專利名稱：：新的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含抗病毒化合物的的藥物組合物，所述抗病毒化合物選自膦甲酸、阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋，該組合物適于局部和經(jīng)非胃腸道給藥。鑒于所述抗病毒化合物的作用，該組合物可用于預(yù)防和治療由皰疹病毒和其它病毒引起的感染。發(fā)明背景人類的皰疹病毒感染是由六種已知的人皰疹病毒誘發(fā)的，最常見的是單純性皰疹病毒和水痘樣帶狀皰疹病毒。還存在許多動(dòng)物皰疹病毒。單純性皰疹病毒可劃分為兩種血清型，1型(HSV-1)和2型(HSV-2)，它們的臨床表征可以從良性的可自我控制的口面部和生殖器感染到可危及生命的癥狀，如腦炎和全身性新生兒感染?？诿娌縃AV感染主要是由HSV-1引起的。在兒時(shí)發(fā)生初次感染后，在患者的余生病毒就潛伏在感覺神經(jīng)細(xì)胞中，最多的是潛伏在三叉神經(jīng)節(jié)。隨后在不同時(shí)期病毒可被重新激活。在神經(jīng)細(xì)胞中被重新激活后，病毒經(jīng)神經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)到皮膚，隨后發(fā)展成復(fù)發(fā)的口面部HSV感染，最常見的是稱之為唇皰疹的感染。約半數(shù)患者在隨后的疹部經(jīng)歷前驅(qū)癥狀，如疼痛、灼燒感或刺癢。發(fā)病癥狀一般可快速獲得自我控制，典型的復(fù)發(fā)在最初癥狀發(fā)生10天內(nèi)可痊愈。病毒最早在唇部進(jìn)行復(fù)制并在發(fā)病后24小時(shí)獲得最大病毒載量。然后病毒濃度急劇降低，在典型患者發(fā)病后70-80小時(shí)已分離不到病毒。生殖道HSV感染與口面部感染臨床表征相似，都存在兩種重要的例外。生殖道HSV感染最常見的是由HSV-2引起的，在初次感染后，病毒將潛在的感染感覺或自主神經(jīng)節(jié)。重新激活將引起以生殖道成其附近的皰疹病毒感染為特征的局部復(fù)發(fā)性損傷。水痘樣帶狀皰疹病毒(VZV)也是皰疹病毒組的一個(gè)成員。已知其初次感染會引起水痘。同HSV一樣，在初次感染后，在患者余生VZV也潛伏并像HSV一樣可被激活形成水痘樣帶狀皰疹。水痘樣帶狀皰疹通常導(dǎo)致皮疹和急劇疼痛。在30％的患者中，疼痛可延長并在皮疹消除后持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。其它已知的人皰疹病毒是巨細(xì)胞病毒(CMV)、EB病毒(EBV)和人皰疹病毒6(HHV-6)。普通宿主初次CMV感染一般不伴隨癥狀，但偶然也出現(xiàn)CMV單核細(xì)胞增多癥癥狀。在血液中，CMV主要駐留在多形核白細(xì)胞中，也在單核細(xì)胞和偶然地在T淋巴細(xì)胞中駐留，但在后兩者中的駐留形式至今也不清楚。絕大多數(shù)人的EBV感染始于口咽上皮，初次感染EBV的早期是感染B淋巴細(xì)胞。EBV在B淋巴細(xì)胞中通常不進(jìn)行復(fù)制繁殖，而是建立潛伏感染。HIV是一種感染和毀壞攜帶CD4細(xì)胞標(biāo)記物淋巴細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒，引發(fā)進(jìn)行性免疫缺陷。膦甲酸抑制HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶，在體外顯示出對抗HIV復(fù)制的抗病毒活性。已有許多有效對抗人皰疹病毒的抗病毒藥物。但到目前為止臨床上成功地治療免疫活性患者的復(fù)發(fā)性皰疹病毒感染很有限。膦甲酸，磷酰甲酸三鈉鹽的六水合物(六水合磷酰甲酸鈉)，是一種熟知的廣譜抗病毒藥物，其通過直接抑制皰疹病毒和乙型肝炎病毒的病毒DNA聚合酶及逆轉(zhuǎn)錄病毒的病毒逆轉(zhuǎn)錄酶而起作用。據(jù)證明，膦甲酸臨床用于全身性，即靜脈治療CMV視網(wǎng)膜炎；阿昔洛韋用于AIDS患者抵御HSV感染。在免疫活性的患者中，所述治療的副作用是腎功能損傷和在危及生命的疾病治療中可以忍受的但在溫和的、可自我控制的復(fù)發(fā)性HSV感染疾病的治療中難以忍受的其它不良癥狀。阿昔洛韋(ACV)，9-[(2-羥基乙氧基)甲基]-鳥苷，是一種主要用于治療各種皰疹病毒感染的藥物。它可以局部、口服或靜脈制劑形式給藥，局部制劑的效果較差。阿昔洛韋的治療少產(chǎn)生副作用。Valaciclovir或L-纈氨酰阿昔洛韋是阿昔洛韋的前藥?？共《舅幬飮娢袈屙f，9-(4-羥基-3-羥甲基丁-1-基)-鳥苷對抗人皰疹病毒的活性譜與阿昔洛韋相似。泛昔洛韋，噴昔洛韋的6-脫氧衍生物在體內(nèi)通過氧化代謝轉(zhuǎn)化為噴昔洛韋。