本發(fā)明屬于生物醫(yī)用高分子材料領(lǐng)域，具體涉及基于阿霉素前藥和基因共載的混合膠束藥物及其制備方法。

背景介紹

癌癥是機(jī)體在各種致癌因素作用下，局部組織的細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控導(dǎo)致異常增生與分化而形成的新生物。新生物一旦形成，不因病況消除而停止生長(zhǎng)，其生長(zhǎng)不受正常機(jī)體生理調(diào)節(jié)，而是破壞正常組織與器官，最終導(dǎo)致人們因器官功能的衰竭而死亡。近年來(lái)，癌癥在全球的發(fā)病率不斷增長(zhǎng)，其中肺癌在男性中的發(fā)病率和死亡率居于首位，在女性中的死亡率也居于第二位，嚴(yán)重威脅了人類(lèi)的身體健康，所以如何有效地治療肺癌引起人們的廣泛關(guān)注。

目前臨床上用于癌癥治療的方法主要有手術(shù)治療、化學(xué)療法、放射療法、基因療法等。最常用的是化學(xué)療法。但是，化療過(guò)程中使用的小分子藥物（如：紫杉醇，阿霉素，喜樹(shù)堿等），在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞也有很強(qiáng)的損傷作用，同時(shí)，小分子藥物在血液循環(huán)中易被清除，很難到達(dá)腫瘤部位，嚴(yán)重限制了這些藥物在臨床上的療效。通過(guò)前藥化，可以有效地解決上述問(wèn)題。前藥，也稱藥物前體、前驅(qū)藥物等，是指藥物經(jīng)過(guò)化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾后得到的在體外無(wú)活性或活性較小、在體內(nèi)經(jīng)酶或非酶的轉(zhuǎn)化釋放出活性藥物而發(fā)揮藥效的化合物。這種方式可以延長(zhǎng)藥物在血液循環(huán)中的時(shí)間，降低毒副作用，有效提高藥物的利用率。基因治療是將特定的目的基因通過(guò)一定方式導(dǎo)入患者特定的組織細(xì)胞中進(jìn)行適當(dāng)表達(dá)，治療由于基因缺陷或異常而引起的疾病。與傳統(tǒng)治療相比，基因治療具有許多優(yōu)點(diǎn)：可以有效降低耐藥性，減少毒副作用，減輕病人的痛苦。

藥物與基因聯(lián)合治療已成為一種研究方向。但是，現(xiàn)有體系，尤其是載體無(wú)法滿足共裝載并協(xié)同發(fā)揮性能的要求，存在裝載互相影響、藥物釋放不規(guī)律、釋放效果差、病灶富集干擾嚴(yán)重等問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種阿霉素前藥和基因共載的混合膠束藥物的制備方法及其應(yīng)用；該藥物/基因共傳輸體系具有良好的生物相容性和抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。

本發(fā)明具體的技術(shù)方案為：

一種基于阿霉素前藥和基因共載的混合膠束藥物的制備方法，包括以下步驟：

(1)在催化劑的存在下，以6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽為原料，通過(guò)反應(yīng)得到阿霉素衍生物；

(2)在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與炔基磷酸酯單體為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物；

(3)惰性氣體氣氛保護(hù)下，在銅鹽催化劑和配體的存在下，以步驟(2)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與步驟(1)獲得的阿霉素衍生物為原料，通過(guò)反應(yīng)制備酸敏感的阿霉素前藥mpeg-b-pbyp-hyd-dox；

(4)紫外光照條件，在光引發(fā)劑的催化作用下，用步驟(2)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物mpeg-b-pbyp-g-dat；

(5)將步驟(3)的阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）和步驟(4)的側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp-g-dat）混合組裝形成混合膠束；

(6)將步驟(5)的混合膠束與基因復(fù)合，得到基于阿霉素前藥和基因共載的混合膠束藥物。

本發(fā)明將阿霉素和基因（p53）共載能夠?qū)崿F(xiàn)藥物和基因治療的相互促進(jìn)，能夠抑制腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增加腫瘤細(xì)胞的化療敏感性，降低多藥耐藥性的影響。與單純的藥物輸送和基因治療相比，能夠顯著提高阿霉素的利用率，實(shí)現(xiàn)藥物和基因的相互結(jié)合。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種基于阿霉素前藥的混合膠束藥物的制備方法，包括以下步驟：

(1)在催化劑的存在下，以6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽為原料，通過(guò)反應(yīng)得到阿霉素衍生物；

(2)在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與炔基磷酸酯單體為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物；

(3)惰性氣體氣氛保護(hù)下，在銅鹽催化劑和配體的存在下，以步驟(2)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與步驟(1)獲得的阿霉素衍生物為原料，通過(guò)反應(yīng)制備酸敏感的阿霉素前藥mpeg-b-pbyp-hyd-dox；

(4)紫外光照條件，在光引發(fā)劑的催化作用下，用步驟(2)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物；

(5)將步驟(3)的阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）和步驟(4)的側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp-g-dat）混合組裝形成基于阿霉素前藥的混合膠束藥物。

