肼一起加到70ml正丁醇中，混合物在120℃下加熱12小時(shí)。減壓蒸除丁醇，得到的殘余物在水和乙酸乙酯之間進(jìn)行分配。分出有機(jī)相，干燥，真空濃縮，得到1.1g產(chǎn)物。c)2-(4-N，N-2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺將1g Raney鎳加到1.1g(2.9g mmol)中間體1b的30ml二甲基甲酰胺中，混合物在120℃下加熱8小時(shí)。過(guò)濾混合物，真空濃縮濾液。得到的殘余物在水和乙酸乙酯之間進(jìn)行分配。分出有機(jī)相，干燥，真空濃縮，得到0.9g產(chǎn)物。
1H-NMR(D6-DMSO)δ＝2.2(6H)，2.4(2H)，3.0(3H)，3.5(2H)，6.8(2H)，7.2(1H)，7.6-7.8(3H)，8.1(2H)，9.5(1H)和13.2(1H)ppm.實(shí)施例22-(4-N，N-2-(N，N-二甲基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺按照與實(shí)施例1相似的方法進(jìn)行制備。
1H-NMR(D6-DMSO)δ＝2.2(6H)，2.55(2H)，3.1(2H)，7.4(1H)，7.8(2H)，7.9(1H)，8.1(1H)，8.3(1H)，8.4(1H)，9.2(1H)ppm.
1H-NMR(D6-DMSO)δ＝1.25(6H)，3.1(3H)，3.2(4H)，3.9(2H)，7.0(2H)，7.2(1H)，7.6-7.9(3H)，8.1(2H)，9.5(1H)，10.9(1H)和13.5(寬峰)ppm.
類似地，按照WO 98/06703中所述的方法或本專利申請(qǐng)中所述的方法可以制備下列化合物1. 2-(4-(二甲基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺2. 2-(4-(二甲基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺3. 2-(4-(吡咯烷-1-基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺4. 2-(4-(哌啶-1-基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺5. 2-(4-氨基甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺6. 2-(4-(甲基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺7. 2-(4-(丙基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺8. 2-(4-(2-(二乙基氨基)乙-1-基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺9. 2-(4-(2-(二甲基氨基)乙-1-基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺10. 2-(4-(2-氨基乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺11. 1-(2-(2-(甲基氨基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺12. 2-(4-(2-(乙基氨基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺13. 2-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺14. 2-(4-(2-(哌啶-1-基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺15. 2-(3-(二乙基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺16. 2-(3-(二甲基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺17. 2-(3-(吡咯烷-1-基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺18. 2-(3-哌啶-1-基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺19. 2-(3-氨基甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺20. 2-(3-(甲基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺21. 2-(3-(正丙基氨基)甲基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺22. 2-(3-(2-(二乙基氨基)乙-1-基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺23. 2-(3-(2-(二甲基氨基)乙-1-基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺24. 2-(3-(2-氨基乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺25. 2-(3-(2-(N-甲基氨基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺26. 2-(3-(2-N-甲基氨基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺27. 2-(3-(2-(吡咯烷-1-基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺28. 