核苷類似物，如鳥苷類似物阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋與膦甲酸相比都具有較窄的抗病毒譜，主要顯示對抗HSV-1、HSV-2和VZV病毒。這些化合物并不像膦甲酸那樣作用于病毒DNA聚合酶，而是被病毒和細(xì)胞的酶磷醇化三次從而抑制病毒聚合酶的生成。它們主要是口服給藥，但也可以其它方式，如經(jīng)非胃腸道給藥。經(jīng)非胃腸道治療皰疹感染的問題是給藥的大劑量和大體積及抗病毒藥物在體循環(huán)中的半衰期短。當(dāng)皰疹感染僅限于皮膚或粘膜時(shí)，局部治療是有益的。這將會減少身體與活性物質(zhì)的接觸，使施用的較高藥物濃度在病毒復(fù)制的皮膚處達(dá)到較高的局部濃度。雖然據(jù)證明膦甲酸在體外具有抗所有人皰疹病毒的活性，但將膦甲酸局部應(yīng)用于免疫活性患者的復(fù)發(fā)性單純性皰疹病毒感染的試驗(yàn)僅獲得中度的成功。該治療中的損傷康復(fù)時(shí)間縮短了約1天。在所述試驗(yàn)中，膦甲酸以常規(guī)乳劑應(yīng)用。已知以3％制劑局部給藥膦甲酸會刺激粘膜或皮膚，或者全身區(qū)域，這給治療帶來了疼痛。因此，本發(fā)明的目的是尋找一種膦甲酸組合物，該組合物除具有抗病毒作用外，還表現(xiàn)出極低的組織刺激性。核苷類似物阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋對復(fù)發(fā)性皮膚病毒感染的臨床作用與膦甲酸一樣有限。采用局部治療的康復(fù)時(shí)間也僅縮短約一天。因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是尋找一種抗病毒化合物的組合物，該組合物可大大縮短治療時(shí)間，所述化合物選自膦甲酸、阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋。現(xiàn)有技術(shù)WO89/05152描述了一種含有的抗病毒化合物磷酰甲酸鹽(酯)的脂質(zhì)體組合物，所述化合物包囊在脂質(zhì)體中。所述脂質(zhì)體的懸浮液經(jīng)非胃腸道給藥治療皰疹病毒和HIV感染，該給藥方法提高了抗病毒療效。還發(fā)現(xiàn)，但磷酰甲酸鹽或磷酰乙酸鹽以脂質(zhì)體包囊的形式給藥時(shí)，其細(xì)胞內(nèi)抗病毒活性提高了數(shù)倍。脂質(zhì)體由不同的磷脂制備。Jocham，U.E.，PharazeutischeZeitung，Nr.33，13August1992，pp.28-34，描述了膦甲酸脂質(zhì)體可用于AIDS患者眼部皰疹感染的非入侵性治療。所述患者由于抗病毒藥物的強(qiáng)烈刺激作用，現(xiàn)在采用系統(tǒng)性治療。還表明用脂質(zhì)體載體中的活性物質(zhì)局部治療皮膚將促進(jìn)活性成分透過皮膚角質(zhì)層，使活性物質(zhì)局部富集。Schreier，H.等人發(fā)表在《控制釋放雜志》30(1994)，第1-15頁上的是一篇有關(guān)包囊在脂質(zhì)體和niosome中的物質(zhì)的皮膚和透皮藥物釋放的綜述。其結(jié)論是脂質(zhì)體和niosome是適合于各種皮膚上的活性物質(zhì)的有用劑型，這應(yīng)特別歸因于它們調(diào)節(jié)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的能力，它們被用作無毒滲透促進(jìn)劑。還報(bào)道由神經(jīng)酰胺，鞘脂制備的脂質(zhì)體比由磷脂制備的脂質(zhì)體能更有效地透過皮膚。作為一種改進(jìn)皮膚病毒感染，尤其是單純性皰疹病毒感染治療的方法，對用主要是鞘脂和膽甾醇的皮膚磷脂配制的脂質(zhì)體狀的α-干擾素沉積進(jìn)行了評價(jià)，顯示其可釋放到深部皮層。采用抗病毒物質(zhì)的脂質(zhì)體制劑有許多優(yōu)點(diǎn)，如劑量降低同時(shí)保持抗病毒活性，延長半衰期并降低毒性。例如Bakker-Woudenberg，I.等人在斯坦的納維亞傳染病雜志補(bǔ)編7454-57，1991上報(bào)道了，例如在CMV感染的肺成纖維細(xì)胞中包囊在脂質(zhì)體中的膦甲酸抗CMV的抗病毒作用增強(qiáng)。但在應(yīng)用脂質(zhì)體中也存在著在上面文獻(xiàn)中所述的如包囊活性成分的能力有限的缺點(diǎn)。目前仍難以獲得具有足夠高濃度膦甲酸的組合物。另一個(gè)問題是穩(wěn)定性；脂質(zhì)體制劑總是泄露。這意味著脂質(zhì)體制劑需凍干并在臨用前重新配制。Spruance，S.L.的粘膜與皮膚的皰疹病毒感染的局部治療(國際抗病毒劑消息，1994，6月2日，pp.86-87)報(bào)道了普通宿主的復(fù)發(fā)性皰疹病毒唇炎(labialis)的有效局部治療因最佳適度下的藥物制劑和對早期治療干預(yù)的認(rèn)識不夠的受到阻礙。