上述技術(shù)方案中，步驟(4)中，光引發(fā)劑選自安息香二甲醚或2-羥基-4'-(2-羥乙氧基)-2-甲基苯丙酮，所述側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物、2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽和光引發(fā)劑的摩爾比為1：(200～300)：(15～25)；步驟(5)中，阿霉素前藥與側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物的質(zhì)量比為1：(0.5～2)。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種阿霉素前藥或者阿霉素前藥膠束的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在催化劑的存在下，以6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽為原料，通過(guò)反應(yīng)得到阿霉素衍生物；

(2)在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與炔基磷酸酯單體為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物；

(3)惰性氣體氣氛保護(hù)下，在銅鹽催化劑和配體的存在下，以步驟(2)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與步驟(1)獲得的阿霉素衍生物為原料，通過(guò)反應(yīng)制備阿霉素前藥；

(4)將步驟(3)的阿霉素前藥組裝形成阿霉素前藥膠束。

本發(fā)明中，步驟(1)中，6-溴己酸甲酯與疊氮化鈉反應(yīng)，得到6-疊氮己酸甲酯，然后6-疊氮己酸甲酯與水合肼反應(yīng)，制備得到6-疊氮己酰肼，所述6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽的摩爾比為1：(2～6)，所述催化劑為冰醋酸；步驟（2）中，炔基磷酸酯單體為2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷，所述聚乙二醇和炔基磷酸酯單體的摩爾比為1：(60～80)，所述催化劑為辛酸亞錫或1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯；步驟(3)中，銅鹽催化劑選自五水合硫酸銅、氯化亞銅或溴化亞銅，配體選自抗壞血酸鈉、聯(lián)吡啶、五甲基二亞乙基三胺、四甲基乙二胺或六甲基三亞乙基四胺中的一種，所述側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物、阿霉素鹽酸鹽和銅鹽催化劑的摩爾比為1：(10～20)：(10～20)，所述銅鹽催化劑和配體的摩爾比為1：(1～2)。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種陽(yáng)離子載體膠束的制備方法，包括以下步驟：

(1)在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與炔基磷酸酯單體為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物；

(2)紫外光照條件，在光引發(fā)劑的催化作用下，用步驟(1)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物；

(3)將步驟(2)的側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物組裝形成膠束。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種基于基因的膠束藥物的制備方法，包括以下步驟：

(1)在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與炔基磷酸酯單體為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物；

(2)紫外光照條件，在光引發(fā)劑的催化作用下，用步驟(1)側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物；

(3)將步驟(2)的側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物組裝形成膠束，將膠束與基因混合，得到基于基因的膠束藥物。

本發(fā)明中，基因藥物優(yōu)選p53基因，其是一種重要的抑癌基因，肺癌中p53基因的突變率高達(dá)50%-70%。p53基因?qū)?xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡和dna修復(fù)起重要作用，同時(shí)可以抑制細(xì)胞內(nèi)多藥耐藥性（mdr）基因的表達(dá)。p53基因的突變或缺失會(huì)導(dǎo)致癌細(xì)胞對(duì)化療不敏感，大大降低化療藥物的治療效果。因此，外源導(dǎo)入p53基因不僅可以抑制癌細(xì)胞增殖，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)凋亡，同時(shí)可以增加癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的敏感性。

本發(fā)明還公開(kāi)了一種兩嵌段共聚物的制備方法，用三氯化磷和乙二醇為原料、氧化劑存在下反應(yīng)，獲得2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷；然后在縛酸劑存在下，將2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷與3-丁炔-1-醇反應(yīng)制備2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷；然后在惰性氣體氣氛保護(hù)下和催化劑的存在下，以聚乙二醇與2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷為原料，通過(guò)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物。

然后在光引發(fā)劑存在下，用側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備得到所述兩嵌段共聚物。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述的制備方法制備的產(chǎn)品。

本發(fā)明的阿霉素前藥為mpeg-b-pbyp-hyd-dox，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

式中，m為22～113，n為15～70，x為2～11。

本發(fā)明還公開(kāi)了上述產(chǎn)品在制備納米藥物中的應(yīng)用或者在制備阿霉素前藥和基因共同載體中的應(yīng)用；本發(fā)明上述方法可以制備得到側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物，接枝阿霉素得到阿霉素前藥，因此本發(fā)明還公開(kāi)了側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物在制備納米藥物中的應(yīng)用或者在制備阿霉素前藥和基因共同載體中的應(yīng)用。所述納米藥物含有阿霉素和/或基因藥物。

本發(fā)明中，peg親水性部分包裹在內(nèi)核外邊形成膠束的外殼，對(duì)膠束的穩(wěn)定性具有很好的作用。聚合物前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）的結(jié)構(gòu)中含有疏水性阿霉素部分以及陽(yáng)離子載體側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp-g-dat）中固定了p53基因的部分，用于形成混合膠束的內(nèi)核，共同溶解于二甲亞砜中，滴加二次水，在水溶液中自組裝形成混合膠束，透析除去二甲亞砜獲得混合膠束。在腫瘤細(xì)胞的ph條件和磷酸二酯酶的存在下，酸敏感基團(tuán)以及主鏈磷酸酯鍵斷裂，膠束被破壞，從而快速地釋放出聚集在膠束內(nèi)部的疏水性藥物阿霉素以及抑癌基因p53。采用生物可降解的聚磷酸酯作為主鏈，用酸敏感的基團(tuán)連接藥物，利用不同嵌段共聚物自組裝形成的混合膠束實(shí)現(xiàn)藥物和基因的共同輸送，可以有效提高物理穩(wěn)定性和載藥能力，減少藥物和基因在運(yùn)輸過(guò)程中的相互影響，保證兩者的共同運(yùn)輸；同時(shí)簡(jiǎn)化了合成過(guò)程，可以直接方便地得到共同輸送藥物和基因的多功能復(fù)合體系。