2-(3-(2-(哌啶-1-基)乙-1-基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺29. 2-(4-N，N-(2-氨基乙-1-基)甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺30. 2-(4-N-(2-(二乙基氨基)乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺31. 2-(4-N-(2-(二甲基氨基)乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺32. 2-(4-N-(2-氨基乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺33. 2-(3-N，N-(2-(二甲基氨基)乙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺34. 2-(3-N，N-(2-氨基乙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺35. 2-(3-N-(2-(二乙基氨基)乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺36. 2-(3-N-(2-(二甲基氨基)乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺37. 2-(3-N-(2-氨基乙-1-基)氨基)苯基)苯并咪唑-4-羧酰胺38. 2-(3-N，N-(d-(二乙基氨基)丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺39. 2-(3-N，N-(D-(二甲基氨基)丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺40. 2-(3-N，N-(3-氨基丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺41. 2-(3-N-(D-(二甲基氨基)丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺42. 2-(3-N-(3-(二甲基氨基)丙-1-基)氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺43. 2-(3-N-(3-氨基丙-1-基)氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺44. 2-(3-N，N-(2-吡咯烷酮-1-基-乙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺45. 2-(3-N-(2-吡咯烷酮-1-基)乙-1-基)氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺46. 2-(3-N，N-(3-(吡咯烷-1-基)丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺47. 2-(3-N，N-(3-(哌啶-1-基)丙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺48. 2-(3-N，N-(2-(哌啶-1-基)乙-1-基)甲基氨基)苯基苯并咪唑-4-羧酰胺實(shí)施例A聚(ADP-核糖)聚合酶或PARP(EC2.4.2.30)的抑制用組蛋白(II-AS型；SIGMA H7755)涂布96池微滴平皿(Falcon)。首先將組蛋白溶解于碳酸鹽緩沖液(0.05M NaHCO3；pH9.4)中，得到的濃度為50μg/ml，在微滴平皿的每個(gè)池中加入100μl此組蛋白溶液，使之培養(yǎng)過(guò)夜。移除組蛋白溶液，在每個(gè)池中加入200μl 1％濃BSA(牛血清白蛋白)溶液的碳酸緩沖溶液并于室溫下培養(yǎng)2小時(shí)。用洗滌緩沖液(0.05％吐溫10的PBS溶液)洗滌3次，為了使酶反應(yīng)，使每池中含有50μl酶反應(yīng)溶液(5μl反應(yīng)緩沖液(1M tris HCl pH8.0，100mM MgCl2，10mM DTT)，0.5μl PARP(c＝0.22μg/μl)，4μl活化的DNA(SIGMA D-4522，1mg/ml水溶液)，40.5μl水)，并與10μl抑制劑溶液一起預(yù)培養(yǎng)10分鐘。加入40μl底物溶液(4μl反應(yīng)緩沖液(同上)，8μl NAD溶液(100μM水溶液)，28μl水)開(kāi)始反應(yīng)。反應(yīng)于室溫下進(jìn)行20分鐘。用洗滌緩沖液(同上)洗滌3次終止反應(yīng)。接著與特異的抗聚-ADP-核糖抗體一起在室溫培養(yǎng)1小時(shí)。所用的抗體為單克隆抗-聚-(ADP-核糖)抗體“10H”(Kawamaitsu H.等人(1984)，Monoclonal antibodies to poly(adenosinediphosphatr ribose)recognize different structures，生物化學(xué)23，3771-3777)，也可以采用多克隆抗體。