雖然阿昔洛韋的含聚丙二醇水質(zhì)霜?jiǎng)┍慌鷾?zhǔn)可治療皰疹唇炎，但報(bào)道結(jié)果卻相反。現(xiàn)在已明確局部施用抗病毒化合物需一種進(jìn)攻性的、促進(jìn)滲透的制劑以使化合物在患者感覺到新一輪發(fā)作后立即滲透到完整的、未受損傷的角質(zhì)層中。進(jìn)攻性促進(jìn)劑的使用損傷皮膚，產(chǎn)生刺激，有時(shí)還引起接觸性過敏或其它感染。WO94/05258涉及一種改善了譬如皮膚滲透特性的阿昔洛韋水包油乳劑，該制劑的特征在于有包含甘油縮甲醛和多元醇的有機(jī)溶劑存在。所述乳劑可含有增加量的溶解的阿昔洛韋，因?yàn)楦视涂s甲醛可提高化合物的溶解度。但在局部制劑中使用有機(jī)溶溶劑仍是一種缺陷。為提供一種復(fù)發(fā)性皰疹感染的有效的局部治療方法，首先要解決的問題是使足夠量的活性物質(zhì)快速滲透到角質(zhì)層。第二個(gè)要解決的問題是如何使活性物質(zhì)在適當(dāng)?shù)牟课唬椿畹谋砥ぶ蟹e累，皰疹病毒進(jìn)行復(fù)制的表皮。所使用的制劑應(yīng)是無刺激的和物理學(xué)上穩(wěn)定的。這些對于膦甲酸來說難以實(shí)現(xiàn)，因?yàn)殪⒓姿岱肿拥膹?qiáng)極性，當(dāng)應(yīng)用于皮膚和粘膜時(shí)就潛在有刺激性。至今為止還沒有一種有效并且無害的膦甲酸或抗病毒核苷類似物的局部給藥制劑。發(fā)明概述如今令人意外地發(fā)現(xiàn)上述問題可采用本發(fā)明的藥物組合物得以解決，所述組合物含有與半乳糖脂和一種極性溶劑混合的抗病毒化合物，所述化合物選自膦甲酸、阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋。優(yōu)選的藥物組合物含有與半乳糖脂和一種極性溶劑混合的治療有效量的膦甲酸。藥物組合物含有分散、溶解或包囊在凝膠或其它結(jié)構(gòu)物，如脂質(zhì)體中的抗病毒化合物，通過形成雙鏈雙層的極性半乳糖脂和極性溶劑形成。這樣的組合物不具有刺激性，快速滲透皮膚，改善抗病毒化合物在活的表皮中的積累，可維持活性物質(zhì)的高濃度并且化學(xué)和物理性質(zhì)穩(wěn)定。無需加入賦形劑就可獲得粘稠制劑。如果是局部給藥，在本發(fā)明的組合物中使用的半乳糖脂可使抗病毒化合物在病灶定向釋放到活的表皮中，由此在病灶獲得最大藥物濃度和最小副作用；并且如果是經(jīng)非胃腸道給藥，容易的給藥可改善療效。在本說明書和權(quán)利要求中使用的膦甲酸除指磷酰甲酸三鈉鹽的六水合物外，還指水合物和非水合物形式的磷酰甲酸的可藥用鹽、酯或其它衍生物。阿昔洛韋、valaciclovir、噴昔洛韋和泛昔洛韋除包括上述的化合物外，還包括它們的可藥用鹽、酯或其它衍生物。顯然，也可將其它抗病毒化合物配制到使用相同載體，即半乳糖脂和一種極性溶劑的藥物組合物中。本發(fā)明組合物中的半乳糖脂由至少50％的二半乳糖基二?；视停Ｓ嗍瞧渌鼧O性脂組成。在優(yōu)選的組合物中，半乳糖脂由約70％二半乳糖基二?；视秃?0-30％的其它極性脂組成。在另一種優(yōu)選的組合物中，半乳糖脂物質(zhì)由高達(dá)100％的二半乳糖基二?；视徒M成?；诎肴樘堑膬煞N酰基甘油是很常用的，即單半乳糖基二酰基甘油和二半乳糖基二?；视?。它們常用的縮寫分別是MGDG和DGDG。二半乳糖基二?；视涂梢酝ㄊ奖硎酒渲蠷1和R2彼此獨(dú)立地是飽和或不飽和的10-22個(gè)碳原子和0-3個(gè)雙鍵的脂肪酸殘基，或是氫；R3是羥基或磺酸鹽(酯)基。作為優(yōu)選的脂肪酸殘基R1和R2可例舉自然形成的脂肪?；?，如由飽和酸棕櫚酸(C15H31CO；16∶0)和硬脂酸(C17H35CO；18∶0)；單不飽和酸油酸(C17H33CO；18∶1)；和多不飽和酸亞油酸(C17H31CO；18∶2)和亞麻酸(C17H29CO；18∶3)衍生的殘基。脂肪酸殘基還包括與甘油部分連接的羥酸，并且其羥基是被其它脂肪酸酯化的，故稱之為酯酐類物。半乳糖脂物質(zhì)的組成具體比例對本發(fā)明來說并不重要，只要DGDG的含量至少是50％。在許多應(yīng)用中，高含量的DGDG可獲得最佳效果，因?yàn)镈GDG是最重要的雙層形成成分。半乳糖脂可從幾乎所有種類的植物材料中提取。優(yōu)選的植物材料是谷類，如小麥、黑麥、燕麥、玉米、大米、小米和芝麻的種子。燕麥片和小麥麩是高脂的，在制備方法中使用它們是有益的。如果有利也可以使用合成的二半乳糖基二?；视蜑榘肴樘侵镔|(zhì)。從植物小規(guī)模分離半乳糖脂，尤其是DGDG是已知的，文獻(xiàn)已有記載。典型地，將毫克到克量的植物脂質(zhì)提取物在薄層板或硅膠柱上用含氯仿、甲醇和丙酮的溶劑系統(tǒng)分離。