優(yōu)選的技術(shù)方案中，側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物的數(shù)均分子量為13000～20000g·mol^-1；酸敏感的阿霉素前藥的數(shù)均分子量為18000～30000g·mol^-1；側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物的數(shù)均分子量為20000～30000g·mol^-1；所形成的混合膠束的粒徑為150～180nm。

本發(fā)明采用結(jié)構(gòu)中含有聚乙二醇和聚磷酸酯的嵌段共聚物作為基本原料，經(jīng)銅鹽及配體催化后與抗癌藥物阿霉素反應(yīng)，制備酸敏感的聚合物前藥；經(jīng)光引發(fā)劑催化后與含有叔胺基團(tuán)的單體反應(yīng)，制備可質(zhì)子化的陽(yáng)離子載體；利用這兩種聚合物制備阿霉素前藥和p53基因共載的混合膠束作為藥物。

舉例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的制備方法包括以下步驟：

(1)以6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽（dox?hcl）作為原料，無(wú)水甲醇為溶劑，冰醋酸為催化劑，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)獲得阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）；

其中，阿霉素鹽酸鹽與6-疊氮己酰肼的摩爾比為1：(2～6)；

所述6-疊氮己酰肼的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

所述阿霉素衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

(2)惰性氣體氛圍，在催化劑的存在下，以聚乙二醇與2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷為原料，以無(wú)水二氯甲烷為溶劑，通過(guò)開(kāi)環(huán)反應(yīng)獲得側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）；

其中，聚乙二醇，2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷和催化劑的摩爾比為1：(60～80)：0.5；

所述聚乙二醇的結(jié)構(gòu)式為：

所述2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷的結(jié)構(gòu)式為：

所述側(cè)鏈含有炔基的兩嵌段共聚物的結(jié)構(gòu)式為：

上述m為22～113，n為15～70

(3)以無(wú)水n,n-二甲基甲酰胺作為溶劑，在銅鹽催化劑和配體的存在下，以步驟(2)獲得的兩嵌段共聚物與步驟(1)獲得的阿霉素衍生物作為原料，通過(guò)反應(yīng)制備酸敏感的阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）；

其中，兩嵌段共聚物、阿霉素鹽酸鹽和銅鹽催化劑的摩爾比為1：(10～20)：(10～20)；銅鹽催化劑和配體的摩爾比為1：(1～2)；

(4)以無(wú)水甲醇作為溶劑，在光引發(fā)劑的存在下，用步驟(2)獲得的兩嵌段共聚物與2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽為原料，制備側(cè)鏈含有叔胺基團(tuán)的兩嵌段共聚物陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）；

其中，兩嵌段共聚物、2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽和光引發(fā)劑的摩爾比為1：(200～300)：(15～25)；

(5)以二甲亞砜作為溶劑，在勻速攪拌并逐滴滴加二次水的條件下，用步驟(3)獲得的mpeg-b-pbyp-hyd-dox和步驟(4)獲得的mpeg-b-pbyp-g-dat作為原料，制備得到用于阿霉素和p53基因共載的混合膠束；

其中，酸敏感的前藥與陽(yáng)離子載體質(zhì)量比為1：(0.5～2)。

制備阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl），主要通過(guò)三個(gè)步驟制備而成：

第一步，制備6-疊氮己酸甲酯。以6-溴己酸甲酯與疊氮化鈉（nan3）反應(yīng)，以n,n-二甲基甲酰胺（dmf）為溶劑，進(jìn)行疊氮化反應(yīng)，獲得6-疊氮己酸甲酯。其中，6-溴己酸甲酯、疊氮化鈉的摩爾比為1：(1.5～5)；

第二步，制備6-疊氮己酰肼。以第一步合成的6-疊氮己酸甲酯與質(zhì)量為85%的水合肼反應(yīng)，以四氫呋喃（thf）作為溶劑，通過(guò)酰胺化反應(yīng)，獲得6-疊氮己酰肼。其中，6-疊氮己酸甲酯與水合肼的摩爾比為1：(10～30)；

第三步，制備阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）。采用第二步合成的6-疊氮己酰肼與阿霉素鹽酸鹽（dox?hcl）作為原料，以無(wú)水甲醇（ch3oh）為溶劑，冰醋酸為催化劑，獲得阿霉素衍生物。其中，阿霉素鹽酸鹽與6-疊氮己酰肼的摩爾比為1：(2～6)。

制備2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷，主要通過(guò)兩個(gè)步驟制備而成：

第一步，制備2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷（cop）。以三氯化磷與乙二醇反應(yīng)，以二氯甲烷（ch2cl2）為溶劑，以氧氣為氧化劑，獲得2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷。其中，三氯化磷和乙二醇的摩爾比為1：(0.8～1.2);

第二步，制備2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷（byp）。以2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷（cop）與3-丁炔-1-醇反應(yīng)，以無(wú)水四氫呋喃（thf）為溶劑，以三乙胺、吡啶或乙二胺為縛酸劑，制備得到2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷。其中，2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷，3-丁炔-1-醇與縛酸劑的摩爾比為1：(1～1.3)：(1～1.5)。