采用1∶5,000的抗體稀釋液，用抗體緩沖液(1％BSA的PBS溶液；0.05％吐溫20)來(lái)進(jìn)行稀釋。用緩沖液洗滌3次后，與次級(jí)抗體在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。對(duì)于單克隆抗體而言，采用偶聯(lián)過(guò)氧化酶(Boehringer Mannheim)的抗小鼠IgG，對(duì)于兔子抗體而言，采用偶聯(lián)過(guò)氧化酶(SIGMA A-6154)的抗兔子IgG，均采用用抗體緩沖液稀釋的1∶10,000的稀釋液。用緩沖液洗滌3次后，采用100μl/池的著色試劑(SIGMA，TMB已混合的T8540)在室溫下進(jìn)行著色反應(yīng)約15分鐘。加入100μl 2M的硫酸終止著色反應(yīng)，立即進(jìn)行測(cè)定(450nm對(duì)620nm；ELISA平皿-讀數(shù)儀器“Easy Reader”EAR340AT，SLT Labinstruments，Austria)所要測(cè)量的抑制劑的IC50值是使最大色濃度出現(xiàn)一半改變時(shí)的抑制劑濃度。Ki值為抑制常數(shù)。測(cè)定了下列Ki值實(shí)施例1 16nM實(shí)施例2 10nM實(shí)施例34nM實(shí)施B水溶解度的測(cè)定將需要測(cè)定的化合物直接溶解在一定體積的水中，用乙酸鈉溶液調(diào)節(jié)生成溶液pH值至5-6，從而獲得了待測(cè)濃度的活性化合物溶液。如果測(cè)定物質(zhì)不存在水溶性的鹽類形式，將其溶解于小量的二甲亞砜中，然后用水稀釋(二甲亞砜的終濃度＜＝1％)，同上調(diào)節(jié)pH值。強(qiáng)PARP抑制劑NU1076(WO 97/04771)顯示出的溶解度＜0.01％，而本發(fā)明實(shí)施例化合物的溶解度＞0.5％。實(shí)施例CPARP抑制劑的細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)為了測(cè)試PARP抑制劑的作用，用化學(xué)品處理真核細(xì)胞，以使細(xì)胞系DNA受到損傷，結(jié)果存在于細(xì)胞中的PARP酶被活化。由于酶的活化，在蛋白質(zhì)上形成了聚-ADP-核糖(PAR)鏈。這些鏈與特異的抗體結(jié)合。它們反過(guò)來(lái)又與帶有熒光標(biāo)記的次級(jí)抗體結(jié)合。用熒光掃描儀測(cè)定熒光強(qiáng)度，其中部分是因PARP酶的活性引起的。通過(guò)熒光信號(hào)的減弱可以鑒別出PARP抑制劑。為了防止因不同的細(xì)胞計(jì)數(shù)而使結(jié)果出現(xiàn)假象，進(jìn)一步用染料標(biāo)記細(xì)胞DNA，并同依然用熒光掃描儀測(cè)定熒光強(qiáng)度。
將C4I細(xì)胞系中的400,000個(gè)細(xì)胞在37℃、5％CO2的條件下，于24孔的細(xì)胞培養(yǎng)皿(其為帶有10％胎兒牛血清的RPMI培養(yǎng)基)中進(jìn)行培養(yǎng)，直至得到一厚層細(xì)胞。用DMEM洗滌細(xì)胞，將欲測(cè)定的PARP抑制劑以各種濃度加到DMEM中。37℃下培養(yǎng)20分鐘后，采用過(guò)氧化氫使其濃度達(dá)到1mM，混合物繼續(xù)在37℃下培養(yǎng)10分鐘。就對(duì)照樣品而言，一些孔中的細(xì)胞不用過(guò)氧化氫處理(不發(fā)生PARP活化)，或不給予抑制劑(最大的PARP的活化)。用PBS洗滌細(xì)胞一次，并通過(guò)加入甲醇/丙酮(7；3)混合物(其已被預(yù)冷卻至-20℃)使細(xì)胞在-20℃下固定10分鐘。干燥細(xì)胞，加入PBS室溫脫水10分鐘。室溫下，于PBS中，用0.05％吐溫20和5％干牛奶粉阻斷非特異結(jié)合部位30分鐘。加入小鼠抗體-PAR抗體，濃度為20μg/ml帶有0.05％吐溫20和5％干牛奶粉的PBS溶液。混合物在37℃下培養(yǎng)1小時(shí)。通過(guò)用PBS洗滌未結(jié)合的抗體移除抗體，共5次，每次5分鐘?；旌衔镌儆?7℃下與稀釋的山羊抗-小鼠FITC-偶聯(lián)的次級(jí)抗體(1∶50帶有0.05％吐溫20、5％干牛奶粉和1μg/ml DAPI(4’，6-二脒基-2-苯基吲哚)的PBS稀釋液)一起培養(yǎng)30分鐘。通過(guò)用PBS洗滌未結(jié)合的抗體移除抗體，共5次，每次5分鐘。借助熒光掃描儀，在一些孔的幾個(gè)位置上測(cè)定FITC和DAPI熒光強(qiáng)度。為了分析方便，將FITC信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化至DAPI信號(hào)。以各種抑制劑濃度標(biāo)準(zhǔn)化值的半對(duì)數(shù)進(jìn)行繪圖，可以計(jì)算出IC50值。測(cè)定了下列IC50值實(shí)施例1 115nM實(shí)施例2 119nM實(shí)施例3 118nM
權(quán)利要求
1.式I化合物及其互變異構(gòu)體、可能的對(duì)映體及外消旋體，它們的前藥以及可能的生理上可接受的鹽類用于制備治療出現(xiàn)病理性PARP活性增加疾病藥物的用途， 其中A為N或CHR1為氫，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，其中烷基基團(tuán)的一個(gè)碳原子可以進(jìn)一步攜帶OR11或基團(tuán)R5，其中R11為氫或C1-C4-烷基，并且R2為氫，氯，氟，溴，碘，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，硝基，CF3，CN，NR21R22，NH-CO-R23，OR21，其中R21和R22各自獨(dú)立，為氫或C1-C4-烷基，并且R23為氫或C1-C4-烷基或苯基，并且R3為-(CH2)q-NR31R32，-(CH2)q-NR33R34，其中q為0，1，2或3，R31為氫或C1-C6-烷基，(CH2)rNR33R34，R32為(CH2)rNR33R34，其中，如果R31和R32各自獨(dú)立，r為2，3，4，5或6，并且R33和R34各自獨(dú)立，為氫，C1-C6-烷基，與氮原子一起形成額外有選自O(shè)雜原子的3-8元環(huán)，N-C1-C4-烷基，N-C0-C2-苯基或NH，苯基C1-C4-烷基，其中苯環(huán)上可被上至3個(gè)相同或不同的取代基所取代，所述的取代基選自C1-C6-烷基，鹵素，硝基，SO2NR35R36(其中R35，R36各自獨(dú)立，為氫，C1-C6-烷基，與氮原子一起形成可以攜帶其它選自O(shè)，S，SO2的雜原子的3-8元環(huán)，N-C1-C4-烷基，N-C0-C2-苯基或NH)，C1-C4-烷氧基，S(O)0-2-R37(其中R37為氫，C1-C4-烷基)，CF3，(CH2)0-4-COR37，(CH2)0-4NR35R36，(CH2)0-4CONR35R36，(CH2)0-4OR37-CH2COOR37，R4為氫，支鏈和直鏈C1-C6-烷基，氯，溴，氟，硝基，氰基，NR41R42，NH-CO-R43，OR41，其中R41和R42各自獨(dú)立為氫或C1-C4-烷基，并且R43為C1-C4-烷基或苯基。