工業(yè)規(guī)模上可采用常規(guī)提取和分離或置換色譜法從植物獲得半乳糖脂。將植物粗提物加載到含吸附劑為固定相的色譜柱上，用極性和非極性溶劑的混合物洗脫非極性的脂質(zhì)，然后用更強(qiáng)極性的溶劑混合物洗脫主要含DGDG的半乳糖脂物質(zhì)的級分。將水或其它極性溶劑如甘油加到本發(fā)明使用的半乳糖脂中會形成層狀脂-水結(jié)構(gòu)物，常稱為雙層結(jié)構(gòu)物。本發(fā)明的極性脂質(zhì)可與大量水或其它極性溶劑的水溶液結(jié)合，溶脹。由于半乳糖脂特別良好的固有溶脹特性，令人意外地發(fā)現(xiàn)在沒有除水以外的其它化學(xué)物質(zhì)，如洗滌劑或有機(jī)溶劑的存在下它就容易形成脂質(zhì)體分散液。制備脂質(zhì)體的方法僅是將過量水或極性液體加到半乳糖脂中，溶脹并輕輕攪拌。所獲得的由多層載體組成的分散液，即脂質(zhì)體特別穩(wěn)定，可對抗聚集和隨后的沉淀。作為半乳糖脂部分的其它脂質(zhì)是不同糖脂和磷脂的混合物，如MGDG和磷脂酰膽堿。組成取決于制備半乳糖脂所采用的原料和方法。極性溶劑可以是水和水溶液，如緩沖液和鹽水，或任何其它常用溶劑，如乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、glycofurol、甲基吡咯烷酮、transcutol。但水是優(yōu)選的溶劑。本發(fā)明的藥物組合物還可含有不同的可藥用的并且與制劑中的組分相容的添加劑或賦形劑。這類添加劑的實(shí)例有增稠劑、防腐劑、抗氧劑、著色劑、香料和矯味劑，以及其它活性物質(zhì)，如維生素A酸。藥物組合物的制備方法包括如下步驟將抗病毒化合物和可任意選擇的添加劑溶于極性溶劑，如水；加入半乳糖脂；并攪拌或振搖混合物直至獲得均勻混合物。如果用水為極性溶劑，溶解需借助微熱。本發(fā)明的藥物組合物通過向感染部位局部或經(jīng)非胃腸道施用，適于預(yù)防和治療哺乳動(dòng)物包括人的皮膚、粘膜和眼部的皰疹病毒感染，尤其是HSV-1、HSV-2和VZV感染。它們也適于預(yù)防或治療各種CMV感染癥狀，如視網(wǎng)膜炎、腦炎、結(jié)腸炎和肺炎。在CMV感染時(shí)，通過包括靜脈輸注的非胃腸道給藥是優(yōu)選的。甚至EBV感染的臨床癥狀，如原發(fā)性淋巴瘤也適于通過靜脈給藥預(yù)防或治療。所有皰疹病毒感染及其它病毒感染，如HIV和HBV都可使用本發(fā)明的抗病毒化合物，即膦甲酸、阿昔洛韋、valacilovir、噴昔洛韋或泛昔洛韋的組合物通過靜脈給藥得以有效治療，在粘膜損傷的情況下也可采用局部給藥。例如卡波濟(jì)氏肉瘤，KS是一種多灶的多克隆增生瘤，其特征是局部生長并最終遷移。最近在KS損傷中檢測到一種新的人皰疹病毒，并認(rèn)為該病毒是KS的起因物質(zhì)。在臨床試驗(yàn)中，某些患者對用膦甲酸靜脈治療有反應(yīng)。皮膚的KS損傷適于局部用藥，或者優(yōu)選經(jīng)非胃腸道給藥，尤其是對于非皮膚性KS損傷。藥物組合物可局部給藥，這主要是說對于未受損皮膚是經(jīng)皮、眼部是經(jīng)眼給藥，對于粘膜表明可經(jīng)舌下、直腸和陰道給藥。特別嚴(yán)格的治療區(qū)域是未受損皮膚與泌尿道和消化道的接界處。局部組合物可以是洗劑、霜?jiǎng)?、軟膏或凝膠，它們可與硬膏、棍劑或筆劑結(jié)合使用。組合物也可配制成經(jīng)非胃腸道給藥的制劑，如用于皮下、肌內(nèi)、眼內(nèi)或靜脈注射的溶液或乳液。特別有利于經(jīng)非胃腸道給藥的組合物應(yīng)包括所需的較少的體積、較少的給藥頻率、在病毒復(fù)制部位有較高的藥物濃度和低毒性。本發(fā)明藥物組合物的組成如下(％w/w)a)0.1-10％膦甲酸，b)1-70％半乳糖脂，c)30-98.9％極性溶劑和任選的添加劑。優(yōu)選的適用于皮膚的局部組合物可包含(％w/w)a)1-5％膦甲酸，b)20-40％半乳糖脂，c)55-79％水。這種局部應(yīng)用的膦甲酸制劑大大降低了對組織的刺激程度。病毒性皮膚疾病采用局部給藥進(jìn)行治療的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是其全身性接觸較普通靜脈治療少得多。例如據(jù)估計(jì)典型的普通HSV復(fù)發(fā)性感染要用100毫克局部霜?jiǎng)绻褂?％的膦甲酸霜?jiǎng)?，則100毫克含約5毫克膦甲酸。先前的研究表明每次應(yīng)用高達(dá)5％的局部用量的膦甲酸可進(jìn)入體循環(huán)的量相對于0.25毫克。這可與普通靜脈膦甲酸治療的一天約10克的批準(zhǔn)劑量相比較。局部給藥抗病毒化合物的制劑將改善活性物質(zhì)向病毒復(fù)制部位，即活的表皮的釋放，同時(shí)降低了其全身性分布。