制備混合膠束包括以下幾步：

利用酸敏感的阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）和陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）為原料，以二甲亞砜作為溶劑，利用滴加透析的方法制備膠束，獲得用于藥物和基因共載的混合膠束。其中，酸敏感的前藥與陽(yáng)離子載體的質(zhì)量比為1：(0.5～2)。

上述技術(shù)方案中，步驟(1)中，反應(yīng)溫度為60℃～80℃，反應(yīng)時(shí)間為12h～24h；步驟(2)中，惰性氣體為氮?dú)?；反?yīng)溫度為25℃～40℃，反應(yīng)時(shí)間為1h～1.5h；步驟(3)中，反應(yīng)溫度為40℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間為36h～48h；步驟(4)中，反應(yīng)溫度為25℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間為1h～2h。

本發(fā)明首次將合成的環(huán)境響應(yīng)性聚合物前藥與陽(yáng)離子載體通過(guò)配方及參數(shù)的限定，制備得到混合膠束，作為藥物和基因的共載體系，解決了現(xiàn)有的單一嵌段聚合物無(wú)法通過(guò)簡(jiǎn)單的修飾實(shí)現(xiàn)多種功能的問(wèn)題，可以直接方便得到藥物載體和基因載體的復(fù)合體系，是一種簡(jiǎn)單、高效、快速的制備方法。

進(jìn)一步的技術(shù)方案，在步驟(1)～(4)完成后，分別對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行提純處理，所述純化過(guò)程包括以下步驟：

(i)阿霉素衍生物n3-hyd-dox?hcl的純化：反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑后在冰乙醚中沉淀三次；采用離心法得到沉淀物，將其放置在真空干燥箱中干燥至恒重得到紅色粉末狀的產(chǎn)物n3-hyd-dox?hcl；

(ii)側(cè)鏈含炔基的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）的純化：反應(yīng)結(jié)束后，滴加2～3滴冰醋酸攪拌1～2h，除去溶劑后在混合沉淀劑（乙醚/甲醇=10/1）中沉淀三次；傾去上層清液，得到沉淀物，將其放置在真空干燥箱中干燥，得到白色粘稠狀固體mpeg-b-pbyp；

(iii)酸敏感阿霉素前藥的純化：反應(yīng)結(jié)束后，用去離子水透析72h，將透析袋中得到的紫色透明液體冷凍干燥，得到深紫色固體產(chǎn)物mpeg-b-pbyp-hyd-dox。

(iv)可質(zhì)子化的陽(yáng)離子載體的純化：反應(yīng)結(jié)束后，用去離子水透析72h，將透析袋中得到的白色透明液體冷凍干燥，得到白色粘稠狀固體產(chǎn)物mpeg-b-pbyp-g-dat。

上述技術(shù)方案中，步驟(i)中，采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方法除去溶劑；步驟(iii)中透析時(shí)采用截留分子量為7000～14000da的透析袋；步驟(iv)中，透析時(shí)采用截留分子量為7000～14000da的透析袋。

具體的提純包括以下步驟：

(i)制備阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）的純化：

第一步，制備6-疊氮己酸甲酯的純化：反應(yīng)結(jié)束后，用中性三氧化二鋁的短柱過(guò)濾反應(yīng)液，并用油泵減壓除去溶劑dmf。隨后，用大量的ch2cl2溶解粗產(chǎn)物，用30ml的二次水萃取三次，將有機(jī)相收集并用無(wú)水硫酸鈉干燥4h。最后，用棉花過(guò)濾無(wú)水硫酸鈉，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去濾液中的溶劑，將產(chǎn)物置于真空烘箱中干燥24h，得到無(wú)色的液體產(chǎn)物6-疊氮己酸甲酯；

第二步，制備6-疊氮己酰肼的純化：反應(yīng)結(jié)束后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去thf后換用ch2cl2溶解。在分液漏斗中，采用飽和氯化鈉水溶液萃取粗產(chǎn)物。將有機(jī)相用無(wú)水na2so4干燥4h，除去溶劑后真空干燥，最終收集到產(chǎn)物6-疊氮己酰肼；

第三步，制備阿霉素衍生物的純化：反應(yīng)結(jié)束后，用棉花過(guò)濾除去反應(yīng)液中的na2so4，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后，在冰乙醚中沉淀三次。最終，采用離心法得到下面的沉淀物，將其放置在真空干燥箱中干燥24h，得到紅色粉末狀產(chǎn)物，即為n3-hyd-dox?hcl。

(ii)側(cè)鏈含炔基的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）的純化：

第一步，制備2-氯-2-氧代-1,3,2,-二氧磷雜環(huán)戊烷（cop）的純化：氧化反應(yīng)結(jié)束后，水泵減壓除去溶劑。隨后，將得到的液體用油泵進(jìn)行減壓蒸餾，得到無(wú)色透明液體，即為cop；

第二步，制備2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷（byp）的純化：反應(yīng)結(jié)束后，用砂芯漏斗除去縛酸劑產(chǎn)生的鹽酸鹽，同時(shí)用水泵減壓除去溶劑thf。隨后，將得到的淡黃色液體減壓蒸餾，最終得到無(wú)色透明液體，即為byp；