2.權(quán)利要求1中所述化合物的用途，就苯并咪唑環(huán)而言，其中的R2在3-位并且R3在4-位，或R2在4-位并且R3在3-位。
3.權(quán)利要求1或2中所述化合物的用途，其中的R1和R4為氫。
4.權(quán)利要求1-3任意一個(gè)中所述化合物的用途，其中R2為氫，支鏈或直鏈C1-C6-烷基，硝基，CN，NH2，O-C1-C4-烷基。
5.權(quán)利要求1-4任意一個(gè)中所述化合物的用途，其中R3為(CH2)1，2NR34R36和N(R37)-(CH2)2-3NR35R3，其中R37為氫或C1-C4-烷基，R35和R36各自獨(dú)立為氫和C1-C4-烷基，NR35R36還可一起構(gòu)成環(huán)狀的脂肪胺，例如，哌啶，吡咯烷，氮雜和哌嗪，其中在哌嗪的第二個(gè)N原子上可以任意的被氫或C1-C4-烷基取代。
6.權(quán)利要求1-5任意一個(gè)中所述化合物的用途，其中R2為氫并且A為氮原子。
7.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述化合物用于制備治療神經(jīng)變性疾病和神經(jīng)損傷的用途。
8.權(quán)利要求7中所述化合物用于治療由于局部缺血、創(chuàng)傷或大出血導(dǎo)致的神經(jīng)變性疾病和神經(jīng)損傷的用途。
9.權(quán)利要求7中所述化合物用于治療中風(fēng)和顱腦創(chuàng)傷的用途。
10.權(quán)利要求8中所述化合物用于治療Alzheimer’s疾病、Huntington’s疾病的用途。
11.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療或預(yù)防由于局部缺血所導(dǎo)致?lián)p傷的藥物的用途。
12.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療癲癇，特別是一般性癲癇發(fā)作，(例如癲癇小發(fā)作、緊張性陣攣發(fā)作)以及部分癲癇發(fā)作(例如顳葉和復(fù)合部分發(fā)作)藥物的用途。
13.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療腎臟局部缺血后的腎損傷以及腎移植過(guò)程中或之后出現(xiàn)的腎損傷藥物的用途。
14.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療心臟局部缺血后的心臟損傷藥物的用途。
15.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療心臟瓣膜替換、動(dòng)脈瘤切除及心臟移植過(guò)程中或之后出現(xiàn)的微梗塞藥物的用途。
16.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備在臨界壓縮的冠狀動(dòng)脈的再血管化治療中(例如在PCTA和心臟分流手術(shù)中)或在臨界壓縮的外周動(dòng)脈的再血管化治療中特別是腿部動(dòng)脈)所用藥物的用途。
17.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療急性心肌梗塞及出現(xiàn)在藥物或機(jī)械溶解過(guò)程中或之后的損傷藥物的用途。
18.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療腫瘤及其轉(zhuǎn)移藥物的用途。
19.權(quán)利要求6中所述式I化合物用于制備治療多發(fā)性器官衰竭膿毒癥(例如膿毒癥休克和“急性呼吸distress綜合癥”過(guò)程中出現(xiàn)的)藥物的用途。
20.權(quán)利要求1-6任意一個(gè)中所述式I化合物用于制備治療免疫性疾病，例如炎癥和風(fēng)濕性失調(diào)(如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)藥物的用途。
21.權(quán)利要求6中所述式I化合物用于制備治療糖尿病藥物的用途。
22.選自下列的化合物2-(4-N，N-2-(N，N-二乙基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺，2-(4-N，N-2-(N，N-二甲基氨基)乙-1-基甲基氨基)苯基)苯并咪唑-4-甲酰胺，2-(3-(2-(N，N-二甲基氨基)乙-1-基)-4-硝基苯基)-苯并咪唑-4-甲酰胺以及它們的前藥或鹽類。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式Ⅰ的2－苯基苯并咪唑類和2－苯基吲哚類作為多聚(ADP－核糖)聚合酶抑制劑用于制備藥物:其中A為N或CH,R
文檔編號(hào)A61P7/02GK1331683SQ99814810
公開(kāi)日2002年1月16日 申請(qǐng)日期1999年11月5日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月17日
發(fā)明者W·盧畢斯徹, M·考克, T·霍格爾 申請(qǐng)人:巴斯福股份公司