所述局部給藥的本發(fā)明藥物組合物獲得了最佳的藥理學(xué)效果。適于經(jīng)非胃腸道給藥的優(yōu)選組合物可包含(％w/w)a)1-5％膦甲酸，b)1-10％半乳糖脂，c)85-98％水。一種預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物包括人的皮膚、粘膜或眼部皰疹病毒感染的方法，包括局部或經(jīng)非胃腸道施用治療有效劑量的本發(fā)明藥物組合物。局部治療復(fù)發(fā)性感染應(yīng)在病毒復(fù)制期間進(jìn)行，優(yōu)選從前驅(qū)癥狀一出現(xiàn)并維持至少3-4天。在整個(gè)發(fā)病期間、每隔一小時(shí)或隨意施用藥劑也是有益的?？梢韵嗤绞街委煋p傷。經(jīng)常復(fù)發(fā)疾病的患者可選擇預(yù)防性治療。在這種情況下，可在最初癥狀出現(xiàn)之前將藥劑應(yīng)用于預(yù)期復(fù)發(fā)的區(qū)域。對于非皮膚性病毒感染，如CMV、EBV、HIV和HBV，經(jīng)非胃腸道給藥的預(yù)防和治療應(yīng)在病毒重新激活的最初跡象時(shí)開始并持續(xù)至少數(shù)周的時(shí)間，只要重新激活的危險(xiǎn)還存在就應(yīng)持續(xù)。本發(fā)明的藥物組合物也可用作美容組合物以改善外觀。藥物制劑如下制備藥物制劑。在制劑中使用下列組分-膦甲酸，即磷酰甲酸的三鈉鹽，六水合物(AstraAB，瑞典)；-燕麥半乳糖脂，脂質(zhì)類組成為70％DGDG和30％包括MGDG和磷脂的其它極性脂質(zhì)。由GC以甲酯測定的脂肪酸殘基組成為21％C16∶0(棕櫚酸酯)，3％C18∶3(亞麻酸酯)和5％由其它脂肪酸獲得的殘基(由瑞典的ScotiaLipidTeknikAB制備)。-阿昔洛韋，9-[(2-羥基乙氧基)甲基]鳥苷，H2O含量為0.5mol/mol(從美國SigmaChemicalCo.購得無環(huán)鳥苷(阿昔洛韋)。制劑中的％是指％w/w。制劑1.局部給藥的抗病毒制劑組分％膦甲酸3.0半乳糖脂40.0水加至100.0將膦甲酸溶于溫水中。加入粉狀半乳糖脂后，將混合物交替旋渦攪拌直至達(dá)均勻并高度粘稠。制劑2.局部給藥的抗病毒制劑組分％膦甲酸3.0半乳糖脂40.0甘油5.0水加至100.0除將甘油在開始時(shí)加到水中外，將不同的組分以相同于制劑1中的方式混合。將甘油加到制劑中是為了獲得較好的稠度。制劑3.局部給藥的抗病毒制劑組分％阿昔洛韋2.3半乳糖脂28.6水加至100.0采用制劑1中的相同方式制備眼科給藥的下列抗病毒制劑4和5。制劑4.組分％膦甲酸2.4半乳糖脂20.0水加至100.0制劑5.組分％膦甲酸2.4半乳糖脂30.0水加至100.0制劑6.經(jīng)非胃腸道給藥的抗病毒制劑組分％膦甲酸2.0半乳糖脂5.0水加至100.0將膦甲酸水溶液加到干的半乳糖脂粉末中，使半乳糖脂溶脹3小時(shí)。通過透析除去游離的膦甲酸并將脂質(zhì)體分散液按需凍干。制劑7.經(jīng)非胃腸道給藥的抗病毒制劑組分％膦甲酸2.4半乳糖脂10水加至100在玻璃壁上蒸發(fā)半乳糖脂薄膜。進(jìn)入膦甲酸水溶液以形成脂膜。將制劑凍干并在臨用前重新配制。以相同方法制備還含有膽甾醇的制劑8。制劑8.經(jīng)非胃腸道給藥的抗病毒制劑組分％膦甲酸2.4半乳糖脂10膽甾醇1.75水加至100由半乳糖脂形成的脂質(zhì)體和其它雙層結(jié)構(gòu)物與相應(yīng)的磷脂結(jié)構(gòu)物相比具有許多優(yōu)點(diǎn)，半乳糖脂比磷脂更耐水解，即半乳糖脂制劑在化學(xué)上更穩(wěn)定。通過下列試驗(yàn)說明水溶脹和熱穩(wěn)定性。證明水溶脹特性的對比制劑為配制2.4％膦甲酸的大豆磷脂和大豆磷脂酰膽堿制劑并達(dá)到上面制劑4和5的相同粘度，分別需約30和40％的磷脂。試驗(yàn)表明半乳糖脂比磷脂可結(jié)合更多的水，因此由半乳糖脂獲得的凝膠更具粘性。為獲得與半乳糖脂凝膠粘度相同的磷脂凝膠，需使用相對多量的磷脂。這意味著可使用較少量的水，進(jìn)而意味著制劑中可溶解的抗病毒量也更少。脂質(zhì)體的熱穩(wěn)定性以下列方法制備脂質(zhì)體，即多層載體并說明其在加熱處理期間的物理和化學(xué)穩(wěn)定性。將去離子并脫氣的水加到半乳糖脂物質(zhì)中使脂質(zhì)的終濃度達(dá)到1.9％(w/w)。使樣品在室溫平衡12小時(shí)，然后高剪切混合3分鐘。將該粗脂質(zhì)體分散液在500巴勻化6個(gè)循環(huán)(Mini-Lab8.30H勻化器，Rannie，Denmark)，得到有點(diǎn)不透明的低粘性制劑。然后使用分批高壓釜將樣品在121℃高壓滅菌20分鐘。很容易得出結(jié)論，即高壓滅菌不影響脂質(zhì)體的物理穩(wěn)定性；在加熱處理后觀察不到聚集和隨后的沉淀。