第三步，制備側(cè)鏈含炔基的兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）的純化：反應(yīng)結(jié)束后，滴加2～3滴冰醋酸攪拌1～2h，除去溶劑后在混合沉淀劑（乙醚/甲醇=10/1）中沉淀三次；倒掉上清液后得到沉淀物，將其放置在真空干燥箱中干燥得到白色粘稠狀固體,即為mpeg-b-pbyp。

(iii)酸敏感阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）的純化：

反應(yīng)結(jié)束后，用去離子水透析72h，將透析袋中得到的紫色透明液體冷凍干燥，得到深紫色固體產(chǎn)物。

(iv)可質(zhì)子化的陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）的純化：

反應(yīng)結(jié)束后，用去離子水透析72h，將透析袋中得到的白色透明液體冷凍干燥，得到白色粘狀固體產(chǎn)物。

本發(fā)明公開(kāi)的基于阿霉素前藥和基因共載的混合膠束可以在水溶液中自組裝并固定p53基因形成穩(wěn)定膠束藥物。peg親水性部分包裹在內(nèi)核外層形成膠束的外殼，對(duì)膠束的穩(wěn)定性具有很好的作用。聚合物前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）含有的疏水性阿霉素部分以及陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）固定p53基因的部分，用于形成混合膠束的內(nèi)核。在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的ph條件和磷酸二酯酶的存在下，酸敏感基團(tuán)以及主鏈磷酸酯鍵斷裂，膠束被破壞，從而快速地釋放出聚集在膠束內(nèi)部的疏水性藥物阿霉素以及抑癌基因p53。因此，本發(fā)明同時(shí)請(qǐng)求保護(hù)上述阿霉素和p53基因共載的混合膠束在制備刺激響應(yīng)性抗癌納米藥物中的應(yīng)用。

由于上述方案的實(shí)施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、本發(fā)明采用生物相容性良好的聚乙二醇和聚磷酸酯作為主鏈，以在酸性條件下可以發(fā)生水解的基團(tuán)連接藥物，制備了具有良好生物相容性和生物可降解性的用于阿霉素前藥和p53基因共載的混合膠束；該混合膠束可以大大提高藥物的水溶性，增加了固定基因的穩(wěn)定性，在腫瘤細(xì)胞環(huán)境中易于分解，加速藥物和基因的共同輸送和釋放，大大提高了其應(yīng)用價(jià)值。

2、本發(fā)明獲得的用于阿霉素前藥和p53基因共載的混合膠束可以在水溶液中自組裝并固定p53基因形成穩(wěn)定膠束，peg親水性部分包裹在內(nèi)核外邊形成膠束的外殼，對(duì)膠束的穩(wěn)定性具有很好的作用，能夠延長(zhǎng)在血液中的循環(huán)時(shí)間。同時(shí)，聚合物主鏈中的磷酸酯鍵在酸性和酶存在的條件下可以發(fā)生降解，阿霉素也是通過(guò)酸敏感的基團(tuán)連接到主鏈上，當(dāng)膠束到達(dá)腫瘤或病變組織時(shí)，ph值降低，酸敏感基團(tuán)以及主鏈的磷酸酯鍵斷裂，膠束被破壞，從而快速地釋放出聚集在膠束內(nèi)部的疏水性藥物阿霉素以及抑癌基因p53，增加了藥物和基因的利用率和靶向性，在癌癥的治療方面，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

3、本發(fā)明提供的酸敏感前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）和陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat），結(jié)構(gòu)明確，合成條件溫和，具有以下顯著特點(diǎn)：(1)所用原料和試劑容易獲得；(2)反應(yīng)條件簡(jiǎn)單溫和；(3)產(chǎn)率高；(4)產(chǎn)物分離簡(jiǎn)便；(5)產(chǎn)物穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，制備容易，提純方便，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例一中阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）的核磁共振氫譜圖，溶劑為氘代二甲亞砜；

圖2為實(shí)施例二中嵌段共聚物mpeg-b-pbyp的核磁共振氫譜圖，溶劑為氘代氯仿；

圖3為實(shí)施例三中阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）的核磁共振氫譜圖，溶劑為氘代氯仿；

圖4為實(shí)施例四中陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）的核磁共振氫譜圖，溶劑為氘代氯仿；

圖5為紅外光譜圖，其中，(a)dox、(b)dox-hyd-n3、(c)mpeg-b-pbyp、(d)mpeg-b-pbyp-hyd-dox、(e)mpeg-b-pbyp-g-dat；

圖6為實(shí)施例五中制備的兩種聚合物在水溶液中自組裝形成的混合膠束的動(dòng)態(tài)光散射曲線和透射電鏡照片圖；

圖7為實(shí)施例五中制備的混合膠束在不同ph值的緩沖溶液中的藥物釋放曲線圖；

圖8為共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束抑制腫瘤細(xì)胞增殖性能測(cè)試圖；

圖9為mpeg-b-pbyp-hyd-dox膠束、mpeg-b-pbyp-g-dat/p53膠束和混合膠束/p53抑制腫瘤細(xì)胞增殖性能測(cè)試圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述：

實(shí)施例一：阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）的合成

阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）主要通過(guò)三個(gè)步驟制備而成。第一步，制備6-疊氮己酸甲酯；第二步，制備6-疊氮己酰肼；第三步，對(duì)阿霉素鹽酸鹽（dox?hcl）進(jìn)行修飾得到阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl），具體合成方法如下：

合成小分子化合物6-疊氮己酸甲酯。將事先放置于120℃烘箱的玻璃裝置取出，放入保干器中，待其冷卻至室溫，取出使用。分別稱取6-溴己酸甲酯（2.35g，11.24mmol）和疊氮化鈉（nan3）（1.83g，18.15mmol），并用15ml的dmf溶解在50ml的圓底燒瓶中，在60℃冷凝水回流條件下反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后用中性三氧化二鋁（al2o3）的短柱過(guò)濾反應(yīng)液，除去未反應(yīng)的nan3，并用油泵減壓除去溶劑dmf。隨后，用大量的二氯甲烷（ch2cl2）溶解粗產(chǎn)物，用30ml二次水萃取三次，將有機(jī)相收集并用無(wú)水硫酸鈉（na2so4）干燥4h。最后，用棉花過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將產(chǎn)物置于真空烘箱中干燥24h，得到無(wú)色的液體產(chǎn)物6-疊氮己酸甲酯（1.14g，產(chǎn)率：66.8%）；

在圓底燒瓶中加入已得到的6-疊氮己酸甲酯（0.54g，3.17mmol）和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為85%的水合肼（4.70g，79.4mmol），采用四氫呋喃（thf）作為溶劑。同樣，在80℃油浴并裝有蛇形冷凝管的裝置中，回流反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去thf，用ch2cl2溶解。在分液漏斗中，采用飽和氯化鈉水溶液萃取粗產(chǎn)物。將有機(jī)相用無(wú)水na2so4干燥4h，除去溶劑后真空干燥，最終收集到產(chǎn)物6-疊氮己酰肼（0.29g，產(chǎn)率：53.5%）；

分別稱取6-疊氮己酰肼（102.0mg，0.60mmol），dox?hcl（115.9mg，0.20mmol）和無(wú)水na2so4（103mg，0.73mmol）加入帶有冷凝回流裝置的圓底燒瓶中，用30ml的無(wú)水甲醇（ch3oh）溶解。隨后加入3滴冰醋酸，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，?5℃油浴中避光反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，用棉花過(guò)濾，除去反應(yīng)液中的na2so4，除去溶劑后在冰乙醚中沉淀三次。最終，采用離心法得到下面的沉淀物，將其放置在真空干燥箱中干燥24h，得到紅色粉末狀的產(chǎn)物，即為n3-hyd-dox?hcl（93.5mg，產(chǎn)率：62.4%）。

實(shí)施例二：側(cè)鏈含炔基的兩嵌段共聚物的合成

以聚乙二醇（mpeg）與2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷（byp）為原料，以1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯（dbu）為催化劑，二氯甲烷為溶劑，通過(guò)開(kāi)環(huán)反應(yīng)，獲得側(cè)鏈含炔基的兩嵌段共聚物。具體合成方法如下：

提前4h將所用玻璃儀器放置于120℃烘箱中烘干，取出后放在保干器內(nèi)冷卻至室溫待用。首先，取分子量為5000的聚乙二醇（mpeg）（0.82g，0.16mmol）置于50ml的支管燒瓶中，并加入25ml的甲苯，采用兩次常壓甲苯共沸的方法除去雜質(zhì)水。待其冷卻后，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，加入7ml干燥的ch2cl2溶解，向支管燒瓶中依次加入2-炔丁基-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷（byp）（2.12g，11.9mmol）和1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯（dbu）（0.049g，0.32mmol）。抽放氣三次后，在氮?dú)夥諊聦⒀b置密封后置于35℃油浴中反應(yīng)1h。反應(yīng)結(jié)束后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去少量溶劑，然后將其在沉淀劑（乙醚/甲醇=10/1）中沉淀三次，收集沉淀物并真空干燥，得到兩嵌段共聚物mpeg-b-pbyp（2.64g，產(chǎn)率：89.8%）。

實(shí)施例三：酸敏感的阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）與兩嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）發(fā)生反應(yīng)，獲得酸敏感的阿霉素前藥。具體合成方法如下：

將反應(yīng)所需的玻璃儀器提前4h放入120℃烘箱中烘干，取出后在保干器中冷卻至室溫待用。首先，在氮?dú)夥諊?，向支管燒瓶中依次加入溴化亞銅（cubr）（64.3mg，0.45mmol）和五甲基二乙烯三胺（pmdeta）（155.3mg，0.90mmol）,用5ml二甲亞砜（dmso）將其充分溶解混合均勻。然后加入mpeg-b-pbyp（387.7mg，0.02mmol）和阿霉素衍生物（dox-hyd-n3）（328.0mg，0.45mmol），再加入2mldmso，使其充分溶解。最后充放氣三次，在氮?dú)夥諊聦⒀b置密封后置于45℃油浴中反應(yīng)40h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液移到截留分子量為7000da的透析袋中，采用去離子水進(jìn)行透析，每隔4h后換一次去離子水。透析72h后，將透析袋中溶液取出，冷凍干燥后得到紫色固體產(chǎn)物，即為阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）（489.6mg，68.4%）。

實(shí)施例四：可質(zhì)子化的陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）的合成

利用含有叔胺基團(tuán)的2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽與嵌段共聚物（mpeg-b-pbyp）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，獲得可質(zhì)子化的陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）。具體合成方法如下：