但使用HPLC的高壓滅菌樣品分析表明其化學(xué)穩(wěn)定性也沒有受到影響，因?yàn)樵诩訜崽幚砬昂蟮纳V沒有差異。這意味著半乳糖脂具水解穩(wěn)定性在加熱處理期間沒有毒性副產(chǎn)物，如脂肪酸產(chǎn)生。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是半乳糖脂脂質(zhì)體可在最后滅菌，從而避免了常用于脂質(zhì)體的滅菌制備。與相應(yīng)的磷脂結(jié)構(gòu)物相比，半乳糖脂脂質(zhì)體的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是它們不需加入糖作為冷凍保護(hù)劑就可被凍干。當(dāng)將磷脂脂質(zhì)體凍干時(shí)，必需加入如蔗糖或海藻糖以使膜不被破壞。生物學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)1.體外皮膚滲透為評價(jià)制劑對膦甲酸穿透角質(zhì)層以及在角質(zhì)層下皮層的累積的能力的影響，用豬的未受損皮膚開發(fā)體外模型。試驗(yàn)?zāi)Ｐ秃徒Y(jié)果如下所述。使用剛屠宰的豬的皮膚。用刮刀將下面的組織仔細(xì)地除去，然后皮膚用0.9％NaCl洗并干燥。最后，將成塊皮膚包在錫箔中，在-28℃冷凍儲存。擴(kuò)散室由供應(yīng)和接受部分組成的玻璃室。將皮膚放在這樣的兩個(gè)室之間并用金屬夾固定。供應(yīng)室與制劑接觸的表面積為3.14cm2，容積約為2毫升。接受室的容積為28-29毫升并安裝有連接管以方便取樣并使用套管控制試驗(yàn)期間的溫度。將豬皮解凍、干燥并切成適宜大小。然后將豬皮固定在擴(kuò)散室。接受室充滿0.9％NaCl溶液并小心地除去接受室中皮膚下面與溶液間的所有空氣泡。在保持37℃下，用磁力攪拌棒持續(xù)攪拌該溶液。試驗(yàn)三種不同的C14-膦甲酸制劑；除制劑A是相應(yīng)的上述制劑以外；其它制劑B除含有膦甲酸外，還含相同量的代替半乳糖脂的磷脂，主要是鞘磷脂及水；制劑C除含膦甲酸外，是一種含不同促進(jìn)劑，如聚氧乙烯脂肪酸酯、硬脂酸酯、丙二醇和甘油的常規(guī)乳基。以50-100毫克的量將不同的制劑應(yīng)用于不同的皮膚貼片(patch)表面。每次試驗(yàn)開始時(shí)測定制劑的放射性。3小時(shí)后，從擴(kuò)散室取出皮膚并從每個(gè)接受室取樣。將樣品放在閃爍瓶中用閃爍光譜儀分析。將皮膚塊固定在板上用膠粘帶剝離皮膚。通過切片機(jī)將剩余的皮膚塊切成薄片測定滲透到深部皮層的藥物量。將薄片放在閃爍瓶中用Soluene350溶解過夜。然后加入閃爍混合液，用閃爍色譜儀測定樣品。測定應(yīng)用于每塊皮膚的每種制劑的膦甲酸在角質(zhì)層、角質(zhì)層下皮層和接受室中濃度。結(jié)果如下表所示。表1.膦甲酸在皮膚中的分布，以攝入％表示3小時(shí)后的試驗(yàn)數(shù)據(jù)<</tables>這表明本發(fā)明的制劑的病灶膦甲酸定向給藥與常規(guī)局部制劑相比有所改善。由上述試驗(yàn)可得出的結(jié)論是膦甲酸的皮膚分布依所用的制劑而不同。常規(guī)制劑C與半乳糖脂制劑A之間的比較具有特殊重要性。滲透試驗(yàn)開始后3小時(shí)由制劑A和C滲透到角質(zhì)層的膦甲酸量相近。但制劑A膦甲酸的滲透速度相對較快，隨后藥物在角質(zhì)層下皮層的積累也更顯著，所述皮層相應(yīng)于活的表皮，是皰疹病毒進(jìn)行復(fù)制的部位。還表明制劑B透過角質(zhì)層的速率較慢。試驗(yàn)2.對體內(nèi)抗HSV-1感染的作用在豚鼠體內(nèi)試驗(yàn)本發(fā)明的局部制劑對抗皮膚皰疹病毒感染的治療作用。該試驗(yàn)?zāi)Ｐ秃徒Y(jié)果如下所述。皰疹病毒HSV-1菌株C42是從結(jié)膜炎患者中分離的，在幼倉鼠腎細(xì)胞上傳代10次。在非洲綠猴腎細(xì)胞(AGMK)上進(jìn)行空斑試驗(yàn)測定皰疹病毒的滴定度。在空斑減少試驗(yàn)試驗(yàn)中使用的菌株對所研究的抑制劑是敏感的。試驗(yàn)中使用重400-500克的Dunkin-Hartley豚鼠。對食物和飲用水沒有限制。在麻醉?xiàng)l件下，將豚鼠的背部拔毛、刮剃、脫毛、洗凈并干燥。將無毛的表面劃分為四個(gè)方塊，在每塊面積的中央應(yīng)用滴定度為106PFU/ml的20毫克HSV-1。麻醉下用接種儀接種病毒。在將動(dòng)物放入籠中之前，動(dòng)物在麻醉后昏睡期間，使動(dòng)物在30℃保持2小時(shí)。如試驗(yàn)1中所述的那樣，在每只動(dòng)物的兩塊區(qū)域分別用膦甲酸制劑A和C局部處理。每只動(dòng)物的另兩塊區(qū)域作為對照，使用微量移液管施用的各種制劑，將制劑擴(kuò)散在每處感染部位并使其至干。每種制劑使用5只豚鼠。自感染后48小時(shí)始，即從第3天開始對豚鼠皮膚進(jìn)行評分。為確定不同制劑的作用，采用下述評分系統(tǒng)接種皮膚的外觀分?jǐn)?shù)紅斑和輕微水腫0.5紅斑和一或兩個(gè)小水泡1紅斑和多個(gè)小水泡2多個(gè)大水泡，即相近的聯(lián)合3干水泡，較大結(jié)痂III結(jié)痂脫落約50％II約剩10％的結(jié)痂I未感染或愈合面，沒有結(jié)痂或水泡0可存在接種損傷或感染痕跡豚鼠接種HSV后，就接種面的表征評分，每天一次。水泡形成期間的分?jǐn)?shù)由阿拉伯?dāng)?shù)字給出，當(dāng)水泡開始干燥和結(jié)痂時(shí)，分?jǐn)?shù)變?yōu)榱_馬數(shù)字。所有都是盲評分。表2中累積評分是將感染過程中的所有阿拉伯和羅馬分?jǐn)?shù)相加除以天數(shù)獲得的。所給出的分值是每種制劑5只動(dòng)物的平均值。表2.在豚鼠中的抗病毒作用</tables>所得結(jié)果表明制劑A和制劑C都可明顯有效地對抗皰疹病毒。試驗(yàn)3體內(nèi)皮膚刺激為評價(jià)本發(fā)明的半乳糖脂對皮膚的毒性，進(jìn)行如下試驗(yàn)。將半乳糖脂(由燕麥制得，瑞典的ScotiaLipidTeknikAB制備)與注射用水混合，得到10％凝膠，將其以0.5毫升每只動(dòng)物的劑量施用于6只新西蘭雄性白兔的未受損皮膚上并用半封閉式繃帶保持4小時(shí)。然后在除去繃帶后1、24、48和72小時(shí)檢查皮膚的紅斑和水腫。然后由24、48和72小時(shí)的皮膚損傷評價(jià)計(jì)算平均值。下表3給出了結(jié)果。表3.在兔中的皮膚刺激</tables>由此可得出半乳糖脂的應(yīng)用不會產(chǎn)生任何明顯的刺激。本發(fā)明的藥物組合物可施用于患者的皰疹病毒感染區(qū)的皮膚。以此方式應(yīng)用本發(fā)明的藥物組合物將預(yù)防或者在損傷開始發(fā)作的情況下減輕由皰疹病毒引起的感染，結(jié)果愈合更快。試驗(yàn)4.脂質(zhì)體膦甲酸的抗病毒作用按照制劑7和8構(gòu)建脂質(zhì)體。脂質(zhì)體沒有從由含膦甲酸的包圍介質(zhì)中純化，因此脂質(zhì)體的抗病毒活性就可能由于細(xì)胞培養(yǎng)測定法而低估。采用以前公開的方法(Abele，G.等人，抗病毒化學(xué)和化療(1991)2(3)，163-169)并對其加以改進(jìn)試驗(yàn)脂質(zhì)體對抗1型單純性皰疹病毒的抗病毒作用。在37℃用HSV-1(菌株R39)感染融合的人肺成纖維細(xì)胞。除去病毒接種物后，加入不同稀釋度的荷載膦甲酸的脂質(zhì)體、空脂質(zhì)體和介質(zhì)中的膦甲酸。24小時(shí)后，加入TritonX100融化細(xì)胞，然后進(jìn)入冷凍-融化循環(huán)，采用HSV-1特異性ELISA試驗(yàn)細(xì)胞融化物的病毒復(fù)制。下表4說明在病毒稀釋度為1∶500，接種時(shí)間為24小時(shí)獲得的結(jié)果。表4.脂質(zhì)體膦甲酸對HSV-1的抗病毒作用</tables>結(jié)果表明使用脂質(zhì)體與游離膦甲酸相比，50％的抑制濃度(IC50)降低2-4倍。由于實(shí)際上僅有占總量25％的膦甲酸包囊于脂質(zhì)體，該結(jié)果表明脂質(zhì)體本身的抗病毒活性應(yīng)比所示結(jié)果高4-5倍。試驗(yàn)5.脂質(zhì)體膦甲酸的細(xì)胞毒性按照上述制劑7制備脂質(zhì)體，如先前所述的方法(Palmer，S.等人，艾滋病研究與人逆轉(zhuǎn)錄病毒，第11卷，第10期，1995，對其作某些改進(jìn))使用人外周血單核細(xì)胞(PBMC)試驗(yàn)制備脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性。將PBMC與藥物在介質(zhì)中保溫72小時(shí)。用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器測定細(xì)胞生長。約10000μM的脂質(zhì)體自身與細(xì)胞計(jì)算相干擾。下表5給出了結(jié)果。表5.脂質(zhì)體膦甲酸的細(xì)胞毒性</tables>出人意料地發(fā)現(xiàn)含膦甲酸的半乳糖脂脂質(zhì)體制劑對PBMC細(xì)胞生長的抑制(較高CIC50，細(xì)胞生長抑制濃度)較游離膦甲酸弱2-3倍。如先前所述，我們的脂質(zhì)體制劑的該作用甚至應(yīng)該是更高的，它除含有脂質(zhì)體包囊的膦甲酸外，還含有游離膦甲酸。這可以推斷膦甲酸的螯合作副作用可通過加入半乳糖脂減弱，或者緩釋作用的脂質(zhì)體制劑可降低膦甲酸的最大細(xì)胞內(nèi)濃度，從而降低毒性。