在50ml石英瓶中依次加入mpeg-b-pbyp（396.3mg，0.02mmol），2-二甲氨基乙硫醇鹽酸鹽（907.0mg，6.40mmol）和光引發(fā)劑安息香二甲醚（dmpa）（107.7mg，0.48mmol），加入10ml無(wú)水甲醇（ch3oh）使其充分溶解。隨后，將石英反應(yīng)瓶置于365nm紫外光照射下攪拌反應(yīng)1h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液移到截留分子量為7000da的透析袋中，采用去離子水進(jìn)行透析，每隔4h換一次去離子水。透析72h后，將透析袋中溶液取出，冷凍干燥后得到白色粘性固體產(chǎn)物，即為mpeg-b-pbyp-g-dat（562.3mg，66.2%）。

分別利用核磁共振氫譜（¹hnmr）和紅外光譜（ft-ir）驗(yàn)證所得小分子化合物、聚合物以及阿霉素前藥和陽(yáng)離子載體的結(jié)構(gòu)。附圖1為阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl）的核磁共振氫譜圖；附圖2為嵌段共聚物mpeg-b-pbyp的核磁共振氫譜圖；附圖3為阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）的核磁共振氫譜圖；附圖4為陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）的核磁共振氫譜圖；附圖5為dox（a）,dox-hyd-n3（b）,mpeg-b-pbyp（c）,mpeg-b-pbyp-hyd-dox（d）,mpeg-b-pbyp-g-dat（e）的紅外光譜圖。結(jié)合附圖1、2、3、4、5可以證明反應(yīng)產(chǎn)物符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

實(shí)施例五：采用滴加透析法制備共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束

分別取阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）12.5mg和陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）12.5mg，溶解在2mldmso中。將轉(zhuǎn)速控制在1000rs^-1，攪拌2h。用微量注射器以2mlh^-1的速度向溶液中滴加20ml的去離子水，滴加結(jié)束后，繼續(xù)攪拌4h。隨后，將溶液裝入截留分子量為7000da的透析袋中，用去離子水透析24h后，將溶液取出并定容至25ml，最終得到濃度為1mgml^-1的混合膠束溶液。取3ml膠束溶液與100μgp53基因混合，渦旋10秒，靜置30分鐘，即形成共載阿霉素和p53基因的混合膠束。附圖6為前藥和陽(yáng)離子載體在水中自組裝形成的混合膠束的透射電鏡照片（a）和動(dòng)態(tài)光散射曲線（b）；如：附圖6（a）所示為兩種聚合物在水溶液中自組裝形成球形膠束的形貌；附圖6（b）所示為對(duì)應(yīng)膠束粒徑的動(dòng)態(tài)光散射測(cè)試曲線圖，可以看出混合膠束粒徑為150～200nm。

實(shí)施例六：混合膠束的體外藥物釋放測(cè)試

取5ml預(yù)先制備好的混合膠束溶液（膠束濃度為1mgml^-1）置于截留分子量為7000da的透析袋中，兩端封好置于100ml的大離心管中，隨后，向相應(yīng)的離心管中分別加入30ml不同的緩沖溶液。緩沖溶液分為三種：（1）磷酸緩沖液（ph7.4，10mm）；（2）磷酸緩沖液（ph6.0，10mm）；（3）磷酸緩沖液（ph5.0，10mm）。然后，將大離心管置于37.5℃的恒溫振蕩儀中，以160r/min速度進(jìn)行振蕩。在設(shè)定的時(shí)間點(diǎn)，依次取出5ml釋放液并補(bǔ)加相應(yīng)體積的緩沖溶液。每組實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，最后取平均值。取出的釋放液用熒光分光光度計(jì)對(duì)dox濃度進(jìn)行測(cè)定。載有阿霉素的聚合物膠束在不同ph條件下的釋放曲線如附圖7所示，隨著ph值的降低，藥物釋放速率明顯快于正常生理?xiàng)l件下；同時(shí)，在ph5.0緩沖溶液中藥物累計(jì)釋放率最大。藥物釋放說(shuō)明該混合膠束具有明顯的ph響應(yīng)性，可以達(dá)到控制藥物釋放的目的。

實(shí)施例七：共載阿霉素和p53基因的混合膠束抑制腫瘤細(xì)胞增殖性能測(cè)試

分別將兩種不同的人肺癌細(xì)胞（a549cells，h1299cells）培養(yǎng)在補(bǔ)充有10%胎牛血清(fbs)的1640培養(yǎng)基中，置于37℃，5%co2(相對(duì)濕度為90%)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)液。選擇處在生長(zhǎng)活躍期的細(xì)胞接種于每孔含有100μldmem培養(yǎng)基的96孔板中（密度為60000），培養(yǎng)24h。用滴加透析法制備復(fù)合p53基因的混合膠束母液（混合膠束的濃度為1000mgl^-1，阿霉素濃度為150mgl^-1，p53基因濃度為33.3mgl^-1），將一系列不同濃度的膠束溶液加入到96孔板中，繼續(xù)培養(yǎng)48h。接著每孔加入25μl的mtt溶液（0.5mgml^-1），進(jìn)一步培養(yǎng)4h后，將96孔板中液體吸出，每孔加入150μldmso，用酶標(biāo)儀(bio-radmodel680)在570nm下測(cè)量對(duì)應(yīng)的吸光度。細(xì)胞存活率的計(jì)算方法為：細(xì)胞存活率(cellviability)(%)=[a]test/[a]control×100%，其中，[a]test為混合膠束存在下測(cè)得的吸光度，而[a]control為不含混合膠束的情況下測(cè)得的吸光度。每個(gè)樣品測(cè)試三次，取其平均值。如附圖8所示，（a）和（b）分別為混合膠束與人非小細(xì)胞肺癌（a549細(xì)胞）和人肺癌細(xì)胞（h1299細(xì)胞）培養(yǎng)48h后細(xì)胞的存活率。結(jié)果顯示：所制備的共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束具有良好的抑制a549細(xì)胞和h1299細(xì)胞增殖的能力。