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，它含有與半乳糖脂和極性溶劑混合的抗病毒化合物，所述化合物選自膦甲酸、阿昔洛韋、valaciclovir和泛昔洛韋。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，含有治療有效量的與半乳糖脂和極性溶劑混合的膦甲酸。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中的半乳糖脂由至少50％的二半乳糖基二?；视秃褪Ｓ嗟钠渌鼧O性脂質(zhì)組成。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的藥物組合物，其中的半乳糖脂由約70-80％二半乳糖基二?；视秃?0-30％其它極性脂質(zhì)組成。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的藥物組合物，其中的半乳糖脂由高達(dá)100％的二半乳糖基二?；视徒M成。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的藥物組合物，包含a)0.1-10％膦甲酸，b)1-70％半乳糖脂，c)30-98.9％極性溶劑和任選的添加劑。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的藥物組合物，包含a)1-5％膦甲酸，b)20-40％半乳糖脂，c)55-79％水。8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的藥物組合物，包含a)1-5％膦甲酸，b)1-10％半乳糖脂，c)85-98％水。9.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的藥物組合物，用于局部給藥。10.根據(jù)權(quán)利要求1-6或8任一項(xiàng)的藥物組合物，用于經(jīng)非胃腸道給藥。11.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物，用于預(yù)防和/或治療皰疹病毒感染。12.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物，用于治療復(fù)發(fā)性皰疹病毒感染。13.根據(jù)權(quán)利要求1-6或8任一項(xiàng)的藥物組合物，用于預(yù)防和/或治療HIV或HBV。14.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物的方法，特征在于制備步驟為-將抗病毒化合物和任選的添加劑溶于極性溶劑，-加入半乳糖脂，和-攪拌或振搖混合物直至獲得均勻組合物。15.一種預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物包括人的皮膚、粘膜或眼部皰疹病毒感染的方法，包括經(jīng)局部或經(jīng)非胃腸道給藥治療有效量的權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物。16.一種預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物包括人的非皮膚性皰疹病毒、HIV或HBV感染的方法，包括經(jīng)非胃腸道給藥治療有效量的權(quán)利要求1-6或8任一項(xiàng)的藥物組合物。17.根據(jù)權(quán)利要求15或16的治療復(fù)發(fā)性皰疹病毒感染的方法。18.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物包括人的皰疹病毒感染的藥物中的用途。19.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的藥物組合物在制備用于治療復(fù)發(fā)性皰疹病毒感染的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種藥物組合物,它含有與半乳糖脂和極性溶劑混合的抗病毒混合物,所述化合物選自膦甲酸、阿昔洛韋、valaciclovir和泛昔洛韋。該藥物組合物局部或經(jīng)非胃腸道給藥可用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物包括人皰疹病毒感染。本發(fā)明還涉及所述藥物組合物在制備所述預(yù)防或治療藥物中的用途。文檔編號A61K31/66GK1179717SQ9619283公開日1998年4月22日申請日期1996年2月2日優(yōu)先權(quán)日1996年2月2日發(fā)明者N·E·A·卡爾松,B·G·赫爾斯羅夫,K·S·魯?shù)驴固?N·G·G·尼爾松申請人:阿斯特拉公司