同時(shí)制備與混合膠束相同濃度的mpeg-b-pbyp-hyd-dox膠束和mpeg-b-pbyp-g-dat/p53膠束，將三種不同的膠束加入96孔板中培養(yǎng)48h后，利用相同的mtt測(cè)試法計(jì)算細(xì)胞存活率，比較不同膠束的抑癌效果。如附圖9所示，本發(fā)明的單純的藥物或基因具有抗癌細(xì)胞作用，尤其是相比于單純的藥物或基因作用，利用dox和p53基因共同作用表現(xiàn)出了更強(qiáng)的抑癌效果，表明了所制備的共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束可以起到藥物基因共同作用的效果。

本發(fā)明首先制備阿霉素衍生物（n3-hyd-dox?hcl），然后合成了聚乙二醇和聚磷酸酯的嵌段共聚物mpeg-b-pbyp；再分別通過(guò)兩步不同的反應(yīng)合成了阿霉素前藥（mpeg-b-pbyp-hyd-dox）和陽(yáng)離子載體（mpeg-b-pbyp-g-dat）；最后，再通過(guò)滴加透析的方法制備了共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束，更換本發(fā)明限定的其他催化劑、配體、抗癌藥物和基因，同樣可以得到產(chǎn)物；更換聚乙二醇的分子量以及本發(fā)明限定的原料比例，可以得到不同m值的產(chǎn)物；更換兩種聚合物的質(zhì)量比，可以得到不同比例的混合膠束，粒徑與藥物負(fù)載釋放與上述近似。不同質(zhì)量比混合膠束的效果見(jiàn)表1（10mg/l），n/p表示混合膠束中聚合物(n)的質(zhì)量與dna(p)的質(zhì)量比例。

表1.不同質(zhì)量比混合膠束的抗癌效果

藥物治療和基因治療都有其顯著的優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明將兩種治療方式相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)藥物和基因的共同輸送，開(kāi)發(fā)適合于人體的藥物/基因共輸送系統(tǒng)，能夠?qū)崿F(xiàn)藥物和基因治療的相互促進(jìn)，可以有效抑制癌細(xì)胞增殖，加強(qiáng)基因表達(dá)，提高化療敏感性，改善臨床治療結(jié)果，有效提高藥物和基因的利用率；克服了現(xiàn)有技術(shù)無(wú)法有效協(xié)同藥物與基因關(guān)系的問(wèn)題。

本發(fā)明公開(kāi)的聚合物藥物載體中，聚合物材料具有良好的生物相容性，對(duì)藥物至關(guān)重要，其中聚乙二醇和聚磷酸酯都具有良好的生物相容性和生物可降解性，通過(guò)合成聚乙二醇和聚磷酸酯的嵌段共聚物，并對(duì)聚磷酸酯進(jìn)行側(cè)鏈功能化修飾，制備聚合物前藥和基因載體；通過(guò)分別制備聚合物前藥和基因載體，然后制備混合膠束，解決了現(xiàn)有技術(shù)要在單一的嵌段共聚物上實(shí)現(xiàn)多種功能，需要對(duì)載體材料進(jìn)行繁雜的修飾，合成步驟及分離純化過(guò)程冗長(zhǎng)，產(chǎn)率和純度不夠高這一問(wèn)題。利用各嵌段性能不同，可具備多種性能，在基因及藥物輸送方面具有很大的優(yōu)勢(shì)；本發(fā)明由不同嵌段共聚物自組裝形成的混合膠束，相對(duì)于單一嵌段共聚物形成的膠束而言，物理穩(wěn)定性和載藥能力都得到了提高，同時(shí)，通過(guò)將具有不同官能團(tuán)的聚合物制備成混合膠束，可以直接方便得到共同輸送藥物和基因的多功能復(fù)合體系。

本發(fā)明限定的共載阿霉素前藥和p53基因的混合膠束在水溶液中可以穩(wěn)定存在，而在酸性和磷酸二酯酶存在條件下，敏感性基團(tuán)或鏈段會(huì)發(fā)生斷裂使膠束被破壞，從而可以將聚集在膠束內(nèi)部的藥物和基因快速地釋放出來(lái)，用于治療，p53基因突變是肺癌中發(fā)生頻率最高的遺傳改變，p53基因是人體的一種抑癌基因，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡和dna修復(fù)起重要的調(diào)控作用，因此，可以通過(guò)將外源的p53基因?qū)塍w內(nèi)起到治療肺癌的效果；取得了如實(shí)施例記載的技術(shù)效果。